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一项乙肝检测的新技术
乙肝抗原抗体测定是诊断乙肝常用的方法.酶联免疫测定由于操作简便,成本低廉,敏感性和特异性较好,80年代中期以来就成为乙肝抗原抗体检测主要的方法.但是本法只能定性,作为定量测定的方法就不够准确了.比如,不同乙肝感染者e抗原的浓度可相差100倍,表面抗原的浓度甚至相差800倍,统统用"阳性"来表示,实在太粗糙,很难满足临床的需要.为了弥补这个缺陷,进入90年代以来,国外先后推出第四代检测方法:化学发光法、电化学发光法.但是这两个方法需要昂贵的设备,试剂成本高,在我国难以普遍应用.在这种情况下,又能量化测定乙肝抗原抗体,又比较经济的诊断方法--时间分辨荧光免疫检测法逐渐吸引了人们的目光.
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分辨荧光免疫分析技术的临床检测意义
科学技术不断进步,医学监测手段多样化,这提高了疾病诊断的准确率.本文探讨的荧光分辨免疫技术(TRFIA)是80年代创新的非放射监测手段,它运用镧系元素螯合物的发光特点进行疾病监测,在临床监测中的意义重大.本文重点探讨分辨荧光免疫分析技术的临床监测意义.
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镧系元素时间分辨荧光分析技术及仪器的配套研究
放射免疫(RIA)分析方法以灵敏度高、特异性强著称,但由于它具有放射性,在分析和检测上很难实现全程自动化,从而限制了它的应用.为此,非放射性免疫分析技术应运而生,并迅速发展.主要有酶免疫分析(EIA)、发光免疫分析(CLA)、荧光免疫分析(FIA)等方法,其中被公认有前途的是80年代初发展起来的时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA).
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基于磁性微球AFP时间分辨荧光免疫分析法的建立
目的 建立基于磁性微球(磁珠)AFP时间分辨荧光免疫分析法.方法 用磁珠偶联标记抗AFP单克隆抗体(301M),Eu3标记抗AFP单克隆抗体(304M),采用双抗体夹心法建立基于磁性微球法的AFP-TRFIA,并对106名我院健康体检人员和住院患者进行该方法血清学检测.结果 其检测灵敏度为0.02 IU/mL,线性范围2.12～ 1210 IU/mL;癌胚抗原(CEA)、CA199、CAl25对AFP-TRFIA均无交叉反应.磁珠偶联301M 4℃保存3个月免疫反应性基本无损,而Eu3+标记304M于-20℃下保存6个月免疫反应性也基本无损;同批试剂连续3个月应用分析结果稳定,样品的平均添加回收率为98.75％,低、中、高质控的批内和CV分别为20.46IU/mL和4.75％,50.58 IU/mL和4.25％,120.51 IU/mL和2.89％.批间和CCV分别为19.54IU/mL和9.55％.46.32 IU/mL和7.38％,125.10 IU /mL和3.69％.血清AFP检测结果与传统时间分辨荧光法检测结果对比,结果高度相关,相关系数为0.976.结论 基于磁性微球建立的AFP时间分辨荧光免疫分析法敏感度、特异性、准确度等均符合临床应用要求,可用于临床血清标本中AFP含量的免疫测定.
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CuSO4对2.2.15细胞的影响
目的:探讨硫酸铜(CuSO4)对2.2.15细胞代谢及HBV复制和表达的影响及其机制.方法:采用MTT法检测CuSO4对2.2.15细胞的毒性,流式细胞仪检测细胞周期.透射电镜法,Annexin V/PI双染后双变量流式细胞仪观察CuSO4对2.2.15细胞凋亡的影响,采用时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)检测不同浓度的CuSO4作用后2.2.15细胞上清中HBsAg,HBeAg的P/N值,Taq man荧光定量PCR检测不同浓度CuSO4作用后上清中HBVDNA滴度.结果:MTT实验确定CuSO4在培养液中对2.2.15细胞的大无毒剂量是128 μmol/L.CuSO4作用后可引起细胞周期的改变,肝癌细胞被阻滞在G2+M期,且呈量效相关性.但是未发现CuSO4有诱导凋亡的作用,CuSO4干预12 d的结果显示2.2.15细胞上清中HBsAg,HBeAg的滴度及HBMDNA的复制水平与对照组无明显差别.结论:CuSO4有明显的细胞毒作用,可引起肿瘤细胞周期的改变及细胞坏死,提示了铜的抗癌作用的分子机制,CuSO4短期处理2.2.15细胞后暂未发现其对HBV复制和表达的影响.
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BAS-TRFIA检测抗核抗体Ig(GAM)方法学评估
目的 评估BAS-TRFIA法检测患者血清中抗核抗体Ig(GAM),为临床早期诊断相关疾病提供良好的试验依据.方法 从检测范围、精密度、回收率、稳定性、相关性试验等方面对建立的BAS-TRFIA法检测抗核抗体Ig(GAM)进行分析.结果 BAS-TRFIA法测ANA的曲线良好线性范围在1.1～37 355 U/ml；ELISA法测ANA的曲线良好线性范围在18.2～1167 U/ml,BAS-TRFIA法与ELISA法相比,ANA可测量范围明显提高；BAS-TRFIA法检测ANA低、中、高3种浓度混合血清的批内精密度(CV)分别为5.79％、3.81％和3.16％,批间CV分别为7.48％、6.33％和5.32％；ELISA法低、中、高3个浓度批内CV分别为9.27％、7.35％和5.51％,批间CV分别为12.31％、9.36％和7.15％；高、中、低浓度回收率分别为98.5％、102.2％、104.7％,平均回收率为101.8％;该方法测定值与进口ELISA法所得结果高度相关(R2=0.989)；试剂盒置于37℃水浴箱7d后,BAS-TRFIA法结合率仅下降15.9％,而ELISA法结合率下降58.4％,BAS-TRFIA法试剂盒稳定性较好.结论 BAS-TRFIA法检测人血清中的ANA抗体灵敏度高、检测范围宽、重复性和稳定性好,对早期诊断自身免疫性疾病及监测疗效具有重要意义.
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13 401例孕妇产前筛查结果分析
为了提高提高出生人口的素质,减少出生缺陷儿的发生特别是21-三体综合征(DS)、18-三体综合征,迄今为止医学中对这种疾病既无有效的预防手段,也无有效的治疗方法,只能通过产前筛查和诊断尽可能的及早发现,通过终止妊娠来预防患儿的出生,我们采用时间分辨荧光免疫分析技术,对孕15～19周13 401例的孕妇血清进行甲胎蛋白(AFP)、人绒毛膜促性腺激素游离亚单位(free-β-HCG)、游离雌三醇(uE3)的定量测定,并用专用分析软件计算其风险率,进行产前筛查.
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乙型肝炎病毒两对半模式25006例分析
乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的一种在全球广泛流行的传染病，传染性强，传播途径复杂，呈世界性分布，全球人口的1/3（近20亿）曾感染HBV，大约3.5亿人为HBV慢性感染；每年新增5000万感染者，死亡约100万人。我国是乙型肝炎的高发区，HBV携带率平均为9.75%，无症状慢性HBV携带者约1.2亿，占全球携带者的1/3[1]。 HBV血清标志物的检测对乙型肝炎的诊断、疗效观察及预后判断具有非常重要的意义，随着医学检验技术的发展，HBV血清标志物的定量检测成为可能。时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）是近十年来发展起来的一种高灵敏度的定量检测方法，其应用范围逐渐扩大[2]。本研究采用TRFIA法检测25006例门诊及住院患者HBV血清学标志物，并将其所有模式进行分析，现将结果报告如下。
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浅析药物分析几种新技术的现状及发展前景
评述药物分析的几种新技术,包括时间分辨荧光分析法、流动注射分析和液相色谱--质谱联用技术.其中时间分辨荧光分析法作为一种新的非同位素标记分析技术,具有灵敏度高、选择性好、无放射性污染等优点,能有效消除杂质与背景荧光以提高信噪比,目前广泛用于药物含量测定、酶活性测定、DNA检测和时间分辨荧光免疫分析;流动注射分析是一种新型的微量、高速和自动化的分析技术,具有分析速度快、样品和试剂消耗量少、设备与操作简单、分析效率高等特点,可与各种检测器联用.检测手段灵活多样,适用性广泛,目前在药物分析领域主要用于药物含量测定和生物内源性物质的分析;液相色谱--质谱联用技术集液相色谱的高分离效能与质谱的高选择性、高灵敏检测能力于一体,是组分复杂样品和微量/痕量样品分离分析的有力的研究手段,是药物分析相关领域中不可或缺的重要工具,目前广泛用于药物及天然产物化学成分分析、药物代谢研究、残留物分析等.
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时间分辨荧光免疫检测技术在唐氏筛查中的应用价值
为了探讨时间分辨荧光免疫检测技术在唐氏（唐氏综合征、21-三体综合征）筛查中的应用价值，使用芬兰 PE 公司生产的1420时间分辨荧光测定仪 Wallac MultiCalc 行唐氏筛查，筛查阳性者部分进行羊水产前诊断胎儿染色体核型，统计分析如下。1对象与方法
为了探讨时间分辨荧光免疫检测技术在唐氏（唐氏综合征、21-三体综合征）筛查中的应用价值，使用芬兰 PE 公司生产的1420时间分辨荧光测定仪 Wallac MultiCalc 行唐氏筛查，筛查阳性者部分进行羊水产前诊断胎儿染色体核型，统计分析如下。 -
利用时间分辨荧光免疫分析技术进行肺癌标记物检测
肺癌是目前全世界发病率和死亡率高、预后差的恶性肿瘤之一，严重影响着人类的健康和生存。肺癌标记物在早期肺癌中的异常表达已成为肺癌早期诊断研究领域中有前景的科学探索［1］。但由于现有检测方法灵敏度较差，使广大肺癌患者可能错失了早期发现的机会［2，3］，我们利用时间分辨荧光免疫分析技术进行肺癌标记物的血清含量检测，与传统肺癌标记物检测方法相比较，具有较高精密度和准确度，可在极短时间内实现对大量病人高通量、高灵敏度的肺癌标记物快速检测，满足大范围筛查早期肺癌的需要，报道如下。
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用时间分辨荧光免疫法检测乙肝标志物的临床价值探究
目的：探讨时间分辨荧光免疫方法在乙肝血清标志物检测方面的临床意义和应用价值。方法：分别运用时间分辨荧光免疫法和荧光定量PCR仪器检验法检测2012年1月至2012年12月我院收治的100份乙肝患者的血清样本（其PCR定量＜1.00*103copies/ml），对比分析检测结果的符合率。结果：对本研究中100例血液样本运用时间分辨荧光免疫法进行乙肝标志物检测的结果显示，用其检测乙肝表面抗体指标的符合率为94.3%，用其检测乙肝e抗原的符合率为92.8%，用其检测乙肝e抗体指标的符合率为93.3%，用其检测乙肝核心抗体指标的符合率为84.2%。对本研究中100例血液样本运用荧光定量PCR仪进行检测乙肝标志物的结果显示，用其检测乙肝表面抗体指标的符合率为90.2%，用其检测乙肝e抗原指标的符合率为91.3%，用其检测乙肝e抗体指标的符合率为88.6%，用其检测乙肝核心抗体指标的符合率为78.9%。用两种方法检测乙肝标志物的符合率相比较差异显著。用时间分辨荧光免疫法和荧光定量PCR仪检测本研究中的100份血液样本，其中有91份样本的检测结果与患者的实际病情完全符合，符合率为91.0%；有9份样本的检测结果与患者的实际病情不完全符合。结论：运用时间分辨荧光分析法检测乙肝标志物的特异性较高。在我国尚未充分普及PCR法的情况下，选用时间分辨荧光分析法检测乙肝标志物不失为一种明智的选择。
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CA19-9时间分辨荧光免疫分析法的建立及临床应用
CA19-9是一种胃肠道的肿瘤相关抗原,由糖链乳酸-N-岩藻戊糖唾液酸联结构成,分子量为300万至500万道尔顿[1].临床研究显示CA19-9与胰腺癌的关系为密切,与胆囊癌、胆管癌、胃癌、结直肠癌也有一定的相关性[2].进一步研究发现,CA19-9含量的高低对上述肿瘤的诊断及预防均有一定价值[3].目前,其检测方法有ELISA、RIA、CLIA、ECLIA等,近来我们应用时间分辨荧光免疫分析技术,建立了CA19-9时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA),并与ELISA及化学发光免疫分析(CLIA)进行了临床检测结果评价.
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镧系敏化发光技术快速筛检测定牛肉组织中丹诺沙星的残留量
建立了C18吸附提取(sorbent extraction)和固体表面时间分辨荧光(time resolved luminescence,TRL)技术,用于快速测定牛肉组织中丹诺沙星的残留量.将涂有C18吸附剂的玻璃片浸入除脂的组织匀浆液中提取和富集30 min后,浸入TRL反应试液中反应6 min,取出干燥后采用铽敏化发光技术(terbium-sensitized luminescence,TSL)在C18玻璃片表面直接进行荧光测定,激发光和发射光波长为273 nm和546 nm.丹诺沙星在0～1000ng/ g范围内线性良好.采用本法测定48个盲样(添加浓度为0～1000 ng/g),其中45个样品的测定结果正确,3个样品结果为假阳性.
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一种可用于天然产物粗提物的HIV-1逆转录酶抑制剂筛选方法
人类免疫缺陷病毒(HIV)逆转录酶是成功的获得性免疫缺陷综合症(AIDS)治疗药靶[1],HIV逆转录酶抑制剂是AIDS治疗中必不可少的药物.现有药物的副作用和耐药性的快速出现促使加快寻找新HIV逆转录酶抑制剂的研究工作.天然产物是新药的重要来源,如能够对天然产物粗提物进行HIV逆转录酶抑制活性筛选将极大地提高发现新HIV逆转录酶抑制剂的效率,但目前还未见可用于天然产物粗提物的HIV逆转录酶抑制活性的筛选方法.
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解离-增强时间分辨荧光免疫分析法检测HBVM的临床应用
解离-增强时间分辨荧光免疫分析法(DELFLA)是以三价稀土原子铕(Eu3+)作为示踪物代替HRP等标记抗原或抗体,在免疫反应完成后加入特殊的增强液,将铕从标记抗原或抗体解离下来并与增强液中的组分形成具有强烈荧光螯合物,根据稀土原子螯合物的光谱特点,用时间分辨荧光分析仪测定免疫反应终产物的荧光强度,根据荧光强度判断反应体系中被测物浓度,从而达到定量分析的目的.本文以DELFLA法分别检测5份不同浓度的HBVM标准品和58份病人血清,与常规酶联免疫法(ELISA)进行对照,现将结果报告如下.
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磁性微球时间分辨免疫技术定量检测糖类抗原199的研究
目的 建立检测糖类抗原(CA)199的磁珠时间分辨荧光免疫分析法(Nano-TRFIA).方法 采用磁珠耦联标记抗CA199单克隆抗体(B1),Eu3+标记抗CA199单克隆抗体(Eu3+-CA199-B7),采用双抗体夹心法建立基于磁性微球法的 CA199检测方法 Nano-TRFIA,并对90份血清标本进行该方法血清学检测.结果 Nano-T RFIA检测CA199的灵敏度为0.2 U/mL,甲胎蛋白、CA125对CA199-T RFIA 均无交叉反应.磁珠耦联B14 ℃保存3个月免疫反应基本无损;同批试剂连续3个月应用分析结果稳定,样品的平均添加回收率为97.91%,批内和批间变异系数(CV)分别为4.84% 和8.32%.Nano-T RFIA 检测血清CA199结果与电化学发光法(ECLIA)检测结果显著相关(Y=0.9698 X+4.0153).以ECLIA为金标准,Nano-T RFIA 检测血清CA199时2份标本出现了假阳性.结论 Nano-T RFIA的灵敏度、特异度、准确度等均符合临床应用要求,为进一步临床验证奠定了基础.
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时间分辨荧光法高通量筛选鱼肉组织中土霉素的残留量
目的 动物组织中抗生素残留量的测定一般需要多步骤的样品处理过程.本文介绍了一种全新的、简便和快速筛选鱼肉中土霉素残留量的方法.采用固相萃取和时间分辨荧光(time resolved luminescence,TRL)技术,无须离心和过滤,简化了分析过程.方法 将C18小片浸在组织匀浆液中提取和富集20min,取出,在水中浸泡3min,接着浸在TRL试剂溶液中2min,后取出干燥,干燥后,在C18小片表面上直接进行荧光测定.结果 土霉素在0～8μg/g的范围内,仪器信号的响应与浓度呈现良好的线性关系(r2=0.9992),检测限为0.026μg/g,采用本法对45个加标准液的样品(浓度范围在0～4μg/g)进行分析,其中41个样品的定性结果正确,只有4个样品定性结果显假阳性.结论 本方法简便,快速,准确,适用于鱼肉组织中土霉索的高通量筛选分析.
