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胰岛素对血脑屏障通透性的影响
目的 初步探讨胰岛素调节血脑屏障模型通透性的机制,并评价其对血脑屏障转运功能的影响及致炎症作用,为阿尔兹海默病(Alzheimer disease,AD)等神经系统疾病的治疗及预防奠定基础.方法 将不同浓度胰岛素(20和200 μU/ml)作用于永生化人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells/D3,hCMEC/D3)建立的体外血脑屏障模型,通过监测跨上皮细胞电阻抗(trans epithellal electric resistance,TEER)变化,评价其对血脑屏障模型通透性的影响;实时定量PCR(QRT-PCR)检测与血脑屏障通透性相关的紧密连接蛋白(FHL2、ITGB1和CDH5)、转运载体蛋白(ABCB1、ANXA2)以及细胞炎症因子(VCAM、CCL2)基因mRNA转录水平的变化.结果 胰岛素能在48 h内迅速提高血脑屏障的TEER,高于对照组(加入RPMI 1640培养基)20 ～ 30 Ω·cm2 (P＜0.05);胰岛素可促进紧密连接蛋白(FHL2、ITGB1和CDH5)和转运载体蛋白(ABCB1、ANXA2)基因mRNA的转录水平明显升高,而对细胞炎症因子(VCAM、CCL2)基因mRNA的转录水平无明显作用.结论 胰岛素可能通过促进细胞紧密连接降低血脑屏障通透性,维持一定水平的胰岛素对于建立和维持符合脑内皮微环境状态下的体外血脑屏障模型具有重要意义.因而,胰岛素水平的变化对于AD研究可能具有重要意义.
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参地补肾胶囊含药血清对高糖诱导转分化HK-2细胞ZO-1、α-SMA表达的影响
目的:通过观察参地补肾胶囊含药血清对高糖诱导转分化的人肾小管上皮(HK-2)细胞ZO-1(紧密连接蛋白)、α-SMA(α平滑肌肌动蛋白)表达的影响,从分子生物学水平探讨参地补肾胶囊干预肾小管上皮细胞转分化的机制.方法:制备空白及参地补肾胶囊、贝那普利合药血清,以高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)作为观察对象,实验分为正常对照组、高糖模型组、参地补肾胶囊组和贝那普利组,各组HK-2细胞培养48 h,采用Western Blot方法检测ZO-1、α-SMA蛋白的表达情况,Real-timePCR技术检测ZO-1 mRNA的表达情况.结果:与高糖模型组比较,贝那普利组、参地补肾胶囊组HK-2细胞ZO-1表达量增加(P＜0.05),参地补肾胶囊组ZO-1表达较贝那普利组增强(P＜0.05);贝那普利组及参地补肾胶囊组HK-2细胞a-SMA表达均低于高糖模型组(P＜0.05),参地补肾胶囊组a-SMA表达低于贝那普利组(P＜0.05);参地补肾胶囊组ZO-1mRNA表达增加(P＜0.05),高于贝那普利组(P＜0.05).结论:参地补肾胶囊可能是通过调节细胞ZO-1、α-SMA的表达抑制肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞的转分化.
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重症急性胰腺炎患者血清IL-6水平与内毒素移位及肠黏膜紧密连接蛋白表达关系的研究
目的:大量研究表明重症急性胰腺炎(SAP)患者血清中高浓度IL-6和肠黏膜低表达的紧密连接蛋白可促进内毒素移位的发生.本文主要研究重症胰腺炎患者血清IL-6水平对内毒素移位和肠黏膜紧密连接蛋白表达的影响.方法:50例重症胰腺炎患者,其中12例在患病早期因结肠受累合并腹胀,对12例结肠受累患者应用结肠镜行结肠灌洗进行腹腔减压,同时取结肠黏膜进行活组织检查.所有病人在治疗的第3天,第7天,第10天,第14天抽取外周静脉血.40例健康志愿者作为对照组.应用ELISA方法检测血清IL-6水平,鲎试验(LAL)方法检测血清内毒素含量,应用免疫荧光和Western blotting方法检测肠黏膜紧密连接蛋白表达水平.结果:SAP患者血清IL-6和内毒素含量明显高于健康对照组,而结肠黏膜紧密连接蛋白表达低于对照组;在临床治疗过程中,早期SAP患者血清IL-6和内毒素水平高于晚期(P值均＜0.05).SAP早期血清高浓度的IL-6与结肠黏膜紧密连接蛋白的低表达具有相关性,差异有统计学意义(r=0.735,P＜0.05).结论:血清IL-6水平可作为早期评价重症急性胰腺炎严重程度的一项指标,IL-6水平与重症急性胰腺炎临床病程有相关性,可能导致肠道内毒素移位.
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高温对原代支持细胞增殖能力和occludin紧密连接蛋白的影响
目的:研究高温对原代大鼠睾丸支持细胞增殖作用和对紧密连接蛋白的损伤机制.方法:体外分离培养雄性Wistar大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC),免疫组化FasL鉴定.实验分为对照组(36℃)和实验组(37℃、38℃、39℃).在相应的温度下培养5d后,CCK-8法检测SC增殖作用,Western印迹法检测OCLN表达水平.结果:体外培养SC的纯度＞90％,CCK-8结果显示,细胞增殖活性在36℃时强,37～39℃时逐渐降低；Western印迹显示,36℃时OCLN表达量高；高于36℃时,OCLN表达量随着温度的增加而降低(P＜0.05).结论:高温影响SC增殖活性,破坏了支持细胞紧密连接蛋白的正常表达和血睾屏障的完整性,从而影响正常精子的形成.
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非酒精性脂肪性肝病与肠粘膜屏障关系的研究进展
近年来,非酒精性脂肪性肝病的发病率正呈逐年升高趋势,且可进一步发展为非酒精性肝炎、肝硬化甚至肝癌,但其具体的发病机制目前尚未完全阐明.迄今为止,关于非酒精性脂肪性肝病较为人们所接受的是“两次打击学说”,即肝脏的脂肪变性及脂质的过氧化反应.自“肠-肝轴”被提出后,关于肠道粘膜屏障功能与非酒精性脂肪性肝病的发生和发展的关系备受研究人员的关注.近些年来,关于非酒精性脂肪性肝病与肠道粘膜的机械屏障、生物屏障、化学屏障、免疫屏障方面的研究越来越多,肠粘膜的四个屏障功能与非酒精性脂肪性肝病密切相关,相互影响共同促进疾病的发生发展.本文就非酒精性脂肪性肝病与肠粘膜屏障关系的研究进展进行了综述.
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NAFLD患者肠粘膜机械屏障损伤的研究
非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是慢性肝损伤的主要病因之一.据估计,大约有20％的成人有非酒精性脂肪性肝病,2％-3％发展成非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH).NASH是NAFLD的渐进形式,并可能导致肝硬化和肝细胞癌.NAFLD不仅增加了肝病患者死亡率,作为代谢综合征,还增加了肥胖、2型糖尿病及高脂血症的发病率.肌球蛋白轻链激酶(MLCK)是细胞收缩的关键酶,可使肌球蛋白轻链磷酸化(MLC),促使肌动蛋白收缩,破坏细胞间的紧密连接蛋白,使细胞骨架收缩,进而使肠上皮通透性增加,肠粘膜机械屏障遭到破坏,致使NAFLD的病情进一步发展.MLCK在NAFLD的发生及发展中起着重要作用.NAFLD严重威胁人类健康,影响人们的生活质量及生存质量.为NAFLD患者寻找崭新的治疗方法是极其必要的.
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脉络宁对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性的影响研究
目的 研究脉络宁(玄参、牛膝、石斛、金银花等)对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性的影响,初步探讨其可能的机制.方法 72只成年健康雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,依达拉奉对照组,脉络宁高、中和低剂量组.脑缺血再灌注大鼠模型采用线栓法阻断大脑中动脉缺血2h后再灌注24h的方式建立.TTC法测定脑梗死体积;伊文思蓝法检测血脑屏障通透性;Western blot法检测脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白紧密连接蛋白-1和闭合蛋白的表达.结果 脉络宁能显著降低缺血再灌注大鼠脑梗死体积,明显降低血脑屏障通透性,可使紧密连接蛋白-1和闭合蛋白的表达增加.结论 脉络宁可降低脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性的机制可能与上调脑微血管内皮细胞间连接蛋白紧密连接蛋白-1和闭合蛋白的表达有关.
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EWI-2wint分子与丙型肝炎病毒感染
丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)的感染具有严格的种属特异性和组织特异性,其建立感染的第1步是病毒颗粒通过宿主细胞表面的分子黏多糖分子(glycosaminoglycans,GAG)及低密度脂蛋白受体(low-density lipoprotein receptor,LDLr)等黏附在细胞表面,然后依次与细胞表面的B类Ⅰ型清道夫受体(scavenger receptor B type Ⅰ,SR-B Ⅰ)、CD81、紧密连接蛋白Claudin-1等受体分子结合,再经网格蛋白、脂筏等介导的细胞内吞、融合,完成病毒的细胞入侵过程.
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益生菌对肠黏膜屏障紧密连接蛋白保护作用的研究进展
正常肠道除具有消化吸收食物及蠕动功能外,还有激素分泌、免疫调节和黏膜屏障功能.肠上皮细胞间紧密连接在调节肠黏膜屏障通透性和维持肠上皮细胞紧密性中发挥重要的作用.紧密连接是包含众多蛋白的复合体,可调节细胞旁的通透性,其中跨膜蛋白claudin-1具代表性.研究报道,在炎症性肠病、肠道感染时,由于紧密连接崩解导致肠黏膜屏障断裂破坏,引起肠上皮细胞旁通透性增加.有研究发现肠道菌群失调与肠黏膜屏障功能失调有关.益生菌对因紧密连接蛋白崩解导致的肠黏膜屏障破坏具有保护作用,此文就相关研究进展作一综述.
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肠内营养对增龄大鼠肠黏膜上皮屏障的影响
目的 研究肠内营养(百普力)对老年大鼠增龄过程中肠黏膜上皮屏障变化的影响.方法 将20只12月龄和20只3月龄SD大鼠均随机分为肠内营养组和常规饮食组,肠内营养组给予常规饲料和肠内营养液(百普力),常规饮食组给予标准饲料,饲养1月后取各组大鼠回肠组织常规HE染色观察形态学改变,半定量RT-PCR方法检测小肠黏膜组织中紧密连接蛋白(Occludin、ZO-1)mRNA表达水平,免疫组化法检测Occludin、ZO-1水平.统计学处理采用独立样本t检验和多元回归分析.结果 常规饮食组12月龄大鼠与3月龄大鼠相比:小肠绒毛高度降低(P＜0.05),小肠黏膜组织中Occludin、ZO-1 mRNA表达减少(P＜0.05),小肠黏膜组织中Occludin、ZO-1减少(P＜0.05); 12月龄肠内营养组大鼠与常规饮食组大鼠相比,小肠黏膜厚度和绒毛高度增加(P＜0.05),小肠黏膜组织中Occludin、ZO-1 mRNA表达增多(P＜0.05),Occludin、ZO-1增多(P＜0.05).结论 肠内营养(百普力)能改善老年SD大鼠肠黏膜上皮屏障中紧密连接蛋白(Occludin、ZO-1)的减少程度,对衰老时肠黏膜屏障损伤具有保护作用.
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Caveolin-1和紧密连接蛋白在小鼠血吸虫性结肠炎中的表达及其意义
血吸虫肠病是一种血管内寄生虫病,结肠慢性炎症是其基本的病理改变之一.目前有关caveolin-1和紧密连接蛋白参与血吸虫肠病发病的机制仍不明确.目的:初步探讨caveolin-1和紧密连接蛋白occludin、claudin-1在小鼠血吸虫性结肠炎中的表达及其意义.方法:将40只BALB/c雄性小鼠随机分成正常对照组和感染组.小鼠腹部贴片感染约40条日本血吸虫尾蚴建立血吸虫性结肠炎模型.8周后处死小鼠,行HE染色,伊文思蓝法检测肠道血管内皮细胞通透性,计数腹腔灌洗液中的白细胞,qPCR法检测结肠组织中caveolin-1、occludin、claudin-1、eNOS mRNA表达,蛋白质印迹法和免疫组化检测caveolin-1和occludin蛋白表达.结果:感染组结肠黏膜下层可见大量虫卵肉芽肿,并伴有肠壁广泛的炎症细胞浸润.与正常对照组相比,感染组腹腔灌洗液中伊文思蓝含量和白细胞计数均显著升高(P<0.05),caveolin-1、occludin、claudin-1 mRNA表达显著降低(P<0.01),caveolin-1、occludin蛋白表达和阳性率均显著降低(P<0.05).结论:Caveolin-1、occludin和claudin-1表达下调可能通过影响肠道血管内皮细胞的通透性,诱发白细胞聚集,从而参与血吸虫性结肠炎的发病.
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酪酸杆菌联合谷氨酰胺对应激小鼠肠道紧密连接蛋白表达的影响
目的 研究肠道黏膜通透性在IBS致病过程中的作用机制和评价酪酸杆菌联合谷氨酰胺干预的作用.方法 50只BALB/c小鼠按随机数字法均分为空白对照组、实验对照组、谷氨酰胺组、酪酸杆菌组和联合干预组5组,避水试验诱导建立应激IBS小鼠模型.1.5％甲基纤维素灌胃染色粪便法检测小鼠排便时间和粪便含水量,HE染色法评价肠道病理损伤,结肠膨胀试验检测内脏敏感性.检测血清D-乳酸、二胺氧化酶水平和肠上皮细胞间紧密连接蛋白[闭锁蛋白-1、胞质附着蛋白、紧密连接相关蛋白跨膜蛋白(ZOL-1)]蛋白水平变化评价空肠通透性改变,评价酪酸杆菌联合谷氨酰胺干预的影响.组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析.结果 与空白对照组相比,实验对照组小鼠排便时间[(100.40±14.80) min比(75.88±12.20) min]明显缩短、粪便含水量[(54.76±9.98)％、(74.95±7.15)％]增加明显(t＝3.692、4.023,P＝0.002、0.002),低阈值显著降低[(40.87±4.82) mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa)比(27.80±3.18) mmHg;t=8.761,P＜0.01],空肠黏膜损伤评分增加(0.50±0.15比2.60±0.97;t＝6.034,P＜0.01);肠道通透性包括血清D-乳酸[(913.6±90.1) ng/L比(1 476.0±246.8) ng/L]、二胺氧化酶[(3 391.0±256.9) ng/L比(5 096.0±725.2) ng/L]水平显著增加(t＝40.920、29.810,P均＜0.05),紧密连接蛋白ZOL-1 (0.165±0.005、0.119±0.003)、闭锁蛋白1(0.104±0.016比0.022±0.006)表达显著降低(t=19.830、19.830,P均＜0.01).与实验对照组相比,谷氨酰胺组、酪酸杆菌组和联合干预组经灌胃干预后,排便时间增加[(90.50±3.78)、(97.56±8.79)、(99.89±11.90) min]、粪便含水量降低[(69.33±6.71)％、(58.07±8.97)％、(56.74±8.12)％],差异有统计学意义(F=10.020、8.740,P均＜0.01),而酪酸杆菌组和联合干预组效果佳(F＝2.481、4.874,P均＜0.05);低阈值显著增高[(31.80±2.69)、(36.04±5.06)、(38.93±3.30) mmHg,F＝2.420,P＜0.05)],联合干预组效果佳(F＝ 3.550,P＜0.01);空肠黏膜损伤明显减轻(2.00±0.94、1.30±0.68、1.30±0.48,F＝ 11.350,P＜0.01).谷氨酰胺组、酪酸杆菌组和联合干预组经灌胃干预后,血清中D-乳酸[(1 370.0±78.9)、(1 066.0±155.5)、(1 039.0±129.0)ng/L],二胺氧化酶[(4 808.0±477.4)、(3 713.0±595.0)、(3 725.0±615.9) ng/L]水平均显著降低(F=37.480、27.670,P均＜0.01).谷氨酰胺组、酪酸杆菌组和联合干预组ZOL-1水平(0.126±0.014、0.125±0.006、0.138±0.004)及闭锁蛋白-1(0.037±0.013、0.073±0.028、0.078±0.027)水平明显增加,差异均有统计学意义(F=5.867、10.630,P均＜0.05);联合干预组ZOL-1改善程度优于酪酸杆菌组(t＝5.457,P＜0.05).结论 避水试验诱导小鼠内脏高敏状态和肠道通透性增加,降低肠上皮屏障功能,酪酸杆菌和谷氨酰胺能够较好地恢复内脏敏感性及肠黏膜上皮通透性.
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灭活血吸虫卵对实验性结肠炎肠黏膜的影响
目的 研究灭活血吸虫卵对2,4,6一三硝基苯磺酸(tinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)诱导小鼠结肠炎肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1和Occludin基因及蛋白表达影响及其机制.方法 清洁级BALB/C雌性小鼠50只分成对照组(10只)、TNBS+0.9%氯化钠溶液组(20只)和TNBS+血吸虫卵组(20只).TNBS+血吸虫卵组在造模前第3、14天分别给予腹腔注射冰冻灭活血吸虫卵10 000个(1 ml冰0.9%氯化钠溶液混悬液);TNBS+0.9%氯化钠溶液组给予相同体积的冰0.9%氯化钠溶液腹腔注射.后两组予TNBS溶液灌肠(100 mg/kg)建立结肠炎模型,建模后第7天处死存活小鼠,观察各组小鼠结肠的大体形态和HE染色光镜下病理特征;荧光实时定量PCR法测定结肠组织的Occludin和ZO-1基因表达;Western印迹法检测蛋白表达;免疫组化法测定结肠组织紧密连接蛋白表达分布.结果 TNBS+血吸虫卵组小鼠死亡率较TNBS+0.9%氯化钠溶液组明显下降(15%比30%).TNBS+0.9%氯化钠溶液组组织学评分为(4.21±0.40)分,较TNBS+血吸虫卵组和对照组高[(1.74±0.10)和(1.06±0.20)分,P<0.05].TNBS+0.9%氯化钠溶液组ZO-1和Occludin mRNA表达量较对照组显著下降(P<0.01),而TNBS+血吸虫卵组较TNBS+0.9%氯化钠溶液组显著增加(P<0.05).TNBs+0.9%氯化钠溶液组ZO-1蛋白相对灰度值较正常对照组降低50.3%(P<0.05),而TNBS+血吸虫卵组较TNBS+0.9%氯化钠溶液增加41.1%(P<0.05);TNBS+0.9%氯化钠溶液组Occludin相对灰度值较对照组下降48.7%(P<0.05),而血吸虫卵组较TNBS+0.9%氯化钠溶液组增加23.6%(P<0.05).ZO-1、Occludin蛋白染色强度TNBS+0.9%氯化钠溶液组分布均较对照组间增强(P<0.01),而TNBS+血吸虫卵组染色强度信号分布较TNBS+0.9%氯化钠溶液组显著增加(P<0.05).结论 灭活血吸虫卵能在细胞水平加强紧密连接蛋白ZO-1、Occludin聚集及表达,通过稳定紧密连接蛋白,增加肠道黏膜屏障功能,显著改善实验性结肠炎的肠道炎症反应.
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美沙拉秦/蒙脱石散对结肠炎大鼠肠紧密连接蛋白claudin2表达的影响
UC是一种慢性非特异性结肠炎性反应 ,其发病机制尚未完全明确 ,临床主要表现为腹泻、黏液血便、腹痛[1 ] .研究发现 ,紧密连接蛋白 claudin2 能形成促进离子分泌的通道[2 ] .美沙拉秦作为新型5-氨基水杨酸制剂 ,具有成为 U C一线治疗药物的循证依据 ,但是只能单纯控制炎性反应.蒙脱石散作为肠黏膜保护剂对消化道黏膜具有很强的覆盖保护能力及修复、提高黏膜屏障对攻击因子的防御功能 ,具有平衡正常菌群的作用.
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氯吡格雷对人胃黏膜上皮细胞紧密连接蛋白表达的影响
氯吡格雷治疗心脑血管疾病的疗效优于阿司匹林,但其对胃肠道的损伤引起了广泛关注.紧密连接蛋白是细胞间连接的一个重要形式,由Claudin蛋白、Occludin蛋白、JAM、ZOs等结构蛋白及各类连接蛋白分子组成,Occludin蛋白是先被分离出来的紧密连接蛋白跨膜蛋白,也是紧密连接蛋白中重要的结构蛋白.
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非甾体抗炎药相关大鼠小肠上皮屏障损伤发生机制及其药物干预效果
目的：探讨 NSAID 相关大鼠小肠上皮屏障损伤的评价方法及机制，并研究黏膜保护剂和抑酸剂对上皮屏障的保护作用。方法将96只大鼠分成形态学观察组和机制研究组，每组48只。每组再分成8个亚组，分别为健康对照组、模型组（采用吲哚美辛造模）、替普瑞酮预防组、雷贝拉唑预防组、治疗对照组、替普瑞酮治疗组、雷贝拉唑治疗组，以及替普瑞酮、雷贝拉唑联合治疗组（简称联合治疗组），每个亚组6只。应用共聚焦激光显微内镜在体检测各亚组大鼠小肠脱落细胞间隙密度。采用ELISA 法检测各亚组大鼠血清 TNF-α水平，采用 Western 印迹法检测各亚组空肠组织 caspase-3， NF-κB，闭锁小带蛋白1和闭合蛋白水平。统计学处理采用 LSD-t 检验或 Hamhane′s T2检验。结果替普瑞酮预防组和雷贝拉唑预防组大鼠空肠组织的脱落细胞间隙密度分别为（57．43±24．55）/1000和（59．80±21．14）/1000，均低于模型组的（110．93±50．58）/1000，差异均有统计学意义（t ＝53．50、54．13，P 均＜0．01）。联合治疗组的脱落细胞间隙密度为（40．53±15．39）/1000，低于治疗对照组的（93．80±40．65）/1000，差异有统计学意义（t ＝44．27，P ＜0．01）。替普瑞酮预防组和雷贝拉唑预防组的血清 TNF-α水平分别为（25．80±8．97）和（22．74±7．15）ng/L，均低于模型组的（44．48±7．42）ng/L，差异均有统计学意义（t＝18．68、21．74，P 均＜0．01）。联合治疗组 TNF-α水平为（13．66±4．98）ng/L，低于治疗对照组的（24．67±6．70）ng/L，差异有统计学意义（t＝9．02，P ＜0．01）。替普瑞酮预防组和雷贝拉唑预防组的空肠组织 caspase-3水平分别为1．47±0．35和1．58±0．34，NF-κB 水平分别为1．27±0．14和1．21±0．10，与模型组（2．44±0．45和1．69±0．13）相比，差异均有统计学意义（t ＝0．97、0．86、0．42、0．48，P 均＜0．01）。联合治疗组的 caspase-3和 NF-κB 水平分别为0．66±0．06和0．44±0．21，低于治疗对照组，差异均有统计学意义（t＝0．34、0．56，P 均＜0．01）。替普瑞酮预防组和雷贝拉唑预防组的闭合蛋白水平分别为0．69±0．16和0．74±0．11，闭锁小带蛋白1水平分别为0．81±0．08和0．84±0．12，与模型组（0．45±0．22和0．64±0．07）相比，差异均有统计学意义（t＝0．24、0．29、0．17、0．21，P 均＜0．01）。联合治疗组的闭合蛋白和闭锁小带蛋白1水平分别为2．50±0．46和1．76±0．18，高于治疗对照组，差异均有统计学意义（t＝1．50、0．76，P 均＜0．01）。结论脱落细胞间隙密度或可作为预测炎性反应程度、上皮屏障通透性，以及评价药物疗效的有价值的指标。替普瑞酮和雷贝拉唑对 NSAID 相关大鼠小肠损伤有较好的预防和治疗作用。
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酪酸梭菌对坏死性小肠结肠炎新生鼠肠损伤的保护作用
目的：探讨酪酸梭菌对坏死性小肠结肠炎（NEC）新生大鼠肠组织血管内皮细胞生长因子（VEGF）及其受体2（VEGFR-2）、增殖细胞核抗原（PCNA）及紧密连接蛋白claudin-2表达的影响。方法将出生48 h的SD新生大鼠随机分为模型组，对照组及低、中、高剂量组，每组12只。各组大鼠均以鼠乳代乳品喂养。模型组及低、中、高剂量组定时以缺氧和冷刺激连续3 d，建立NEC模型；低、中、高剂量组在建模的同时分别予酪酸梭菌0.2、0.4、0.8 g/(kg·d)。第4天处死大鼠取肠组织，观察病理变化，免疫组化法检测VEGF、PCNA及claudin-2蛋白表达，RT-PCR法检测VEGFR-2表达。结果各组间的肠组织病理评分差异有统计学意义（P?0.05）。结论 NEC新生鼠VEGF、VEGFR-2和紧密连接蛋白claudin-2表达增高，PCNA表达降低；补充酪酸梭菌能作用于这些因子而对新生鼠起保护作用。
关键词： 酪酸梭菌 坏死性小肠结肠炎 血管内皮细胞生长因子 增殖细胞核抗原 紧密连接蛋白 -
复方肠泰制剂对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜屏障的保护作用
目的：观察复方肠泰制剂在小鼠溃疡性结肠炎中对肠黏膜屏障的保护作用，并探讨其作用机制。方法建立葡聚糖硫酸钠诱导小鼠实验性溃疡性结肠炎模型，实验分为空白组、模型组、不同剂量治疗组（4．3 g／kg与17．1 g／kg）、美沙拉嗪对照组和硫唑嘌呤对照组。造模7d内，观察记录各组小鼠体质量和疾病活动指数变化；采用透射电镜观察各组小鼠结肠的超微结构；HE染色观察各组小鼠炎症；ELISA法测定各组小鼠结肠组织TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-10；蛋白质印迹方法检测各组小鼠结肠组织中ZO-1、Occludin和Claudin-1蛋白的表达。结果模型组小鼠体质量、DAI和结肠长度与空白对照组比较，差异均有统计学意义（P＜0．05）；结肠组织中TNF-α、IL-6和IFN-γ水平显著降低，差异有统计学意义（P＜0．05）；组织病理显示炎性细胞明显浸润，ZO-1、Occludin和Claudin-1蛋白的表达显著下降，差异有统计学意义（P＜0．05）；高剂量复方肠泰组与空白对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论高剂量复方肠泰制剂对小鼠肠黏膜屏障功能具有一定的保护作用，其机制可能与肠上皮紧密连接蛋白表达升高以及肠道免疫功能调节有关。
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老年小鼠血脑屏障在术后认知功能障碍中的作用
目的 观察老年小鼠在异氟醚暴露或阑尾切除术后学习和记忆能力变化及海马区血脑屏障通透性变化情况,寻找血脑屏障改变的原因.方法 30只C57BL老年小鼠(18月龄)随机分为3组:对照组(C组)不予任何干预,手术组(S组)接受阑尾切除术,吸入组(Ⅰ组)吸入异氯醚.采用伊文思蓝(Evans-blue,EB)透过率检测各组海马区血脑屏障通透性的改变,并通过Western blot检测occludin和claudin-5蛋白,观察手术后紧密连接蛋白的变化,检测MMP-2和MMP-9的改变.结果 相比于吸入组及对照组,手术组的潜伏期延长,平台穿越次数减少,EB透过率增加,紧密连接蛋白occludin表达减少,MMP-2和MMP-9表达增加.结论 通过增加MMP-2和MMP-9的表达,引起紧密连接蛋白occludin表达的减少,并导致血脑屏障破坏,终引起术后认知功能障碍的发生.
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角质细胞生长因子-2对右旋葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎和肠道黏膜屏障的保护作用
目的 探究角质细胞生长因子-2 (keratinocyte growth factor 2,KGF-2)对右旋葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的小鼠结肠炎和肠道黏膜屏障的保护作用及其作用机制.方法 36只C57BL/c雄性小鼠随机分为正常对照组、DSS模型组、中剂量KGF-2(5 mg/kg)组和高剂量KGF-2(10 mg/kg)组.除正常对照组外小鼠饮用水中均添加3.5％DSS,KGF-2组同时腹腔注射相应剂量的KGF-2.检测小鼠体重、疾病活动指数(disease activity index,DAD、结肠长度缩短、结肠组织病理评分评价KGF-2对结肠炎的保护作用,多功能酶标仪检测血清异硫氰酸荧光素葡聚糖(fluorescein isothiocyanate-dextran,FITC-D)肠道渗透率,免疫组化和Western blot检测结肠组织ZO-1和occludin蛋白的表达,ELISA分析结肠组织匀浆的TNF-α、IL-6、IL-10、TGF-1β、IFN-γ、IL-1β浓度,以探讨KGF-2对肠道屏障功能保护作用机制.结果 与DSS模型组相比,高剂量KGF-2组结肠DAI显著下降(P=0.021 1),体重减轻明显改善(P=0.017 6),HE评分显著降低(12.17±1.222vs.7.000±0.632 5,P=0.001 1),FITC-D渗透率显著降低(168.5±27.01 vs.14.62±1.812,P=0.004 7),结肠较长(4.956±0.2583 vs.6.289±0.2157,P=0.001 1);ZO-1 (0.158 6±0.010 51 vs.0.387 9±0.028 64,P＜0.000 1)和occludin 0.3005±0.026 56 vs.0.4450±0.056 62,P=0.043 4)蛋白表达水平显著升高;肠道组织TNF-α表达显著降低(68.93±3.379 vs.40.41±1.576,P＜0.000 1),而IL 10 (304.0±21.47 vs.521.2±49.40,P=0.002 4)和IL-6 (3755±309.8 vs.5 640±418.0,P=0.004 7)的表达显著升高,疗效呈剂量依赖性.结论 KGF-2能够减轻DSS导致的肠道黏膜损伤,修复肠道黏膜屏障.KGF-2对肠道黏膜屏障的保护作用可能与增加ZO-1和occludin等紧密连接蛋白的表达、抑制TNF-α及促进IL-6和IL-10分泌有关.
关键词： 角质细胞生长因子-2 炎症性肠病 黏膜屏障 紧密连接蛋白 细胞因子
