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黄芩苷对肠上皮细胞缺氧复氧损伤后屏障功能的影响
目的 探讨黄芩苷对肠上皮细胞缺氧复氧损伤后屏障功能的影响.方法 建立大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)缺氧复氧损伤模型.采用3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基四氮唑嗅盐(MTT)比色法检测细胞增殖,筛选黄芩苷浓度.设立对照组,缺氧复氧组,缺氧复氧+5.0×10-3 mol/L黄芩苷组,缺氧复氧+1.0×10-3 mol/L黄芩苷组,缺氧复氧+0.2×10-3 mol/L黄芩苷组;采用紫外线分光光度计检测细胞上清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;Western blot方法检测细胞紧密连接蛋白Occludin和Zonula Occludens 1 (ZO-1)的表达及核因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平;实时荧光定量-PCR法检测Occludin和ZO-1 mRNA表达水平.结果 MTT比色法显示黄芩苷可缓解缺氧复氧对细胞增殖的抑制(对照组吸光度值:0.442±0.015,缺氧复氧组:0.256±0.007,缺氧复氧+5.0×10-3mol/L黄芩苷组:0.407±0.008;F=66.904,P＜0.05).缺氧复氧组较对照组细胞上清中MDA水平增加[对照组:(3.502±0.231) mol/L,缺氧复氧组:(5.541 ±0.143) mol/L],SOD水平减少[对照组:(20.073 ±0.493)×103 U/L,缺氧复氧组:(13.324±0.081)×103 U/L],Occludin和ZO-1的蛋白、mRNA表达量减少,NF-κB(P65)蛋白表达量增加(P均＜0.05).与缺氧复氧组相比,黄芩苷各组随黄芩苷水平升高,细胞上清中MDA水平逐渐减少[缺氧复氧+5.0×10-3 mol/L黄芩苷组:(4.320 ±0.106)mol/L,缺氧复氧+ 1.0×10-3 mol/L黄芩苷组:(4.578±0.080) mol/L,缺氧复氧+0.2 ×10-3 mol/L黄芩苷组:(4.928 ±0.118) mol/L],SOD水平增加[缺氧复氧+5.0×10-3 mol/L黄芩苷组:(18.462 ±0.284) ×103 U/L,缺氧复氧+ 1.0×10-3mol/L黄芩苷组:(16.624 ±0.364)×103 U/L,缺氧复氧+0.2×10-3 mol/L黄芩苷组:(14.023 ±0.140)×103 U/L],Occludin和ZO-1的蛋白、mRNA表达量增加,NF-κB(p65)蛋白表达量减少(P均＜0.05).结论 黄芩苷可通过降低NF-κB的活性减轻缺氧复氧对肠上皮细胞屏障的损伤.
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石斛多糖对糖尿病大鼠血-视网膜屏障的保护作用及其机制
背景 糖尿病视网膜病变(DR)的发病机制涉及多条通路,近年来炎症因子相关的通路学说在DR发病中的作用越来越受到人们的关注.研究表明,高糖环境下视网膜内肿瘤坏死因子-α(TN F-α)等促炎因子含量增加,从而加速视网膜中紧密连接蛋白的异常,导致血-视网膜屏障(BRB)破坏.研究发现石斛多糖可抑制TNF-α的高表达,但其在DR早期对TNF-α表达的影响尚不清楚. 目的 研究石斛多糖对糖尿病大鼠TNF-α诱导的BRB通透性异常及视网膜内紧密连接蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)、连接蛋白-5(claudin-5)表达的影响.方法 将50只清洁级成年SD大鼠分为正常对照组、糖尿病模型组及低、中、高剂量石斛多糖组,每组10只大鼠,糖尿病模型组和低、中、高剂量石斛多糖组大鼠均采用链脲佐菌素腹腔内注射法诱导糖尿病模型.低、中、高剂量石斛多糖组于建模成功后6周按照分组分别用100、200及300 mg/(kg·d)石斛多糖灌胃,正常对照组和糖尿病模型组大鼠用生理盐水灌胃.干预后8周各组大鼠心脏灌注伊文思蓝并获取双侧眼球,分别进行相关指标检测,通过测定大鼠视网膜中伊文思蓝质量浓度评估大鼠视网膜渗漏量;采用Western blot法检测大鼠视网膜内ZO-1、occludin、claudin-5蛋白的相对表达量,采用ELISA法检测大鼠视网膜中及血清中TNF-α的质量浓度.结果 正常对照组、糖尿病模型组及低、中、高石斛多糖组大鼠视网膜伊文思蓝渗漏量分别为(12.68±1.30)、(30.45±2.60)、(22.12±1.15)、(17.99±1.00)和(21.49±1.00) μg/μl,糖尿病模型组大鼠视网膜伊文思蓝渗漏量明显高于正常对照组,低、中、高石斛多糖组视网膜伊文思蓝渗漏量明显低于糖尿病模型组,差异均有统计学意义(均P＜0.01).Western blot检测显示,糖尿病模型组大鼠视网膜中TNF-α蛋白相对表达量为1.12±0.10,明显高于正常对照组的0.27±0.03,低、中、高石斛多糖组视网膜中TNF-α蛋白表达量明显低于糖尿病模型组,ZO-1、occludin和claudin-5蛋白表达量明显高于糖尿病模型组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);ELISA法检测显示,糖尿病模型组大鼠视网膜和血清中TNF-α质量浓度明显高于正常对照组,低、中、高石斛多糖组大鼠视网膜和血清中TNF-α质量浓度明显低于糖尿病模型组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).不同剂量石斛多糖组各指标的比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 石斛多糖可能通过下调糖尿病大鼠视网膜中TNF-α的表达和上调紧密连接蛋白的表达而改善糖尿病大鼠BRB通透性的异常.
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紧密连接蛋白对实验性角膜新生血管发生的抑制作用
背景 角膜新生血管(CNV)是导致角膜盲的主要原因之一,研究表明紧密连接蛋白中的闭锁小带蛋白1(ZO-1)对病理性新生血管的发生有调节作用,能通过紧密连接结构构成有效的生理屏障,抑制病理性新生血管的生长,但ZO-1对CNV是否发挥作用尚不清楚. 目的 探讨ZO-1在实验性CNV发生及发展中的作用及其机制.方法 将清洁级7～8周龄雄性BALB/c小鼠24只按随机数字表法随机分为碱烧伤15s组和碱烧伤40 s组,用NaOH滤纸贴附小鼠左眼中央角膜的方法构建CNV模型,于碱烧伤后2周在裂隙灯显微镜下观察并比较两组小鼠CNV生长情况,采用逆转录PCR(RT-PCR)法检测并比较两组小鼠角膜组织中ZO-1 mRNA的表达.另取鼠龄和性别相匹配同种小鼠54只随机分为3个组,均用NaOH滤纸贴附小鼠左眼中央角膜40 s的方法构建CNV模型,造模后分别用质量分数0.2％透明质酸钠(HA)配制的10 mg/L的ZO-1抗体和0.2％ HA配制的5 mg/L缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)重组蛋白点眼1周,每日3次.于实验后2周摘除大鼠左眼角膜,用免疫组织化学法检测CD31在CNV中的表达,鉴定CNV的形成数目和面积;采用RT-PCR法检测3个组小鼠角膜组织中血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达;采用流式细胞术检测碱烧伤角膜中巨噬细胞特异性标志物F4/80、中性粒细胞特异性标志物Ly-6G的阳性细胞比例,评价炎性细胞的浸润情况.结果 裂隙灯显微镜下可见造模后2周小鼠CNV达高峰;碱烧伤15 s组小鼠轻度、中度、重度CNV的眼数分布明显少于碱烧伤40 s组,差异有统计学意义(x2=6.032,P=O.049);碱烧伤15s组和碱烧伤40 s组小鼠角膜中ZO-1 mRNA的相对表达量分别为1.53±0.04和1.15±0.08,差异有统计学意义(t=4.157,P=0.014).免疫组织化学法检测显示,ZO-1抗体干预组和HIF-1α阳性对照组小鼠角膜组织中CD31阳性细胞数多于0.2％ HA组,差异均有统计学意义(t=-129.590、-226.820,均P=0.000),且染色面积明显大于0.2％ HA组,差异均有统计学意义(t=-5.310、-8.840,均P=0.000).ZO-1抗体干预组角膜组织内VEGFmRNA相对表达量为1.33±0.10,HIF-1α阳性对照组为1.46±0.11,均明显高于0.2％ HA组的0.93±0.06,差异均有统计学意义(t=-5.820、-7.284,均P=0.000).ZO-1抗体干预组和HIF-1α阳性对照组小鼠角膜组织中F4/80阳性细胞比例明显多于0.2％ HA组,差异均有统计学意义(t=-16.750、-17.480,均P=0.000);ZO-1抗体干预组和HIF-1α阳性对照组小鼠角膜组织中Ly-6G阳性细胞比例明显多于0.2％ HA组,差异均有统计学意义(t=-21.450、-27.680,均P=0.000). 结论 碱烧伤诱导的CNV中ZO-1表达明显下降,用抗ZO-1蛋白干预后CNV组织中VEGF mRNA表达量升高,炎性细胞浸润更明显,提示ZO-1对CNV影响的作用机制与VEGF的表达量有关.
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酸枣仁含药血清对大鼠血脑屏障紧密连接蛋白及血清生化指标的影响
目的:观察酸枣仁含药血清对大鼠血脑屏障紧密连结蛋白及血清生化指标的影响.方法:12只雄性大鼠随机平均分为对照组和酸枣仁组.酸枣仁组给予酸枣仁浸膏,3 mg· (kg·d)-1,连续灌胃3d;对照组给予等量的生理盐水.腹主动脉取血,分离血清;采用MDCK-MDR1细胞模型,培养3d至融合,体积分数10％含药血清孵育12 h后进行F-actin染色,在倒置荧光显微镜下观察酸枣仁含药血清对MDCK-MDR1细胞紧密连接蛋白的影响;并采用Mindray BS-220全自动生化分析仪对含药血清总蛋白、白蛋白、肌酸激酶、总胆红素、直接胆红素、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶和肌酐等生化指标进行分析.结果:F-actin染色结果显示:对照组细胞紧密连接蛋白F-actin形态完整,形成肌动蛋白丝呈环形分布于细胞周围,提示细胞紧密连接完好,酸枣仁含药血清处理后,F-actin荧光无明显变化,细胞周边肌动蛋白丝带无明显异常.血清生化分析结果显示:酸枣仁组与对照组比较,总蛋白、白蛋白、肌酸激酶、总胆红素、直接胆红素等指标差异统计学意义(P＞0.05);酸枣仁组天门冬氨酸氨基转移酶含量(162.2±3.04)U·L-1,高于正常对照组(146.0±4.9)U·L-1(P＜0.05);酸枣仁组碱性磷酸酶和肌酐含量较对照组显著下降(P＜0.001).结论:酸枣仁含药血清对于细胞紧密联接蛋白无显著影响,但可显著提高天门冬氨酸氨基转移酶,提示酸枣仁可能通过影响体内天门冬氨酸氨基转移酶的活性而发挥抗焦虑作用.
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紧密连接蛋白claudin-14基因5'调控区序列的生物信息学分析
目的 研究紧密连接蛋白claudin-14基因转录调控机制,并对潜在的转录因子结合位点进行分析.方法 利用局部序列比对基本检索工具(BLAST)比对获得claudin-14基因5'调控区序列；利用模序识别分析TATA-box、GC-box和CAAT-box；利用在线分析软件Neural Network Promoter Prediction和PROMOTER 2.0分析claudin-14基因5 '调控区序列中启动子；利用在线分析软件EMBOSS和CpG Island Searcher分析claudin-14基因5 '调控区序列中CpG岛位置；利用在线分析软件TFSEARCH分析claudin-14基因5'调控区序列中潜在的转录因子结合位点.结果 Claudin-14基因5 '调控区序列中存在1个CAAT-box、1个TATA-box和1个GC-box；claudin-14基因可能存在5个启动子位点；CpG岛位于62 bp区间(229 ～ 290 bp)、99 bp区间(417 ～ 515 bp)、76 bp区间(523～ 598 bp)、89 bp区间(836 ～924 bp)、69 bp区间(1 216～1 284bp)和194 bp区间(1235～1428bp).评分在85分以上时,该区域有432个潜在的转录因子结合位点；评分在90分以上时,该区域有156个潜在的转录因子结合位点；评分在95分以上时,该区域有66个潜在的转录因子结合位点；评分在100分时,该区域有24个潜在的转录因子结合位点.结论 Claudin-14基因可能存在不同的转录起始位点；claudin-14基因的转录受DNA甲基化和多种转录因子的调控.
关键词： 紧密连接蛋白 claudin-14 5'调控区 生物信息学 -
新生儿缺血缺氧性脑病水通道蛋白4和紧密连接蛋白 Occludin检测的临床意义
目的 探讨新生儿缺血缺氧性脑病(HIE)患儿血清中水通道蛋白4(Aquaporin 4)与紧密连接蛋白(Occludin)水平的变化情况及临床意义.方法 选取2016年1月至2017年10月在郑州儿童医院NICU治疗的92例HIE患儿,依据HIE病情严重程度分为轻度组(39例)、中度组(25例)、重度组(28例),以上3组列为观察组.同期正常分娩的35例新生儿为对照组.全自动微粒子化学发光免疫分析(ACCESS)检测新生儿血清中Aquaporin 4与Occludin的水平并采用t检验对结果进行对比分析.结果 HIE轻、中、重度组血清Aquaporin 4与Occludin水平均高于对照组(P<0.05),HIE中、重度组血清Aquaporin 4和Occludin水平均高于HIE轻度组(P<0.05),HIE重度组血清Aquaporin 4和Occludin水平均高于HIE中度组(P<0.05).观察组患儿血清Aquaporin 4和Occludin水平呈正相关(P<0.05).结论 HIE患儿血清Aquaporin 4和Occludin水平检测对HIE脑损伤程度和预后的判断以及治疗具有重要的指导作用.
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消渴通痹颗粒对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经ZO-1及claudins-5蛋白的影响
目的 观察消渴通痹颗粒对糖尿病大鼠坐骨神经缺血状态血管神经屏障功能的影响及紧密连接蛋白ZO-1及Claudins-5的表达.方法 以高脂饮食加链脲佐菌素注射结合股动脉结扎复制糖尿病大鼠坐骨神经缺血模型,以消渴通痹颗粒干预,6周后尾静脉注射Evans Blue观察血管神经屏障渗透状况;Western Blot法检测紧密连接蛋白claudins-5、ZO-1.结果 模型组大鼠坐骨神经Evans Blue外渗明显,紧密连接蛋白ZO-1、claudins-5表达减少;中药组血管神经屏障通透性改善,紧密连接蛋白ZO-1、claudins-5表达增加,尤以中剂量组为明显.结论 消渴通痹颗粒可改善糖尿病大鼠周围神经血管神经屏障功能,其机制与增加紧密连接蛋白ZO-1、claudins-5表达有关.
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不同剂型七味白术散对腹泻小鼠肠道菌群失调和肠粘膜紧密连接蛋白的影响
目的 研究七味白术散,七味白术滴剂和七味白术提取物对抗生素联合番泻叶致腹泻小鼠肠道菌群失调和肠粘膜连接蛋白的影响.方法 小鼠经头孢曲松钠和盐酸林可霉素加冰番泻叶灌胃造成菌群失调模型.将小鼠分正常组(NG)、模型组(M G)[造模成功后即为自然恢复组(ZH G)]、七味白术散煎剂组(QJ G)、七味白术滴剂组(QD G)、七味白术提取物组(QT G).治疗后,进行粪便含微生物种类鉴别及数量测定和肠粘膜紧密连接蛋白(Claiidin-1,Occludin和ZO-1)的荧光密度分析.结果 QD G和QT G中肠道中肠球菌、肠杆菌、乳杆菌和双歧杆菌四种菌群菌量均有一定幅度增加,与自然恢复相比,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);QJ G和ZH G菌量虽有增加,但不如QD G和QT G恢复迅速.药物治疗后,小肠绒毛尖端紧密连接蛋白Claudin-l,Occludin和ZO-1的荧光密度明显增高,绒毛尖端和紧密连接部破坏减轻,说明各药物能促进受损肠粘膜的修复.结论 七味白术散能够调节肠道菌群失调和促进肠粘膜损伤修复.
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浆液性和黏液性卵巢囊腺癌患者线粒体结构和紧密连接蛋白表达的差异比较?
目的：：探讨浆液性卵巢囊腺癌(SC)与黏液性卵巢囊腺癌(MC)细胞线粒体结构及紧密连接(TJ)蛋白occludin/ZO-1表达异常的差异及可能机制。方法：临床确诊30例卵巢囊腺癌患者中15例为 SC(SC 组),15例为MC(MC 组),另选3例子宫肌瘤患者进行对照(对照组)。采用电镜观察各组线粒体超微结构；采用体视学方法分析线粒体面数密度(Nm)、体密度(Vvm)和外膜面密度(Sv)；采用免疫组化方法检测各组卵巢上皮细胞 occludin/ZO-1蛋白的阳性单位(PU)及其强弱程度(用积分光密度值 IOD 表示)。结果：电镜下,对照组线粒体及内质网均未见异常；MC 组线粒体体积小、数量较多,线粒体 Nm、Vvm 和 Sv 较对照组明显降低(P <0.05)；SC 组线粒体体积大,脊断裂显著,线粒体 Nm、Vvm 和 Sv 较 MC 组显著升高(P <0.01)。免疫组化分析显示 MC 组 occludin 和ZO-1 PU 明显高于对照组(24.23±4.74 Vs 21.07±5.51、37.07±3.58 Vs 20.46±4.89,P 均<0.05),IOD 明显低于对照组(72.39±9.86 Vs 92.38±7.17、73.51±6.86 Vs 80.34±7.04,P 均<0.05)；SC 组 occludin 和 ZO-1 PU明显低于对照组(11.50±4.15 Vs 21.07±5.51、16.24±3.61 Vs 20.46±4.89,P 均<0.05),IOD 明显高于对照组(101.38±6.16 Vs 92.38±7.1、92.78±3.07 Vs 80.34±7.04,P 均<0.01)。结论：SC 及 MC 两种卵巢囊腺癌患者线粒体结构和体视学特征明显不同,可能与 TJ 蛋白的 occludin/ZO-1表达异常有关。
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腹膜间皮细胞在维持腹膜功能及透析效能中的作用机制
维护腹膜透析(periloneal dialys,PD)患者良好的腹膜功能和透析效能是保持长程透析、减低治疗退出率的关键因素.国内外的研究资料表明进入PD治疗前3年的生存率及生活质量优于血液透析,但随着透析时间的延长,腹膜的结构与功能将发生改变,进而导致透析效能下降与透析失超滤.腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cells,PMCs)除了维持腹膜结构的完整外,与之相关的一些功能蛋白水孔蛋白1(aquaporins-1,AQP-1)、紧密连接蛋白(tight junction,TJ)、葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter-1,GLUT-1)等,在水与溶质的转运中起着重要作用.
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肠道微生态对三硝基苯磺酸诱导大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白occludin保护作用的研究
目的 研究肠道微生态对三硝基苯磺酸(trinitro-benze-sulfonic acid,TNBS)诱导大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白的保护作用.方法 建立TNBS诱导大鼠结肠炎模型.实验分为正常组、模型组和双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、肠球菌三联活菌(金双歧)组.进行疾病活动指数(DAI)和组织学损伤评分.用ELISA法测定结肠组织TNF-α、IL-10和血清内毒素,采用免疫组织学染色检测紧密连接(tight junction,TJ)相关蛋白occludin的分布.结果 TNBS诱导大鼠结肠炎后,DAI和组织学损伤评分增高,结肠组织TNF-α水平升高,IL-10水平降低和血清内毒素水平升高,而经金双歧处理后,DAI和组织学损伤评分明显下降,结肠组织TNF-α水平降低,IL-10水平升高和血清内毒素水平降低,组间比较差异有显著性(P<0.05).TNBS诱导大鼠结肠炎后,TJ结构遭到破坏,TJ相关蛋白的表达亦减少,而金双歧处理后,可使TNBS引起的TJ结构受损减轻,相关蛋白的表达增多(P<0.05).结论 肠道微生态对TNBS诱导大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白具有明显的保护作用.
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肠道微生态对三硝基苯磺酸诱导大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白occludin保护作用的研究
目的 研究肠道微生态对三硝基苯磺酸(trinitro-benzen-sulfonic acid,TNBS)诱导大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白的保护作用.方法 建立TNBS诱导大鼠结肠炎模型.实验分为正常组、模型组和双歧杆菌嗜酸乳杆菌肠球菌三联活菌(金双歧)组.进行疾病活动指数(DAI)和组织学损伤评分,用ELISA法测定结肠组织TNF-α、IL-10和血清内毒素水平,采用免疫组织化学染色检测紧密连接(tight junction,TJ)相关蛋白occludin的分布.结果 TNBS诱导大鼠结肠炎后,DAI和组织学损伤评分增高,结肠组织TNF-α水平升高,IL-10水平降低和血清内毒水平升高,而经双歧杆菌嗜酸乳杆菌肠球菌三联活菌处理后,DAI和组织学损伤评分有明显下降,结肠组织TNF-α水平降低,IL-10水平升高和血清内毒素水平降低,组间比较差异有显著性(P<0.05).TNBS诱导大鼠结肠炎后,TJ结构遭到破坏,TJ相关蛋白的表达亦减少,而双歧杆菌嗜酸乳杆菌肠球菌三联活菌(金双歧)处理后可使TNBS引起的TJ结构受损减轻,相关蛋白的表达增多(P<0.05).结论 肠道微生态对TNBS诱导大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞TJ蛋白具有明显的保护作用,其可能的机制是通过纠正肠道微生态,上调肠上皮细胞TJ蛋白occludin的表达,降低结肠组织TNF-α水平,提高IL-10水平,从而抑制内毒素通过紧密连接进入体循环.
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紧密连接蛋白抗体抑制丙型肝炎病毒传播的体外研究
目的:研究紧密连接蛋白(claudin-1)抗体在体外阻断丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)传播的抑制效果.方法:应用HCV传播试验检测-claudin1抗体及丙型肝炎(HC)患者血清对HCV传播的抑制效果.结果:成功建立了HCV传播检测系统,结果表明,HCV感染患者血清和-claudin1抗体都可有效阻断HCV细胞外病毒传播;HC患者血清在体外不能有效抑制HCV细胞间传播,而-claudin1抗体可有效阻断HCV细胞间传播.结论:与其他研究者所发现相一致[1].HCV可以逃避来自患者血清中和抗体的中和效应,而-claudin1抗体可有效阻断HCV传播,为HCV防治提供了新的策略.
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上皮细胞黏附分子和紧密连接蛋白在甲状腺癌组织的表达及其临床意义
目的 检测上皮细胞黏附分子(EpCAM)和紧密连接蛋白-7(Claudin-7)在甲状腺癌细胞和组织中的表达,探讨其临床意义.方法 取乳头状甲状腺癌细胞株TPC-1、滤泡状甲状腺癌细胞株FTC-133、未分化的甲状腺癌细胞株FRO和ACT-1接种,并培养24h.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测EpCAM和Claudin-7在甲状腺癌细胞株中的mRNA水平,Western blot检测EpCAM和Claudin-7在甲状腺癌细胞株中蛋白表达水平,荧光显微镜下观察EpCAM和Claudin-7在甲状腺癌细胞株中的表达.免疫组织化学法检测EpCAM和Claudin-7在甲状腺癌组织中的表达.结果 EpCAM和Claudin-7在FRO和ACT-1细胞株中mRNA和蛋白水平均呈高表达(分别为18.7%、29.6%和81.5%、70.0%),而在TPC-1和FTC-133细胞中几乎不表达.荧光显微镜观察结果同RT-PCR和Western blot一致.免疫组织化学检测结果显示EpCAM和Claudin-7在其他类型的甲状腺癌中的阳性表达率分别为2.6%和5.2%,在未分化的甲状腺癌组织中的阳性表达率为64.9%和81.8%(P=0.000).结论 EpCAM在甲状腺未分化癌组织中高表达,而Claudin-7在甲状腺未分化癌组织中高表达,表明EpCAM和Claudin-7与甲状腺癌的恶性程度密切相关,对甲状腺癌的发生发展具有促进作用.
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肾上腺髓质素对小鼠肠缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨肾上腺髓质素(AM)在肠缺血再灌注损伤(I/R)中对肠黏膜屏障功能的影响及机制.方法 将21只C57小鼠随机分为3组:(1)Sham组;(2) I/R组;(3) I/R+ AM组.采用夹闭肠系膜上动脉30 min、再灌注6h作为制备肠缺血再灌注损伤模型的方法.用苏木素-伊红(HE)染色的方法观察肠黏膜的损伤;测定小肠肠黏膜的跨上皮电阻(TER);检测紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-1蛋白水平的变化以及信号分子727位丝氨酸磷酸化的信号转导与转录激活子1[p-STAT1(S727)]在各组中的激活.结果 HE染色结果显示肠I/R引起部分小肠绒毛上皮脱落,经AM预处理使得小肠绒毛重新排列整齐,显著缓解肠I/R所致的形态结构破坏.肠I/R引起ZO-1和Claudin-1的蛋白表达水平较Sham组分别下降38.54％及42.98％,并引起TER降低44.57％;经AM预处理使得ZO-1和Claudin-1的蛋白的表达较I/R组显著升高(分别为31.33％、33.92％),同时TER值较肠I/R组升高25.97％,并且使得肠I/R所致的p-STAT1(S727)激活被显著抑制(较I/R组降低56.52％).结论 AM对小鼠肠I/R损伤后肠黏膜屏障具有较好的保护作用,并且可以调控肠道紧密连接蛋白的表达,进而影响肠道通透性的改变,其机制可能与抑制p-STAT1(S727)的激活有关.
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缺氧条件下血红素氧合酶-1对肠黏膜屏障的保护作用
目的 观察缺氧条件下血红素氧合酶-1(HO-1)对肠黏膜屏障功能的影响.方法 HO-1真核过表达载体转染Caeo-2细胞,分为常氧组、缺氧组、转染组、质粒对照组.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot方法检测肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin和HO-1的mRNA和蛋白的表达水平变化.免疫荧光法观察Occludin在细胞内的分布.结果 与常氧组比较,缺氧组Occludin的mRNA(0.43±0.03比1.0,P＜0.01)、蛋白(0.62±0.07比1.0,P＜0.01)表达水平均明显降低;与缺氧组比较,转染组Occludin的mRNA(0.65 ±0.04比0.43 ±0.03,P＜0.05)、蛋白(0.89±0.06比0.62 ±0.07,P＜0.05)表达水平明显升高;缺氧组与质粒对照组Occludin的mRNA(0.43±0.03比0.40±0.05,P＞0.05)、蛋白(0.62 ±0.07比0.61 ±0.04,P＞0.05)表达无明显变化.免疫荧光染色见Occludin沿细胞膜分布,呈线性荧光,缺氧引起其形态破坏,转染HO-1后破坏减轻.结论 缺氧条件下,HO-1可增加肠道紧密连接蛋白Occludin的表达水平,减轻缺氧对肠黏膜屏障的损伤.
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不同营养方式对梗阻性黄疸大鼠肠紧密连接蛋白的影响
目的 观察肠内营养(EN)及肠外营养(PN)对阻塞性黄疸(OJ)大鼠小肠紧密连接蛋白的影响.方法 将50只Wistar大鼠随机分5组,EN组和PN组给予等热量等氮量营养.7 d后采用免疫组织化学和Western blot法检测各组末端回肠黏膜的闭锁小带-1(ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)与肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达,并对Western blot图像进行定量分析.结果 正常回肠黏膜ZO-1和Occludin沿绒毛下方均匀连续分布,MLCK主要分布在细胞质内.阻黄时ZO-1、Occludin和MLCK分布散乱,染色稀疏.PN组的ZO-1、Occludin和MLCK的强阳性染色数由阻黄组的2、2、1例升至4、5、3例(P均>0.05),而EN组的强阳性染色数分别上升为7、6、5例(P均<0.05).通过对Western blot显影图像进行定量分析,EN组和PN组的ZO-1的灰度值较阻塞性黄疸组明显上升(均P<0.05);Occludin和MLCK的灰度值在EN组上升(P<0.05),PN组没有变化.结论 梗阻性黄疸时大鼠小肠黏膜上皮ZO-1、Occludin和MLCK分布紊乱,表达下降.肠内、外营养均能够恢复受损的紧密连接蛋白,肠内营养的作用更强.
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紧密连接蛋白Claudin-1在大肠癌及大肠腺瘤组织的表达
目的 检测紧密连接蛋白Claudin-1在正常大肠黏膜、不同病理分型的大肠腺瘤和不同分期的大肠癌组织中的表达,探讨其在大肠癌变过程中不同阶段表达的意义.方法 收集内镜下切除的不同病理分型的大肠腺瘤标本共80例,其中包括管状腺瘤30例、管状绒毛状腺瘤30例、绒毛状腺瘤20例;以及普通外科手术切除的大肠癌组织60例和癌旁组织40例,应用免疫组织化学法检测组织中Claudin-1蛋白的表达.结果 Claudin-1在正常大肠组织、大肠腺瘤和大肠癌组织中的表达阳性率分别为20.0％、46.2％、81.7％,差异有统计学意义(P =0.000).其表达从大肠腺瘤开始显著升高,到大肠癌逐渐增强.并且在大肠癌组织中的表达与Dukes分期、淋巴结转移有关.在大肠管状腺瘤、混合性腺瘤、绒毛状腺瘤中的表达阳性率分别为33.3％、43.3％、70.0％,在绒毛状腺瘤中的表达水平高于管状腺瘤和混合性腺瘤,差异有统计学意义(P =0.036).结论 Claudin-1的表达促进了肿瘤的发生、发展.其表达量的改变提示早期大肠癌的发生,和(或)大肠腺瘤的癌变风险.
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紧密连接蛋白Claudin-7在大肠癌及大肠腺瘤组织中的表达
目的 检测紧密连接蛋白Claudin-7在正常大肠黏膜、不同病理分型的大肠腺瘤和不同分期的大肠癌组织中的表达,探讨其在大肠癌变过程中不同阶段表达的意义.方法 收集内镜下切除的不同病理分型的大肠腺瘤共80例,其中包括管状腺瘤30例,管状绒毛状腺瘤30例,绒毛状腺瘤20例;以及普通外科手术切除的大肠癌组织60例和癌旁正常组织40例,应用免疫组织化学方法检测组织中Claudin-7蛋白的表达.结果 Claudin-7在正常大肠组织中100%的表达,腺瘤和大肠癌中Claudin-7的阳性表达率明显降低,大肠癌组织中阳性表达率低(46.7%),三者阳性表达率比较差异有统计学意义(P=0.000).其在大肠癌中表达与肿瘤的分期、组织分化程度、淋巴结转移明显相关.在大肠管状腺瘤、混合性腺瘤、绒毛状腺瘤中的表达阳性率分别为83.3%、63.3%、50.0%,差异有统计学意义(P=0.040).结论 Claudin-7的表达对肿瘤的发生、发展起抑制作用,并且在大肠癌发生的早期出现表达的异常.
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紧密连接蛋白闭锁蛋白在大肠癌及大肠腺瘤组织的表达
目的 检测紧密连接蛋白闭锁蛋白(Occludin)在正常大肠黏膜、不同病理分型的大肠腺瘤和不同分期的大肠癌组织的表达,探讨其在大肠癌变过程中不同阶段表达的意义.方法 收集内镜下切除的不同病理分型的大肠腺瘤共80例,其中包括管状腺瘤30例,管状绒毛状腺瘤30例,绒毛状腺瘤20例;以及普通外科手术切除的大肠癌组织60例和癌旁正常组织40例,应用免疫组织化学方法检测组织中Occludin蛋白的表达.结果 Occludin在正常大肠黏膜组、大肠腺瘤组、大肠癌组中表达差异有统计学意义(P=0.003),其阳性表达率分别为95.0％、88.7％、71.7％.并且在大肠癌组织中的表达与组织分化程度有关.在管状腺瘤、混合性腺瘤、绒毛状腺瘤中其阳性表达率分别为90.0％、86.7％、90.0％,差异无统计学意义(P=0.901).结论 Occludin在大肠癌组织中表达降低,其表达抑制肿瘤的发生、发展.
