猴免疫缺陷病毒(SIV)在艾滋病模型恒河猴组织中的分布和载量测定

目的 研究当艾滋病恒河猴模型的血浆病毒载量处于低水平或阴性时,猴免疫缺陷病毒 (simian immunodeficiency viruses,SIV) 在宿主组织中的分布情况.方法 SIVmac251感染恒河猴10只,定期检测其血浆载量,感染病毒平均高峰时间第14 天时,活检取淋巴结.选取感染18个月后病毒载量低水平和阴性的2只艾滋病猴 (SAIDS),经安死术后取淋巴结、脾、肝、肺、肾、脑等组织,用原位杂交和实时荧光定量PCR的方法检测病毒在组织中的分布和组织中的病毒载量. 结果感染后14 d,10只猴血浆病毒载量达到107 copies/mL,淋巴结组织病毒载量为105～108 copies/g,原位杂交方法在腹股沟淋巴结中检测到强阳性斑点.感染后第18个月的2只猴,血浆病毒载量下降并维持不高于102copies/mL水平或阴性,但组织分布不尽相同,在肠系膜淋巴结、肾上腺、海马回、空肠、脾脏等组织中检测到105～106 copies/g的病毒载量,于一只猴的脑积液中检测到103 copies/mL的病毒载量.用原位杂交的方法在肠系膜淋巴结和空肠中检测到强阳性斑点,其它组织中未检测到阳性斑点.结论 实验证实SAIDS猴在血浆病毒载量低甚至阴性时,病毒在不同组织中仍有分布,有些组织中甚至出现高病毒载量,提示在制备SIV/SAIDS模型中,尤其在药物筛选和疫苗评价时,应考虑组织病毒载量指标的测定和药物、疫苗对组织病毒的治疗清除作用的评价.

基因转移技术可促进HIV疫苗的开发

"我们采用跨越策略绕过天然的免疫系统应答,而此系统应答正是所有以前HIV(人免疫缺陷病毒)和SIV(猴免疫缺陷病毒)候选疫苗所针对的靶点."费城儿童医院首席科学研究员、本研究项目负责人菲利普*约翰逊博士如是说.这个新方法是约翰逊与俄亥俄州哥伦布全国儿童医院分子病毒学家里德*克拉克博士合作用了10年时间研究的.

猴免疫缺陷病毒感染的猴自身抗体和自身免疫

目的 研究猴免疫缺陷病毒(SIV)感染的猴艾滋病模型自身抗体和病理形态学的动态变化,探讨艾滋病与自身免疫的关系.方法 采用间接免疫荧光法,以小鼠心、肝、脾、肺、肾和淋巴结为靶抗原测定SIV感染猴各时间点的自身抗体;采用ECV304内皮细胞株和粒细胞抗原片分别测定抗内皮细胞和粒细胞的自身抗体.并对比检查相应的淋巴结、肾、脑等脏器的病理组织学改变.结果 SIV感染后多种自身抗体比感染前升高,如抗淋巴细胞抗体、抗血管内皮细胞抗体和抗粒细胞抗体等.病理组织学检查结果显示,在淋巴结有不同程度的组织损伤;在淋巴结、大脑皮层、消化道黏膜下层、心脏间质、肾和肝窦等脏器内有比较明显的小血管病变及其诱发的病理改变.结论 猴自身抗体水平的升高及相应组织、器官的损伤是猴艾滋病自身免疫的佐证.

自切割核酶介导的转基因淋巴细胞有效抑制猴免疫缺陷病毒的感染和致病

目的　获得抗猕猴免疫缺陷病毒(SIV)转基因的淋巴细胞。方法　将锤头型核酶切割的一段靶序列连接在核酶下游构成自切割核酶，人工合成的自切割核酶基因扩增并克隆在pBluescript SK的XhoI-SalI位点，通过连续4次克隆获得10拷贝核酶基因的载体。转染前测定自切割核酶的体外活性并将之转移至哺乳动物表达载体上，脂质体法转染含核酶基因的表达载体，转染细胞在含400 mg/L G418 的培养介质中筛选。转基因细胞对猴免疫缺陷病毒的抗性通过免疫荧光测定来估测。结果　37℃孵育15 min后85％的十体核酶自切割成单体核酶。在初始25 min的反式切割反应中尽管10体核酶摩尔数不足单体核酶十分之一，但十体核酶平均超过单体核酶13.31％的切割产物。Northern 点杂交证明单体核酶基因和十体核酶基因已经转入细胞并在细胞中获得表达。SIV攻毒试验表明，SIV接种6 d后转染单体核酶基因的细胞生长正常，不出现融合细胞，绝大多数转染十体基因的细胞生长良好，只发现极少数的融合细胞；转染单体核酶基因细胞的SIV抗原阳性细胞抑制率达到100％，转染十体核酶基因细胞的SIV抗原阳性细胞抑制率为91.2%, 转空表达载体细胞为48％。结论　转自切割核酶基因的细胞对SIV的感染和致病均表现较强的抗性，但单体核酶比10体核酶对SIV的感染和致病表现出更好的抑制效果。

中国恒河猴感染SIV后T淋巴细胞初始、记忆亚群的变化

目的:对中国恒河猴感染猴免疫缺陷病毒(SIV)后CD4 T初始、记忆亚群的细胞进行分析,了解各亚群的变化规律以及在AIDS发病过程中的意义.方法:使用SIVmac239毒株感染20只中国恒河猴,观察18个月;在感染前、后各时间点,使用实时荧光定量PCR(TaqMan探针法)进行病毒载量的检测;使用CD3/CD4/CD28/CD95表面标记的组合,进行CD4及其初始/记忆亚群比例的流式分析,并结合血常规检测的结果计算CD4及其各亚群的绝对数.结果:得到了CD4各个亚群在SIV感染后的变化曲线;并发现SIV感染后CD4减少的主体是中央型记忆(CM)CD4+T细胞;而初始型CD4+T在半数动物逐渐缓慢减少,但个体间差异较大.此外,还发现快速进展型RM449猴在死亡前其初始型及CM CD4仍较高,但其初始型CD4细胞在流式图上存在着类似"转化阻滞"的现象.结论:本研究展示了CD4细胞的初始、记忆亚群在感染SIV后的变化规律;对其进行细分研究,有助于更准确地了解体内免疫状态的变化,为临床疗效观察、免疫状态评估等提供参考.

猴免疫缺陷病毒外膜糖蛋白基因序列重组和突变克隆的转染研究

目的研究猴免疫缺陷病毒(SIV)外膜糖蛋白(envGP)基因片段与病毒复制功能的关系。方法利用两病毒株共有的内切酶位点，将非致病性SIVmac142株envGP区的DNA片段与致病性SIVmac 239株的对应区域进行置换，构成多个重组体。RFLP和部分序列测序确定后，用等量突变病毒(3μg)转染CD4+T淋巴细胞CEM×174细胞系，用ELISA监测培养液中SIV核心蛋白P27水平的变化，以判定重组病毒的复制能力。结果与SIVmac 239株相比，SIVmac 239 envGP重组体(SIVmac 142/239envGP/142)仍保持高度的复制活性，SIVmac 239 gp41(SIVmac 142/239gp41/142)或SIVmac 239N-gp41(SIVmac 142/239N-gp41/142)的复制能力明显降低，而SIVmac 239-gp41(SIVmac 142/239C-gp41/142)重组体无复制活性。结论 envGP基因是SIVmac 239株复制能力或毒力的重要调节因素。

DC-SIGN与病原感染

DC-SIGN是相对限制地表达于树突细胞上的膜分子,能结合人类免疫缺陷病毒、猴免疫缺陷病毒和Ebola病毒等,并且介导这些病毒在体内的感染,在病毒致病中发挥重要作用;同时它还可以作为ICAM-2、ICAM-3的受体,介导树突细胞在体内的转运和免疫突触的形成;后,它还可以作为抗原识别受体,参与抗原呈递.近报道,无鞭毛体利什曼原虫、登革病毒、结核分枝杆菌也能结合人类树突细胞DC-SIGN或DC-SIGN转染的细胞,进一步确立了DC-SIGN在树突细胞介导免疫反应中的关键作用.

042猴免疫缺陷病毒阴道内接种后可快速感染宫颈阴道上层内树突细胞

猴免疫缺陷病毒样颗粒鼻内免疫诱导全身及粘膜免疫应答

HIV疫苗研究进展

从1981年发现AIDS以来,AIDS已在全球流行,成为全球发展和公共卫生的威胁.开发安全、有效、价格便宜的HIV疫苗是控制AIDS大流行的佳办法.过去几年里,在HIV/AIDS基础病毒学、免疫学、发病机制和抗逆转录病毒药物的研究领域已取得显著进展.然而,由于HIV基因的高变异性、免疫保护相关物的缺乏、现有动物模型的局限性以及与众多临床试验实施相关的后勤问题,研制HIV疫苗面临着棘手的科学难题.超过35个候选疫苗已进入Ⅰ/Ⅱ期临床试验,1万多名志愿者参与试验,已完成2项Ⅲ期临床试验,参与试验的志愿者超过7500人.已试验了多种疫苗和免疫接种策略,包括DNA疫苗、亚单位疫苗、活载体重组疫苗和不同的初免-加强疫苗组合.本文综述了HIV疫苗的研发现状,总结了目前取得的成果,并讨论了在开发各种HIV疫苗中可能遇到的难题.

人类免疫缺陷病毒疫苗研究进展(续)

开发安全有效的人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)疫苗可为人类进一步控制HIV流行带来希望.自20世纪80年代后期以来,人们已开发出许多候选疫苗,包括DNA疫苗、亚单位疫苗、重组活疫苗,这些疫苗在非人灵长类动物中能诱导不同程度的保护性应答,其中4种候选疫苗已在人类志愿者中进行效力测定,并获得了有希望的结果.值得关注的是,人们建立了不同的初免-加强免疫策略,以增强机体对HIV疫苗的免疫应答.此文介绍了有关HIV疫苗的开发进展.

人类免疫缺陷病毒疫苗研究进展(待续)

开发安全有效的人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)疫苗可为人类进一步控制HIV流行带来希望.自20世纪80年代后期以来,人们已开发出许多候选疫苗,包括DNA疫苗、亚单位疫苗、重组活疫苗,这些疫苗在非人灵长类动物中能诱导不同程度的保护性应答,其中4种候选疫苗已在人类志愿者中进行效力测定,并获得了有希望的结果.值得关注的是,人们建立了不同的初免-加强免疫策略,以增强机体对HIV疫苗的免疫应答.此文介绍了有关HIV疫苗的开发进展.

用CyQuant法观察免疫缺陷病毒对中性粒细胞存活率的影响

目的 观察猴免疫缺陷病毒(SIV)感染中性粒细胞(PMN)后对PMN生长率的影响,以及粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)在PMN生存中的作用.方法 用台酚蓝染色和CyQuant法同时对不同时间SIV感染PMN生存率进行测定.结果 2种测定法结果是一致的,但CyQuant法结果显示较好的线形关系.GM-CSF对正常PMN的存活有一定程度的维持作用,但对SIV感染PMN不起明显作用.结论 SIV感染的PMN对GM-CSF的敏感性下降可能是造成PMN功能障碍的原因之一.

猴免疫缺陷病毒感染猕猴淋巴结和脾脏的病理学观察

目的 观察SIVmac251病毒感染猕猴后其脾脏和淋巴结组织的病理学变化,探索猴艾滋病毒感染及猴艾滋病的发病机理.方法 采用SIVmac251病毒感染猕猴,取感染过程中死亡猴以及实验结束存活猴的脾脏和淋巴结进行光镜与电镜观察.结果 光镜观察,见三种淋巴结的病理变化,包括增生型,退化型和耗竭型;电镜观察,淋巴细胞胞质、胞核及静脉内皮细胞胞质内见病毒颗粒和晶格状排列的病毒;脾脏和淋巴结超微损伤以线粒体为主,表现为线粒体增生,肿胀和形态改变(长形巨大线粒体).结论 SIV感染猕猴淋巴结病理改变与人HIV淋巴结病理改变相近,是适于研究艾滋病免疫机理的理想动物模型.首次发现晶格状排列的SIV病毒.

重新燃起的希望:艾滋病疫苗的研究现状

艾滋病疫苗的研发一直是各国科研人员重视的课题.然而,艾滋病疫苗的研发之路充满了坎坷,目前在研的该类疫苗多达40多种,却没有一种可以完全预防艾滋病,由美国制药巨头默克公司开发、曾被誉为艾滋病疫苗中的"希望之星"的V520(又称MRKAd5 HIV-1 gag/pol/nef)疫苗,也因一项名为STEP的临床研究显示其既不能帮助未携带病毒者有效预防病毒感染也不能减少病毒携带者的病毒载量而于2007年被迫宣告失败,这一项历时10年、耗资巨大的项目的功亏一篑,使全球从事艾滋病疫苗研发的人员积极性严重受挫,艾滋病疫苗的研究也由此跌入了低谷.

淫羊藿苷体外抑制SIV感染诱导的CEMx174细胞凋亡

目的 探讨淫羊藿苷体外抑制猴免疫缺陷病毒(Simian immunodeficiency virus,SIV)复制作用和抑制SIV感染诱导的CEMx174细胞凋亡的信号转导机制.方法 细胞病变和间接免疫荧光法测定了淫羊藿苷对SIV复制的抑制作用,Annexin V 和Propidiumiodide (PI) 双染法测定淫羊藿苷对SIV感染导致CEMx174细胞凋亡的作用,放免法测定了SIV感染CEMx174细胞内cAMP含量和依赖cAMP的蛋白激酶活性.Western blot法测定了PKA依赖的组蛋白磷酸化的水平.结果 用不同浓度的淫羊藿苷处理细胞后结果 表明,其半数毒性浓度为134 mg·L-1,半数抑制浓度是26 mg·L-1,治疗指数为5.15.淫羊藿苷对感染细胞凋亡的抑制要比正常细胞为高(P<0.05).50 mg·L-1淫羊藿苷作用病毒感染细胞15 min后降低正常和感染细胞内的cAMP含量,但对感染细胞的cAMP含量影响更加明显.50 mg·L-1淫羊藿苷可以显著下调感染和正常细胞的PKA活性(P<0.05).病毒感染可以使磷酸化的组蛋白-H3升高,50 mg·L-1淫羊藿苷作用2 h后,可以降低磷酸化组蛋白-H3的水平.结论 淫羊藿苷体外对SIV复制有一定抑制作用,SIVmac251 感染导致的细胞凋亡是cAMP-PKA 信号转导通路激活的结果 ,而短时间淫羊藿苷处理SIVmac251 感染的CEMx174细胞可以暂时减缓SIVmac251诱导的细胞凋亡过程.

大黄蒽醌抗猴免疫缺陷病毒作用靶点与转导信号通路研究

目的:探索大黄蒽醌化合物抗猴免疫缺陷病毒可能的作用靶点与转导信号通路.方法:大黄蒽醌化合物干预48 h后,提取两组细胞的总蛋白,利用iTRAQ技术对表达差异的蛋白进行筛选后,使用GO数据库、KEGG数据库进行分析,确定差异蛋白涉及的生物学过程、细胞组件及分子功能,分析目标蛋白质参与的主要疾病和信号转导途径.结果:两组共筛选出235个差异蛋白,其中可能与艾滋病相关的差异蛋白18个,7个蛋白表达上调,11个蛋白表达下调.差异蛋白主要涉及免疫反应、白细胞介素-1的合成与应答、病毒感染等8种生物学过程;参与蛋白结合、DNA结合、RNA结合等11个方面的细胞功能;涉及胞外区、细胞质、质膜、细胞核等11个方面的细胞组件;并主要参与系统性红斑狼疮、金黄色葡萄球菌感染、吞噬作用等9条信号转导通路.结论:利用iTRAQ技术筛选、鉴定差异蛋白表达,诠释大黄蒽醌化合物抗猴免疫缺陷病毒可能的作用靶点与转导信号通路,为临床治疗提供新的研究思路.

青蒿琥酯对猴免疫缺陷病毒感染中国恒河猴模型T淋巴细胞活化的调节作用

目的:观察注射用青蒿琥酯对猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)感染中国恒河猴模型免疫异常激活的改善情况,探讨青蒿琥酯对艾滋病的干预作用.方法:选用8只SIV感染平台期中国恒河猴模型,随机分为治疗组和对照组,每组各4只,治疗组按每天3 mg·kg-1剂量肌肉注射青蒿琥酯注射液8周,对照组肌肉注射等剂量生理盐水.分别于给药前,给药后2周、4周、6周、8周,停药后4周、8周检测血浆病毒载量、全血细胞计数、淋巴细胞亚群及免疫活化相关标记物CD69+、CD25+、HLA-DR+和CD38+表达情况.结果:青蒿琥酯可在4周内下调CD8+细胞CD69+、HLA-DR+和CD38+表达水平(P＜0.05),对CD4+细胞影响较小.给药第4周出现一过性嗜中性粒细胞下降,后回升至正常水平.结论:青蒿琥酯可改善SIV感染中国恒河猴细胞毒性T细胞免疫异常激活,嗜中性粒细胞下降是可逆的.

猴免疫缺陷病毒引起多形核嗜中性白细胞凋亡的可能机理（英文）

本实验目的是研究猴免疫缺陷病毒(SIV)引起多形核嗜中性白细胞(PMNs)凋亡的机理.实验用PCR技术扩增gag基因,用Western blot法测定p53和bcl-2基因的表达.结果显示PMNs在被SIV感染后随着保温时间的延长存活率下降,在感染后24h可以从PMNs中扩增出gag基因.PMNs中p53基因的的表达在感染后24h增加.同时bcl-2基因的表达在对照组和SIV感染组都增加,但在SIV感染组bcl-2蛋白的表达明显低于对照组.结果揭示SⅣ能够感染PMNs,p53和bcl-2基因表达的改变可能是SⅣ感染PMNs引起细胞凋亡的机理.

Allglo探针与TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测猴免疫缺陷病毒的比较

目的 比较Anglo探针和TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测SIV的灵敏度下限和重复性.方法 把SIV标准品进行梯度稀释成6个浓度,每个浓度同时提取12个标本进行批内差异分析,每个标本提取12次进行批间差异分析之后进行逆转录并用TaqMan探针和Anglo探针进行定量PCR检测.批内差异分析者每个标本同时进行逆转录和上机检测,批间差异分析者分12次进行逆转录和检测,对这两种探针的PCR结果利用ABI7300定量PCR仪所携带的软件和相关的统计学方法进行分析.结果 TaqMan探针和Anglo探针法检测SIV标准品的灵敏度下限均为50 copies/mL.重复性结果显示:批内结果差异分析显示Anglo探针法大变异系数为0.63％,小变异系数为0.33％,TaqMan探针法大变异系数为1.33％,小变异系数为0.2％;批间结果差异分析显示Allglo探针法大变异系数为1.77％,小变异系数为0.95％,TaqMan探针法大变异系数为1.86％,小变异系数为1.03％.结论 在荧光定量RT-PCR法检测猴免疫缺陷病毒中,Anglo探针法可能优于TaqMan探针法.