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先天性肾上腺皮质增生症的早期观察和护理
先天性肾上腺皮质增生症(CAH)是较常见的常染色体隐性遗传病,由于皮质激素合成过程中所需酶的先天缺陷所致,发病率为1/10 000活产新生儿.21-羟化酶缺乏为常见的一种类型,约占CAH病人的90%～95%[1],根据酶活力缺乏的轻重程度和由此产生的不同临床表现可分为:单纯男性化型、失盐型、非典型3种[2].失盐型因21-羟化酶缺乏严重,病情重,发病早,绝大多数于新生儿期或婴儿期就以肾上腺皮质危象而收治入院.我院于1998年11月-2004年12月共收治先天性肾上腺皮质增生症21-羟化酶缺乏失盐型7例,现将护理体会报道如下.
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复合酶微囊对酶的保护作用研究
我国现在生产的消化酶制剂主要产品是多酶片，但是近年来，多酶片的质量问题（崩解时限不合格、酶活力低等）时常被披露，显示出国产多酶片的质量不稳定，影响了药品的疗效。为了提高药物疗效，更好服务于患者，本课题从产品的剂型、制备工艺着手，进行彻底革新，研发了复合酶微囊。
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北虫草各部分超氧化物歧化酶活性的对比试验
目的:对北虫草菌丝体、子座的SOD酶活力进行对比研究,并比较水提取和丙酮提取的效果.方法:利用水、丙酮分别对北虫草超氯化物歧化酶(SOD)进行提取,邻苯三酚自氧化法检测其酶活性.结果:北虫草菌丝体的SOD酶活性和蛋白含量均明显高于子座,并且丙酮分级提取的效果更优.结论:北虫草各部分的SOD酶活性和蛋白含量各不相同,不同提取方法效果也有差异.
关键词： 北虫草 超氧化物歧化酶(SOD) 酶活力 -
铅对原代培养海马细胞形态及酶活力的影响
目的 观察铅对原代培养海马神经元形态及酶活力的影响.方法 原代培养乳大鼠海马神经元,经不同浓度醋酸铅(50、100、200 μg/ml)作用1～8 d.用活细胞倒置相差显微镜、HE染色和尼氏体染色观察细胞形态改变;光密度法检测细胞外液中的乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)和胆碱酯酶(cholesterase,CHE)活力;激光扫描共聚焦显微镜定量分析神经元胞浆中游离Ca2+的平均荧光强度.结果 形态学观察发现,低醋酸铅(50、100 μg/ml)组海马神经元表面粗糙,胞体变小,突起细小,细胞间网络疏松,胞体与胞浆之间界限逐渐模糊不清,核仁不清晰;200 μg/ml组,神经元数量减少,细胞之间聚集呈团簇状,可见细胞膜损伤破裂,即神经元解体坏死.HE染色观察低浓度醋酸铅作用24 h后,可见散在单个细胞核回缩,胞浆、突起着色不均,甚至有的出现染色质凝集、核边移,但核膜完整;高浓度醋酸铅则使细胞质空泡变性,突起减少,核边移呈半月形,甚至细胞出现解体坏死,细胞之间聚集成团.尼氏体染色显示醋酸铅能使海马神经元的尼氏体减少,着色浅淡,且有剂量依赖关系.另外,醋酸铅作用于海马神经元24 h后,培养上清中LDH释放增加(P<0.01),CHE活力明显下降(P<0.01).激光共聚焦显微镜检测结果显示,随着醋酸铅浓度的增大,细胞内液Ca2+浓度也随着增大,醋酸铅3个浓度组的平均荧光强度均显著高于正常对照组(P<0.01),并有剂量一反应关系.结论 原代培养的海马神经元随着醋酸铅浓度的加大,呈现不同程度的损伤.
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测定α-L藻糖苷酶活力诊断原发性肝癌中的应用
1 资料与方法1.1 资科本院住院肿瘤病人,手术前检测血清α-L藻精苷酸(AFU)58例,男性38例,女性20例,平均年龄46岁.其山PHC9例,肝占位性病变(SO,)10例,其他消化道恶性肿瘤29训,乳腺癌2例,良性肿瘤8例.原发性肝癌(PHC)病例均经B超、CT诊断和病理证实.1.2 方法血清AFU用微量法测定,试剂为福建三强生物化工有限公司提供AFU-wkit,操作按试剂盒说明书进行.
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土壤中产壳聚糖酶真菌的筛选
在以壳聚糖(Chitosan)为唯一碳源和氮源的培养基上,利用透明圈筛选法,从不同地区采集的105份土样中,共分离到26株产生透明圈较大的菌株,结合酶活力测定结果,获得产酶能力较高的菌株HF-1、HF-5,为进一步的研究提供了条件.
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北虫草不同部位超氧化物歧化酶(SOD)酶活力的比较
目的:对北虫草茵丝体、子座的超氧化物歧化酶(SOD)酶活力进行对比实验,在水提取和丙酮分级提取两种方法中选择效果更好的一种.方法:利用水、丙酮分别对北虫草不同部位的超氧化物歧化酶(SOD)进行提取,邻苯三酚自氧化法检测其酶活性.结果:北虫草茵丝体的SOD酶活性和蛋白含量均明显高于子座,并且丙酮分级提取的效果更优.结论:北虫草各部分的SOD酶活性和蛋白含量各不相同,不同提取方法效果也有差异.
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重组人锰超氧化物歧化酶的胃蛋白酶酶解特性及其稳定性
目的 探讨重组人锰超氧化物歧化酶(rhMn-SOD)的胃蛋白酶酶解特性及其稳定性.方法 在37℃条件下,用模拟胃液(0.084 mol/L HCl,35 mmol/L NaCl,pH 2.0,4 000 U胃蛋白酶)处理rhMn-SOD不同时间,SDS-PAGE分析酶解效果;使用总SOD测定试剂盒检测rhMn-SOD在不同温度(25、37、45、55、65、75℃)下保存不同时间(10、20、30、40、50、60 min)、不同pH(4.0～10.0)、不同化合物(氯仿、甘油、DMSO、10％ SDS、β-巯基乙醇、苯酚、30％H2O2)处理后及日光和紫外照射后的相对活力.结果 rhMn-SOD在模拟胃液中处理2 min即可完全酶解.在25～55℃范围内,rhMn-SOD具有较好的热稳定性,在65～ 75 ℃范围内,rhMn-SOD的热稳定性较差;在pH6.0～8.0范围内,rhMn-SOD具有较好的稳定性;rhMn-SOD对甘油和氯仿不敏感,经DMSO、SDS处理后,活力大幅下降,经β-巯基乙醇、苯酚、30％ H2O2处理后,基本失活;rhMn-SOD经日光和紫外照射3h,活力基本不变.结论 分析了rhMn-SOD的胃蛋白酶酶解特性、热稳定性、pH稳定性、对不同化合物的敏感性以及光稳定性,为其广泛应用于化妆品、药品、食品添加剂等领域奠定了基础.
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毕赤酵母产重组木聚糖酶发酵条件的优化及其酶学性质
目的 优化毕赤酵母工程菌GS115/xynlIA产重组木聚糖酶的发酵条件,并检测其酶学性质.方法 采用单因素试验和L9(34)正交试验考察摇瓶发酵条件下培养基起始pH值、诱导剂甲醇添加量、诱导温度及诱导时间对产酶活性的影响；并分析重组木聚糖酶的酶学性质.结果 影响重组毕赤酵母产酶的因素重要性依次为:培养基起始pH值＞诱导时间＞诱导温度＞甲醇添加量,重组酵母产酶佳条件为:起始pH值7.5,甲醇添加量1.5％,32℃诱导96 h,在此条件下进行诱导表达重组木聚糖酶的酶活性可达228.35IU/ml;酶的适反应温度为50℃,适反应pH值为5.5,在低于40℃和pH4.5～7.5的范围内较稳定.结论 优化了毕赤酵母产重组木聚糖酶的发酵条件,为木聚糖酶的工业化生产及应用提供了依据.
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苏尼替尼对HeLa细胞增殖及3-磷酸甘油醛脱氢酶表达和活性的影响
目的 探讨苏尼替尼(Sutent)对HeLa细胞增殖及3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)表达和活性的影响.方法 用不同浓度的Sutent作用于HeLa细胞,采用MTT法检测Sutent对HeLa细胞增殖活力的影响；Western blot检测HeLa细胞中GAPDH蛋白表达的变化；GENMED细胞GAPDH活性终点比色法定量检测了GAPDH的活力.结果 经Sutent处理24 h后,HeLa细胞的增殖受到明显抑制,且呈浓度依赖性,半数抑制浓度(IC50)为10.283 μmol/L；Sutent可明显降低HeLa细胞中GAPDH蛋白的表达量,并能直接抑制GAPDH的活力.结论 Sutent可抑制HeLa细胞的增殖,降低GAPDH蛋白的表达量及活力,显示了其作为多靶点药物的重要研究价值.
关键词： 苏尼替尼 HeLo细胞 细胞增殖 3-磷酸甘油醛脱氢酶 酶活力 -
有机磷农药中毒的急救护理
1993年8月至2003年7月我院共收治急性有机磷中毒300余例,经抢救,取得了满意的疗效,现将护理体会报告如下.1临床资料1.1一般资料本组300例中男92例,女208例,14岁～75岁,平均38岁,1605中毒63例,3911中毒49例,1059中毒45例,DDV中毒143例,均依据毒物接触史、临床表现、全血胆碱脂酶活力降低/或胃内容物或血液、尿液毒物分析而确诊为急性有机磷中毒.
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人胱硫醚β合成酶原核表达纯化及鉴定
目的:构建人胱硫醚β合成酶(human cystathionine β-synthase,hCBS)基因原核表达载体,在E.coli BL21(DE3)中表达,并进行纯化和酶活性检测.方法:以胰腺细胞cDNA文库为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增hCBS基因蛋白编码区的全序列,克隆入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a(+)-hCBS.经限制性内切酶双酶切及DNA序列分析鉴定目的基因后与人CBS基因(基因bank号:BT007154.1)完全一致,转入E.coli BL21(DE3)中,由IPTG诱导表达融合蛋白.结果:经SDS-PAGE、Western blot分析,证明诱导表达的蛋白为重组人CBS(rhCBS).再由Ni-NTA树脂亲和层析,并脱盐冷冻干燥后获得重组rhCBS(约19mg/L培养物),并测得其比活力约为57kU/g.结论:成功地表达纯化出具有功能活性的重组蛋白rhCBS,为进一步研究该酶的相互作用蛋白以及其在生物学和临床科学的作用奠定了基础.
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纤维素降解的菌株筛选及其运用
目的:筛选降解稻草纤维素菌株,为纤维素的高效降解提供理论依据.方法:采用羧甲基纤维素钠刚果红培养基与滤纸条培养基从采集的腐木、腐土和腐叶等样品中筛选出纤维素降解菌.然后经液态发酵后测定其羧甲基纤维素酶活力与降解稻草的天然纤维素酶活力,综合考虑这两种酶活力,对其进行单独与混合发酵培养.筛选分解稻草能力较强的菌株组合.结果:初筛到5株真菌和5株细菌纤维素降解力较优的菌株.经酶活力测定后,得到分解纤维素能力较强的两株真菌F3和F5与两株细菌B1和B5,其中F3和B1的羧甲基纤维素酶活分别为705.6U、214.6U;F5和B5天然纤维素酶活分别为466.5U、204.8 U.混合培养在一定程度上能提高纤维素酶活,F3/F5具有稳定而较高的酶活力,某时间段酶活高达646.8U,且后续酶活力也保持在较高水平.而F3/B5在某时间段的酶活高达788.6U.结论:菌株的混合培养可以提高纤维素酶活.
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湖北钉螺体内溶菌酶活力及抑菌作用
目的 探讨湖北钉螺体内溶菌酶活力及其抑菌效果.方法 将钉螺软体组织匀浆后,采用浸提法用Tris-HCl-TritonX-114缓冲溶液浸提24 h,10 000×g离心10 min;取上清,37℃水浴15 min,2000×g离心10 min;取沉淀,置于超滤离心管中[截留相对分子质量(Mr)=3000)],在4℃下5000 ×g离心30 min,使之浓缩,即得浓缩溶菌酶.采用二喹啉甲酸(BCA)法测定溶菌酶蛋白质含量,浊度法测定溶菌酶的活力,琼脂扩散(K-B)法检查溶菌酶对溶壁微球菌、痢疾志贺菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及白色念珠菌的抑菌作用.结果 湖北钉螺体内存在溶菌酶,浓缩酶中蛋白质含量为3.428 g/L,活力为(760±120)×103 U/L,总活力为(1520±240)×103 U/L,比活力为(221.70±35.00)U/mg.加入浓缩溶菌酶后,溶壁微球菌、痢疾志贺菌出现抑菌圈,抑菌环直径分别为10～ 12、12～15 mm,生理盐水对照未见抑菌圈.金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及白色念珠菌均未见抑菌圈.结论 缓冲液浸提法能从钉螺软体组织中分离出具有活力溶菌酶,溶菌酶对溶壁微球菌、痢疾志贺菌有抑菌作用,而对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌无抑菌作用.
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铜锌超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶1 mRNA表达及其酶活力与砷中毒肝损伤关系
[目的] 了解燃煤砷暴露人群外周血中铜锌超氧化物歧化酶( Cu/Zn-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)1转录表达与酶活力的关系,探讨其在燃煤型砷中毒肝损伤发生发展中的作用.[方法] 选择燃煤型砷中毒病区133例砷暴露者为砷暴露组(包括病区非病例组25例和病例组108例),将病例组分为无明显肝病组(38例)和肝病组(分为轻度肝病组43例和中重度肝病组27例)；在非砷暴露村选择34例经健康体检无异常的居民作为对照组.采集上述观察对象的外周血,采用实时荧光定量PCR法检测Cu/Zn-SOD mRNA和GSH-Px1 mRNA表达,化学法检测SOD、Cu/Zn-SOD和GSH-Px活力.[结果] 与对照组比较,肝病组Cu/Zn-SOD mRNA和GSH-Px1 mRNA表达量均明显升高(P＜0.05或P＜0.01)；与病区非病例组比较,肝病组Cu/Zn-SOD mRNA表达量明显升高(P＜0.05)；各病例组间比较差异无统计学意义.与对照组和病区非病例组比较,肝病组SOD、Cu/Zn-SOD和GSH-Px活力均明显降低(P＜0.05或P＜0.01)；与无明显肝病组比较,轻度肝病组SOD和Cu/Zn-SOD活力明显下降(P＜0.05),而中重度肝病组三种酶活力均明显下降(P＜0.05或P＜0.01)；与轻度肝病组比较,中重度肝病组SOD活力明显降低(P＜0.05).Cu/Zn-SOD和GSH-Px1转录表达与肝损伤程度呈正相关(P＜0.01),酶活力与肝损伤程度呈负相关(P＜0.01),且转录表达与其酶活力均呈负相关(P＜0.01).[结论] 砷可能通过调控Cu/Zn-SOD和GSH-Px1的转录表达水平而影响其酶活力,参与砷中毒肝损伤的发生发展.
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建曲发酵过程的佳“火候”
目的 分析建曲(青蒿、薄荷、白芷等药材与麦麸、面粉发酵而成的产物)发酵过程的佳“火候”(发酵时间和温度).方法 采用机器视觉技术和电子鼻技术,分别对发酵过程中12批样品的颜色和气味进行检测.测定总糖、总蛋白含有量,以及淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶活力,分析成分变化.结果 总糖含有量明显下降,但总蛋白含有量略有增加,3种酶活力均有不同程度上升.在温度28～ 30℃、相对湿度70％ ～ 80％下,建曲的佳发酵终点为30 ～ 36 h.结论 该发酵方法所得建曲遍起白霉,有酒香气,符合传统炮制要求.
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血清白蛋白和Dane颗粒的作用
HBeAg强阳性患者之血清,经密度区带离心和8ephadex G-200分离后,可以得到具有极高DNA一多聚酶活力的Dane颗粒.对提纯的Dane颗粒的研究表明,这种颗粒结合了一定量的白蛋白,结合的白蛋白在PAGE上和人血清白蛋白单体无明显差别,并非以多聚形式出现.对Dane颗粒和白蛋白结合状态的研究表明,这种结合是非共价的,PAGE可以使其分离.体外条件下,随着时间的推移,这种结合逐渐离解,具有可逆性,提示Dane颗粒和白蛋白的结合可能是以受体和配体的形式出现.目前普遍认为病毒可能通过白蛋白的桥联作用而入侵肝细胞,本文对血清白蛋白可能起的作用进行了讨论.
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肾综合征出血热患者尿液γ-谷酰转肽酶检测的临床意义
肾综合征出血热(HFRS)主要病变是全身微小血管广泛性受损,引起各系统器官、组织的严重血液循环障碍,并有组织水肿、变性和坏死,突出的病变表现于肾脏、心脏和脑垂体等,而人体各器官中γ-谷酰转肽酶(γ-GT)的含量依次为肾、前列腺、胰、肝、盲肠和脑.γ-GT在肾脏中含量高,肾单位病变时,此酶经尿排出,测尿中酶活力可能有助于肾疾患诊断.为早期了解HFRS肾损害程度,以便早预防早治疗.我们观察了HFRS患者病程中尿γ-GT的消失变化,并与其他检测指标进行了比较,现报道如下.
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病毒性肝炎患者外周血细胞超氧化物歧化酶活力的测定
超氧化物歧化酶(SOD),在生物体内普遍存在.该酶的生物学作用在于能专一性清除超氧自由基O-2,保护机体、细胞免受O-2的毒害.
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一种直接检测血清中HBV基因组和DNA聚合酶活性的方法
对判断HBV携带者有否感染性,HBeAg系统和DNA聚合酶活力的检测是重要的参考标志.近年来HBV DNA的检谢提示这将是一种更直接反映HBV本身的存在状态以及感染性的标志[2].
