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胃肠道疾病与紧密连接蛋白关系的研究进展
紧密连接蛋白的异常表达与许多胃肠道疾病的发生、发展特别是肿瘤的发生、浸润和转移密切相关.研究紧密连接蛋白的表达对胃肠道肿瘤的诊断、治疗及预后判断有重要意义.本文就胃肠道疾病与紧密连接蛋白的关系研究进展作一综述.
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去乙酰化酶Sirt3沉默对缺氧条件下肠上皮Caco-2细胞缺氧诱导因子-1α表达的影响及其对肠上皮屏障功能的作用
目的 采用RNA干扰(RNAi)技术,使去乙酰化酶Sirt3基因表达下调或缺失,观察其下调或缺失后对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响及其对肠屏障功能的作用.方法 体外培养Caco-2细胞,分别检测跨上皮电阻(TER),常氧和低氧(1％O2)条件下Sirt3-小干扰RNA(siRNA)转染前后HIF-1α和紧密连接蛋白:ZO-1、Occludin、Claudin-1的mRNA与蛋白表达.结果 常氧与低氧条件下,Sirt3-siRNA转染后Sirt3的蛋白表达分别下降52％、35％;HIF-1α的蛋白表达(0.72±0.01、0.93 ±0.01)比转染前(0.38 ±0.01、0.81±0.03)明显升高(P＜0.01);低氧条件下,Sirt3-siRNA转染后Occludin、Claudin-1、ZO-1的蛋白(0.71 ±0.03、0.69±0.01、0.72±0.02)和mRNA (0.80±0.01、0.84±0.01、0.88 0.03)表达比转染前明显降低(P＜0.01);低氧条件下,经Sirt3-siRNA转染后TER下降30.8％.结论 缺氧条件下,Sirt3可以调控HIF-1α的表达.沉默Sirt3后紧密连接蛋白表达降低,从而影响肠屏障功能.
关键词： 上皮屏障功能 RNA干扰 去乙酰化酶Sirt3 缺氧诱导因子-1 紧密连接蛋白 -
白细胞介素-22对缺氧条件下肠上皮屏障的保护作用及其机制
目的 观察白细胞介素-22 (IL-22)对缺氧肠上皮T84细胞屏障功能的影响,探讨其分子机制.方法 对T84细胞进行2％02缺氧6h(Hx组)及100 μg/L重组IL-22(Hx+ rIL-22)处理,分别检测跨上皮电阻(TER),IL-22受体A1(IL-22RA1)及紧密连接蛋白:ZO-1、Occludin、Claudin-1及Claudin-4的mRNA与蛋白表达.结果 缺氧引起IL-22RA1的mRNA及蛋白表达较常氧分别下降30.0％及63.0％,并引起TER降低54.7％,经rIL-22预处理使得TER较Hx升高43.8％.缺氧处理使ZO-1、Occludin、Claudin-1及Claudin-4表达明显降低,而rIL-22预处理则可缓解该现象(mRNA及蛋白表达较Hx组分别升高:44.3％、36.4％、77.6％、61.2％及109.3％、77.6％、153.3％、79.6％,P＜0.01).结论 IL-22与其受体作用后可以维持肠屏障功能,稳定渗透性,调控紧密连接蛋白的表达.
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大鼠肠黏膜上皮occludin蛋白在发育过程中的变化
目的 研究在不同发育阶段大鼠的肠黏膜上皮中紧密连接蛋白occludin的变化情况,探索其与肠黏膜屏障相关疾病的潜在关系.方法 于SD大鼠孕18 d(E18)、生后1d (P1)、生后7 d (P7)、生后21 d(P21)、生后28 d(P28)时取出末端回肠,HE染色观察其绒毛长度;免疫印迹(Western blot)检测occludin蛋白的表达水平;免疫荧光(Immunofluorescence)观察occludin蛋白的分布以及荧光强度.结果 HE染色结果显示肠绒毛长度随着发育而增长,生后21d以后则趋于稳定;免疫印迹结果显示occludin蛋白的表达水平在出生后有一过性下降,从E18的0.34±0.02降至P1的0.16±0.02,而后随年龄增长,并在P7(0.52±0.06)时超过E18水平(P＜0.05);免疫荧光结果显示occludin蛋白在回肠末端主要分布于黏膜层,与E18组相比,其荧光强度在出生后(P1组)有一过性下降,之后随年龄而逐渐增加.结论 大鼠末端回肠黏膜绒毛的形态和紧密连接蛋白occludin随年龄增长而逐渐发育,但在出生后短期出现一过性下降过程,可能与此期易发坏死性小肠结肠炎有关.
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可溶性环氧化物水解酶抑制剂TPPU对大鼠局灶脑缺血后血脑屏障的保护作用
目的:研究可溶性表氧化物水解酶抑制剂(sEHi) TPPU对脑缺血/再灌注损伤所致血脑屏障(BBB)破坏的作用.方法:线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型;45只大鼠随机分为3组,假手术组、模型组(制作MCAO模型)、TPPU组(于MCAO术前24 h、缺血再灌注后0、24及48 h经大鼠尾静脉注射TPPU),各1 5只.Garcia评分法评估神经功能缺损及恢复情况;TTC法检测大鼠脑梗死体积;干湿重法评估脑水肿程度;伊文氏蓝(EB)法检测BBB通透性;免疫荧光染色、western blot等方法检测BBB相关蛋白含量的变化.结果:与模型组比较,TPPU能够改善大鼠脑梗死后神经功能缺损症状(P＜0.01),减小脑皮质梗死体积,减少EB向脑组织渗漏,减轻血管性脑水肿,减轻MCAO后BBB紧密连接蛋白的丢失(均P＜0.05).结论:TPPU能够保护MCAO大鼠BBB完整性,减轻脑水肿,减小脑梗死体积,减轻神经功能缺损症状.
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唑来膦酸对食管鳞癌细胞转移的抑制作用
目的 分析唑来膦酸(ZOL)对食管鳞癌细胞转移能力的抑制效应并探讨其分子机制.方法 食管鳞癌细胞株EC9706与EC109细胞经ZOL处理后,以噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖能力,细胞侵袭与划痕愈合实验检测细胞侵袭与转移能力,免疫印迹(Western blotting)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)与细胞免疫荧光实验检测转移相关蛋白表达变化.结果 不同浓度ZOL处理可显著抑制EC9706与EC109细胞的增殖、侵袭与迁移能力,同未加药对照组比较,均差异有统计学意义(P＜0.05);ZOL处理通过抑制转录因子Slug转录上调紧密连接蛋白表达水平,转染因子Slug可逆转ZOL的抗细胞转移效应.结论 ZOL通过Slug调控紧密连接蛋白表达可能是其干预食管鳞癌细胞转移的分子机制.
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小檗碱改善肠黏膜屏障损伤及其可能机制的实验研究
目的:研究小檗碱(BBR)改善肠黏膜屏障损伤及可能机制.方法:人结肠腺癌细胞系(caco-2)培养形成完整的紧密连接单层.不同浓度的脂多糖(LPS)(0,0.1,1,10 μg/ml)作用于caco-2细胞24 h后,检测单层跨膜电阻与通透性以及凋亡相关蛋白caspasel2表达.实验分为对照组、模型组(LPS 10 μg/ml),干预组(LPS 10 μg/ml与BBR 10 μmol/L),作用24 h后检测通透性与紧密连接蛋白zo-1,occludin,claudin-1的表达以及各组TLR4,MyD88,NF-κB的变化.结果:caco-2细胞单层通透性在LPS(0 10 μg/ml)范围内呈浓度依赖性增加;10 μg/ml以下浓度的LPS作用后caspase12表达与对照组无明显差异;与对照组比较,模型组的紧密连接蛋白表达明显降低,蛋白TLR4,MyD88,NF κB的表达明显增加(P＜0.05);而与模型组比较,干预组紧密连接蛋白则明显增加,蛋白TLR4,MyD88,NF-κB的表达明显降低(P＜0.05).结论:小檗碱能增加肠上皮细胞间紧密连接(TJ)蛋白的表达,从而有效修复LPS引起的肠黏膜屏障损伤,LPS诱导caco-2细胞紧密连接蛋白减少可能是通过TLR4,MyD88,NF-κB信号通路的活化,而BBR能抑制该信号通路从而能改善紧密连接蛋白的表达.
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脾切除对大鼠肠黏膜屏障的影响
目的 探讨脾脏在肠黏膜屏障中的作用及其机制.方法 60只Wistar大鼠随机分6组,每组10只.正常对照组,假手术组,实验A、B、C、D组分别于脾切除术后7、30、60、90 d用乳果糖/甘露醇(L/M)比值检测肠黏膜通透性,采用免疫组织化学、Western blot法检测末端回肠紧密连接蛋白闭锁小带-1(ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)、壳牢素-1(C1audin-1)的表达,并利用图像分析系统对Western blot图像进行定量分析.结果 对照组的L/M比值为(0.308 ±0.082);脾切除术后7 d L/M比值降至(0.145±0.061)(P=0.003),术后30和60 d的L/M比值分别为(0.266±0.097)和(0.256±0.086),与对照组相比差异没有统计学意义;术后90 d L/M比值为(0.139±0.071)较对照组明显下降(P=0.001).免疫组化检测结果显示,术后7、30、60 d的ZO-1强阳性表达(5/10,6/9,6/10)与对照组(8/10)相比,差异均无统计学意义;术后90 d强阳性表达(2/8)下降明显(P=0.03).术后7、30、60 d的Occludin染色强阳性表达(4/10、4/9和5/10)与对照组(9/10)相比,差异无显著性意义;术后90 d组强阳性表达(3/8)下降明显(P=0.03).实验各组的Claudin-1染色强度与对照组相比差异均无统计学意义(均P＞0.05).对Western blot显影图像进行定量分析,ZO-1的灰度值术后90 d下降明显(P=0.03),Occludin的灰度值术后30、90 d下降明显(P=0.03和0.02),而C1audin-1的灰度值各组间差异均没有统计学意义(均P＞0.05).结论 脾切除短期内和一段时间后能降低大鼠肠黏膜通透性,术后90 d能明显降低紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达,而对C1audin-1的表达没有影响.脾脏影响肠黏膜屏障与改变紧密连接蛋白有关.
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缺血再灌注对血脑屏障紧密连接蛋白的影响
紧密连接是血脑屏障的结构功能基础,它是一个复杂的、具有主动调节性的细胞系统.近来的研究表明缺血再灌注通过各种途径影响紧密连接的结构和分布.探讨血脑屏障连接复合体的分子结构、在脑损伤时的变化以及对血脑屏障通透性调节的可能机制为脑损伤的临床防治提供了一个全新的思路.
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BBI阻断LPS对肠道上皮细胞间紧密连接蛋白的抑制作用
目的 探讨大豆来源的蛋白酶抑制剂(BBI)是否能阻断脂多糖(LPS)对肠道上皮细胞间紧密连接蛋白的下调作用及其机制.方法 用CCK8试剂盒检测LPS和BBI对HT-29细胞的毒性作用.用BBI预处理HT-29细胞6 h,再用LPS刺激,分别用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞紧密连接蛋白(ZO-1,Occludin)、TLR4及MyDD8的表达;通过Western Blot检测NF-κB的激活.结果 LPS 1 000 ng/mL和BBI1 000μg/mL对HT-29细胞均无毒性作用.LPS可显著地上调HT-29细胞TLR4表达,且上调作用具有时间与剂量效应;能明显下调紧密连接蛋白的表达,其下调作用与LPS浓度成正比;能明显激活NF-κB,且具有剂量效应;LPS对HT-29细胞的这种作用可被BBI显著地抑制.结论 通过抑制LPS诱导的肠道上皮细胞TLR4的表达和NF-κB的活化,BBI能显著地阻断LPS对肠道上皮细胞间紧密连接蛋白的抑制作用.
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GLP-2对实验性梗阻性黄疸小肠上皮细胞紧密连接的调控
目的 探讨类高血糖素多肽-2(GLP-2)对实验性梗阻性黄疸小肠上皮细胞紧密连接的调控.方法 建立梗阻性黄疸大鼠模型,造模后10d随机分组,每组10只.黄疸组皮下注射0.01 mmol/LPBS 0.5 mL,实验甲组腹腔注射250 g/(kg*d),实验乙组腹腔注射125g/(kg*d)的GLP-2溶液0.5 mL,每天2次,连续7 d后处死.另设正常对照组,用免疫组化及Western blots检测末端回肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1,Occludin及Claudin-1, Claudin-4的分布和表达,并用图像分析系统对Western blots图像进行定量分析.结果 正常情况下ZO-1,Occludin和Claudin-1染色强阳性率分别为70.0%,80.0%和70.0%.梗阻性黄疸时ZO-1和Occludin分布不均,染色变淡,线条模糊.补充外源性GLP-2后,实验甲组的ZO-1,Occludin和Claudin-1染色有所恢复,且强阳性表达率分别从黄疸组的20.0%,30.0%和20.0%升至实验甲组的80.0%,90.0%和80.0% (均P<0.05);Claudin-4表达和分布变化不明显.实验乙组对紧密连接蛋白无影响.Western blots图像定量分析得到相同的结果. 结论 梗阻性黄疸时,补充GLP-2可影响小肠黏膜上皮紧密连接蛋白的分布和表达;提示GLP-2能恢复和维持小肠黏膜上皮屏障的完整性.
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梗阻性黄疸大鼠肠黏膜上皮紧密连接蛋白和MLCK的研究
目的 探讨梗阻性黄疸肠黏膜屏障破坏的机制.方法 建立梗阻性黄疸大鼠的动物模型,分别于胆管结扎10 d和20 d后,采用免疫组化、Western blot方法检测末端回肠黏膜的紧密连接蛋白成员ZO-1和Occludin与肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的分布和表达.结果 正常回肠黏膜层ZO-1和Occludin的分布相似,主要位于上皮细胞的边缘,细胞膜顶端,沿绒毛下方均匀连续分布;MLCK主要分布在细胞浆内.梗阻性黄疸时ZO-1和Occludin分布不均, 染色变淡,线条模糊,边缘粗糙有毛刺状突起;MLCK分布散乱,染色稀疏.与对照组相比20 d组和10 d组的ZO-1,Occludin,MLCK数量明显减少,强阳性表达率分别从70.0 %,80.0 %,70.0 %降至10 d组的28.6 %,28.6 %,28.6 % (均P＜0.05)和20 d组的ZO-1从10 d 组的28.6 %降至14.3 %, 35.7 %, 21.4 % (均P＜0.05).20 d 组的ZO-1下降较10 d组更为明显(P＜0.05), 而Occludin和MLCK变化不明显.Western blot检测的结果与之相似.结论 梗阻性黄疸时大鼠小肠黏膜上皮ZO-1,Occludin,MLCK分布紊乱,表达下降,小肠黏膜上皮屏障的完整性破坏.
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紧密连接蛋白在缺血再灌注肾损伤小鼠肾脏中的表达及意义
目的 探讨紧密连接蛋白claudin-2、claudin-10和claudin-17在缺血再灌注肾损伤模型小鼠肾脏中的表达及意义.方法 将152只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=8)、假手术组(n=72)及模型组(n=72).采用夹闭小鼠双侧肾蒂30 min的方法建立缺血再灌注肾损伤小鼠模型,假手术组及模型组依据再灌注后时间点(0、3、6、12、24、48、72 h及5 d、7 d)分为9个亚组,每组8只小鼠.分别采用RT-PCR法及免疫组化法分别检测各组小鼠肾组织紧密连接蛋白claudin-2、-10、-17 mRNA及其蛋白表达水平.结果 对照组及假手术组小鼠肾组织claudin-2、-10、-17 mRNA及其蛋白表达水平随再灌注时间点无明显变化(P>0.05).与对照组及假手术组比较,再灌注后模型组claudin-2、-10 mRNA及其蛋白表达水平降低,且随着再灌注时间的推移逐渐减弱,至再灌注24 h时达到低水平(P<0.05);再灌注后模型组claudin-17 mRNA及其蛋白表达水平增高,且随再灌注时间的推移逐渐增高,至再灌注12 h时mRNA及24 h时蛋白水平达到高(P<0.05).结论 缺血再灌注肾损伤与紧密连接蛋白claudin-2、-10、-17的异常表达密切相关.
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二十碳五烯酸对E.coli LF82感染后肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1 mRNA的影响
目的 探讨二十碳五烯酸(EPA)对黏附侵袭性大肠杆菌(AIEC)LF82感染后肠上皮细胞(Caco-2)紧密连接蛋白(ZO-1)表达的影响.方法 用Caco-2细胞株建立体外肠上皮细胞紧密连接模型,分为EPA处理组,EPA 0、25、50、100、200μmol/L干预96 h;以及EPA(EPA 0、25、50、100、200μmol/L)+E.coli LF82联合处理组,在不同浓度EPA干预96 h的基础上,予E.coli LF82分别干预0 h、6 h、12 h.通过细胞形态学观察,MTT法测定细胞生长曲线,以及细胞膜两侧碱性磷酸酶(ALP)活性检测对Caco-2细胞模型进行评价.流式细胞术检测不同浓度EPA对Caco-2细胞凋亡的影响.RT-qPCR检测EPA和/或E.coli LF82作用于Caco-2细胞后ZO-1 mRNA的表达情况.酶联免疫吸附法检测Caco-2细胞上清中TNF-α 的变化.结果 EPA25、50μmol/L处理后,Caco-2细胞存活率均高于0浓度组,且增高呈浓度依赖性(P<0.05);EPA100、200μmol/L处理组的细胞存活率下降呈浓度依赖性,均低于0浓度组(P<0.05).EPA浓度为100、200μmol/L时,细胞凋亡率较0浓度组增加(P<0.05).单独E.coli LF82干预Caco-2细胞6 h、12 h后,ZO-1 mRNA表达随处理时间延长而减少,均低于未处理组(P<0.05).EPA 25、50μmol/L干预联合E.coli LF82处理6 h或12 h,Caco-2细胞的ZO-1 mRNA表达随EPA浓度增加而增加,均高于E.coli LF82单独处理组(P<0.05).单独E.coli LF82处理6 h、12 h组的TNF-α 分泌随干预时间延长而增加,均高于未处理组(P<0.05).EPA25、50μmol/L联合LF82处理6 h或12 h,细胞上清液中TNF-α 分泌量随EPA浓度的增加而减少,均少于单独LF82处理组(P<0.05).结论 EPA能有效预防E.coli LF82感染后肠上皮细胞紧密连接的破坏,抑制炎症因子的分泌,对肠黏膜屏障有一定的保护作用.
关键词： 二十碳五烯酸 粘附侵袭性大肠杆菌LF82 紧密连接蛋白 炎症因子 肠上皮细胞 -
紧密连接蛋白ZO-1、occludin和actin参与缺氧缺血诱导的血脑屏障通透性增加
目的 探讨血脑屏障紧密连接(blood-brain barrier-tisht junction,BBB-TJ)蛋白ZO-1、occludin和ac.tin在缺氧缺血诱导的血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性增加中的变化及其机制.方法 利用人脐静脉内皮细胞系ECV304与星形胶质细胞(astrocytes,AS)共培养建立体外BBB模型,模型随机分为正常对照组和缺氧缺血两组.透射电镜观察两组间BBB-TJ的变化,直接免疫荧光观察细胞骨架蛋白actin分布的改变.γ计数仪检测大分子物质125I-牛血清白蛋白(120I-BSA)通透曲线观察BBB通透性的改变,Western blot检测细胞骨架蛋白actin,胞浆附着蛋白ZO-1,跨膜蛋白occludin的表达量的改变.结果 透射电镜观察培养第10天的体外BBB模型,可见内皮细胞连接紧密,细胞间形成光滑、连续、较高密度的紧密连接.缺氧缺血后5 h,内皮细胞间连接开放,形成裂隙.直接免疫荧光下检测可见周边Actin丝带模糊,部分断裂,形成细胞间裂隙.缺氧缺血组1251-BSA的通透量增加,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).同时ZO-1的表达量显著减少,而occludin和actin的表达量无明显改变.结论 缺氧缺血诱导occludin的位置分布改变和ZO-1的表达量减少进而促使actin蛋白发生重排,是导致缺氧缺血后BBB通透性增加的可能机制之一.
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紧密连接蛋白与幽门螺杆菌感染相关性胃病的关系研究
幽门螺杆菌(Hp)感染是导致慢性胃炎、消化性溃疡的重要原因,但其发病机制尚不清楚.紧密连接结构和功能受损导致胃黏膜屏障功能障碍在Hp相关性胃病发病中的作用近年来受到关注.紧密连接由多种蛋白及分子组成,包括3种完整的膜蛋白(咬合蛋白、闭合蛋白、连接黏附分子)和1种胞浆蛋白(闭合小环蛋白).该文主要阐述各种紧密连接蛋白的组成及功能,Hp感染所致紧密连接蛋白功能的变化及其与相关胃病发病的关系,以及增强紧密连接蛋白功能在Hp相关性胃病防治中的意义.
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紧密连接蛋白在声带白斑伴咽喉反流患者声带黏膜中的表达
目的 通过观察紧密连接(tight junction,TJ)蛋白在声带白斑伴咽喉反流(laryngophayngeal reflux,LPR)患者声带黏膜表达的差异,探讨其与声带黏膜屏障损伤的相关性.方法 将因声带白斑行手术治疗且资料完整的26例患者按24h双通道测酸结果分LPR组和非LPR组,两组各13例.术中分别采集声带黏膜标本.HE染色观察声带组织病理学的变化、透射电镜检测声带黏膜紧密连接的形态学、Western blot检测紧密连接蛋白Clau-din 1与ZO-1的表达.结果 HE染色发现LPR组声带黏膜炎症细胞浸润较多,上皮结构完整性较差;电镜下观察到LPR组紧密连接附近的电子致密物质明显较少,紧密连接形态学明显改变.Western blot示LPR组Claudin-1和ZO-1两种蛋白表达减少(P＜0.05).利用免疫荧光检测发现,LPR组的紧密连接蛋白Claudin-1和ZO-1在细胞浆内表达明显减少(P＜0.05).结论 咽喉反流物可以导致紧密连接结构破坏,相关蛋白功能表达异常,细胞间连接结构遭到破坏,细胞间隙扩大,声带黏膜上皮的通透性增高,可能是声带白斑黏膜损伤的重要机制.
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重症肝炎患者肠道分泌片和紧密连接蛋白的变化
目的 研究重症肝炎患者肠道分泌片(SC)和紧密连接蛋白(ZO-1、Occludin)的变化,了解重症肝炎患者伴发腹部症状的原因.方法 采用免疫组织化学方法分别检测肠道SC和ZO-1、Occludin.结果 与对照组比较,重症肝炎患者肠道SC和ZO-1、Occludin染色明显减弱.对照组光密度sC为(9.47±3.84),ZO-1为(1.08±0.35),Occludin为(12.08±8.06);重症肝炎患者光密度SC为(0.59±0.10),ZO-1为(0.41±0.30),Occludin为(2.92±1.37),与对照组比较,重症肝炎患者SC、ZO-1和Occludin光密度显著减少(P＜0.01).结论 重症肝炎患者肠道SC和ZO-1、Occludin表达下降,导致肠道屏障功能发生异常,这是引起腹部症状的原由之一.
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竹节参总皂苷对自然衰老大鼠小肠上皮细胞紧密连接蛋白的调节作用及其机制研究
目的:研究竹节参总皂苷对衰老大鼠肠道上皮细胞紧密连接蛋白表达的调节作用及其可能机制.方法:SPF级SD大鼠分为成年组(6月龄)、衰老模型组(24月龄)及竹节参总皂苷高、中、低剂量组5组.免疫组织化学方法检测各组大鼠回肠上皮细胞间紧密连接蛋白Occludin、ZO-1,抗氧化应激相关蛋白Nrf2、HO-1、NQO-1,线粒体相关蛋白Sirt1、PGC-1α,及p-AMPK蛋白的表达情况.结果:与成年组大鼠比较,自然衰老大鼠Occludin、ZO-1、Nrf2、HO-1、NQO-1、Sirt1、PGC-1α、p-AMPK蛋白表达均显著降低(P＜0.01).与自然衰老大鼠比较,竹节参总皂苷各组大鼠Occludin、ZO-1、Nrf2、HO-1、NQO-1、Sirt1、PGC-1α、p-AMPK表达显著升高(P＜0.05或P＜0.01).结论:自然衰老大鼠细胞间紧密连接蛋白表达减少引起的回肠黏膜屏障功能障碍可能与线粒体氧化应激密切相关,而竹节参总皂苷可能通过调节衰老大鼠线粒体氧化应激的水平,从而上调肠上皮细胞间紧密连接蛋白的表达,改善衰老大鼠肠道黏膜屏障功能障碍.
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缺血后适应促进树鼩血栓性脑缺血时紧密连接occludin／ZO-1蛋白表达及抑制脑水肿的机制
目的：研究脑缺血及缺血后适应（ postconditioning ，PC）条件下，树鼩脑缺血时局部脑血流（ regional cerebral blood flow，rCBF）、脑水肿及紧密连接（tight junction，TJ）的occludin和zonula occludins（ZO）-1蛋白表达的改变；探讨TJ表达对脑水肿及脑梗死的影响及其可能机制。方法：将72只健康成年树鼩随机分为对照组、脑缺血组和脑缺血＋PC组，其余3只动物用于磁共振成像（ MRI）观察。通过光化学反应诱导树鼩局部血栓形成；缺血PC组于缺血后4 h夹闭患侧颈总动脉3次（每次5 min）实施PC处理。用电镜观察神经超微结构，用TUNEL法检测海马神经元的凋亡数量，用激光多普勒血流监测仪检测缺血区的rCBF，用免疫组化及Western blot 法观察缺血海马occludin／ZO-1蛋白的表达，MRI技术监测脑梗死体积，组织干湿法检测脑含水量的改变。结果：树鼩脑缺血后海马CA1区的正常神经元明显减少以及神经元超微结构明显异常。脑缺血组TUNEL阳性细胞数明显增加（ P＜0.01），rCBF明显降低，occludin／ZO-1表达减弱（P＜0.01），脑含水量和脑梗死体积明显增加（P＜0.01）。经PC处理的动物，缺血区rCBF增加， TJ表达增强，脑含水量降低，且TUNEL阳性细胞数和脑梗死体积明显减小（ P＜0.01）。结论：缺血PC可增加树鼩缺血区rCBF但不增加局部含水量；提示缺血PC缩小脑梗死体积可能与occlu-din／ZO-1表达增强而抑制脑水肿有关。
