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基质细胞衍生因子1对低密度脂蛋白诱导单核-内皮细胞粘附的影响
目的观察基质细胞衍生因子1对低密度脂蛋白诱导的单核细胞-内皮细胞粘附的调节作用,以进一步探讨基质细胞衍生因子1在动脉粥样硬化中的作用.方法密度梯度离心法分离人低密度脂蛋白;逆转录聚合酶反应检测内皮细胞基质细胞衍生因子1 mRNA表达,Western blot检测基质细胞衍生因子1蛋白质的表达;细胞记数法观察低密度脂蛋白及基质细胞衍生因子1抗体干预对内皮细胞/单核细胞粘附的影响.结果对照组几乎没有基质细胞衍生因子mRNA以及蛋白质的表达,随着低密度脂蛋白浓度增加,基质细胞衍生因子1 mRNA以及蛋白质的表达水平明显增加.低密度脂蛋白浓度为50 mg/L、100 mg/L和150 mg/L时,每个视野粘附的单核细胞数分别为60±20、97±26和170±32,而正常对照组为20±5,差异有极显著性意义(P<0.01).终浓度为0.1 mg/L、0.5 mg/L和1 mg/L基质细胞衍生因子1抗体干预后,粘附的单核细胞数分别为113±23、53±21和41±10,均低于低密度脂蛋白对照组的186±31,与低密度脂蛋白对照组差异有显著性意义(P<0.05).结论低密度脂蛋白促进内皮细胞与单核细胞的粘附,其机制与促进内皮细胞表达基质细胞衍生因子1密切相关.
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组织工程血管模型中的细胞粘附
本文运用一种模拟血流动力学状态的平板流动腔血管模型,研究在不同剪切力作用和不同处理因素对内皮细胞的粘附保留状态的影响.用不同因素处理细胞载片后在其上培养细胞,再用同一剪切力作用,或者用同一底物处理细胞载片后用不同剪切力作用.结果发现,在生理剪切力条件下,低剪切力(2.1 Pa)作用时细胞保留率为90.38%±2.09%,比高剪切力(4.2 Pa)作用时细胞保留率(46.58%±1.98%)要高;多聚赖氨酸处理时的细胞保留率(90.38%±2.09%)和纤维连接素处理时的细胞保留率(91.59%±1.24%)比Ⅳ型胶原处理时细胞保留率(19.77%±1.05%)要高,且不同底物对细胞脱落行为有不同影响;而血管内皮生长因子基因转染对细胞粘附无明显影响.此结果提示,低剪切力、多聚赖氨酸和纤维连接素有利于组织工程血管模型中的细胞粘附.
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整合素连接激酶在肾脏疾病中的作用
肾脏排泄功能的完成是依赖由3种不同细胞(系膜细胞、内皮细胞和足细胞)组成的肾小球来实现的.肾小球细胞被固定在肾小球基底膜(glomerular basement membrane,GBM)的细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)中.GBM是一种由细胞粘附糖蛋白,如Ⅳ型胶原、纤连蛋白(fibronectin,Fn)、层连蛋白和蛋白聚糖组成的胶样网状结构.
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养正消积抗肿瘤作用的机制
养正消积胶囊是在络病理论指导下由黄芪、女贞子等16味药组成的方剂，研究表明其提取物DME25具有抑制肿瘤细胞粘附、迁移，血管生成以及肿瘤细胞与间皮细胞粘附的功效，但尚需进一步的成份提纯以及研究证实其在肿瘤治疗中的临床价值。本文主要对养正消积胶囊的成份以及药效、成份的提取以及成份的鉴定、对肿瘤细胞的作用、对肿瘤血管生成的作用及对体内肿瘤的作用进行综述。
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穿透支原体P35蛋白细胞粘附活性研究
目的 研究穿透支原体(Mpe)P35蛋白的细胞粘附活性.方法 IPTG诱导pQE31/p35原核表达载体在E.coli 中表达,用Ni-NTA Spin亲和纯化,Western blot鉴定表达产物.通过间接免疫荧光试验(IFA)、竞争抑制试验研究rP35对HeLa细胞的粘附活性.结果 pQE31/p35在E.coli 中表达出分子量约35 kDa的蛋白质,Western blot鉴定其为特异性rP35蛋白.IFA发现rP35对HeLa细胞无明显的粘附活性;竞争抑制试验表明rP35不能抑制Mpe粘附HeLa细胞.结论 P35可能不是Mpe的主要粘附分子.
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两种细胞粘附检测方法的比较
目的细胞与细胞之间及细胞与基质之间的粘附作用是细胞间信号传递及多种细胞生物活动的基础,细胞粘附作用的检测是细胞生物学研究中重要的实验方法之一.本文对采用51Cr释放实验及3H-TdR掺入法检测细胞粘附的方法进行了比较.方法将铺底细胞以0.5×105/孔的密度于96孔培养板中铺底培养24h,待检细胞以51Cr或3H-TdR标记,以1×105/孔的浓度加入96孔培养板中,作用4h后轻柔洗去未粘附细胞.按相应检测系统检测51Cr及3H-TdR标记的粘附细胞的放射强度,比较其灵敏度和稳定性.结果 51Cr释放实验及3H-TdR掺入法均具有较好的敏感性和稳定性.相比较,3H-TdR掺入法的敏感性和稳定性更好.这两种方法均能准确地检测细胞间的粘附现象,并反映其相对强弱.结论采用同位素标记的方法,其敏感性和稳定性均较好,且干扰因素少,所获结果稳定可靠,3H-TdR掺入法的敏感性和稳定性较51Cr释放法好.
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糖皮质激素对PMA诱导的CD18表达的抑制作用及机制
国内外大量研究表明糖皮质激素(glucocorticoid,GC)能明显抑制包括由于CD18在内的多种粘附分子的表达.以往研究多限于CD18蛋白质水平,无法阐明GC-GR使细胞表面CD18数量减少,是由于合成减少,分解增多,还是细胞内转位过程受到抑制(CD18从胞内储存池脱落并转位至质膜有关).对GC在CD18基因转录水平上的抑制作用极其机制目前研究得很少.目的:探讨GC抑制CD18 mRNA表达的作用及机制.方法:本研究以细胞激活剂PMA诱导下的人组织淋巴瘤细胞系U937细胞和人早幼粒白血病细胞系HL-60为实验模型,用定量RT-PCR法、Northern杂交法、流式细胞术研究GC抑制CD18表达的作用及机制.结果:地塞米松Dex能够明显地抑制PMA诱导U937细胞CD18 mRNA的表达,这种作用具有剂量依赖性,当Dex为10-8mol/L时,其抑制率达50%,10-6mol/L时可达89%.把GR的拮抗剂RU38486与Dex同时处理U937细胞,随着RU38486浓度的升高,Dex对CD18 mRNA表达上调的抑制作用逐渐减弱,当RU38486的浓度达10-6mol/L时,几乎可完全阻断Dex的作用.而单纯用RU38486处理U937细胞,CD18 mRNA表达无明显变化,说明Dex的抑制作用是通过GR来介导的.在U937细胞和HL-60细胞,Dex对CD18膜蛋白表达也有相似的抑制作用.在HL-60细胞,Dex能阻止PMA引起的细胞粘附表型的改变,RU486可逆转Dex的作用.实验还表明PMA能通过PKC激活转录因子NF-κB促进IL-8表达,GR介导的Dex具有明显的抑制作用.结论:Dex对CD18表达的抑制作用是通过GR来介导的.由于CD18的基因启动子上无NF-κB的结合位点和糖皮质激素反应元件(GRE),Dex对CD18表达的抑制作用可能是间接的.
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CD2胞内区结合蛋白的分子克隆及其功能研究
CD2分子分布于胸腺细胞、所有的成熟T淋巴细胞和大部分天然杀伤细胞的表面,是T细胞粘附和信号分子,在细胞分化成熟、识别、粘附、激活和凋亡等方面具有重要作用.
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肺癌细胞与血管内皮细胞的粘附力学的研究
目的:本文力图从生物力学角度揭示在卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)作用下,肺癌细胞与人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)粘附力学特征,并探讨这一粘附过程与肺癌细胞粘附分子slex的相关关系.方法:采用微管吸吮技术定量测定肺癌细胞与HUVEC的粘附力(Fa);并结合流式细胞仪分析在BCG-PSN作用下,肺癌细胞粘附分子配体slex表达情况.结果:(1)肺癌细胞与HUVEC的粘附力(Fa)在未使用BCG-PSN以前PG细胞大于Paa细胞,用BCG-PSN后,其在Paa细胞呈浓度依赖性及时间依赖性下降,在PG细胞表现为在50 μg/ml及以上浓度组粘附力呈明显浓度依赖性下降.各时相点表现为在开始时呈时间依赖性下降,至72小时出现反弹.(2)经BCG-PSN处理后,Paa细胞slex表达呈浓度依赖性下降,PG细胞slex表达无显著差异.结论:实验条件下PG细胞较之Paa细胞有较高的粘附力,且两种细胞与内皮细胞的粘附力均受BCG-PSN的抑制,这可能与PG细胞具有较高的血行转移潜能及BCG-PSN的抗肿瘤作用有关.流式细胞分析研究表明,BCG-PSN对肺癌细胞粘附性的抑制环节很可能是粘附分子表达下降所致的粘附强化启动过程.
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血管活性肠肽对体外大肠癌HT29细胞粘附和侵袭作用的影响
目的观察血管活性肠肽(VIP)和双丁酰环磷酸腺苷(db-cAMP)对体外大肠癌HT29细胞对大鼠血管内皮的粘附和侵袭的影响.方法取出大鼠主动脉,建立体外癌细胞-血管内皮粘附试验模型.用光镜和扫描电镜观察HT29细胞对大鼠血管内皮粘附作用和其形态学变化,以及VIP和db-cAMP对细胞粘附的影响并在扫描电镜上计数量化分析.结果在血管内皮上可清晰辨认癌细胞并可观察其对血管内皮的粘附和侵袭的形态学改变.VIP组的粘附细胞和高活性粘附细胞显著多于对照组(P＜0.05),相反db-cAMP则无此作用.结论VIP可促进体外HT29细胞对血管内皮的粘附和侵袭,其机制可能与激活癌细胞A激酶系统有关.
关键词： 血管活性肠肽 人结肠腺癌细胞系(HT29) 细胞粘附 -
兔活骨组织在体外促同种成骨细胞与支架粘附的实验研究
目的为提高体外构建组织工程化活性骨的质量,探索一种促进种子细胞与支架粘附的方法.方法应用三蒸水浸泡新鲜兔骨碎粒5h后与L-聚乳酸(PLLA)/聚磷酸钙纤维(CPPf)复合支架共培养48h作为实验组;未进行共培养的L-聚乳酸(PLLA)/聚磷酸钙纤维(CPPf)复合支架作为对照组.接种成骨细胞24h后应用扫描电镜观察细胞-支架复合体内粘附细胞情况,应用MTT法测接种细胞上架率.结果实验组的接种细胞上架率显著高于对照组(P《0.01),扫描电镜下实验组支架内粘附细胞明显多于对照组.结论兔活骨组织在体外可以促进同种成骨细胞与支架的粘附,从而提高体外构建活性骨的质量.
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EB病毒LMP1对人鼻咽癌细胞转移能力的影响
背景与目的:EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)在鼻咽癌的浸润和转移过程中起重要的作用.本实验目的在于研究EB病毒LMP1对人鼻咽癌细胞转移能力的影响和探讨其中的相关机制.方法:应用免疫细胞化学RT-PCR法和Western blot检测LMP1、E-cadherin和intercellularadhesion molecule-1(ICAM-1)在人高分化鼻咽癌细胞系CNE1和转染了LMP1基因的CNE1-GL细胞中的表达.应用细胞.细胞粘附实验、细胞-基质粘附实验、划痕实验和细胞运动实验观察LMP1对鼻咽癌细胞粘附和运动能力的影响.结果:免疫细胞化学结果显示:LMP1在CNE1和CNE1-GL细胞中的阳性率分别为0和(96.60±3.03)%(P<0.01);E-cadherin蛋白的阳性率分别为(37.47±1.50)%和(19.53±1.92)%(P<0.01);ICAM-1蛋白的阳性率分别为(5.27±1.45)%和(93.33±4.23)%(P<0.01).RT-PCR和Western blot结果表明,与CNE1细胞相比较, CNE1-GL细胞中E-cadherin的mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01),而ICAM-1的mRNA和蛋白表达则明显升高(P<0.01).肿瘤细胞同质粘附实验显示,CNE1-GL细胞的同质粘附能力较CNE1细胞弱(P<0.05).肿瘤细胞.基质粘附实验得出CNE1-GL细胞的异质粘附能力(A值=0.60±0.03)较CNE1细胞(A值=0.46±0.01)强(P<0.01).肿瘤细胞运动实验显示,穿过PVPF膜的CNE1-GL细胞数多于CNE1细胞(119.3±6.0 vs46.3±7.0,P<0.05).结论:LMP1通过抑制E-cadherin表达、促进ICAM-1表达从而抑制肿瘤细胞的同质粘附能力、增强其异质粘附能力和运动能力来参与鼻咽癌的侵袭和转移.
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EBV-LMP1上调Ezrin表达对鼻咽癌细胞转移潜能的影响
背景与目的:细胞骨架相关蛋白Ezrin的异常表达与肿瘤侵袭转移密切相关.既往研究已证实EB病毒潜伏膜蛋白1(Epstein-Barr virus latent membrane protein 1.EBV-LMP1)可促进鼻咽癌细胞的转移能力.本研究旨在进一步探讨EBV-LMP1是否通过改变Ezrin的表达来影响鼻咽癌细胞的转移能力.方法:采用免疫细胞化学和Western blot检测两种鼻咽癌细胞株-CNE1细胞(EBV阴性)和CNE1-GL细胞(稳定转染EBV-LMP1)中LMP1和Ezrin的表达;细胞.基质粘附实验检测CNE1、CNE1-GL和经Ezrin抗体预处理的CNE1-GL细胞(AntiEzrin-CNE1-GL)对细胞外基质的粘附力:Transwell小室法检测上述3种细胞的运动和对重组基底膜侵袭能力.结果:CNE1细胞中Ezrin阴性表达,而CNE1-GL细胞中Ezrin强阳性表达.CNE1-GL细胞对细胞外基质的粘附率[(89.38±6.12)%]强于CNE1细胞[(49.42±5.37)%](P<0.001),而AntiEzrin-CNE1-GL细胞对基质的粘附率[(56.94±4.08)%]明显下降,与CNE1-GL相比,差异有统计学意义(P<0.05).运动实验和侵袭实验均提示CNEl.GL细胞运动、侵袭能力(107±11和179±25)强于CNE1细胞(27+3和46+6),差异均有统计学意义(P＜0.001),而AntiEzrin-CNE1-GL细胞的运动、侵袭能力(384和51±5)较CNE1-GL细胞显均显著下降(P＜0.001).结论:CNE1细胞中EBV-LMP1可通过上调Ezrin表达来促进细胞转移.
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抗CXCR4单克隆抗体12G5对HL-60细胞粘附及增殖的影响
背景与目的:近年研究发现,骨髓基质细胞分泌的趋化因子SDF-1通过其分布于白血病细胞膜表面的生理性受体CXCR4可能参与了白血病细胞的髓内屏障,然而,SDF-1/CXCR4系统与白血病细胞之间的相互关系尚不清楚,因此,本研究采用抗CXCR4单克隆抗体12G5阻抑SDF-1活性,观察与白血病骨髓基质细胞共培养的HL-60细胞粘附性及细胞增殖的变化,以探讨从阻抑SDF-1活性入手治疗残留白血病的可能性.方法:培养并共培养HL-60细胞,采用 12G5(10μg/ml)阻断 SDF-1生物作用,观察 HL-60细胞在骨髓基质层上的粘附情况并测定细胞粘附率,通过流式细胞仪检测凋亡率,并观察其增殖周期的变化;应用台盼蓝拒染法检测细 胞存活情况,绘制细胞生长曲线.结果:(1)12G5孵育后24h,骨髓基质对HL-60的粘附率为(39.4±7.9)%,对照组为 (51.4±5.9)%,二者具有显著差异(P<0.05).(2)比较细胞增殖周期及凋亡率,实验组中G0/G1期细胞比例为(55.2±4.9)%,S期为(30.4±4.1)%,G2/M期为(14.4±5.2)%,细胞凋亡比例为(9.0±1.7)%;对照组中G0/G1期细胞比例为(44.7±2.2)%,S期为(45.3±3.7)%,G2/M期为(10.0±2.6)%,细胞凋亡比例为(4.0±2.4)%.(3)12G5孵育48h后,HL-60细胞生存率明显下降,增殖减缓.结论:12G5能在一定程度上抑制HL-60细胞的粘附性及增殖活性,因此,通过12G5阻抑SDF-1活性可能有助于治疗残留白血病.
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EBV-LMP1对鼻咽癌细胞系CNE1细胞转移相关因素的影响
背景与目的:已证实 EB病毒 (Epstein- Barr virus, EBV)编码的潜伏膜蛋白 1 ( latent membrane protein 1,LMP1)能够诱导鼻咽癌细胞中基质金属蛋白酶 9( matrix metalloproteinase- 9, MMP- 9)的表达.本实验的目的是观察 EB病毒潜伏膜蛋白 1( EBV- LMP1)对鼻咽癌细胞系 CNE1细胞转移相关因素的影响,探讨 LMP1在鼻咽癌侵袭、转移过程中的作用.方法:用免疫组化法及 Western blot法检测 CNE1- GL(转染 LMP1基因的 CNE1细胞)和 CNE1细胞中 MMP- 9的表达情况;用细胞-基质粘附实验、细胞运动实验和肿瘤细胞重组基底膜侵袭实验检测 LMP1对 CNE1细胞粘附、运动及侵袭能力的影响.结果:免疫组化法及 Western blot法结果均显示 CNE1- GL细胞中 MMP- 9的表达明显高于 CNE1细胞 (P< 0.05);肿瘤细胞-基质粘附实验结果显示, CNE1- GL的粘附能力(平均吸光度值为 1.2508± 0.0711),高于 CNE1细胞(平均吸光度值为 0.9519± 0.068),两者相比差异有显著性 (P< 0.01).运动实验及重组基底膜侵袭实验结果均显示,穿过游离的聚乙烯吡咯烷酮膜( polyvinyl pyrrolidone- free,PVP- F)的 CNE1- GL细胞数明显高于 CNE1细胞 (P< 0.01). 结论: LMP1能够诱导 CNE1细胞中 MMP- 9的表达,且增强 CNE1细胞与基底膜的粘附能力、运动能力及侵袭能力.
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视黄酸与肿瘤转移
癌转移是肿瘤细胞从原发部位进入体液循环,后穿过管壁在靶器官定位,并在该处增殖成转移癌.已经发现癌转移是一个多步骤、多阶段、多基因的复杂过程,是癌症患者死亡的主要原因.因此如何控制癌转移是决定预后的关键因素.对癌转移机制研究也成为当今国内外的研究热点之一.
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釉基质蛋白对人牙周膜细胞群在牙骨质上附着与增殖的影响
目的 研究釉基质蛋白(emdogain,EMD)对体外培养的人牙周膜细胞群(human periodontal ligament cell populations,hPDLPs)在牙骨质片上附着、增殖的影响,为EMD联合hPDLPs应用于牙周组织缺损修复提供实验依据.方法 采用组织块法分离培养hPDLPs,制备人牙骨质片,实验组用含100 mg/mL EMD的培养液包被处理牙骨质片,对照组用不含EMD的培养液处理.分别于细胞接种牙骨质片上16 h(观察附着情况)和72 h(观察增殖情况),用噻唑蓝比色法检测牙骨质片上的细胞数；同时,用扫描电镜观察牙骨质片上的细胞数.结果 噻唑蓝比色法检测,实验组细胞附着数(t=-3.318,P=0.008)、增殖数(t=-6.499,P＜0.001)明显多于对照组,两组之间差异有统计学意义.扫描电镜观察计数,实验组hPDLPs附着数(t=8.001,P＜0.001)、增殖数(t=13.046,P＜0.001)较对照组多,差异有统计学意义.结论 EMD可促进hPDLPs在牙骨质表面的附着和增殖,提示EMD和hPDLPs可联合应用修复牙周组织缺损.
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钛表面形貌对人单核细胞活力和粘附影响的实验研究
目的 研究钛金属表面形貌对人单核细胞活力和粘附的影响.方法 应用机械磨光、酸蚀、喷砂、喷砂酸蚀的表面处理方式形成4种不同的钛片表面形貌,分别设为SiC组、SiC+F组、63号组和63+F组.表面粗糙度仪检测钛试件表面粗糙度,以Ra值表征,扫描电镜观测钛试件表面形貌.将离心分离的健康成年人外周血单核细胞接种于处理后钛试件表面,扫描电镜观察培养48 h钛片表面单核细胞粘附情况;四唑盐比色法检测和钛片共同培养1、3、5、7 d的细胞活力.结果 4种钛片表面单核细胞的活力和粘附有差异,置于Ra值大的63号组培养的单核细胞在第1天、第3天、第5天、第7天都显示了高的活力,置于Ra值相近的SiC+F组和63+F组培养的细胞显示了相似的活力.扫描电镜下观察,表面粗糙的63号组钛片表面粘附了较多的单核细胞,表面多微孔的63+F组有大量的单核细胞粘附在材料表面的窝洞结构中.结论 钛表面形貌影响人单核细胞的活力和粘附.表面粗糙度大促进单核细胞的活力,表面粗糙度大和表面多微孔结构有利于单核细胞的粘附.
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沙利度胺治疗口腔粘膜疾病的临床应用
沙利度胺(thalidomide),商品名反应停,化学名酞咪哌啶酮,曾用名沙立度胺、沙利度安等,是一种人工合成的谷氨酸衍生物,口服后无明显的肝脏代谢,主要的清除途径是非酶的水解作用,半衰期为5～7 h.其主要药理作用包括中枢镇静、抗炎、抑制血管生成、干扰细胞粘附以及免疫调节作用.20世纪50年代曾在欧洲被广泛用于失眠症和妊娠反应等,1961年因其致畸作用而被禁用.后来发现,沙利度胺可用于麻风性结节红斑的治疗,近年来被广泛用于多种恶性肿瘤、皮肤病、口腔疾病(如口腔粘膜疾病、口腔颌面外科肿瘤)和某些消化系统病等疾病的治疗.
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盐酸小蘖碱对LPS诱导的人脐静脉内皮细胞与粒性白细胞粘附的影响
通过研究盐酸小蘖碱(BC)对细菌脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与粒性白细胞(HL-60)粘附的影响,探讨盐酸小蘖碱的抗炎作用机制.结果,盐酸小蘖碱与LPS共同处理HUVEC时,能明显降低LPS诱导的HUVEC与HL-60的粘附,可能是BC抗炎作用机制之一.
