医院坏账核算现实策

补中益气汤对A549/DDP移植瘤裸鼠中Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,mTOR表达的影响

探讨补中益气汤对A549/DDP移植瘤裸鼠中Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,mTOR表达的影响.BALB/C裸鼠60只随机分为空白对照组、荷瘤对照组、顺铂组和补中益气汤高剂量+顺铂组(高联组)、补中益气汤中剂量+顺铂组(中联组)、补中益气汤低剂量+顺铂组(低联组),培养A549/DDP细胞(浓度为5×106个/mL),接种于各组,观察各组成瘤情况.给予相应治疗,14 d后取瘤组织固定、切片,免疫组织化学方法、Real-time PCR方法检测各组裸鼠移植瘤中Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,mTOR蛋白和mRNA的表达水平.结果显示补中益气汤联合顺铂可降低移植瘤体积,中联组和高联组的抑瘤率与顺铂组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);与荷瘤对照组比较,中联组和高联组Bad,NF-κB,Survivin,mTOR的蛋白和mRNA的表达明显减少(P＜0.05),caspase-9的蛋白和mRNA在中联组和高联组的表达逐渐增多,与荷瘤对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);Bad,NF-κB,caspase-9的mRNA,中联组和高联组与顺铂组、低联组、荷瘤对照组比较有统计学意义(P＜0.05),低联组、顺铂组、荷瘤对照组两两比较,无统计学差异,各因子蛋白和mRNA的表达中联组和高联组比较,无统计学意义.结果表明补中益气汤与顺铂联合作用可抑制A549/DDP移植瘤的生长,补中益气汤抑制A549/DDP移植瘤的作用可能是通过调节Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,mTOR,促进细胞凋亡实现的.

Bad、Bax和Bid蛋白表达在非酒精性脂肪性肝炎中的作用

目的:探讨细胞凋亡相关蛋白Bad、Bax和Bid表达在小鼠非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis, NASH)中的作用.方法:采用胆碱-蛋氨酸缺乏、高脂(high fat, methionine and choline deficient, MCD)饮食建立小鼠NASH模型(实验组), 以胆碱-蛋氨酸充足饮食设立对照组. HE染色观察肝脏脂肪变、炎症活动和纤维化程度; 采用Western blot检测Bad、Bax和Bid蛋白表达.结果: MCD饮食喂养小鼠10 d可见轻度肝脂肪变, 3 wk形成中、重度肝脂肪变及明显的炎性细胞浸润, 8 wk肝脂肪变、肝细胞坏死、炎性细胞浸润加重, 或伴有轻度肝纤维化. 血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)水平随肝损伤加重而进行性升高. 10 d、3 wk和8 wk实验组小鼠肝组织Bad和Bax蛋白表达显著高于对照组(P<0.05、P<0.01和P<0.05); 造模10 d实验组小鼠Bid蛋白活化, 10 d、3 wk和8 wk表达均显著高于对照组(P<0.01).结论:MCD饮食可导致小鼠NASH, 诱发细胞凋亡调节蛋白Bad、Bax和Bid表达上调.

PPARγ、STAT-3和BAD在肝细胞肝癌的表达及相互作用研究

目的 研究肝细胞肝癌中过氧化物酶体增殖物活化受体(peroxisome proliferators activated receptorsγ,PPARγ)、信号转导和转录激活因子3(STAT-3)及bcl-2相关促凋亡蛋白(BAD)的表达情况及其与临床病理特征的关系.方法 利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCS)和Westernblotting技术分别对30例肝细胞肝癌,相应癌旁组织和正常组织包括部分硬化组织中上述三种指标的mRNA及蛋白含量进行半定量分析,将结果与临床资料进行统计分析.结果 PPARγ、STAT-3及BAD mRNA和蛋白在肝细胞肝癌,癌旁和正常组织中的表达有统计学意义,其中mRNA表达分别为PPARγ(x2=77.268,P＜0.05),STAT-3(F=370.187,P＜0.05),BAD(F=82.647,P＜0.05),蛋白表达分别为PPARγ(x2=7.590,P＜0.05),STAT-3(x2=22.419,P＜0.05),BAD表达与组织分化程度有关((F=141.625,P＜0.05),其中mRNA分别为PPARγ(t=-2.628,P＜0.05),STAT-3(t=-3.810,P＜0.05),BAD(t=5.042,P＜0.05),蛋白分别为PPARγ(M=0.000,P＜0.05),STAT-3(t=-3.759,P＜0.05),BAD(M=61.500,P＜0.05)与肿瘤大小,瘤栓有无,微转移灶及是否发生复发转移等无关.PPARπ与STAT-3mRNA及蛋白表达均为正相关(r=0.750,P＜0.05,r=0.717,P＜0.05).PPIARγ与BAD mRNA蛋白表达均为负相关(r=-0.401,P＜0.05,r=-0.417,JP＜0.05).STAT-3与BADmRNA蛋白表达均为负相关(r=-0.617,P＜0.05,r=-0.485,P＜0.05).结论 PPARγ、STAT-3在肝细胞肝癌高表达而BAD低表达并与其组织分化和发展有关.

bcl-2和bad蛋白表达与乳腺癌的相关性研究

目的探讨bcl-2、bad基因在乳腺癌前病变及其在癌组织中的表达,以及与ER、PR及淋巴结转移间的关系.方法采用免疫组织化学染色SABC法,观察19例乳腺单纯性增生,20例乳腺非典型增生,48例乳腺癌组织中bcl-2、bad蛋白的表达,并同时检测48例乳腺癌组织中ER、PR的表达. 结果 bcl-2在正常组和乳腺单纯性增生组100%表达,非典型增生组,乳腺癌组的表达率分别为85.0%和58.33%,二组之间比较差异有显著性(χ2=3.37,P<0.05).bad蛋白在各组中的表达率较bcl-2表达有下降趋势,分别为87.5%, 84.2%, 55%, 47.91%.bcl-2、bad在各组中表达阳性率差异有显著性(χ2=23.05, P<0.001, χ2=11.29, P<0.01). 结论 bcl-2、bad基因在乳腺癌的恶性转化中起重要作用;同时其表达与雌激素的调节有密切关系;bcl-2蛋白表达与乳腺癌淋巴结转移有关.

PTEN/PI3K信号转导途径与子宫内膜癌生物学行为的相关性

目的:研究PTEN/PI3K信号转导途径与子宫内膜癌发生发展的关系.方法:应用免疫组化和免疫印迹方法对68例子宫内膜癌和癌前病变组织及11例正常子宫内膜进行PTEN、p-PKB及p-Bad蛋白检测.结果:1)PTEN蛋白的阳性表达率在正常增殖期子宫内膜组织中高(90.9%),非典型增生组织中开始下降,在子宫内膜癌组织中明显降低(49.1%),三者之间比较,差异有统计学意义,P＜0.01;2)p-PKB及p-Bad与PTEN的阳性表达呈相反趋势,在非典型增生组织及内膜癌组织中p-PBK及p Bad表达阳性率明显增加,差异均有统计学意义,P＜0.01,P＜0.05.在子宫内膜癌PTEN表达阴性组织中p-PKB、p-Bad蛋白染色积分均明显高于PTEN阳性组,P＜0.05,P＜0.01;3)相关分析显示PTEN与p-PKB及p-Bad表达均呈负相关,r=-0.67,P＜0.05;r=-0.65,P＜0.05;4)PTEN、p-Bad蛋白的阳性表达率在不同的临床分期、组织学分级及不同肌层浸润程度之间比较,差异均无统计学意义,P＞0.05,而PTEN、p-PKB只在临床分期间差异有统计学意义,P＜0.05.结论:PTEN/PI3K信号转导途径与子宫内膜癌的发生密切相关.伴随PTEN表达缺失,p-PKB、p-Bad阳性表达更加明显,提示PTEN蛋白表达可作为子宫内膜癌早期诊断指标和基因治疗靶点.

牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡中促凋亡蛋白Bad的表达改变

目的:检测牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡中Bad的表达改变,为保护成骨细胞提供依据.方法:8.348U/L牙龈蛋白酶处理成骨细胞0、4、8、16、24、48和72h,或将不同浓度牙龈蛋白酶与成骨细胞作用24h后,蛋白质印迹法检测Bad蛋白表达改变.结果:在一定范围内,牙龈蛋白酶在诱导成骨细胞凋亡中呈时间和剂量依赖性上调Bad的表达,牙龈蛋白酶抑制剂TLCK有效抑制牙龈蛋白酶所诱导的Bad的高表达.结论:牙龈蛋白酶上调Bad的表达,促凋亡蛋白Bad参与了牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡过程.

探讨MG132对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其机制

目的:研究不同浓度蛋白酶体抑制剂MG132对人肺腺癌A549细胞凋亡的作用,并且观察对细胞中Bcl-2和Bad两种凋亡相关蛋白表达的影响.方法:体外培养A549细胞分别暴露于0、5、10、20、40 μmol/L的MG132,24 h后MTT法测定细胞存活率,流式细胞术(FCW)检测细胞的凋亡率,Western Blot方法测定A549细胞中Bcl-2和Bad两种蛋白的表达情况.结果:MTT法和流式细胞术检测结果显示,A549细胞的存活率和凋亡率与MG132呈浓度依赖性关系,MG132浓度越高细胞存活率越低,并且凋亡率越高.Western Blot方法测定结果显示A549细胞中Bcl-2的表达随着MG132浓度增高而逐渐减少,而Bad的表达无明显变化.结论:MG132可以诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡,实现该作用的可能机制部分是通过降低Bcl-2蛋白的表达,而Bad在这一过程中似乎没有表现出明显的作用.

软骨多糖对S180荷瘤小鼠Bcl-2和Bad表达的影响

目的 通过软骨多糖对S180荷瘤小鼠实体瘤Bcl-2和Bad蛋白表达的影响研究软骨多糖抑瘤作用机理.方法 皮下注射S180细胞建立动物实体瘤模型,将小鼠随机分为生理盐水对照组和软骨多糖给药组,连续腹腔注射生理盐水或软骨多糖21 d,取实体瘤制成石蜡切片;应用常规HE染色法观察细胞形态学变化,免疫组化SP法检测Bcl-2和Bad的表达情况,并比较酶解法和加热法进行的抗原修复对脱片率的影响.结果 软骨多糖有效抑制了S180肉瘤的生长,Bcl-2的阳性表达率由(70.45±8.89)%降至(24.19±4.32)%,Bad的表达率由(4.14±1.35)%升至(18.89±3.15)%.酶解法进行抗原修复的脱片率要小于加热法.结论 软骨多糖通过显著降低Bcl-2的表达水平和提高Bad的表达水平而诱导细胞凋亡,从而抑制了S180肿瘤细胞的生长;软骨多糖是一种新型的抗肿瘤活性物质.

PESV干预K562细胞PI3K/Akt信号通路凋亡调控的研究

[目的]探讨PESV对K562细胞PI3K/Akt信号蛋白及凋亡调控因子Bcl-2和Bad表达的影响.[方法]将体外培养K562细胞,经PESV处理不同时间后,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测PI3K及p-Akt蛋白水平变化,实时荧光定量RT-PCR检测Bcl-2、Bad mRNA水平变化.[结果]与对照组相比,PESV处理后K562细胞凋亡率显著增加,PI3K及p-Akt表达降低,抗凋亡相关基因Bcl-2 mRNA表达降低,促凋亡基因Bad mRNA表达增加.[结论]PESV可能通过降低PI3K、Akt信号蛋白表达,调节Bcl-2和Bad表达,抑制K562细胞增殖,促进其凋亡.

降脂通络软胶囊对膜性肾病大鼠肾保护作用及对肾组织Bcl-2和Bad表达的影响

目的 观察降脂通络软胶囊对膜性肾病大鼠模型血液生化指标及对肾组织Bcl-2、Bad表达的影响,探讨降脂通络软胶囊对膜性肾病大鼠的肾保护作用和可能机制.方法 将60只SD大鼠随机选取10只为对照组,其余50只进行造模,造模成功后将大鼠随机分为模型组、贝那普利组和降脂通络软胶囊(25、50、100 mg/kg)组,每组各10只,各组按相应剂量给药,在给药的第4周末检测大鼠24 h尿蛋白定量(UTP)及血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)水平;采用电镜、免疫荧光观察肾脏病理形态学变化,免疫组化及Real-time PCR法检测各组大鼠肾组织Bcl-2、Bad的表达情况.结果 与模型组比较,各给药组UTP、TC、TG均有所降低(P＜0.05),各给药组TP、ALB均有所升高(P＜0.05).降脂通络软胶囊50、100 mg/kg组与贝那普利组UTP、TC、TG、TP、ALB比较差异不显著(P＞0.05),效果优于降脂通络软胶囊25 mg/kg组(P＜0.05).与对照组比较,各给药组及模型组BUN、Ser均未见明显变化,差异不显著(P＞0.05).与模型组相比,各给药组大鼠肾组织中Bel-2 mRNA的表达较模型组明显上调,Bad mRNA表达下调,差异显著(P＜0.05);降脂通络软胶囊50、100 mg/kg组与贝那普利组Bcl-2、Bad比较差异不显著(P＞0.05),效果优于降脂通络软胶囊25 mg/kg组(P＜0.05).结论 降脂通络软胶囊对膜性肾病大鼠的肾保护作用可能与其上调肾组织中Bcl-2 mRNA表达,下调Bad mRNA表达,抑制足细胞凋亡、修复受损足细胞有关.

HRS调控凋亡相关蛋白Bcl-xL、Bad、Bcl-2、Bax对大鼠心肌缺血再灌注损伤影响

目的 探讨氢气饱和生理盐水(HRS)调控凋亡相关蛋白Bcl-xL、Bad、Bcl-2、Bax对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 36只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注损伤组和HRS处理组,每组12只;采用经典造模法建立心肌缺血再灌注损伤模型,3组制模成功后再灌注2h,评价造模效果及Bcl-xL、Bad、Bcl-2、Bax等相关凋亡蛋白的表达.结果 大鼠心脏缺血再灌注损伤2h后,假手术组、缺血再灌注损伤组、HRS处理组Bcl-xLmRNA和蛋白表达分别为(2.41 ±0.13)和(2.71±0.11)、(0.82±0.08)和(0.72±0.03)、(1.96±0.12)和(2.07±0.12),Bcl-2 mRNA和蛋白表达分别为(2.12±0.07)和(2.51±0.08)、(0.50±0.04)和(0.83±0.07)、(1.62±0.03)和(1.92±0.05),Bad mRNA和蛋白表达分别为(0.27±0.06)和(0.53±0.04)、(1.03±0.05)和(1.24±0.03)、(0.48±0.02)和(0.72±0.05),Bax mRNA和蛋白表达分别为(0.51±0.03)和(0.47 ±0.05)、(1.53±0.05)和(1.25±0.03)、(0.52±0.03)和(0.93±0.03);3组Bcl-xL、Bad、Bcl-2、Bax mRNA和蛋白表达分别比较,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).结论 HRS可通过调控Bcl-xL、Bad、Bcl-2、Bax凋亡相关蛋白的表达较为有效地减轻大鼠心肌缺血再损伤,进而保护心肌细胞.

整顿粗糙男美容坏习惯

粗糙的男人已经不再风靡.如今,装扮精致、举止儒雅之男士备受广大女性青睐.殊不知,一身西装、笑容可掬或谈吐优雅这些绅士特质已不再是女性评判优劣的终极标准,原来那些容易忽视的"细枝末节"才是真正的考点!

CCl4诱发galectin-3基因敲除鼠急性肝损伤中GRP78和BAD表达

目的 观察半乳糖凝集素-3(galectin-3)基因敲除鼠肝脏中GRP78和BAD表达,探讨急性肝损伤中gMectin-3抗凋亡作用.方法 制备GRP78和BAD DNA探针,分别利用Western和Northern杂交技术检测在CCl4损伤galectin-3基因敲除鼠肝组织中GRP78和BAD蛋白和mRNA表达.结果 成功构建PTS1-BAD和PTS1-GRP78扩增质粒.GRP78蛋白主要定位在微粒体中,galectin-3+/+小鼠经CCl4处理6-14 h后,肝脏GRP78表达上调至高峰,而后恢复正常;在galectin-3-/-小鼠中,CCl4处理后GRP78表达水平未见变化.正常或者cch处理的galectin.3+/+和-/一小鼠中GRP78 mRNA表达未见显著差别.galectin一3+/+鼠中主要定位在微粒体中在CCl4处理前后未见BAD蛋白在细胞浆和微粒体中表达.galectin-3-/-中BAD主要定位在肝细胞浆和微粒体,CCl4处理前后表达升高.BAD mRNA 1.6 kb片段在galectin-3+/+和-/-小鼠经CCl4处理前后均没有变化,但0.9 kb片段galectin-3+/+和-/-小鼠经CCl4处理后表达降低.结论 CCl4可诱导肝脏mRNA降解,该过程中参与细胞凋亡的蛋白质表达升高.galectin-3+/+小鼠CCl4处理后肝细胞凋亡以内质网应急途径为主,而galectin-3-/-则以线粒体为主.在肝细胞中galectin-3对线粒体凋亡和内质网应急途径均有抑制作用.

促凋亡蛋白BAD在乳腺导管增生及乳腺癌组织中表达的研究

目的检测促凋亡蛋白BAD在人乳腺导管增生及乳腺癌组织中表达,探讨其在乳腺癌癌变过程中的作用及意义.方法采用免疫组织化学S-P法,检测131例乳腺导管增生及乳腺癌组织中促凋亡蛋白BAD的表达.结果BAD蛋白在正常乳腺组织中的阳性率为33.3%(3/9).从普通导管增生、轻中度不典型导管增生、重度不典型增生及导管原位癌到浸润性导管癌组织,BAD蛋白表达阳性率呈递增趋势,在乳腺普通导管增生和重度不典型增生及原位癌组间阳性表达率差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论促凋亡蛋白BAD蛋白表达在乳腺癌癌变过程中呈递增趋势;BAD蛋白表达水平与组织学分级有关,组织学分级越低,其蛋白表达阳性率越高.

细胞周期蛋白依赖激酶Roscovitine诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡及制的研究

目的:探讨细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)抑制剂Roscovitine (Ros)诱导非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞凋亡及其作用机制.方法:以不同浓度Ros(10μ M、20μ M、40μ M)处理细胞24h,采用Annexin V-PI染色以流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblot法检测胞浆中和线粒体促凋亡蛋白Bax和Bad的表达,流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP)变化.结果:Ros以剂量依赖的方式诱导A549细胞凋亡,同时Bad和Bax在胞浆的含量随着Ros剂量的增加而减少,而在线粒体中却出现相反的结果,线粒体膜电位随Ros剂量的增大而降低.结论:Ros可通过促进Bax和Bad由胞浆向线粒体易位,诱导NSCLC A549细胞由线粒体途径发生凋亡.

PESV对K562细胞BCR/ABL融合基因及凋亡调控因子Bcl-2、Bad表达的影响

目的:探讨PESV对K562细胞BCR/ABL融合基因及凋亡调控因子bcl-2和bad表达的影响.方法:将体外培养K562细胞,经PESV处理不同时间后,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光定量RT-PCR检测BCR/ABL、Bcl-2、Bad mRNA水平变化.结果:与对照组相比,PESV处理后K562细胞,凋亡率增加,BCR/ABL融合基因表达降低,抗凋亡相关基因Bcl-2 mRNA表达降低,促凋亡基因Bad mRNA表达增加.结论:PESV能降低降低K562细胞BCR/ABL融合基因的表达,可能通过调节Bcl-2和Bad表达,抑制K562细胞增殖,促进其凋亡.

TGF-β1对大鼠脑瘤术后缺氧性脑损伤BAD及Bcl-2 mRNA的影响

目的 观察脑瘤术后大鼠缺氧性脑损伤,外源性转化生长因子β1(TGF-β1)对脑组织BAD及Bcl-2 mRNA表达的影响.方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、生理盐水对照组和TGF-β1干预组,每组10只.建立大鼠脑瘤术后缺氧性脑损伤模型2 h后,侧脑室注入20 ng的TGF-β1,RT-PCR方法检测给药24 h后脑组织BAD及Bcl-2 mRNA表达.结果 模型组及生理盐水组较假手术组,BADmRNA表达显著增高(P《0.05),Bcl-2 mRNA表达降低(P《0.05).TGF-β1干预组较模型组及生理盐水组BAD mRNA表达显著降低(P《0.05),Bcl-2 mRNA表达显著增高(P《0.05).结论 TGF-β1可以通过上调Bcl-2 mRNA表达及下调BAD mRNA表达,抑制细胞凋亡,从而发挥神经保护作用,为TGF-β1临床脑瘤术后缺氧性脑损伤治疗提供理论依据.

脑络欣通及其拆方对脑缺血再灌注大鼠NGF、PI3K、Akt以及Bad蛋白表达的影响

目的 观察局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠缺血半暗带NGF、PI3K、Akt以及Bad蛋白的动态表达及脑络欣通(黄芪、川芎、三七、蜈蚣等)对其影响.方法 以线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉,复制局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2h再灌注3、7、14 d,用免疫组化染色SABC法分别检测缺血半暗带NGF、PI3K、Akt、Bad的表达.结果 与模型组相比,脑络欣通组在脑缺血再灌注3、7、14 d后,能够明显增加PI3K、Akt的表达(P＜0.01或P＜0.001);在再灌注7、14 d,脑络欣通组NGF蛋白表达显著升高(P＜0.05或P＜0.01);再灌注14 d,脑络欣通组Bad蛋白表达显著减少(P＜0.05).结论 脑络欣通能够保护脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织,其作用机制可能与促进NGF表达,激活PI3 K/Akt通路并降低Bad蛋白表达有关.

急性肝功能衰竭大鼠中凋亡相关蛋白的表达

细胞凋亡为急、慢性肝病的主要特征之一.近来研究表明,Bcl-2家族蛋白在细胞凋亡的胞内信号转导途径中发挥重要作用[1-3].目前发现,Bcl-2家族蛋白有20余种,其中Bcl-2、Bcl-xL蛋白具有抗凋亡作用,而Bad、Bax和Bid等具有促凋亡作用[2-4].