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快速老化相关miRNAs在遗忘型轻度认知功能障碍患者血清中的表达及其生物信息学分析
目的: 探讨快速老化相关miRNAs在遗忘型轻度认知功能障碍(aMCI) 患者血清中的表达,阐明其在aMCI发病中的作用.方法: 选取aMCI患者(aMCI组, n=66)和认知功能正常老年人(对照组, n=76)为研究对象.采用实时定量PCR技术(qRT-PCR)检测2组受试者血清中miR-132、miR-193b、miR-130b、miR-20a、miR-296、miR-329和miR-206的表达.采用TargetScan 6.0软件对差异表达的血清miRNAs进行靶基因预测,并通过DAVID在线工具分析靶基因生物学功能;利用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测2组受试者血清中靶基因的水平.结果: aMCI组患者血清miR-206和miR-132表达水平均明显高于对照组(P<0.05),其他miRNAs则差异无统计学意义(P>0.05).靶基因预测,脑源性神经营养因子(BDNF)和沉默信息调节因子1(SIRT1)共为miR-206和miR-132的靶基因.aMCI组患者血清BDNF和SIRT1表达水平均明显低于对照组(BDNF:29.50 μg·L-1±3.13 μg·L-1 vs 32.29 μg·L-1±3.66 μg·L-1;SIRT1:1.86 μg·L-1±0.25 μg·L-1 vs2.10 μg·L-1± 0.29 μg·L-1),2组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论: miR-206和miR-132在aMCI患者血清中表达水平明显升高,二者可能通过调控其靶基因BDNF和SIRT1的表达参与aMCI发病过程.
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标本配穴电针预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠海马沉默信息调节因子1的影响
目的 基于沉默信息调节因子1(silent information regulation 1,SIRT1)途径探讨标本配穴电针预处理抗脑缺血再灌注损伤的作用机制.方法 将60只雄性SD大鼠随机分为A组、B组和C组,每组20只.A组仅分离右侧颈总动脉,不给予其他处理;B组采用改良的MCAO线栓法制备大鼠右侧局灶性脑缺血再灌注损伤模型;C组造模前取百会、肾俞、三阴交行电针预处理.比较各组再灌注3 h后神经行为学评分,并采用TTC染色法测定脑梗死容积百分比,采用HE染色法观察海马神经元形态,采用Western-blot方法检测SIRT1和过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)蛋白表达.结果 C组神经行为学评分和脑梗死百分比较B组均显著降低,SIRT1和PGC-1α蛋白表达较B组均显著升高,两组比较差异均具有统计学意义(P<0.01).结论 标本配穴电针预处理可能通过上调内源性脑SIRT1和PGC-1α蛋白表达而减轻脑缺血再灌注损伤.
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西格列汀对Ⅱ型糖尿病大鼠骨髓内皮祖细胞衰老的影响及可能机制
目的:探讨西格列汀对Ⅱ型糖尿病大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)衰老的影响及可能机制.方法:建立SD大鼠Ⅱ型糖尿病模型,成模大鼠随机分为模型组,西格列汀低、中、高剂量组(西格列汀组),西格列汀与烟酰胺联合用药组(西格列汀+烟酰胺组);正常大鼠随机分为正常对照组及烟酰胺组.每周测体质量及随机血糖,ELISA检测血清中胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和二肽基肽酶4(DPP-4)水平,β-半乳糖苷酶染色法检测EPCs的衰老阳性率,RT-qPCR检测EPCs中沉默信息调节因子1 (SIRT1)的mRNA表达水平.结果:烟酰胺组与对照组相比,EPCs衰老阳性率明显降低;DM组与NC组比较显示成模后大鼠血清DPP-4水平升高、GLP-1水平下降,EPCs中SIRT1 mRNA相对表达量下调,EPCs衰老阳性率上升,差异均有统计学意义;成模大鼠在西格列汀干预后,随着药物剂量增加,与模型组比较,大鼠血清中DPP-4水平下降、GLP-1水平升高,EPCs中SIRT1 mRNA相对表达量上调,EPCs衰老阳性率呈现下降趋势,差异均有统计学意义;与高剂量西格列汀组相比,西格列汀+烟酰胺组大鼠EPCs衰老阳性率升高,差异有统计学意义.结论:西格列汀能缓解Ⅱ型糖尿病大鼠EPCs衰老,其作用机制可能涉及SIRT1介导的DPP-4/GLP-1通路.
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胰高血糖素样肽1-受体/沉默信息调节因子1通路参与高糖诱导大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞衰老
目的:探讨胰高血糖素样肽1-受体(GLP-1R)/沉默信息调节因子1(SIRT1)信号通路参与高糖诱导大鼠嗜铬细胞瘤细胞系(PC12)细胞衰老的机制.方法:培养PC12细胞用作神经细胞模型,采用β-半乳糖苷酶染色评价PC12细胞衰老情况;免疫印迹检测SIRT1、GLP-1R表达.结果:葡萄糖能剂量依赖性诱导PC12细胞衰老,并抑制SIRT1和GLP-1的表达,且均在葡萄糖(30 mmol/L,48 h)时效果明显.SIRT1激动剂白藜芦醇(10μmol/L)能抑制高糖促进PC12细胞衰老的作用,而SIRT1的特异性抑制剂splitomicin(10μmol/L)能阻断白藜芦醇的作用.GLP-1R的激动剂GLP-1 (10 nmol/L)能逆转高糖对SIRT1表达的抑制作用并缓解PC12细胞的衰老,而GLP-1R特异性拮抗剂exendin(9-39)则阻断了GLP-1的作用.结论:GLP-1R/SIRT1信号通路参与了高糖诱导的神经细胞衰老的作用.
关键词： PC12细胞 糖尿病脑病 衰老 沉默信息调节因子1 胰高血糖素样肽1-受体 -
Sirt1对糖尿病心肌病大鼠早期心肌S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的调节作用及其机制研究
目的:通过建立糖尿病大鼠模型,探讨沉默信息调节因子(Sirt1)对S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH)糖尿病心肌病早期的调节作用及其机制. 方法:采用高脂饮食联合链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,分为对照组、早期糖尿病模型组(DM组)和白藜芦醇处理组(RES组),RES组给予白藜芦醇2.5 mg/(kg·d)灌胃2周处理.HE染色法观察心肌组织病理结构变化,超声心动图检测心功能相关指标,高效液相色谱法检测同型半胱氨酸(Hcy)、S-腺苷甲硫氨酸(SAM)及S-腺苷同型半胱氨酸(SAH),Western blot检测各组心肌组织SAHH、Srit1等蛋白表达变化. 结果:显微镜下DM组大鼠心肌组织可见不同程度炎细胞浸润、甚至变性,而RES组心肌组织可见少量炎性细胞浸润,少量心肌细胞呈长杆状,坏死灶不明显,嗜酸性变较DM组轻.HPLC检测结果显示对照组、DM组和RES组的Hcy分别为(45.37±7.99)、(101.78±16.77)和(86.33±10.09) μmol/L,DM组和RES组较对照组升高,但RES组低于DM组;SAH分别为(50.33±7.34)、(22.92±4.32)和(33.45±7.88) μmol/L,DM组和RES组较对照组降低,但RES组高于DM组;SAM分别为(66.34±9.99)、(69.56±9.01)和(70.89±11.33) μmol/L,各组间无显著差异;SAHH分别为(44.11±5.17)、(92.33±17.56)和(19.73±4.07) μmol/L,DM组较对照组升高,RES组较对照组降低;Srit1分别为(80.12±10.09)、(29.11±3.91)和(107.32±13.24) μmol/L,DM组较对照组降低,RES组较对照组升高. 结论:SAHH及下游Hcy等的表达可能是早期糖尿病心肌病发生发展的重要作用机制,而Sirt1对SAHH的表达调控作用可能起重要作用.
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外源性睾酮对雄性小鼠心功能和心脏衰老的影响
目的:探讨外源性睾酮对雄性小鼠心功能和心脏衰老的影响. 方法:15个月龄C57/BL6雄性小鼠分为4组:安慰剂组、睾酮组、沉默信息调节因子1(Sirt1)抑制剂EX-527组(EX-527组)和睾酮+EX-527组,每组7只.干预3个月后超声心动图检测小鼠心功能指标,ELISA法检测小鼠血清睾酮浓度,分离小鼠左心室,组织化学染色法检测衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal),Western blot检测心肌组织B型利钠肽(BNP)、Sirt1蛋白表达水平,实时定量RT-PCR检测心肌组织肌球蛋白重链(MYH)6、MYH7、肌浆网钙ATP酶2(SERCA2)和α-肌动蛋白1(ACTA1) mRNA表达水平. 结果:睾酮组及睾酮+ EX-527组血清睾酮水平较安慰剂组及EX-527组明显升高(P均＜0.05).与安慰剂组相比,睾酮组SA-β-gal染色阳性面积比例明显减少[(17.13±7.12)％对(35.88±10.74)％,P＜0.05],BNP蛋白表达水平、MYH7和ACTA1 mRNA表达水平明显降低(P均＜0.05),Sirt1蛋白表达水平、MYH6和SERCA2 mRNA表达水平明显升高(P均＜0.05).EX-527组和睾酮+EX-527组上述各指标与安慰剂组相比无统计学差异,与睾酮组相比有显著性差异(P均＜0.05).超声心动图结果示各组左室舒张末期内径、室间隔厚度、左室后壁厚度、左室缩短分数、左室射血分数及E/A值无显著性差异(P均＞0.05). 结论:外源性睾酮可能通过Sirt1途径延缓雄性小鼠心肌细胞衰老,改善心衰相关的基因表达异常.
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丙型肝炎病毒核心蛋白下调沉默信息调节因子1导致肝窦内皮细胞功能障碍
目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对肝窦内皮细胞(LSEC)沉默信息调节因子1(SIRT1)表达及LSEC功能的影响.方法 HepG2细胞或表达HCV核心蛋白的HepG2细胞与LSEC共培养.应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-PCR(RT-PCR)、Western印迹检测LSEC SIRT1活性、mRNA和蛋白的表达,以及LSEC脂联素受体2(AdipoR2)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、第Ⅷ相关抗原(Von Willebrand factor, vWf)、分化抗原簇31(CD31)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和CD14蛋白的表达.应用流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)水平,检测共培养上清液中丙二醛(MDA) 、超氧化物歧化酶(SOD)、脂联素、一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)的水平.计量资料采用t检验.结果 与LSEC和HepG2细胞共培养组相比,LSEC和表达HCV核心蛋白HepG2细胞共培养组SIRT1活性(0.3±0.1比1.0±0.3,t=5.422,P<0.01)、mRNA(0.4±0.1比1.0±0.2,t=6.573,P<0.01)和蛋白(0.3±0.08比1.0±0.3,t=5.613,P<0.01)水平下降;脂联素[(3.41±0.61)比(5.82±0.87)μg/mL,t=5.556,P<0.01]分泌减少且AdipoR2蛋白(0.3±0.1比0.8±0.2,t=5.477,P<0.01)表达下降;eNOS蛋白(0.4±0.1比0.9±0.3,t=3.873,P<0.01)表达下降;vWf蛋白(0.8±0.3比0.4±0.1,t=3.098,P<0.01)、CD31蛋白(0.9±0.2比0.3±0.1,t=6.573,P<0.01)、VEGF蛋白(0.9±0.3比0.5±0.1,t=3.873,P<0.01)表达增加;CD14蛋白(0.4±0.1比0.9±0.3,t=3.873,P<0.01)表达下降.共培养上清液中NO和SOD水平下降,ET-1和MDA水平升高. 结论 HCV核心蛋白下调SIRT1活性及表达,下调脂联素及受体表达,引起LSEC收缩和肝窦毛细血管化,增加氧化应激反应,导致肝窦微循环障碍.
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丙型肝炎病毒核心蛋白下调沉默信息调节因子1导致肝星状细胞活化
目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对肝星状细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)表达及肝星状细胞活化的影响.方法 HepG2细胞或表达HCV核心蛋白的HepG2细胞与肝星状细胞(LX-2细胞)共培养.应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-PCR、Western印迹检测LX-2细胞SIRT1活性、mRNA及蛋白的表达.Western印迹检测LX-2细胞磷酸化AMP激活的蛋白激酶(p-AMPK)、脂联素受体2(AdipoR2)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)蛋白的表达.ELISA法检测共培养上清液中人Ⅳ胶原(ColⅣ)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)、透明质酸(HA)和人层黏连蛋白(LN)的水平.计量资料采用t检验.结果 与LX-2细胞和HepG2细胞共培养组相比,LX-2细胞和表达HCV核心蛋白HepG2细胞共培养组SIRT1活性(0.4±0.1比1.0±0.2,t=6.573,P<0.01)、mRNA(0.3±0.1比1.0±0.3,t=5.422,P<0.01)和蛋白(0.4±0.1比0.8±0.2,t=4.382,P<0.01)水平下降;p-AMPK(0.3±0.1比0.8±0.2,t=5.477,P<0.01)和AdipoR2(0.4±0.1比0.8±0.2,t=4.382,P<0.01)表达下降;TGF-β1(2.3±0.5比0.8±0.2,t=6.823,P<0.01)表达增加;共培养上清液中ColⅣ、PⅢNP、HA和LN的水平增加.SIRT1激动剂白藜芦醇降低TGF-β1的表达.结论 HCV核心蛋白下调肝星状细胞SIRT1活性及表达,下调AdipoR2表达,上调TGF-βl表达,活化肝星状细胞.
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脂滴自噬在丙型肝炎病毒核心蛋白下调沉默信息调节因子1诱导小鼠肝脂肪变性中的作用
目的 研究脂滴自噬在HCV核心蛋白下调沉默信息调节因子1(SIRT1)诱导小鼠肝脂肪变性中的作用.方法 小鼠随机分为两组,每组10只.实验组小鼠尾静脉注射HCV core重组表达载体.对照组小鼠尾静脉注射磷酸盐缓冲溶液.1个月后处死小鼠.检测肝功能、脂联素、血清和肝内甘油三酰(TG)、肝脏组织病理学检查肝脂肪变性程度.蛋白质免疫法检测肝脏SIRT1蛋白、脂联素受体(AdipoR)蛋白以及脂滴自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、脂肪分化相关蛋白(ADRP)、尾部作用蛋白(TIP 47)和P62蛋白的表达.计量资料采用t检验.结果 与对照组相比,HCV组小鼠出现肝脂肪变性;肝脏TG含量明显增加[(80.9±20.1)比(45.8±10.5) μg/mg,t=4.964,P＜0.01];血清脂联素[(1.05±0.25)比(1.41±0.45) ng/mL,t=2.211,P＜o.05]水平下降;SIRT1蛋白水平(o.4±o.1比0.9±0.2,t=7.071,P＜0.01)和AdipoR2蛋白水平(0.4±0.1比0.8±0.2,t=5.656,P＜0.01)下降;LC3-Ⅱ蛋白(0.8±0.2比0.4±0.1,t=5.656,P＜0.01)、TIP-47蛋白(0.9±0.3比0.4±0.1,t=5.000,P＜0.01)和ADRP蛋白(0.8±0.3比0.4±0.1,t=4.000,P＜0.01)表达增加;而p62蛋白(0.7±0.2比0.8±0.3,t=0.877,P＞0.05)表达水平差异无统计学意义.结论 HCV核心蛋白下调SIRT1表达,下调脂联素及受体表达,引起不完全脂滴自噬导致肝脂肪变性.
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Mir-217通过 Sirt1/HIF-1α信号通路介导高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞炎症反应及纤维化
目的探讨MicroRNA-217(Mir-217)、沉默信息调节因子1(Sirt1)及低氧诱导因子1α(HIF-1α)在高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞( RMCs)炎症反应及纤维化中的作用。方法以Sirt1激活剂白藜芦醇预处理体外高糖培养的RMCs或转染Sirt1小干扰RNA( siRNA)、HIF-1αsiRNA及Mir-217抑制物。采用实时定量PCR检测Mir-217、Sirt1 mRNA、HIF-1αmRNA的表达,Western印迹检测Sirt1、HIF-1α、结缔组织生长因子(CTGF)、内皮素1、纤连蛋白(FN)的表达,酶联免疫吸附法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子( VEGF)的表达。结果高糖促进RMCs中Mir-217、HIF-1α、CTGF、ET-1、FN、TGF-β1及VEGF的表达(均P<0.01),下调Sirt1表达(P<0.01)。 Mir-217基因沉默或25μmol/L白藜芦醇预处理可逆转高糖刺激的HIF-1α、CTGF、内皮素1、FN、TGF-β1及VEGF表达(均P<0.01)。结论在高糖培养的RMCs中,Mir-217通过调节Sirt1/HIF-1α通路促进炎症反应及纤维化,为Sirt1在糖尿病肾病中发挥保护作用的机制提供新的理论依据。
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2型糖尿病不同尿白蛋白排泄率患者血清Mir-217水平与Sirt1及HIF-1α的相关性
目的探讨2型糖尿病不同尿白蛋白排泄率患者血清MicroRNA-217( Mir-217)水平与沉默信息调节因子1(Sirt1)及低氧诱导因子1α(HIF-1α)相关性。方法479例2型糖尿病患者根据尿白蛋白与尿肌酐的比值( urinary albumin to creatinine ratio,ACR)分为正常白蛋白尿组( D1组,181例)、微量蛋白尿组( D2组,165例)、临床蛋白尿组( D3组,133例),192名正常体检者作为对照组。采用实时定量PCR检测血清Mir-217水平,采用酶联免疫吸附法( ELISA)检测血清Sirt1、HIF-1α、血管内皮生长因子( VEGF)水平。结果与对照者相比,2型糖尿病患者血清Mir-217水平显著升高,且随着尿白蛋白升高,分别在D1、D2、D3组逐渐升高(P<0.01)。年龄、糖尿病病程、体重指数、空腹血糖、空腹胰岛素、稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、HbA1C、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血尿酸、血尿素氮(BUN)、HIF-1α、VEGF、Mir-217与ACR呈正相关(均P<0.05)；高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、Sirt1与ACR呈负相关(均P<0.05)。 VEGF、HIF-1α、Mir-217、BUN、糖尿病病程、LDL-C、Sirt1以及血尿酸是影响ACR的主要因素(均P<0.01)。糖尿病病程、HOMA-IR、HbA1C、ACR、LDL-C、TC、TG、血尿酸、BUN、HIF-1α及VEGF与Mir-217呈正相关(均 P<0.05),Sirt1与 Mir-217呈负相关(P<0.01)。结论血清Mir-217可能通过促进慢性炎症反应、肾脏纤维化、新生血管形成等途径参与糖尿病肾病的发生和发展,可作为糖尿病肾病新的生物学标记物。
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沉默信息调节因子1在缺血预处理中的神经保护作用
沉默信息调节因子1（silent mating type information regulation 2 homolog 1, SIRT1）作为表观遗传学中沉默信息调节因子，在基因沉默中有重要作用，且得到研究者的广泛关注。其作用依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide, NAD+)/NADH的信号转导，通过多种转录因子调节蛋白质表达，起到保护神经细胞的作用。缺血预处理(ischemic preconditioning, IPC)措施对神经细胞产生一定的保护作用。实验发现在IPC介导神经保护中，SIRT1起重要作用。近年来的研究提出，SIRT1也可能损伤细胞，因在脑缺血情况下，已消耗大量NAD+，SIRT1的激活可能会进一步消耗NAD+，加速神经细胞死亡。这为研究IPC的作用提供了新的内容。
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沉默信息调节因子1及其与痛风和高尿酸血症关联的研究进展
沉默信息调节因子1为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖的脱乙酰化酶，其功能广泛而复杂，包括在细胞存活、增殖等过程中都有重要的生理作用。研究发现沉默信息调节因子1可调节糖、脂代谢，且对炎症反应有一定的抑制作用，故有可能通过抑制血尿酸水平升高、阻断炎症反应而对慢性痛风反复发作产生一定的预防作用。本文介绍沉默信息调节因子1的主要生物学功能及其与痛风和高尿酸血症的关联。
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SIRT1对高糖诱导的系膜细胞NF-κB p65乙酰化及MCP-1表达的影响
目的 探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(RMC)核因子κB(NF-κB) p65蛋白乙酰化及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响.方法 构建干扰SIRT1基因的shRNA慢病毒质粒pTRC-shSIRT1并进行鉴定.将RMC分为高糖组(用高糖培养液培养)、白藜芦醇(SIRT1激活剂)+高糖组(用含1μmol/L白藜芦醇的低糖培养液培养24 h后,换用高糖培养液培养)、SIRT1 RNAi组(添加干扰病毒pTRC-shSIRT1感染4h后,换用低糖培养液培养)、SIRT1 RNAi+高糖组(添加干扰病毒pTRC-shSIRT1感染4h后,换用高糖培养液培养),同时设正常对照组和甘露醇高渗对照组.以实时荧光定量PCR检测SIRT1、MCP-1的mRNA表达,蛋白质印迹法检测SIRT1和NF-κB p65乙酰化蛋白的表达,ELISA技术检测MCP-1蛋白含量.结果 质粒测序证实干扰SIRT1基因的shRNA慢病毒载体构建成功,且能抑制RMC中SIRT1基因表达(P＜0.01).高糖刺激使RMC SIRT1基因表达降低,NF-κB p65蛋白乙酰化增强,MCP-1 mRNA和蛋白水平增高;SIRT1激活剂白藜芦醇可逆转高糖引起的变化;而沉默SIRT1可促进高糖诱导的RMC NF-κB p56乙酰化及MCP-1mRNA和蛋白表达(P＜0.05或0.01).结论 SIRT1可抑制高糖诱导的RMC MCP-1表达,其机制可能与NF-κB p56去乙酰化有关.
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丹参素通过SIRT1-SOD信号通路延缓大鼠主动脉内皮细胞老化
本研究旨在观察丹参素(Danshensu,DSS)预处理对大鼠主动脉内皮细胞(rat aortic endothelial cells,RAECs)老化的影响及机制.原代RAECs株传代培养到第四代为年轻组细胞(Young group),传代至第十二代为老年组细胞(Old group);自第四代起,给予DSS孵育到第十二代,即为DSS组细胞;自第四代起,联合给予DSS和细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂尼克酰胺(NAM)孵育到第十二代,即为DSS+N组细胞.用细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA β-gal)染色法鉴定细胞老化程度,DAPI荧光染色检测老化相关的异染色质位点(senescence associated heterochromatin foci,SAHF)的表达变化,硫代巴比妥酸(TBA)法和化学比色法检测RAECs中丙二醛(MDA)和过氧化氢(H2O2)含量,免疫印迹法测定细胞SIRT1、黄嘌呤氧化酶(XOD)和超氧化物歧化酶2(SOD2)的表达.结果显示,与年轻组相比,老年组细胞发生明显衰老,细胞SA β-gal阳性率、SAHF形成率、MDA及H2O2含量显著增加(均P＜0.01);DSS处理能明显减少老年组细胞SA β-gal阳性率、SAHF形成率、MDA及H2O2含量(P＜0.05或P＜0.01),SIRT1阻断剂可以逆转DSS对细胞的保护作用;免疫印迹结果显示,与年轻组相比,老年组细胞XOD蛋白表达增加,SIRT1和SOD2蛋白表达减少(P＜ 0.05或P＜ 0.01),DSS可以使老年组细胞XOD蛋白表达减少,SIRT1和SOD2蛋白表达增加(P＜0.05);而给予SIRT1阻断剂逆转DSS的作用.以上结果提示,DSS预处理能减轻RAECs的氧化应激水平,延缓细胞的衰老进程,其机制可能与SIRT1蛋白表达的上调有关.
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人肺腺癌细胞系中SIRT1表达与奈达铂敏感性的关系
目的 探讨5株人肺腺癌细胞系HCC827、H1650、H1975、A549和H1299中沉默信息调节因子1(Sirtuin 1,SIRT1)与奈达铂(Nedaplatin,NDP)药物敏感性的关系.方法 采用实时定量PCR及western blot检测5株人肺腺癌细胞系SIRT1 mRNA及蛋白质表达水平;NDP作用于细胞后,用CCK-8法检测细胞活力并计算半数生长抑制浓度值(the half growth inhibition con-centration,IC50);通过siRNA干扰技术下调A549、H1299、H1650和H1975细胞系中SIRT1的表达,采用CCK-8法和流式细胞术分别检测NDP对细胞存活率和细胞凋亡的影响.结果 与HCC827细胞(mRNA和蛋白质相对表达量分别为1.00和0.11±0.02)相比,H1650、H1975、A549和H1299细胞中SIRT1 mRNA(分别为4.53±0.74、3.11±0.64、15.76±2.28和18.09±1.17)和蛋白质表达水平(分别为0.23±0.03、0.21±0.02、0.52±0.11和0.56±0.08)均明显上调,差异有统计学意义(F分别为122.10和26.50,P<0.01);A549和H1299细胞对NDP的敏感性[IC50值分别为(7.38±1.59)μmol/L和(8.14±1.43)μmol/L]明显高于HCC827、H1650和H1975细胞[IC50值分别为(26.16±4.35)μmol/L、(22.29±3.26)μmol/L和(24.41±2.58)μmol/L],差异有统计学意义(F=30.86,P<0.01).A549和H1299细胞转染并经NDP处理后,siSIRT1组细胞存活率明显高于NC组(F分别为235.10和39.20,P<0.01),细胞凋亡率明显低于NC组(t分别为7.29和6.68,P<0.05);而在H1650和H1975细胞中,siSIRT1组细胞存活率明显低于NC组(F分别为185.40和60.09,P<0.01),细胞凋亡率明显高于NC组(t分别为6.15和31.36,P<0.01).结论 在SIRT1高表达的A549和H1299细胞中SIRT1表达增加了细胞对NDP敏感性,而SIRT1中表达的H1650和H1975细胞中SIRT1表达降低了细胞对NDP的敏感性,提示在人肺腺癌细胞中SIRT1可能在铂类耐药发挥双重作用.
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沉默信息调节因子1在心肌缺血/再灌注损伤中的保护作用研究进展
沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)是一种依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenosine dinucleotide,NAD+)的组蛋白去乙酰化酶,参与机体细胞存活、衰老、凋亡、代谢,在衰老相关性疾病及脏器损伤中具有保护作用.心脏SIRT1信号转导增加可以通过调控相关信号分子而减少氧化应激、细胞凋亡、炎症反应等在心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤中介导保护作用.文章主要从SIRT1的基本特征、表达和活化调控机制,以及SIRT1在心肌I/R损伤中的保护作用和相关机制进行综述.刺激内源性SIRT1或Sirtuins有望成为防治心肌I/R损伤的一个新靶点.
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SIRT1在前列腺疾病中的作用研究进展
沉默信息调节因子1(SIRT1),是一种依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的Ⅲ型组蛋白去乙酰化酶(HDAC).SIRT1在物质能量代谢、氧化应激、细胞生存、增殖、凋亡、自噬等方面发挥着关键作用,与衰老、炎症、代谢性疾病、肿瘤、心血管疾病、神经退行性疾病等的发生密切相关.近些年来前列腺疾病的发病率不断升高,但有效治疗药物较少.SIRT1在前列腺疾病中的作用日益受到人们的关注,越来越多的SIRT1激动剂和抑制剂不断发现,为前列腺疾病的认识与诊治提供了新的方向.本文对SIRT1在前列腺疾病中的研究进展做一综述.
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丙戊酸钠对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用
目的:观察丙戊酸钠对鱼藤酮诱导的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的影响并探讨其分子机制.方法:100 μmol/L丙戊酸钠作用SH-SY5Y细胞3h后,使用400 nmol/L鱼藤酮处理24 h诱导SH-SY5Y细胞损伤.采用MTT法检测细胞存活率;分光光度法检测线粒体复合体Ⅰ(mitochondrial complex Ⅰ,COX Ⅰ)活性;蛋白质印迹法检测酰基辅酶A心磷脂酰基转移酶(Acyl-CoA lysocardiolipin acyltransferase 1,ALCAT1)、沉默信息调节因子1(silent in-formation regulator 1,SIRT1)、核受体过氧化酶体-增殖子激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator activated recep-tor γcoactivator 1α,PGC-1α)的表达水平;RT-PCR法检测PGC-1α mRNA转录水平.结果:预防性给予丙戊酸钠能明显提高鱼藤酮损伤的SH-SY5Y细胞存活率,下调ALCAT1的表达水平,增强COXI的活性,并上调SIRT1及PGC-1α的表达水平,但对PGC-1α mRNA转录水平无明显影响.结论:丙戊酸钠对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用.
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脂质体紫杉醇联合卡培他滨对晚期乳腺癌患者DBC1及SIRT1表达的影响
目的:探讨脂质体紫杉醇联合卡培他滨对晚期乳腺癌患者干预后患者组织中DBC1及SIRT1的表达情况,为患者预后评价提供理论依据.方法:选取2013年7月至2015年7月收治的80例晚期乳腺癌患者作为研究对象,使用脂质体紫杉醇(力朴素)联合卡培他滨进行治疗,患者第1天使用135～175 mg·m-2力朴素,然后每天使用2000 mg·m-2卡培他滨进行治疗,以21 d为1个疗程,患者连续治疗2～6个疗程后对疗效进行评价.比较脂质体紫杉醇联合卡培他滨干预前后患者病灶组织中SIRT1和DBC1表达水平差异,并分析不同病理类型中SIRT1及DBC1的表达差异,记录患者使用药物干预后不良反应发生情况.结果:治疗后患者SIRT1及DBC1表达阳性率均明显低于治疗前,差异具有统计学意义(x2=65.83,P=0.000;x2 =53.43,P =0.000);经治疗后不同病理类型患者的病灶组织中SIRT1和DBC1表达的阳性指数差异无统计学意义(P＞0.05);患者所出现的均为可逆性不良反应,大多数表现为以Ⅰ级或Ⅱ级不良反应为主的血液学毒性,其次为手足综合征和消化道反应,采取相应的对症治疗后均可依照原定计划完成化疗,并未出现明显的肝肾功能损伤及过敏反应.结论:对晚期乳腺癌患者使用脂质体紫杉醇联合卡培他滨干预后可显著降低其DBC1和SIRT1的阳性表达,且具有较好的安全性.
