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人卵巢颗粒细胞分离培养方法的改进
背景：建立分离培养颗粒细胞快速有效的方法也是提高体外受精-胚胎移植成功率关键的一步。虽然目前文献中有较多关于人卵巢颗粒细胞分离方法的报道，但在细胞数量、纯度及后续生长等方面不尽人意。目的：建立有效的分离提纯、体外培养人卵巢黄素化颗粒细胞的方法。方法：收集体外受精-胚胎移植取卵时的卵泡液，用裂解法、沉淀法、密度梯度离心法分离，Ⅰ型胶原酶或透明质酸酶消化颗粒细胞黏液团并接种在培养皿中进行培养，培养液中加入或不加自体卵泡液。结果与结论：用裂解法得到的颗粒细胞数较沉淀法和密度梯度离心法得到的细胞数多(P >0.05，P <0.05)；3种方法提取的颗粒细胞活性比较无明显差异；培养24 h后沉淀法贴壁细胞数多(P <0.05)，而密度梯度离心法贴壁细胞数少(P <0.05)；透明质酸酶消化颗粒细胞较Ⅰ型胶原酶耗时少且消化彻底；加入自体卵泡液能够促进颗粒细胞生长和存活。结果证实，沉淀法提取颗粒细胞虽然耗时长，但培养的细胞存活率高、培养后收获的细胞数多；透明质酸酶较Ⅰ型胶原酶更适合消化颗粒细胞黏液团；在培养液中加入自体卵泡液更有益于颗粒细胞生长。
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地下水用含铁锰矿石除砷
在印度的孟加拉邦至少发现6个地下水砷污染的地区.近年,孟加拉国报告地下水被砷严重污染.水环境中砷的化学过程相当复杂,以+5、+3、0和-3价出现.但在地下水中砷主要是砷酸盐(H3AsO4、H2AsO4-1、HAsO4-2)和亚砷酸盐(H3AsO3、H2AsO3-1、HAsO3-2).文献中报告,从地下水除砷的铁(Ⅲ)和铝盐等混凝沉淀法,对As(Ⅲ)的去除效果不及As(Ⅴ),需预氧化As(Ⅲ)转为As(Ⅴ).
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低密度脂蛋白胆固醇LDL-C直接透射比浊测定法及其应用
血脂的测定是检查动脉硬化的常规项目.美国血脂学会指出LDL-C是动脉硬化的危险因子,当T-CHO超过6.2 mmoL/L并且LDL-C异常时需对患者限制饮食并采取治疗措施.从测定方法上看,多年来一直以选择沉淀法分离LDL-C部分再显色测定,这样不适于全自动生化分析仪测定.近年来有进口LDL-C双试剂引进,但价格昂贵未能普及,多以测定T-CHO,HDL-C和TG以Friedwaid公式推算LDL-C的结果[1,2].我们根据LDL-C和HDL-C的性质选择了表面活性剂,用分散剂控制LDL-C部分,防止产生大颗粒沉淀,使其反应呈溶胶状,在600～630 nm波长下其吸光度与LDL-C含量成正比.制备了LDL-C直接测定法试剂,在各型半自动和全自动生化分析仪上应用,并取得了良好效果.
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直接厚涂片法沉淀法漂浮集菌法检查痰结核杆菌
痰结核杆菌的检查对诊断、治疗结核病具有重要意义,为了提高痰结核杆菌的检出率,我们采用直接厚涂片法,沉淀法,漂浮集菌法对痰进行结核杆菌检查,比较3种方法结核杆菌检出率.
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化学沉淀法测定小而密低密度脂蛋白方法的建立
目的：利用化学沉淀原理建立小而密低密度脂蛋白（sdLDL）快速、简便的检测方法。方法通过比较不同种类及不同浓度沉淀剂对血清样本中脂蛋白的分离效果，确定终沉淀剂，并对化学沉淀法测定血清sdLDL-C的精密度、线性范围和回收率进行分析。结果终选择140 U/mL肝素-90 mmol/L Mg2＋作为沉淀剂测定血清sdLDL 胆固醇（sdLDL-C）含量。化学沉淀法测定sdLDL-C在0．14～1．44 mmol/L范围内线性关系良好，回归方程为Y＝1．025X-0．197，r＝0．988；对高、低2组不同sdLDL-C浓度的样本批内变异系数（CV）分别为2．83％、3．19％，批间CV分别为5．49％、6．13％；回收率为83．81％。结论 sdLDL化学沉淀法具有样本用量少、操作简便、成本低廉等优点，更适合常规实验室检测血清sdLDL-C含量。
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应用沉淀法消除HLAP患者生化标本乳糜状态的探讨
目的 探索磷钨酸镁沉淀法在高脂血症性急性胰腺炎(HLAP)患者标本进行生化检验前对重度乳糜状态的消除作用.方法 取外观正常标本经磷钨酸镁处理后做各项生化检验,与处理前数据进行相关性分析;以脂肪乳液配制轻、中、重3组模拟乳糜血清做回收试验,计算各生化项目的回收率;收集HLAP患者标本做实证试验,观察乳糜消除效果和生化检验效果.结果 除了二氧化碳结合力(C02CP)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、乳酸脱氢酶同工酶1(LD-1)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)外,钾离子(K+)、钠离子(Na+)、氯离子(Cl-)、钙离子(Ca2+)、血糖(Glu)、尿素(Urea)、尿酸(UA)、肌酐(Cr)、淀粉酶(AMY)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、胆碱酯酶(CHE)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、总胆汁酸(TBA)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LD)、α-羟丁酸脱氢酶(ot-HBDH)经磷钨酸镁处理后均可正确检测,且与处理前呈高度的直线相关,拟合曲线显著性检验显示P均＜0.01.回收试验中3组模拟乳糜血清各生化项目的回收率低为98.03％,高为103.44％,回收效果良好.HLAP患者标本经磷钨酸镁处理后可正确检测的生化项目与相关性分析实验中外观正常的标本一致,甘油三酯(TG)＜10 mmol/L或TG＞ 40 mmol/L的标本乳糜消除效果明显,TG为10～40 mmol/L的标本需先做稀释使TG＜ 10 mmol/L再做处理.结论 磷钨酸镁沉淀法清除血脂效果显著,对绝大多数的生化检验不会产生干扰,适用于重度乳糜状态的HLAP患者标本生化检验前的处理.
关键词： 沉淀法 磷钨酸镁 高脂血症性急性胰腺炎 生化检验 -
低密度脂蛋白胆固醇检测方法的研究进展
有研究发现冠心病的发病风险与总胆固醇（total cholesterol，TC ）含量有明显关联［1］。人体血液循环中的胆固醇主要由低密度脂蛋白（low-density lipoprotein，LDL）转运。许多前瞻性研究和临床试验也发现LDL是冠心病发病风险的主要影响因素［1-2］。对有冠心病临床表现患者［3-4］和无冠心病临床表现患者［5-7］的干预性研究发现降脂治疗疗效明显。临床实验室检测低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholester-ol，LDL-C）常用的方法是Friedewald计算法［8］。该方法是根据患者空腹状态的血清TC、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol， HDL-C）和甘油三酯（triglyeride，TG）进行计算得到LDL-C浓度。虽然这一方法在临床检测中广泛应用，但并不建议使用这一方法检测非空腹状态样本、高TG血症（TG＞4．52 mmol／L）患者样本和Ⅲ型高脂蛋白血症患者样本。基于上述原因，1995年美国国家胆固醇教育计划（National Cholesterol Education Program，NCEP）专家组建议使用直接法检测 LDL-C［9］。我们综述了 LDL-C检测方法的发展历史和不同检测方法间的结果比较等研究进展。
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述评:以ZAG探索脂肪积存之奥秘
当我们阅读20世纪五、六十年代哈佛大学的Bürgi和Schmid如何从人血浆中用锌沉淀法提纯一种糖蛋白,即目前为人们所熟知的锌-α2-糖蛋白(ZAG)的文章时,不禁要赞叹于当时他们所采用的完整详尽的生化技术,简直是生物化学上的一个奇迹.
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丙交酯-乙交酯共聚物中残留单体的去除
将丙交酯-乙交酯共聚物(PLGA)溶于二氯甲烷中,用稀盐酸为萃取剂(即稀酸萃取法)或乙醇为沉淀剂(乙醇沉淀法)去除PLGA中残留的乙交酯和丙交酯单体.考察了两种方法的工艺参数对单体残留量的影响.结果表明,稀酸萃取法比乙醇沉淀法的去除效果好,但所用盐酸会破坏PLGA;沉淀法能有效避免PLGA的降解,且工艺简单.上述两法的去除效果均优于真空加热法.
关键词： 丙交酯-乙交酯共聚物 萃取 沉淀法 残留单体 -
试剂盒质量对HDL-C测定结果的影响
血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)是血脂检验常规项目和流行病学调查的重要项目之一.目前国内已基本普及直接测定法,但卫生部医政司与中华医学会检验分会推荐的磷钨酸一镁沉淀法(PTA)[1,2]在基层医院仍被广泛采用,同时沉淀法也是鉴定直接法商品试剂可靠性对比方法.
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两种直接测定高密度脂蛋白胆固醇的方法与沉淀法的对比
目的评价聚阴离子多聚物/表面活性剂(PPD)法与PEG修饰酶/硫酸α-环糊精(PEGME)法直接测定高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的准确性和特异性.方法将两法试剂与沉淀法作对比,分别考察对序列超离HDL、LDL及对正常血清标本、高胆红素标本、高甘油三酯标本和校准血清的作用情况.结果 PPD法与沉淀法相比偏差较大,准确性、特异性均较差,而PEGME法与沉淀法结果一致.结论临床实验室使用PPD法试剂应谨慎,而PEGME法优于PPD法.
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3种分离尿外体方法比较
目的 对超速离心法、超滤法和沉淀法3种分离尿液中外体(exosome)方法进行比较,为临床研究选择合适的分离方法提供依据.方法 用超速离心法、超滤法和沉淀法3种方法分别从4例健康人和2例慢性肾脏病(CKD)患者尿液中分离exosome.用透射电镜观察尿exosome形态结构,BCA法检测exosome总蛋白质浓度,分别在尿体积及exosome总蛋白质浓度相同上样条件下,用western blot(WB)检测exosome标志蛋白TSG101和Alix.结果 3种分离方法均能获得直径为40 ～ 100 nm的圆形膜性囊泡;WB能检测到超速离心法及超滤法分离得到的exosome标志蛋白,而沉淀法未检测到;超滤法尿exosome总蛋白质浓度远高于超速离心法及沉淀法;超速离心法尿体积及exosome总蛋白质浓度相同情况下上样时所有样本均能检测到exosome标志蛋白,且表达量在3种方法中均多;超滤法尿体积相同情况下上样,4例健康人均能检测到exosome标志蛋白,而以exosome总蛋白质浓度相同上样时,仅有2例健康人能检测到标志蛋白,但2例CKD患者在此两种上样方式未检测到标志蛋白;沉淀法两种上样条件下所有样本均未检测到exosome标志蛋白.结论 超速离心法分离尿exosome效果较好,开展尿exosome临床研究时建议选择超速离心法.
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聚乙二醇及其衍生物在检验医学中的应用
聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)又名聚氧乙烯二醇,是一类用途极为广泛的高分子化合物,20世纪印年代就在医学检验中发挥了重要的作用.PEG沉淀反应广泛应用于临床检验以及免疫球蛋白、核酸和酶的分离与纯化;应用PEG修饰法无需预先分离沉淀直接测定血清HDL-C;蛋白质和多肽的PEG化修饰可以降低其免疫原性和抗原性,增加水溶性和稳定性,降低毒副作用;PEG抗人球蛋白技术能够灵敏地检测出稀有红细胞抗体;用PEG修饰、遮蔽人类及动物红细胞血型抗原,制备无抗原性的人类通用型血液以及动物血的人源化改造也取得了一定的进展.
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吡喹酮引起类赫氏反应伴消化道出血1例
李某,男,15岁,居住血吸虫病流行区.既往体健,否认癫痫和药物过敏史.2003年6月15日前后多次到团东外洲嬉水.当时双下肢有一过性小红丘疹,数天后未治自愈.7月25日开始发烧、畏寒、腹泻、全身乏力.7月26日到当地团洲血防站门诊检查血吸虫病,IHA、ELISA均呈强阳性反应,水洗沉淀法找到血吸虫虫卵,诊断为急性血吸虫病,医生要求患者住院治疗,但患者执意回家服药.按120 mg/kg体重,总剂量为5 400 mg,6日疗法,予以治疗.7月27日早餐后1 h,患者服吡喹酮4片,约1 h后,开始腹痛、呕吐,解稀大便带红白冻样约100m1,30 min后,患者出现高热抽搐,1 h后进入昏迷状态,急送团洲血防站救治.
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滤液法和沉淀法测定地骨皮醇提物中的甜菜碱含量
目的建立地骨皮醇提物中甜菜碱的含量测定方法.方法基于甜菜碱与雷氏盐的反应,采用分光光度法测定地骨皮醇提物中甜菜碱含量.结果沉淀法与滤液法的平均回收率分别为98.40%与98 21%,RSD分别为0.97%与1.04%(n=6).结论滤液法与沉淀法用于甜菜碱的含量测定,所得结果基本一致,滤液法操作相对简便。
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钙纳米粒子的制备及表征鉴定
目的:制备钙纳米粒子并进行表征鉴定.方法:采用液相沉淀法,在不同温度、缓冲液、液体混合方式下制备钙纳米粒子,并用透射电镜(TEM)、粒度分布仪、X射线能谱仪(XPS)等测试手段对该纳米粒子的结构、大小和形状等进行表征.结果:低温下向柠檬酸钠中匀速缓慢加入等量氯化钙和磷酸氢二钠并搅拌,可得到颗粒状钙纳米粒子,平均粒径260 nm,XPS结果显示其化学成分为磷酸钙.结论:通过液相沉淀法,成功制备了大小、形态较理想的钙纳米粒子.
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乙醇沉淀法去除人血清清蛋白的实验研究
目的:探索应用乙醇沉淀法选择性去除人血清清蛋白的效果. 方法:正常血清标本与肺腺癌患者血清标本各8份,均用乙醇沉淀法去除清蛋白,低丰度蛋白与原血清样本蛋白等量上样行一维凝胶电泳分析,并对去除清蛋白后标本进行清蛋白定量检测. 结果:一维凝胶电泳显示,清蛋白大部分被清除,显示出低丰度蛋白,正常血清与肺腺癌患者血清低丰度蛋白一维电泳无明显差异,两组标本平均清蛋白含量为(5.88±0.35)g/L和(5.50±0.53)g/L. 结论:乙醇沉淀法可有效去除人血清中的清蛋白,为进一步行血清蛋白质组学分析提供良好的实验条件.
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4种寄生虫虫卵检查方法比较
目前,寄生虫虫卵的检查方法常用的是直接涂片法、饱和盐水漂浮法和清水沉淀法[1～3],但直接涂片法的检出率较低,饱和盐水漂浮法仅适用于肠道线虫卵的检查,而清水沉淀法操作较为烦琐.鉴于此,本实验室根据文献报道,选择比重较饱和盐水更大的亚硝酸钠饱和溶液作为漂浮液,既可用于线虫卵的检查,也可用于吸虫卵、绦虫卵的检查,并且其操作方便,便于基层,特别是普查中推广使用.
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国产低密度脂蛋白胆固醇直接测定法的评价
血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定对高胆固醇血症的诊断和疗效观察,以及对冠心病危险性的预测都有重要的临床意义.过去普遍使用Friedewald公式(简称F公式)计算…或PVS沉淀法[2],但该两法不适用于甘油三酯(TG)>4.52mmol/L的标本或自动分析.近年已有适合自动分析的LD-C直接测定试剂盒问世,但为进口商品,价格较贵.新近宁波慈城生化试剂厂推出了LDL-C直接测定试剂盒,对此我们作了可比性评价.
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机采浓缩血小板制剂的简捷质检方法
血小板是维持人体正常止血功能的重要血液成分之一,若体内的血小板数量少于正常范围或功能异常,就会发生出血,而输注血小板制剂可有效地防治因血小板数量减少或功能异常而导致的出血.20世纪初人们开始利用全血静置法、沉淀法、手工离心法及单采等方法制备富含血小板血浆(PRP)、浓缩及超浓缩血小板(PC)制剂应用于临床,使血小板减少或功能异常患者的血小板数量或
