人骨髓基质细胞支持脐血造血细胞扩增后脐血归巢相关特性变化的研究

目的 探讨人骨髓基质细胞(HBMSC)联合细胞因子对脐血(CB)单个核细胞(MNC)体外培养后造血细胞归巢相关特性的变化以评价HBMSC及细胞因子支持的体外扩增对脐血归巢相关功能的影响.方法 将从新鲜CB标本中分离出的MNC分别接种于已建立的无血清培养体系:A组:对照组;B组:单用HBMSC支持;C组:单用细胞因子支持;D组:细胞因子和HBMSC联合支持.分别在0 d(d0)、10 d(d10)及14 d(d14)用流式细胞仪检测CD34+CXCR4细胞、CD34+VLA-4+细胞的变化情况.结果 ①在体外培养过程中,各时间点D组CD34+CXCR4+细胞扩增倍数均高于A、B、C组(P<0.05);②B、C和D组与A组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 HBMSC联合外源性细胞因子对脐血MNC进行体外培养,能有效扩增具归巢能力的造血干祖细胞数目.

母血、脐血性激素结合球蛋白水平与妊娠期糖尿病

目的:探讨妊娠期糖尿病(GDM)孕母、正常孕母,母血、脐血性激素结合球蛋白水平.方法:采用ELISA 法测定51例36～41周妊娠期糖尿病孕母,正常孕母母血、脐血性激素结合球蛋白水平,将其分为病例组(妊娠期糖尿病)25例及对照组(正常组)26例.结果:病例组胎儿母血、脐血存在低性激素结合球蛋白水平,与胎儿性别无关.结论:妊娠期糖尿病孕母胎儿存在低性激素结合球蛋白水平,妊娠期糖尿病孕母所孕育的胎儿体内可能存在胰岛素抵抗.

新生儿窒息脐血一氧化氮和血糖水平与其预后关系的探讨

目的:探讨新生儿窒息脐血一氧化氮(NO)及血糖变化的临床意义.方法:对30例窒息新生儿脐血NO和血糖水平进行检测,并与32例正常新生儿比较.结果:窒息组的脐血NO2- (43.74±13.20)μmol/L、血糖(5.63±1.20)mmol/L明显高于对照组脐血NO2- (27.28±9.52)μmol/L和血糖(3.65±0.79)mmol/L (P＜0.01);重度窒息组脐血NO2- (60.17±9.93)μmol/L和血糖(7.25±0.54)mmol/L显著高于轻度窒息组(36.72±6.33)μmol/L和(4.93±0.53)mmol/L(P＜0.01);NO和血糖水平呈显著正相关,而且脐血NO水平与新生儿缺氧缺血性脑病密切相关.结论:新生儿窒息脐血NO和血糖水平的测定具有重要临床意义.

三种常用的密度梯度离心方法富集有核红细胞的比较

目的 探讨富集母血中胎儿有核红细胞的适宜密度梯度离心方法.方法 对10例脐血分别用Percoll 1090单密度梯度离法、Percoll 1075与Percoll 1090双密度梯度离心法、Ficoll 1077单密度梯度离心法3种方法进行有核红细胞的分离,然后用适宜的密度梯度离心法分离12例10 mL母血中的胎儿有核红细胞.结果 ①Percoll 1090单密度梯度离法每mL脐血富集(70.58±5.67)×104个有核红细胞;Percoll 1075与Percoll 1090双密度梯度离心法每mL脐血富集(23.62±1.90) ×104个有核红细胞;Ficoll1077单密度梯度离心法每mL脐血富集(4.53±0.26)×104个有核红细胞.②采用Percoll 1090单密度梯度离法从12例10 mL母血中富集到的平均有核红细胞数为12.9±5.4个.结论 Percoll 1090单密度梯度分离法可有效增加脐血中有核红细胞的分离数量,并从孕妇外周血中成功富集到胎儿有核红细胞.

第三方脐血辅助输注的单倍型造血干细胞移植36例疗效分析

目的：探讨经第三方脐血辅助输注的异基因造血干细胞移植患者植入和移植后严重移植物抗宿主病（GVHD）情况与第三方脐血之间的关系。方法回顾性分析我中心2012年1月至2013年4月进行的使用脐血辅助输注的异基因造血干细胞移植患者36例的临床资料。结果所有患者均为恶性血液病，达到完全缓解者55.6%，约一半为未缓解或复发患者。患者年龄为4～55岁，中位年龄15.0岁。患者男女比例为1.4∶1。供者年龄为4～58岁，中位年龄36.0岁。从供者与患者关系来看，父母供子女者占75.0%，子女供父母者占11.1%，半相合同胞供者占13.9%，三种供者来源比较，存在统计学差异（P＜0.05），提示父母供子女者显著多于另两组，另两组间无统计学差异。从供受者性别比率来看，男供男比率为33.3%，男供女为27.8%，女供男为16.7%，女供女为22.2%，四组间比较无统计学差异，提示四组供受者性别比率无统计学差异。回输 MNC （9.62±2.9）×108/kg（患者体重），CD34+细胞（3.87±1.36）×106/kg。移植后1.5个月复查STR-PCR，34例为100%供者型，仅2例为非完全供者型，1周后复查均转变为100%供者型。观察至移植后100 d，未发生GVHD者占55.6%，发生GVHD者44.4%，其中发生Ⅰ～Ⅱ度GVHD者占38.9%，Ⅲ～Ⅳ度GVHD者占5.6%。结论从临床上可认为使用脐血进行辅助输注在一定程度上促进供者造血干细胞成功植入，造血恢复快且稳定，治疗效果好，而发生严重GVHD的概率也大大降低，值得进一步深入研究。

重型再生障碍性贫血60例应用脐血与外周血造血干细胞移植的对比性研究

目的 探讨脐血移植(UCBT)与外周血造血干细胞移植(PBSCT)治疗重型再生障碍性贫血的临床疗效,同时通过对比性研究,为患者选择合适的治疗方案.方法 PBSCT组以环磷酰胺(CTX)、抗胸腺细胞球蛋白(ATG)、氟达拉滨(FLU)为主要预处理药物,术后以环孢素A(CsA)+骁悉(MMF)+甲氨蝶呤(MTX)预防移植物抗宿主病(GVHD);UCBT组以CTX+ATG为主要预处理药物,术后以CsA预防GVHD.结果 两组移植病例中粒系恢复情况相当,但UCBT的红系、巨核系恢复较慢.PBSCT组植入率为85.71%.而UCBT组仅有1例完全植入(亲缘供者),植入率仅为3.12%.PBSCT组完全缓解22例,部分缓解1例,死亡5例,总有效率78.57%;脐血移植完全缓解25例,无效2例,死亡5例,总有效率78.12%.结论 UCBT虽植入率低但临床疗效与PBSCT相当,是重型再生障碍性贫血患者无合适人类白细胞抗原配型时有效的治疗方案.

脐血干细胞移植治疗膝盖软骨损伤一例疗效观察

关节软骨损伤临床上非常多见,主要由外伤或疾病造成.关节软骨损伤的早期可引起损伤关节的疼痛和关节功能的受限,晚期关节可能出现退行性病变,发生非炎性骨关节炎,将严重降低患者生活质量.

单细胞人白细胞抗原多基因位点检测的配型预选性研究及意义

目的探索单细胞扩增前引物延伸法(PEP)全基因组扩增,后续多重巢式聚合酶链反应(MN-PCR) 同步扩增人类白细胞抗原(HLA)-A、B和DR基因位点检测技术,进行配型预选研究的价值.方法采用PEP-MN-PCR方法测定单个淋巴细胞和单个胚胎细胞的HLA-A、B和DR基因型.结果 PEP-MN-PCR对单个淋巴细胞的扩增率、扩增准确率、假阴性率和假阳性率分别为91.7%、95.7%、3.0%和1.7%,而单个胚胎细胞则分别为97.7%、97.5%、2.3%和2.6%,两种细胞检测结果比较差异均无显著性意义(P>0.05).结论单细胞PEP-MN-PCR检测HLA多基因位点有较高的扩增效率和扩增准确率,具有应用于植入前胚胎遗传学分析,筛选HLA匹配胚胎,提供脐血造血干细胞移植治疗同胞疾病的应用价值.

流式细胞仪与免疫磁珠分选法纯化脐血嗜碱粒细胞的比较

近年来研究结果显示,嗜碱粒细胞在过敏反应炎症中担当重要角色,是炎症的发起者和传播者~[1].嗜碱粒细胞占外周血白细胞的小部分(<1%),提纯一定数量的嗜碱粒细胞就需要较多的血,这限制了对它的深入研究.产妇脐带血血量较多,可得到50-150 ml的量,而且脐带血尚未直接受到外界抗原刺激,是研究过敏性疾病发病机制的理想标本.本研究比较流式细胞仪分选和免疫磁珠分选两种方法提纯产妇脐带血中嗜碱粒细胞的分选效率.

三种标记法对脐血CD34+造血干细胞绝对计数的比较分析

CD34抗原的相对分子质量为105 000～120 000,选择性地表达于早期造血干/祖细胞、小血管内皮细胞和胚胎纤维母细胞表面,该抗原在原始造血中表达强,随着细胞分化,其表达水平逐渐减弱直至消失,因此一直作为干/祖细胞表面的一种特征性标志而广泛应用于造血干细胞基础研究和临床[1].脐带血中含有丰富的造血干/祖细胞,被认为是极具潜力的继骨髓和外周血后的第3种造血干细胞来源.

自胚囊胎膜及脐血中分离解脲脲原体二例

病例1:患者女,30岁.孕1产0.婚后5年未孕.后因泌尿系感染使用大量抗生素(红霉素、吡哌酸等)后受孕.孕28周后胎儿发育偏小,宫高腹围增长缓慢.宫颈涂片抗解脲脲原体免疫荧光染色阳性.给予加强营养、吸氧(15分钟,2次/日)及舒喘灵(2.4 mg,3次/日)治疗.至37周时宫高腹围不增长,胎儿监护无激惹试验(NST)可疑.遂于38周引产.产后胎儿正常,体重2 500 g.胎盘病理显示局灶较多钙化点,胎盘底板有一较小梗死灶.在无菌条件下取胎盘及胎膜各少量,用空针抽取脐血0.2 ml放入专用液体运送培养基中,立即送检解脲脲原体培养,结果胎膜及脐血培养均阳性.

差速贴壁法体外培养人脐血内皮祖细胞的实验研究

目的 建立一种经济可靠、稳定、高纯度内皮祖细胞的培养方法.方法 采用Ficoll 密度梯度离心法从人脐血中分离单个核细胞,于包被人纤连蛋白的培养皿中贴壁培养,收集48 h后的悬浮细胞重新贴壁培养至第7天,利用免疫组化、免疫荧光及流式细胞术对培养的细胞进行鉴定.结果 培养的细胞呈短梭形、多角型、胞体小;可见到大量典型的内皮祖细胞克隆;vWF和flk-1免疫组化细胞阳性率>95%,免疫荧光Dil-ac-LDL和FITC UEA-1双染阳性的细胞阳性率>98%,流式分析CD133+ 细胞的百分率为(7.O±1.8)%.结论 差速贴壁法是一种经济可靠、稳定、高纯度内皮祖细胞的培养方法.

HBV DNA及乙肝标志物检测乙肝产妇脐血和乳汁的应用分析

目的:探讨HBV DNA及其标志物检测乙型肝炎(Hepatitis B,HB)产妇脐血和乳汁及临床意义.方法:51例乙肝产妇采用荧光定量聚合酶联反应(FQ-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测产妇血清、脐血和乳汁的HBV DNA含量及乙肝标志物,并对结果进行回顾性分析.结果:51例乙肝产妇检测乙肝六项结果显示脐血32例阳性,乳汁31例阳性,与对照组比较有非常显著性意义(P＜0.01);脐血和乳汁中各项乙肝指标检测结果显示HBeAg阳性率高,分别是79.4%和82.3%;51例乙肝产妇检测HBV DNA含量结果为HBsAg、HBeAg、HBcAb、Pre-S1模型高,脐血和乳汁分别是76.2%和81.0%.结论:乙肝产妇定量检测HBV DNA及其乙肝标志物有利于阻断乙肝垂直传播,从而降低乙肝的新生儿感染率.

人B7-2瘤苗与DC瘤苗体外联合诱导抗食管癌的作用

目的:研究人B7-2瘤苗和负载了肿瘤细胞冻融抗原的DC瘤苗体外联合诱导抗食管癌的免疫作用.方法:应用脂质体转染技术,将融合基因表达载体pEGFP-N3-B7-2转染人食管癌细胞株EC9706.采用密度梯度离心法从脐血中分离单个核细胞(MNC)后,获得单核细胞(Mo).在细胞因子作用下诱导分化,第3 d加入EC9706的冻融抗原,共培养4 d后获得负载肿瘤抗原的成熟树突状细胞(MDC).将致敏DC与从脐血中分离的T淋巴细胞共培养3 d,获得细胞毒T淋巴细胞(CTL);四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对转染和未转染的EC9706的细胞毒作用.结果:融合基因在食管癌细胞株EC9706的胞膜上定位表达.脐血来源的DC可负载并递呈肿瘤抗原,激活自体T淋巴细胞,诱导肿瘤特异性CTL产生,对转染pEGFP-N3-B7-2的EC9706细胞有显著杀伤作用(F=21.672,P=0.000).结论:人B7-2瘤苗和DC瘤苗体外联合应用,诱导出明显的杀伤食管癌细胞的免疫效应.

脐血间充质干细胞移植治疗肝硬化的研究进展

肝硬化是严重威胁人类健康的疾病之一,目前尚无一种能够普遍开展的有效阻断该疾病进程的根治措施.干细胞领域的研究进展为肝硬化的治疗带来了契机.具有来源广泛、免疫原性弱、增殖分化能力强等优势的人脐血间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)已在相关的基础及临床研究报道中展现出诱人临床应用价值.本文就脐血MSCs的生物学特性及其在治疗肝硬化方面的应用研究作一综述.

不同来源间充质干细胞在肝病治疗中应用的研究进展

肝脏疾病是临床的常见病、多发病,在我国无论是相对发病率还是绝对病例数,肝脏疾病患者均居世界首位,是严重危害健康和耗费社会资源的主要疾病之一.近年来,国内外有关干细胞治疗慢性肝病的研究成果令人鼓舞,显示了勃勃生机.间充质干细胞是来源于发育早期中胚层的一类多能干细胞,研究证明他不仅存在于骨髓中,也存在于其他一些组织与器官的间质中,如外周血、脐血、松质骨、脂肪组织、滑膜和脐带等.本文就骨髓间充质干细胞、脐血间充质干细胞以及脐带间充质干细胞在治疗肝脏疾病方面的研究作一综述.

脐血干细胞转化为肝细胞的研究进展

自进行第1例脐血干细胞移植以来,各国科研机构相继开展对于脐血干细胞的研究,脐血库也纷纷建立.随着再生医学的发展,众多国内外学者在尝试进行非肝源性细胞向肝细胞分化方面的研究,并已经证实脐血干细胞在特定的微环境下可以在体内和体外转化为肝样细胞,为脐血干细胞在肝脏疾病中的应用奠定了基础.本文就脐血干细胞向肝细胞转化的新研究进展作一综述.

胰岛素-胰岛素样生长因子代谢轴在胎儿生长发育中的作用

目的:探讨胰岛素-胰岛素样生长因子(IGF)代谢轴在胎儿宫内生长发育中的作用.方法:连续收集266名单胎足月新生儿基本资料,采用放免法检测脐血胰岛素和IGF水平.结果:(1)脐血胰岛素水平与出生体重、BMI、身长和胎盘重量均呈正相关(P<0.01).(2)脐血IGF水平与出生体重、BMI、身长和胎盘重量均呈正相关(P<0.01).(3)脐血胰岛素水平和IGF水平呈显著正相关(P<0.01).结论:脐血胰岛素、IGF水平可作为评价胎儿官内生长发育情况的参考指标.

内脏脂肪素在妊娠期糖尿病患者血清、胎盘组织及脐血中的表达及其临床意义

目的 研究内脏脂肪素(Visfatin)在GDM患者血清、胎盘组织及脐血中的表达及其在GDM发生中的作用及与新生儿结局的相关性. 方法 选取于我院妇产科行剖官产术终止妊娠的GDM组37例,另选糖耐量正常妊娠组(GNGT) 35名,分别测定两组FPG、FIns、HbA1 c、TC、TG、LDL-C、HDL-C;稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);测量婴儿出生体重和身高,计算Ponderral(PI)指数及孕妇BMI.ELISA测定两组母体血清、脐血Visfatin水平;Western blot测定胎盘组织Visfatin蛋白表达. 结果 GDM组分娩前血清FPG、FIns、HbA1c、TC、TG、LDL-C及HOMA-IR均高于GNGT组,HDL-C低于GNGT组(P＜0.05).GDM组新生儿PI指数及胎盘组织Visfatin蛋白水平表达与GNGT组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);GDM组母体静脉血、新生儿脐血Visfatin水平高于GNGT组(P＜0.05).相关分析结果显示,血清Visfatin水平与HOMA-IR、FIns、FPG呈正相关(P＜0.05). 结论 GDM患者血清、胎盘及其新生儿脐血Visfatin水平的升高可能参与了GDM的发生发展,以及胎儿宫内发育的调节.

脐血移植治疗复杂性心脏病的初步经验