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埃他卡林对急性低压缺氧所致大鼠脑水肿的预防作用
目的 探讨盐酸埃他卡林(iptakalim hydrochloride, Ipt)对模拟海拔8 000 m急性低压缺氧所致大鼠脑水肿的影响及其机理. 方法 成年Wistar大鼠随机分为常氧对照组、急性低压缺氧组和Ipt 3个预防给药组[Ipt 2、4和8 mg/(kg·d)].采用干湿重法分别测定各组的脑含水量;用原子吸收分光光度计检测皮层Na+、K+、Ca2+ 和Mg2+ 含量;无机磷标定法判断脑皮质Na+/K+-ATPase、Ca2+-ATPase和Mg2+-ATPase活性及用RT-PCR测定紧密连接蛋白occludin和水通道蛋白-4(aquaporin-4, AQP4)基因表达. 结果 大鼠在模拟海拔8 000 m高原,经受缺氧8 h,皮层含水量明显增高;皮层电解质发生改变,Na+ 和Ca2+ 含量增高,K+ 和Mg2+无明显变化;Na+/K+-ATPase、Ca2+-ATPase和Mg2+-ATPase活性显著降低;同时紧密连接蛋白occludin和AQP4的基因表达降低.预防给予Ipt上述改变明显好转. 结论 Ipt能减轻急性低压缺氧所致脑水肿,可能与对含水量、皮层电解质浓度、膜上ATP酶活性、及膜上水通道蛋白和紧密连接蛋白基因表达的影响有关.
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紧密连接蛋白在人宫颈癌组织中的表达及其临床意义
目的 分析紧密连接蛋白(Occludin)在人宫颈癌中的表达及其临床意义.方法 选取40例宫颈癌患者为研究对象,用免疫印迹法检测Occludin蛋白在40对配对宫颈癌组织和正常组织中的表达情况,分析其蛋白表达与临床病理参数的相关性.结果 在正常组织和癌组织中Occludin蛋白的低表达率分别为62.50％(25例/40例)和77.50％(31例/40例),高表达率分别为37.50％(15例/40例)和22.50％(9例/40例),Occludin蛋白的表达量分别为(0.39±0.34)和(0.11±0.11),差异均有统计学意义(均P＜0.05).Occludin蛋白表达水平与患者年龄、肿瘤大小、FIGO分期、病理分级、淋巴结转移等均无明显相关性(均P＞0.05).结论 宫颈癌组织中Occludin蛋白呈异常低表达,可能参与了宫颈癌的发生与发展病理过程,但与患者临床病理特征无关.
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Claudin-7——潜在的抑癌基因
目的 分析Claudin-7基因敲除后小鼠表型及Claudin-7潜在的抑癌功能.方法 将小鼠分为2组,Claudin-7基因敲除组及野生型组,每组各15只,分别采用PCR鉴定小鼠基因型,HE染色观察Claudin-7基因敲除后各脏器的组织病理学变化；免疫共沉淀(CO-IP)检测Claudin-7与intergrin α2相互作用；蛋白印迹技术检测Claudin-7在小鼠不同脏器及C-fos、C-jun、Cox-2蛋白在小鼠肠道中表达,同时检测Claudin-7在人不同分化大肠癌及肝转移组织中的表达情况,分正常人大肠组织、高分化大肠癌组织、低分化大肠癌组织及大肠癌肝转移组织4组,每组20例患者.结果 Claudin-7基因敲除小鼠自出生后第4d左右停止生长,7d左右死亡；HE染色以肠道病理变化为显著,表现为黏膜上皮细胞严重脱落、空泡形成、并有炎性反应细胞浸润,其他脏器病理变化显示除有轻微的中性粒细胞浸润外未见明显的组织损伤；Claudin-7在肠道、胃、肺、膀胱、皮肤、胸腺、肾脏脏器中均有表达,小肠和大肠广泛强表达；Claudin-7和intergrin α2免疫共沉淀,C-fos、C-jun及Cox-2蛋白表达在Claudin-7基因敲除小鼠肠道中显著高表达(P ＜0.001)；Claudin-7蛋白表达随大肠癌的分化降低而降低,在大肠癌肝转移组织中表达显著降低(P＜0.001),差异有统计学意义.结论 Claudin-7基因敲除可诱导严重的肠道炎性反应,Claudin-7可能为潜在的抑癌基因.
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视网膜移植术后紧密连接蛋白表达的研究
目的 探讨视网膜色素上皮移植术后供体细胞与宿主细胞间紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的表达情况.方法 采用CFDA-SE(10 μmol/L)标记供体视网膜色素上皮细胞,通过玻璃体显微手术将细胞悬液植入同种异体青紫蓝兔视网膜下腔,移植术后应用眼底彩色照相机、光学相干断层扫描仪(optical coherence tomography,OCT)、荧光素眼底血管造影术(fluorescence fundusangiography,FFA)观察记录移植术后眼底情况,并分别在不同时间点处死实验动物,在荧光显微镜下观察标记细胞的位置并作紧密连接的结构蛋白ZO-1和occludin的免疫组化分析.结果 细胞在接种后2h开始贴壁,ld后光镜下可见黑色圆形贴壁细胞.部分贴壁的细胞胞浆向外延伸,细胞内色素颗粒仍聚集于胞核周围,充盈整个胞浆.传2～3代后细胞中色素颗粒逐渐减少、脱失.荧光显微镜下观察,抗细胞角蛋白染色阳性率几乎达100％,证明培养的细胞是RPECs.免疫组化结果显示,在受体视网膜组织中,occludin及ZO-1阳性染色定位于RPECs的细胞膜和(或)靠近胞膜的细胞质内,接近顶部1/3处,呈棕黄色的颗粒状、点状结构,与紧密连接位于上皮细胞侧面顶端的分布一致.移植后30、60d时S ZO-1/S (F=224.29,P＜ 0.05)、S occludin/S (F=273.90,P＜ 0.05)与正常眼比较,差异有统计学意义.结论 视网膜色素上皮移植术后可嵌插于宿主视网膜色素上皮之间并形成新的血视网膜外屏障.
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黄连提取物小檗碱对溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜机械屏障的影响
目的 观察黄连提取物小檗碱(BBR)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠黏膜机械屏障的干预作用,探讨BBR治疗UC的可能机制.方法 BALB/c小鼠随机分为模型对照组、BBR低、高剂量组、阳性对照组和空白对照组.采用右旋葡聚糖硫酸复制UC模型,灌胃给药7d,评估疾病活动指数(DAI),结肠组织切片、HE染色并观察组织的病理学变化;免疫组化SP法检测紧密连接蛋白claudin-1、occludin和ZO-1的表达水平;Western Blot法测定肠道干细胞(ISCs)标志物LGR-5和TERT的含量.结果 与治疗前比较,药物治疗后小鼠的DAI评分均下降(P＜0.01),结肠组织病理表现有不同程度的改善;与治疗后同期模型对照组比较,高剂量BBR组的DAI评分显著下降(P＜0.01),结肠组织中claudin-1、occludin和ZO-1的水平均明显升高(P＜0.01).BBR低、高剂量组结肠组织中LGR-5和TERT的含量均升高(P＜0.05).结论 BBR通过抑制ISCs和紧密连接蛋白的破坏,维持肠黏膜机械屏障的稳态,从而有效抑制UC小鼠的结肠炎症,对UC的发生发展起到保护作用.
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紧密连接蛋白claudin 1、3、4与肺爆震伤致大鼠肺水肿的关系研究
目的 探讨大鼠肺泡上皮细胞紧密连接蛋白claudin 1、3、4与肺爆震伤致肺水肿的关系.方法 应用爆炸装置制备大鼠肺爆震伤模型,伤后4h留取标本,通过测定支气管肺泡灌洗液中蛋白含量及肺组织湿/干重比值评价肺水肿,电镜下观察肺泡上皮对镧的扩散,肺泡上皮基膜染色,通过免疫组织化学技术及计算机图像分析评价肺组织中claudin 1、3、4蛋白的表达.结果 肺爆震伤发生4h后肺水肿形成,肺泡上皮间基膜断裂,镧颗粒大量进入肺泡上皮细胞间,肺组织中claudin 1、3、4蛋白表达相较于对照组显著降低(P＜0.05).结论 肺爆震伤发生后,紧密连接蛋白claudin 1、3、4表达下降,紧密连接受损,肺泡上皮细胞屏障被破坏,从而导致肺水肿的形成.
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紧密连接蛋白与妇科肿瘤的相关研究
紧密连接蛋白作是细胞之间黏附结构中重要的一种,随着对分子成分和结构的不断探索,发现其在多种恶性肿瘤中表达异常,其基本功能是屏障和围栏功能,保持细胞极性,并与细胞增殖和肿瘤抑制有关.本文对紧密连接的基本结构、功能及在妇科肿瘤中的相关研究进行综述.
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青葙子提取物对小鼠糖尿病视网膜病血-视网膜屏障的保护作用及机制
目的 观察青葙子提取物(CAE)对链脲佐菌素(STZ)诱导的C57小鼠糖尿病视网膜病(DR)血-视网膜屏障(BRB)的改善作用,并进一步研究其可能机制.方法 采用STZ诱导C57小鼠建立DR模型,然后给予DR小鼠CAE 100 mg/kg干预;通过检测视网膜组织白蛋白(Albumin)渗漏和血管内皮生长因子(VEGF)表达观察CAE对DR小鼠BRB破坏的影响;采用Westem blot检测视网膜组织Claudin-1、Claudin-5、Occludin、ZO-1及p-NFκB、IκB、p-IKK的蛋白表达水平;采用ELISA检测血清中TNF-α、IL-1β、IL-6含量.结果 CAE能够逆转DR小鼠视网膜组织Albumin渗漏增加和VEGF表达的升高(P＜ 0.01);CAE能够上调DR小鼠视网膜组织降低的紧密连接蛋白Claudin-1、Claudin-5、Occludin表达(P＜0.05或P＜ 0.01),同时能够抑制NFκB信号通路的激活(P＜0.01),并下调DR小鼠血清中增加的IL-1β、IL-6、TNF-α含量(P＜0.01).结论 CAE具有保护STZ诱导DR小鼠BRB的活性,其机制为保护DR中减少的紧密连接蛋白表达,同时抑制了DR中炎性信号通路的激活.
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右美托咪定对脓毒血症大鼠肾功能及紧密连接蛋白表达的影响
目的：探讨右美托咪定对脓毒血症大鼠肾功能及紧密连接蛋白表达的影响。方法 SD大鼠30只，随机分为右美托咪定处理组（ Dex组）、脓毒血症模型组（ M组）、生理盐水对照组（ C组），每组10只。 Dex组大鼠静脉注射脂多糖（ LPS）5 mg／kg，之后泵注Dex 7μg／kg，15 min后调整剂量为5μg／kg· h，持续泵注30 min；模型组按同样方法给予LPS后泵注生理盐水；C组始终采用上述方法给予生理盐水。24 h后取血液分离血浆，多功能生化仪检测肌酐（ Scr）和尿素氮（ BUN）含量；ELISA检测IL-1β和TNF-α含量；Western blot检测肾组织中紧密连接蛋白ZO-1和occludin的表达变化。结果与C组相比，模型组损伤较重，可见大量炎性细胞浸润，有肾小球肾炎表现，而Dex组未见明显的炎症细胞，细胞异常较少，与模型组相比，损伤减轻。肾功能及炎性因子检测结果显示，与C组比较，各组血浆中Scr、BUN、IL-1β和TNF-α含量均显著升高（P＜0.05），ZO-1和occludin蛋白表达水平均下降（P＜0.05）；与模型组比较，Dex组各项指标均明显降低（P＜0.05），ZO-1和occludin蛋白表达水平均升高（P ＜0.05）。结论右美托咪定可改善脓毒血症所致的急性肾损伤的肾功能，抑制炎症反应，提升紧密连接蛋白，对肾脏有一定的保护作用。
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缺血再灌注后血脑屏障通透性改变的研究进展
脑缺血再灌注是指缺血脑组织恢复血液灌注后,脑组织损伤反而加重,表现为脑组织结构和功能的改变.血脑屏障能控制血脑两侧的物质转运,从而保证中枢神经组织内环境的相对稳定,在脑缺血再灌注时也起到了至关重要的作用.本文对近几年来脑缺血再灌注的研究做一综述,旨在总结这些因素对血脑屏障产生作用的同时对临床的治疗提供一些理论上的依据.
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内毒素脂多糖对体外血脑屏障模型通透性的影响及其机制研究
感染性脑损伤时血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性增加在血管源性脑水肿发生发展中起重要作用,因此,阐明感染性脑损伤时BBB通透性改变及其调控机制具有十分重要的临床意义.本研究利用同种属的星型胶质细胞(astrocytes,AS)与脑微血管内皮细胞(bain microvascular endothelial cell,BMEC)共同培养,建立体外BBB模型,探讨BBB紧密连接蛋白和细胞骨架肌动蛋白(actin)在内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BBB通透性增高中的变化及其与Rho/Rho激酶细胞信号转导通路的关系.对这一问题的深入探讨,有助于进一步阐明感染性脑损伤的发病机制,为其临床防治提供新的思路.
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褐藻糖胶对乳腺肿瘤大鼠肠道屏障损伤的保护作用
目的 探讨褐藻糖胶(fucoidan)对二甲基苯蒽(7,12-dimethylbenz (a) anthracene,DMBA)诱发的乳腺肿瘤大鼠肠道屏障损伤的保护作用.方法 60只雌性SD大鼠按体质量随机分为正常对照组(CN)、模型组(M)、低(F1)和高剂量(F2)褐藻糖胶干预组.M组及F1、F2组,大鼠右侧臀部皮下一次性注射100 mg/kg DMBA建立乳腺癌模型,观察各组大鼠乳腺癌发生率及抑瘤率;HE染色观察大鼠空肠粘膜病理学改变;酶联免疫吸附实验(EHSA)检测血浆中D-乳酸(D-LA)和二胺氧化酶(DAO)水平;Western Blot法检测大鼠肠道紧密连接蛋白occludin及ZO-1表达.结果 与模型组比较,F1、F2组大鼠肿瘤潜伏期均延长,肿瘤发生率和平均瘤重量降低(均p＜0.05);抑瘤率分别达到34.5％和49.2％;M组大鼠肠壁受损,绒毛裸露且结构丧失,绒毛高度和隐窝深度降低,经褐藻糖胶干预后,小肠绒毛逐渐恢复栅栏样结构,其绒毛结构接近于CN组;与M组比较,F2组D-LA的浓度显著降低(P＜0.05),F1、F2组DAO的浓度均显著降低(均P＜0.05),F1、F2组occludin及ZO-1的表达均显著升高(P＜0.05).结论 褐藻糖胶对大鼠乳腺肿瘤生长具有一定抑制作用,其作用机制可能修复乳腺癌大鼠受损的肠黏膜屏障相关.
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中医药对肠道紧密连接蛋白调节作用的研究进展
肠道机械屏障是防止肠腔中有毒物质入侵机体的重要屏障结构,而紧密连接蛋白是其主要结构基础,主要包括claudin-1、occludin及ZO-1蛋白等.多种消化系统疾病,包括溃疡性结肠炎、急性胰腺炎、肠易激综合症、功能性消化不良等疾病的发生发展均有肠道紧密连接蛋白及机械屏障相关.就近年来研究发现中医药对肠道紧密连接蛋白具有一定调控作用进行综述.
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左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障紧密连接蛋白、Ⅳ型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响
目的 研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症(DD)大鼠海马血脑屏障紧密连接蛋白(ZO-1)、Ⅳ型胶原蛋白(CoⅣ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法 采用ig高脂乳剂、尾iv链脲佐菌素(STZ,38 mg/kg)、28d慢性应激联合的方法建立DD大鼠模型并随机分为5组:模型组,阳性药(盐酸二甲双胍0.18 g/kg+百忧解1.8 mg/kg)组,左归降糖解郁方高、中、低剂量(32.82、16.41、8.20 g/kg)组,并以正常大鼠为对照组,每组10只.给药4周后,电镜下观察血脑屏障的形态变化,免疫组化法检测海马血脑屏障CoⅣ、ZO-1、α-SMA的表达情况.结果 与对照组比较,模型组大鼠ZO-1、α-SMA的表达下降,CoⅣ的表达升高,差异显著(P＜0.05);与模型组比较,阳性药组和左归降糖解郁方高剂量组大鼠ZO-1、α-SMA的表达升高,CoⅣ的表达下降,差异显著(P＜0.05、0.01).结论 左归降糖解郁方可以保护DD大鼠血脑屏障的损伤,其保护机制可能与升高血脑屏障ZO-1和α-SMA的表达,降低CoⅣ的表达有关.
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桃红四物汤抗癫痫作用机制研究
目的 研究桃红四物汤的抗癫痫作用机制.方法 建立戊四氮(PTZ)点燃大鼠癫痫模型,随机分为对照组、模型组和桃红四物汤低、中、高剂量组.桃红四物汤剂量分别为0.7、1.4、2.1g/kg,给药体积为10 mL/kg,每日ig给药1次,连续给药2周.给药第0、14天观察大鼠癫痫发作程度.给药结束处死大鼠,伊文思蓝(EB)法测定血脑屏障通透性,Westernblotting法和免疫荧光法测定脑组织及不同部位3种紧密连接蛋白:闭锁连接蛋白-1(ZO-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Occludin蛋白表达水平.结果 高、中、低剂量桃红四物汤可显著降低大鼠癫痫发作程度和血脑屏障通透性(P＜0.01).低剂量桃红四物汤可显著升高大鼠脑组织皮层、海马及纹状体的MMP-9表达水平(P＜0.05);中、高剂量桃红四物汤可显著升高大鼠脑组织ZO-1、MMP-9、Occludin表达水平(P＜0.05、0.01).结论 桃红四物汤可显著减轻癫痫发作程度,作用机制可能与降低血脑屏障通透性及升高脑组织紧密连接蛋白表达水平有关.
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富氢液对脂多糖刺激离体肠上皮 屏障功能障碍的影响
目的：观察富氢液对脂多糖（LPS）刺激人肠上皮细胞（Caco2）单层模型细胞通透性的影响，探讨其对肠屏障功能障碍的保护作用机制。方法人结肠腺癌细胞株Caco2培养于含20%胎牛血清的DMEM培养基中，传代至第28～35代的细胞用于实验。采用随机数字表法将细胞分为空白组、富氢液组、LPS组和LPS+富氢液组。空白组和LPS组用正常培养基培养，富氢液组和LPS+富氢液组用含饱和氢气培养基培养；LPS组和LPS+富氢液组分别加入1g/L的LPS孵育，空白组和富氢液组加入等量生理盐水。建立Caco2细胞单层模型模拟离体肠上皮屏障，孵育0、3、6、12、24、48h测定其跨上皮细胞电阻（TEER）值来反映肠屏障通透性；采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法和乳酸脱氢酶（LDH）法分别测定细胞活性和损伤情况；孵育6、12、24h采用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）测定细胞紧密连接蛋白claudin-1与occludin的蛋白表达；孵育24h采用免疫荧光法观察claudin-1与occludin蛋白的分布。结果空白组与富氢液组各指标比较差异均无统计学意义。LPS组和LPS+富氢液组细胞孵育6h起TEER值即较空白组明显降低，且呈时间依赖性；而LPS+富氢液组细胞孵育6h起TEER值明显高于LPS组。与空白组相比，LPS组细胞活性明显降低〔（67.2±7.9）%比（100.0±0.0）%，P＜0.05〕，细胞损伤明显〔LDH释放率：（38.5±2.1）%比（1.2±0.3）%， P＜0.05〕，孵育6、12、24h时claudin-1和occludin蛋白表达明显下调〔claudin-1（灰度值）：0.351±0.079、0.272±0.075、0.190±0.049比0.518±0.030，occludin（灰度值）：0.416±0.044、0.290±0.062、0.226±0.019比0.602±0.038，均P＜0.05〕，孵育24h时细胞claudin-1和occludin蛋白分布紊乱且连续性中断。与LPS组相比，LPS+富氢液组细胞活性部分恢复〔（88.8±7.4）%比（67.2±7.9）%，P＜0.05〕，细胞损伤减轻〔LDH释放率：（16.4±4.3）%比（38.5±2.1）%，P＜0.05〕，24h时claudin-1和occludin蛋白表达明显上调〔claudin-1（灰度值）：0.428±0.046比0.190±0.049，occludin（灰度值）：0.466±0.071比0.226±0.019，均P＜0.05〕，且分布形态的连续性与完整性部分恢复。结论富氢液能够有效改善LPS所致肠上皮细胞屏障功能障碍，其机制可能与调节肠上皮细胞活性、减轻细胞损伤以及改善紧密连接蛋白claudin-1、occludin的表达与分布有关。
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中药火把花根对油酸致急性肺损伤大鼠 气道紧密连接蛋白表达的影响
目的：观察中药火把花根对急性肺损伤（ALI）大鼠支气管上皮紧密连接蛋白claudin-2和ZO-1表达的影响，探讨火把花根对ALI的保护机制。方法将24只健康成年清洁级雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、ALI组、火把花根预处理组，每组8只。经尾静脉注射油酸0.04mL/kg复制大鼠ALI模型，对照组注射等量生理盐水（NS）；火把花根预处理组于制模前10d连续灌胃药物600mg·kg-1·d-1（2mL），对照组和ALI组灌胃等量NS。制模后4h取腹主动脉血、收集支气管肺泡灌洗液（BALF），测定血浆及BALF中蛋白含量，计算肺通透性指数（LPI）；处死大鼠取肺组织，测定肺湿/干质量（W/D）比值，苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察肺组织病理学变化，并进行肺损伤评分（LIS）；应用免疫组化法观察支气管黏膜上皮claudin-2和ZO-1的阳性表达及定位；应用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测支气管黏膜上皮claudin-2和ZO-1的蛋白表达。结果镜下显示：与对照组比较，ALI组大鼠肺组织损伤明显，细胞水肿，细胞间连接结构紊乱，LIS、W/D及LPI均显著升高〔LIS（分）：3.81±0.42比0.40±0.08，W/D：7.68±0.64比4.44±0.39，LPI：0.89±0.15比0.38±0.05，均P＜0.01〕；claudin-2和ZO-1主要表达在支气管上皮细胞，且ALI组表达强度较对照组明显减弱；WesternBlot显示，ALI组claudin-2和ZO-1的蛋白表达较对照组显著下调〔claudin-2蛋白（灰度值）：0.43±0.31比2.16±1.33，ZO-1蛋白（灰度值）：1.25±0.41比2.82±0.76，均P＜0.01〕。与ALI组比较，火把花根预处理可明显改善ALI大鼠肺损伤程度〔LIS（分）：1.22±0.39比3.81±0.42，W/D：4.62±0.84比7.68±0.64， LPI：0.46±0.07比0.89±0.15，均P＜0.01〕，且claudin-2和ZO-1的蛋白表达均明显上调〔claudin-2蛋白（灰度值）：2.98±0.91比0.43±0.31，ZO-1蛋白（灰度值）：2.35±0.51比1.25±0.41，均P＜0.01〕。结论火把花根可能通过上调支气管上皮细胞紧密连接蛋白claudin-2及ZO-1的表达，以减轻ALI时气道上皮损伤，从而起到肺脏的保护性作用。
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第26例——急性肾功能衰竭及血液净化治疗（Internet网上专题讨论）
Matthay R A医生：美国威斯康星州医学院教授（EllisD@lij.edu） 急性肾功能衰竭（ARF）在所有住院患者中发生率为5%，许多研究中ARF的病死率仍然高于50%。近30年中，在改变缺血性ARF进程方面，除支持治疗外，能改善ARF预后的其它治疗进展甚少。ARF研究的终目标是建立合理的治疗方法，预防和减少肾功能不全的发生，降低病死率。但ARF的病理生理变化很复杂，有多种细胞和血管机制导致器官功能障碍。我们曾对ARF中肾小管上皮细胞损伤问题进行了初步探讨，缺血损伤时肾小管细胞发生损伤和死亡是肾小球滤过率（GFR）改变的重要原因，坏死细胞内容物和细胞碎屑等在肾小管腔内形成管型，造成阻塞，使肾小管内压力升高及单个肾单位GFR下降，紧密连接松懈，基底膜剥脱，小管液回漏，进一步降低了肾小球的有效滤过压。缺血性细胞损伤的特征是细胞ATP耗竭，此时，有数种不同途径终使肌纤蛋白细胞结构发生严重变化，肌纤蛋白调节障碍，GFR下降。有关其机制已有较多推测，如肾小管上皮细胞极性改变使蛋白质重新分布，包括Na+K+ATP酶，并因此导致近曲小管处Na+重吸收减少，较多的Na+流经致密斑，通过管球反馈机制使入球小动脉收缩，GFR下降。肌纤蛋白调节障碍还可造成顶端膜超微结构丧失，细胞从基底膜松懈，顶端膜发生气泡样变化以及小管细胞脱落造成肾小管阻塞。此外，肌纤蛋白细胞骨架的破坏导致紧密连接蛋白的破坏，增加了细胞间溶液流动，使肾小球滤过液回漏。
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黄龙汤对脓毒症大鼠肠黏膜上皮Claudin-1和Occludin的mRNA及蛋白表达水平的影响
目的：探讨黄龙汤对脓毒症大鼠肠黏膜上皮紧密连接蛋白Claudin-1和Occludin的mRNA及蛋白表达水平的影响。方法将55只Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组（n＝10）、模型组（n＝15）、西药治疗组（n＝15）和中西药联合组（n＝15）。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）复制脓毒症模型，假手术组只手术不行CLP。假手术组和模型组灌胃2 mL生理盐水，西药治疗组腹腔注射美罗培南每次50 mg；中西药联合组在西药治疗基础上灌胃中药黄龙汤〔生大黄（后下）15 g，芒硝10 g，枳实15 g，厚朴10 g，人参10 g，当归20 g，黄芩15 g，甘草10 g煎浓成150 mL〕每次2 mL（含生药0.68 g/mL），4组均每日2次。给药4 d后处死大鼠，取临近回盲部的部分回肠组织约10 cm，用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肠组织Claudin-1和Occludin的mRNA表达水平，用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测Claudin-1和Occludin的蛋白表达水平。结果与假手术组比较，模型组、西药治疗组及中西药联合组大鼠小肠上皮Claudin-1和Occludin的mRNA〔积分吸光度（IA）比值〕及蛋白表达水平（灰度值比值）均明显下降（Claudin-1 mRNA：0.327±0.029、0.387±0.035、0.420±0.053比0.561±0.035，Occludin mRNA：0.364±0.058、0.422±0.033、0.442±0.048 比0.616±0.036，Claudin-1蛋白：0.307±0.015、0.337±0.017、0.355±0.027 比0.426±0.017，Occludin 蛋白：0.326±0.028、0.355±0.017、0.366±0.025比0.455±0.018，P＜0.05或P＜0.01）；与模型组比较，西药治疗组和中西药联合组Claudin-1、Occludin的mRNA及蛋白表达显著上调（P＜0.05或P＜0.01）；且以中西药联合组升高更显著（均P＜0.05）。结论黄龙汤对脓毒症大鼠肠黏膜屏障的保护作用可能是通过上调脓毒症模型大鼠小肠组织中Claudin-1和Occludin的mRNA及蛋白表达水平而实现的。
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白藜芦醇激活超氧化物歧化酶2减轻失血性休克大鼠的肠屏障损伤
目的 探讨白藜芦醇改善失血性休克肠损伤的作用机制.方法 SPF级雄性SD大鼠64只,按随机数字表法分为假手术组(Sham组,麻醉后仅行动静脉置管术)、失血性休克模型组(模型组,大鼠麻醉后行动静脉置管术,休克后给予0.3 mL溶剂)、白藜芦醇组(大鼠麻醉后行动静脉置管术,休克后给予白藜芦醇15 mg/kg)、超氧化物歧化酶2(SOD2)特异性抑制剂(2-ME)组(在白藜芦醇组基础上加用2-ME,浓度为0.1 mmol/L).采用股动脉放血的方法复制大鼠失血性休克模型.大鼠给药后分成两批,一批用以观察各组24 h存活率和存活时间;另一批在休克2h后取血测定血清D-乳酸含量,取小肠组织观察病理学改变和Chiu评分,并比较小肠组织紧密连接蛋白Occludin、Claudin、ZO-1的蛋白表达水平和氧化应激相关指标SOD2活性及还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、丙二醛(MDA)含量的差异.结果 与Sham组比较,模型组大鼠存活率、SOD2活性、GSH、GSH/GSSG均降低,生存时间缩短,D-乳酸、Chiu评分和MDA含量均明显升高,小肠组织紧密连接蛋白表达减少.与模型组比较,白藜芦醇组大鼠存活率明显升高[75.0％ (6/8)比37.5％(3/8)],生存时间显著延长(h:21.0±4.3比10.4±5.8,P＜0.05),血D-乳酸含量、小肠组织病理评分明显降低[D-乳酸(μg/L):380.18±70.59比500.88±97.53,Chiu评分(分):1.75±0.71比4.00±0.53,均P＜0.05],紧密连接蛋白表达、SOD2活性、GSH和GSH/GSSG明显升高[Occludin蛋白(灰度值):0.89±0.10比0.43±0.07,Claudin蛋白(灰度值):0.78±0.06比0.33±0.05,ZO-1蛋白(灰度值):0.83±0.06比0.34±0.07,SOD2 (kU/L):0.85±0.12比0.51±0.11,GSH(μmol/L):7.25±1.01比3.86±0.54,GSH/GSSG:6.39±1.14比1.56±0.25,均P＜0.05],MDA显著降低(ng/g:5.00±1.31比8.63±0.92,P＜ 0.05).与白藜芦醇组比较,2-ME组大鼠存活率明显降低[50.0％ (4/8)比75.0％(6/8)],生存时间再度缩短(h:12.2±5.7比21.0±4.3,P＜ 0.05),D-乳酸含量增加(μg/L:463.88±60.16比380.18±70.59)和Chiu评分评分升高(分:3.13±0.99比1.75±0.71,P＜0.05),紧密蛋白表达降低[Occludin蛋白(灰度值):0.55±0.04比0.89±0.10,Claudin蛋白(灰度值):0.38±0.05比0.78±0.06,ZO-1蛋白(灰度值):0.41±0.04比0.83±0.06,均P＜0.05],SOD2活性、GSH、GSH/GSSG下降[SOD2活性(kU/L):0.58±0.13比0.85±0.12,GSH (pμmol/L):4.49±0.52比7.25±1.01,GSH/GSSG:1.57±0.39比6.39±1.14],MDA含量增加(ng/g:6.25±1.04比5.00±1.31,P＜ 0.05).Sham组小肠组织基本正常未见明显病理学改变;模型组小肠上皮绒毛倒塌,黏膜屏障破坏明显;白藜芦醇组小肠绒毛和小肠屏障的破坏明显减轻;2-ME组病理学改变较白藜芦醇组明显.结论 白藜芦醇能改善失血性休克大鼠的肠屏障损伤,其机制可能与激活SOD2有关.
