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单侧海马损毁诱发双侧齿状回细胞增殖的研究
目的探讨成年大鼠单侧海马锥体细胞被损毁后,海马齿状回(dentate gyrus,DG)神经干细胞/前体细胞(neural stem cells/progenitor cells)原位激活的时间变化规律.方法用海人酸(kainic acid,KA)建立单侧海马损毁模型,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU)标记增殖的细胞,免疫组织化学染色检测损毁后不同时间点损毁侧及对侧海马DG表达BrdU的细胞数.结果空白对照组和各时间点假损毁组双侧海马DG区均可见到少量BrdU阳性细胞,组间无显著性差异(P＞0.05);与对照组比较,实验组双侧DG BrdU阳性细胞均于损毁后第3 d起明显增多(P＜0.01),第5 d达高峰(P＜0.01),第9 d下降至对照组水平;损毁侧阳性细胞数目较对侧略多.结论成年大鼠单侧海马损毁可增强双侧海马DG的神经发生,其机制可能与损毁引起的机体激素水平、神经递质、神经营养因子浓度的改变以及损毁侧局部微环境变化有关.
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用BrdU法研究放射性核素内照射诱发大鼠体细胞HPRT基因突变
目的研究晚期混合裂变产物内照射诱发Wistar大鼠外周血淋巴细胞次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)基因突变情况.方法将晚期混合裂变产物自尾静脉注入,再用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)法测定HPRT基因的突变频率.结果随着内照射剂量的增加,大鼠外周血淋巴细胞HPRT基因突变频率也不断上升,内照射剂量在10.178cSv以上的各组与对照组均有显著差异(P＜0.01).剂量效应关系符合线性模型.结论 BrdU法是一种快速、简便、较准确的测定放射性核素内照射损伤的方法,HPRT基因突变可作为一种很好的生物剂量计.
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caspase-3在海马损伤后齿状回神经发生调控中的作用
目的 探讨成年大鼠海马CA1区损毁后,齿状回(DG)细胞先增殖后减少的原因.方法 用海人酸(KA)建立单侧海马损毁模型;用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记海马DG区增殖的细胞,用免疫组织化学方法检测标记后不同时间点DG区BrdU阳性细胞,并用无偏差体视学方法定量分析;激光共聚焦显微镜检测BrdU与裂解的easpase-3的共表达.结果 实验组动物在损毁海马后各时间点DG区BrdU阳性细胞总数均比对照组明显增多,差异有统计学意义(P<
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黄芩苷对全脑缺血/再灌注大鼠认知功能的影响及其机制研究
目的：探讨中药单体黄芩苷对全脑缺血/再灌注损伤大鼠认知功能的影响及其作用机制。方法将60只♂ SD大鼠,随机分为假手术组(S组)、全脑缺血/再灌注组(I/R组)、全脑缺血/再灌注+黄芩苷组( I/RB组),每组20只。全脑缺血/再灌注模型采用双侧颈总动脉夹闭合并低血压。I/RB组大鼠造模后12 h行黄芩苷(100 mg · kg-1)灌胃,每天两次,连续7d。 S组及I/R组大鼠在相同时间点给予相应体积的生理盐水灌胃。造模7 d后,采用Morris水迷宫检测空间学习记忆能力,BrdU免疫组化标记脑内神经前体细胞的增殖,Western blot检测脑组织COX-2蛋白的表达。结果与I/R组比较,I/RB组大鼠的学习记忆功能明显改善(P<0．05),海马齿状回(DG)和侧脑室室管膜下区(SVZ) BrdU阳性细胞数目明显增加( P<0．01),脑组织COX-2蛋白的表达明显下降( P<0．01)。结论黄芩苷能明显改善全脑缺血/再灌注大鼠的认知功能,机制可能与抑制脑组织COX-2蛋白的表达,促进脑内神经前体细胞增殖有关。
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三肽化合物酪丝缬肽对人肝癌BEL-7402细胞增殖抑制作用的实验研究
目的观察三肽化合物酪丝缬肽(tyroservaltide,YSV)对体外培养人肝癌BEL-7402细胞增殖的抑制作用.方法建立人肝癌BEL-7402及Chang氏肝细胞体外培养体系,用BrdU法、MTT法及LDH法,观察YSV对体外培养的BEL-7402细胞、Chang氏肝细胞DNA分裂指数、MTT代谢率、LDH释放量的影响,用琼脂糖凝胶电泳观察药物对体外培养BEL-7402细胞DNA片段化的影响.结果 YSV对BEL-7402细胞作用48 h、72 h时药物浓度为1 mg·L-1和0.1 mg·L-1组与阴性对照组比较:①能显著抑制肿瘤细胞DNA的合成(P<0.01),抑制率高为药物浓度1 mg·L-1作用72 h时可达32.53%,②能表现出明显抑制细胞代谢的作用(P<0.05)其中YSV 0.1 mg·L-1作用72 h时抑制率高为19.12%,③能增加胞浆内LDH的释放(P<0.05),YSV(1 mg·L-1)作用72 h时抑制率高,为36.13%,④能诱导BEL-7402肝癌细胞DNA片断化成低分子量DNA,经1%琼脂糖电泳后显示为DNA Ladder.对正常肝细胞系Chang氏肝仅0.1 mg·L-1在48 h表现出抑制DNA合成能力的作用.结论 YSV抑制人肝癌BEL-7402细胞的增殖,对正常肝细胞系Chang氏肝没有影响.
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细胞周期同步化研究进展
近年来,细胞周期同步化在肿瘤药理研究方面得到广泛的应用,提供了新颖的思路.该文结合近年来的相关文献,从肿瘤药理学角度,对细胞周期同步化的方法 、分类、应用及同步化方法 的对比等方面进行简略阐述,为今后的研究提供参考.
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BrdU标记检测慢性吗啡对C6胶质瘤细胞增殖的影响
大鼠C6胶质瘤细胞稳定表达μ受体,也表达其它阿片受体,许多实难已经表明受介导了码啡的依赖、耐受作用[1].
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红景天苷对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞再生的作用研究
目的 探讨红景天苷对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织神经再生的作用.方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组和红景天苷组,采用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,红景天苷组于造模后给予红景天苷(40mg/kg)腹腔注射,每日1次,连续7d;其余2组腹腔注射生理盐水.于再灌注后第1、3、7d,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)、平衡木试验、足失误试验评价动物神经功能恢复状况;采用免疫荧光化学方法检测侧脑室下区(SVZ)和海马齿状回(DG)细胞增殖标记5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)和新生神经细胞标记DCX的表达. 结果 红景天苷组大鼠的mNSS评分、平衡木试验评分、足失误比率均较模型组显著降低(P＜0.05);在大脑SVZ区和海马DG区,红景天苷组BrdU和DCX的表达较模型组均显著升高(P＜0.05). 结论 红景天苷可改善脑缺血损伤大鼠的神经行为学症状,其机理可能与红景天苷可促进脑组织内源性神经再生相关.
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BrdU标记的同种异体骨髓基质干细胞移植治疗兔股骨头坏死骨缺损模型
[目的]探讨同种异体骨髓基质干细胞移植治疗股骨头坏死的可行性,并研究移植细胞的转归和缺损区新生骨的来源.[方法] 24只新西兰大耳白兔随机分成两组,每组12只,所有动物的双侧股骨头均参加实验.用液氮冷冻法造模,股骨头钻孔造成骨缺损.对照组置入胶原蛋白海绵,实验组置入复合有定向诱导并用BrdU标记的第5代同种异体骨髓基质干细胞的胶原蛋白海绵.分别于术后2、4、8、12周处死3只实验动物.所获的股骨头标本分别做组织切片HE染色、BrdU免疫组织化学染色,进一步测算股骨头冠状截面的新生骨小梁在骨缺损区所占的面积百分比,做统计分析.[结果]股骨头标本切片后行免疫组织化学染色,可见成骨细胞及骨细胞的核均呈棕褐色.实验组缺损区2周时新生骨小梁开始形成,并可见少量的浆细胞和淋巴细胞,4周时浆细胞和淋巴细胞明显减少,12周时缺损区可见大量细小的骨小梁,炎性细胞消失.两组实验动物股骨头冠状截面的新生骨小梁在骨缺损区所占的面积百分比具有统计学意义上的差异(P＜0.05).[结论]移植的骨髓基质干细胞的终转归是缺损区新生骨小梁,同种异体骨髓基质干细胞可以用于股骨头坏死的治疗.
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腹腔注射给药Ghrelin对小鼠神经再生的影响
目的 探讨腹腔注射给药Ghrelin对小鼠海马神经再生的影响.方法 本研究将小鼠随机分为Ghrelin组及对照组,两组均腹腔注射相同剂量BrdU(100 mg/kg,早晚各1次,连续5天),目的用来标记海马齿状回颗粒细胞下区(Subgranular Zone,SGZ)增生的细胞.处理组小鼠给予腹腔注射Ghrelin(80μg/kg,一天一次,连续8 d),而对照组注射等量的生理盐水.1周后进行免疫组化分析.结果 BrdU免疫阳性(BrdU+)细胞在海马齿状回中广泛表达;Ghrelin处理组BrdU+细胞数显著多于生理盐水对照组(t=3.43,P<0.01).结论 腹腔注射Ghrelin(80μg/kg)促进海马齿状回神经再生.
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BrdU单抗免疫组化法观察人工皮肤种子细胞生长
目的研究贵州小型香猪来源的组织工程皮肤自体及同种异体移植后种子细胞生长情况,为复方壳多糖组织工程皮肤临床应用提供实验依据.方法构建猪的组织工程皮肤并于移植后第1、4、8周采集标本,BrdU单抗免疫组化染色,观察移植后种子细胞存活情况.结果猪组织工程皮肤移植后8周BrdU单克隆抗体免疫组化染色阳性.结论笔者构建的组织工程皮肤自体及同种异体移植后种子细胞存活良好.本实验为复方壳多糖组织工程皮肤临床应用提供了有力的实验依据.
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UPS抑制剂对成年大鼠脑内淀粉样蛋白沉积和神经新生的影响
目的 观察UPS抑制剂对成年大鼠脑内淀粉样蛋白沉积和神经前体细胞增殖水平的影响.方法 采用水迷宫方法检测大鼠行为学习记忆能力,在腹腔注射UPS抑制剂60 d后,采用水迷宫再次测定大鼠学习记忆能力,用免疫组化方法标记神经细胞增殖的方法,用改进的特殊刚果红染色方法观察大鼠脑内淀粉样蛋白沉积的变化.结果 腹腔注射UPS抑制剂60 d后,实验组与对照组相比,学习记忆能力和Brdu阳性细胞数量显著减推(P＜0.05),而淀粉样蛋白沉积数量明显增加.结论 UPS抑制剂可能是通过影响了脑内淀粉样蛋白的沉积,减少了神经前体细胞的增殖而影响了成年大鼠的学习记忆能力.
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AG490防治后发性白内障的实验研究
目的 通过在活体兔眼行白内障超声乳化术制造兔眼后发性白内障模型,并与正常兔和应用AG490的兔进行对照,研究AG490对后发性白内障的作用,并观察术后不同时间AG490对兔眼的影响及此药的毒副作用.方法 将35只(70眼)成年健康新西兰大白兔随机分为3组:对照组:于前房内注入BrdU (0.02 mL);模型组:行透明晶状体超声乳化术,术中前房内注入BrdU(0.02 mL)+透明质酸钠(0.05 mL)+生理盐水(0.10 mL);治疗组:行透明晶状体超声乳化术,术中前房内注入BrdU(0.02 mL)+透明质酸钠(0.05 mL) +AG490(0.10 mL),术后1d、3d、7d、1个月、2个月对3组兔眼进行裂隙灯显微镜、视网膜电图(electroretinogram,ERG)及病理组织学检查,免疫组织化学方法检测晶状体后囊膜上BrdU的表达.结果 术后各时间点模型组与治疗组前房炎症反应情况及ERG检查差异均无统计学意义(均为P＞0.05).治疗组后囊膜混浊发生率低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.01).各时间点治疗组赤道部及后囊膜晶状体上皮细胞均较模型组少.各时间点3组BrdU的表达差异均有统计学意义(均为P＜0.01).术后1d、3d、7d模型组与对照组及治疗组赤道部及前囊下阳性细胞核标记指数值比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05),对照组与治疗组比较差异无统计学意义(均为P＞0.05);术后1个月、2个月各组间赤道部及前囊下阳性细胞核标记指数值两两比较差异均有统计学意义(均为P ＜0.05).结论 AG490可以通过抑制晶状体上皮细胞增殖而有效地延缓后发性白内障的发生.在2个月内的不同时间点AG490对兔眼均无明显的毒副作用.
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用BrdU标记滞留细胞联合Sox2表达检测晶状体干细胞
目的 检测小鼠晶状体上皮细胞中可能存在的晶状体干细胞及其分布位置.方法 60只(60眼)Balb/c小鼠随机分为BrdU标记组和生理盐水对照组,每组各30只(30眼).BrdU标记组以150mg· kg-1剂量的10g·L-1BrdU每天2次腹腔注射,连续注射10 d.生理盐水对照组以15 mL·kg-1生理盐水每天2次腹腔注射,连续注射10d.在BrdU或生理盐水注射结束后0周、1周、2周、3周、4周、6周、8周、10周、12和14周分别处死3只小鼠,制备眼球冰冻切片.通过免疫荧光化学染色观察晶状体上皮BrdU标记细胞的量和分布变化.在BrdU标记组,通过免疫荧光化学染色观察0周、4周、8周、12和14周晶状体上皮细胞Sox2蛋白的表达及分布规律.通过BrdU-Sox2双标记免疫荧光染色观察BrdU-Sox2双标阳性细胞.结果 BrdU标记组在完成BrdU标记时(0周),晶状体上皮中央区和赤道区BrdU标记率均达100％；随着时间延长,中央区和赤道区的BrdU标记率逐渐下降,至12周时降至低,中央区和赤道区分别为14.23％、5.86％ (P=0.000)；14周时中央区和赤道区分别为14.97％、6.11％(P=0.000),分别与12周时两区比较,差异均无统计学意义(均为p＞0.05).0周、4周、8周、12周和14周时,中央区Sox2阳性细胞率分别为3.74％、3.47％、4.23％、4.09％和3.70％,赤道区Sox2阳性细胞率分别为0.66％、0.37％、0.47％、0.33％和0.51％,各时间点中央区与赤道区Sox2阳性细胞率差异均无统计学意义(均为P＞0.05).Sox2在晶状体上皮细胞内表达稳定,主要分布于中央区.部分BrdU阳性细胞表达Sox2,即BrdU-Sox2双标阳性细胞,集中分布于晶状体上皮中央区.结论 表达Sox2的标记滞留细胞可能是晶状体干细胞,主要分布于晶状体上皮中央区.
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兔眼结膜上皮标记保留细胞的研究
目的 检测兔眼结膜上皮细胞对5'-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)的标记保留情况,为进一步探索结膜上皮干细胞的定位提供依据.方法 实验1组为短期标记保留实验,采用一次性兔腹腔注射BrdU 50 mg/kg,不同时间间隔免疫组织化学法分析兔眼各部位结膜组织BrdU标记保留细胞.实验2组为长期标记保留实验,连续7 d每日注射BrdU 50 mg/kg,观察6周后兔结膜上皮的BrdU标记阳性细胞.结果 实验1组于1、3、5、7 d,BrdU标记阳性细胞数量的高峰位置从睑皮肤黏膜交界处向穹隆部移行,所有切片的睑皮肤黏膜交界处均可见较多的BrdU标记阳性细胞.实验2组的结膜上皮BrdU标记阳性细胞主要保留在睑皮肤黏膜交界处.结论 短期和长期标记保留实验说明兔眼睑皮肤黏膜交界处可能含有兔结膜上皮干细胞.
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人参皂苷Rg3对大鼠脑胶质瘤肿瘤干细胞增殖的影响
目的 观察人参皂苷Rg3对C6胶质瘤肿瘤干细胞增殖的抑制作用,探讨人参皂苷Rg3抗胶质瘤的作用机制.方法 制备脑C6胶质瘤肿瘤干细胞培养模型,细胞免疫荧光法检测巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达.实验分人参皂苷Rg3组、阴性对照组及阳性对照组.分别用MTT法和BrdU免疫荧光法检测人参皂苷Rg3对C6胶质瘤肿瘤干细胞增殖的影响.结果 脑肿瘤干细胞表达神经干细胞的特异性标志物Nestin、GFAP及NSE,MTT检测显示:与阴性对照组比较,阳性对照组OD值明显增大;与阳性对照组比较,人参皂苷Rg3组OD值表达明显减小.免疫组化染色显示BrdU在各组均表达,与阴性对照组比较,阳性对照组面密度值和光密度值明显增强;与阳性对照组比较,人参皂苷Rg3组BrdU面密度值和光密度值表达均明显降低.结论 胶质瘤中存在具有神经干细胞特性的肿瘤干细胞,人参皂苷Rg3对脑胶质瘤肿瘤干细胞的增殖具有抑制作用.
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p55PIK N末端24个氨基酸抑制甲状腺癌细胞增殖的研究
目的 观察P55PIK的N端的24个氨基酸抑制甲状腺癌细胞增殖的作用.方法 构建含有P55PIK-N端24个氨基酸的腺病毒载体Ad-N24-p55PIK-GFP及对照病毒Ad-GFP,以其感染甲状腺癌YTC236细胞,流式细胞仪检测细胞周期进程,应用BrdU掺人的方法 检测其对细胞DNA合成的影响,通过建立体内肿瘤裸鼠移植瘤模型,进一步证实Ad-N24p55PIK-GFP的抗肿瘤作用.结果 对照腺病毒Ad-GFP感染的细胞中G0/G1期细胞为(69.83±3.50)%,S期和G2/M期细胞数分别为(18.56±3.10)%和(11.61±2.90)%,而带有插入目的 基因的腺病毒Ad-N24p55PIK-GFP感染后的细胞G0/G1期细胞减少为(45.81±2.10)%,S期和G2/M期细胞增加至(30.12±2.60)%和(24.07±2.90)%,BrdU掺入显示BrdU阳性的细胞数由(21.2±3.0)%降至(8.1±2.2)%,FTC236细胞裸鼠移植瘤模型局部应用Ad-N24p55PIK-GFP后肿瘤生长显著减慢.结论 在FTC236细胞中,过表达p55PIK的N末端的24个氨基酸可有效阻滞细胞周期进程,抑制细胞DNA合成,体外有效抑制甲状腺癌裸鼠移植瘤模型的肿瘤生长.
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局灶性脑缺血大鼠缺血区血管新生研究
目的:观察局灶性脑缺血大鼠血管新生的表达.方法:采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型,将造模成功后的大鼠随机分为模型组和ED组,另设正常组和假手术组,分别给予处理后观察BrdU的表达.结果:正常脑内有一定量的BrdU表达,缺血后BrdU迅速增加,7天时达到高峰,模型组明显多于正常组、假手术组和ED组(P＜0.01),14天时无显著性差异,ED组少于同期模型组.结论:局灶性脑缺血大鼠缺血1天时缺血区可有血管新生,ED可以抑制脑缺血后血管新生.
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戊四氮诱导发育鼠癫癎持续状态后海马神经发生及MK-801的影响
目的 探讨戊四氮诱导发育期大鼠癫癎持续状态(SE)后对海马内齿状回颗粒细胞神经发生的影响以及N-甲基D-天冬氨酸受体(NMDAR)拮抗剂MK-801对此结果的抑制作用,从而研究癫癎发作后发育脑海马内神经发生及NMDAR在神经发生中的作用.方法 SD大鼠7,14,21,28 d 4个日龄组共216只,每组均为54只,每个日龄组大鼠随机分SE组、MK-801组和正常对照组,每组18只.采用5-溴脱氧尿核苷(BrdU)标记新生细胞,再以β微管蛋白Ⅲ(TuJ1)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)分别标记早期神经元和胶质细胞的单、双标免疫组织化学方法,检测PTZ诱导癫癎持续状态后发育鼠海马齿状回(dentate gyrus,DG)神经发生,并用MK-801治疗后观察对其的影响.结果 BrdU注射后第7天和第14天,SE组各日龄幼鼠齿状回BrdU阳性细胞数明显高于同日龄的正常对照组,其中约有80%同时表达TuJ1;MK-801组BrdU阳性细胞数较SE组明显减少(P＜0.01),而在第28天三组之间BrdU阳性细胞数无明显差异(P＞0.05).结论 癫癎发作可增加幼鼠齿状回颗粒细胞的神经发生,而NMDAR在癫癎后的神经发生中起着促进作用.
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BrdU标记在大鼠生精细胞体外培养中的应用
目的探讨应用5-溴-2-脱氧尿苷(5-bromo-2-deoxy-uridine,BrdU)标记检测大鼠生精细胞体外的分化、发育情况.方法采用BrdU体内标记生精细胞的DNA,免疫细胞化学法跟踪观察大鼠生精细胞在体外培养中的分化、发育情况.结果培养前在体内标记BrdU的细胞为初级精母细胞,经培养后在BrdU标记的细胞中出现早期精子细胞.结论大鼠生精细胞体外培养过程中,应用BrdU标记能检测生精细胞的分化、发育情况.
