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蜡样芽孢杆菌非溶血性肠毒素基因的原核表达及多克隆抗体制备
目的 分别对非溶血性肠毒素基因(Nhe)的3个亚基进行原核表达,并对蜡样芽孢杆菌分泌的非溶血性肠毒素蛋白进行免疫学鉴定. 方法 根据NCBI数据库非溶血性肠毒素NheA、NheB、NheC基因序列设计引物,以蜡样芽孢杆菌的基因组为模板,PCR扩增NheA、NheB、NheC基因.分别将3个基因克隆到原核表达载体pET-30a(+)后转化到大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达目的蛋白,进行SDS-PAGE分析以及Western blot分析,并免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体. 结果 经PCR和酶切鉴定,成功构建重组表达载体.重组表达载体分别转化至BL21 (DE3),经IPTG诱导表达相应的目的蛋白,分子质量单位分别为NheA 40 ku,NheB 44 ku,NheC 40 ku.经电离飞行时间质谱鉴定,重组蛋白NheA、NheB和NheC表达正确.3种目的蛋白经SDS-PAGE电泳后分别割胶回收,免疫新西兰大白兔,获得重组多克隆抗体. 结论 成功构建了NheA、NheB、NheC基因重组表达载体,表达的重组蛋白免疫新西兰兔获得相应的克隆抗体,为进一步研究非溶血型肠毒素的结构和功能奠定了基础.
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蜡样芽孢杆菌蔗糖代谢差异分析
蜡样芽孢杆菌（ Bacillus cereus，B．cereus）是一种好氧的革兰氏阳性杆菌，广泛存在于土壤、空气和水中［1］。它是一种条件致病菌，在国内外曾多次引起食源性中毒事件［2］；而它又被作为一种稳定、高耐受、快速增殖的益生菌添加剂，应用于饲料、农业和医药保健等各领域［3］。本文旨在通过不同菌株的比较，探究蜡样芽孢杆菌蔗糖代谢差异及与其致病性间的关系。
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眼源性蜡样芽孢杆菌溶血素BL及其体外生物活性检测
目的 对经API细菌鉴定条所证实的眼源性蜡样芽孢杆菌进行溶血素BL(HBL)基因鉴定并进行体外毒理性试验.方法 根据溶血素结合亚基B、2个溶血亚基L1、L2三种组分的基因核苷酸序列,设计合成3对特异性引物,通过体系和条件优化,建立PCR检测方法,并对5株临床分离的眼源性蜡样芽孢杆菌进行检测分析；随机选取其中1株菌,利用盐析法提取溶血素,并以不同浓度剂量作用于绵羊红细胞、Vero细胞和Hela细胞,监测其对细胞的毒性；通过腹腔注射观察HBL对小鼠的致死作用,评估其毒力的强弱.结果 5株临床分离菌中,共检出3个基因；蜡样芽孢杆菌溶血素BL蛋白具有较强溶血活性,其溶血活性呈明显的时间-剂量依赖性；BL溶血素对Vero细胞和Hela细胞的作用所致的形态变化虽有不同,但结果均导致细胞死亡,其内容物释出；对小鼠的致死率同样存在时间-剂量依赖性,且2.0 HU/ml浓度以上的BL溶血素可使小鼠48 h的致死率达100％.结论 HBL具有较强的溶血活性,对临床分离的眼源性蜡样芽孢杆菌BL基因进行检测,3个基因均表达,为该菌感染后病情发展迅速、预后较差的临床表现提供了理论依据,同时为该病的快速诊断和分子流行病学调查提供了新的方法.
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从食物中毒标本中分离出蜡样芽孢杆菌
2001年10月17日晚接到我市鸡街医院报告,该地区某中学学生17名疑似食物中毒住院治疗.经现场调查,发生中毒的17人中午均进食米饭、土豆等,食后约1 h左右出现恶心、呕吐现象,均无腹痛腹泻发生,经过流行病学调查、临床表现及实验室病原菌检验,确认为一起由呕吐型蜡样芽孢杆菌引起的食物中毒.现报告如下.
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抗生素在感染性腹泻治疗中的应用
导致人类感染性腹泻的病原菌大约有20～30种,其中以志贺菌属和各种致病性大肠埃希菌为主要的病原菌,沙门菌属、副溶血弧菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌等引起的细菌性食物中毒也时常发生,尤其是在发展中国家,此外,霍乱弧菌的暴发流行在世界范围内仍时有发生.虽然对各种感染性腹泻的治疗随着补液疗法和整体医疗水平的提高有了很大进步,但随着临床上抗生素的滥用,加速了肠道病原菌耐药性的产生,给临床治疗带来困难.因此,了解抗生素在感染性腹泻中的合理使用已迫在眉睫.
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蜡样芽孢杆菌性眼内炎
蜡样芽孢杆菌性眼内炎是暴发性眼内感染之一,严重损毁眼球组织,预后极差.蜡样芽孢杆菌的细菌毒素、眼内活动性、眼内宿主对细胞壁的反应、血-眼屏障破坏等可能是其导致眼内炎的发病机制;蜡样芽孢杆菌可通过眼开放性损伤、手术操作或内源性感染扩散等途径进入眼内,发病急,同时伴有全身典型中毒症状;治疗上建议玻璃体腔内注射有效抗菌药物,并同时积极手术治疗.
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眼球穿孔伤蜡样芽孢杆菌致化脓性眼内炎报告
化脓性眼内炎是眼球穿孔伤严重的并发症,发病率约为10%[1]由蜡样芽孢杆菌导致的眼内炎,临床较少见,现报道1例如下.
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蜡样芽孢杆菌性角膜炎一例
蜡样芽孢杆菌是导致食物中毒的常见病原菌,其所引起的角膜炎较罕见.2006年7月河南省眼科研究所诊治1例因摘取角膜接触镜时指甲损伤角膜引起的蜡样芽孢杆菌性角膜炎患者.
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蜡样芽孢杆菌性眼内炎引起眶蜂窝织炎一例
患者男性，82岁。因干农活时左眼被“铁片”击伤后红痛伴视物模糊32 h，加重10 h，于2011年3月12日来黑龙江省七台河市人民医院急诊眼科就诊，急诊眼科以“左眼眼内炎，左眼球内异物，左眼角膜溃疡穿孔”收入院。既往有高血压病史3年。入院体温36．0℃。眼科检查：左眼无光感，眼球运动尚可，眼睑红肿，启闭正常，结膜充血水肿，角膜混浊、时钟10点位周边角膜可见一类圆形全层穿通伤，穿通伤边缘及周围呈环形污秽黄色混浊，前房积脓5 mm，大量纤维渗出，眼内窥不清。辅助检查：血常规：白细胞10．85×109／L，淋巴细胞90．8％，中性粒细胞5．3％，超敏C反应蛋白12．1 mg／L；心电图显示窦性心动过缓；当地医院行眼眶CT检查，结果显示：左眼球内异物。急诊眼科局麻下行左眼球探查＋磁性异物取出＋玻璃体腔注药＋自体角膜缘结膜瓣移植术，术中磁铁吸出球内一约2 mm ×6 mm铁质异物。玻璃体腔内注入注射用头孢他啶1 mg／0．1 ml、两性霉素5 mg／0．1 ml，结膜下注射注射用头孢他啶1 mg／0．1 ml，术后每日全身给予万古霉素和头孢他啶静滴，常规局部应用抗生素滴眼剂、皮质类固醇激素滴眼液及散瞳滴眼液等。急诊术后第二天，患者自感左眼痛加重。体温37．5℃。眼科检查：左眼无光感，眼球突出，眶压增高，拒按，眼睑肿胀，上睑不能上举，眼球固定不动，结膜高度充血水肿，未见明显分泌物，角膜上半部结膜瓣覆盖、下半部白色混浊，眼内窥不入。辅助检查：B超显示玻璃体腔可见中等量密集弱回声光点，球壁明显增厚，球后可见“T”形征。血常规检查，结果提示白细胞10．10×109，淋巴细胞83．1％，中性粒细胞7．9％。急诊术后第三天，术中送检的异物＋玻璃体液微生物检查结果为革兰氏阳性杆菌，用专用革兰氏阳性菌鉴定试条鉴定为蜡样芽孢杆菌，对庆大霉素、红霉素、万古霉素、妥布霉素、利福平和左氧氟沙星敏感。根据微生物检查结果调整用药，全身抗生素将注射用头孢他啶改为克林霉素，每日静滴，局部加万古霉素滴眼液10次／d。复查CT检查，结果显示：左侧眼睑肿胀，眼环边界不清、呈铸造样，球后肌锥间可见密度增高影，眶内软组织结构紊乱。急诊术后第四天，复查B超显示：较术后第二天玻璃体腔中等量密集弱回声光点明显增多。MRI检查，结果显示：左眼晶状体偏向前，玻璃体腔信号不均匀增高，眼环肿胀，边界不清，T1加权检查，结果为眼内可见不均匀异常低信号，T2加权检查，结果为球后肌锥间隙见不均匀的高信号。根据上述病情，确定诊断为：左眼蜡样芽孢杆菌性眼内炎；左眼眶蜂窝织炎；左眼球内异物；左眼角膜穿通伤；左眼外伤性角膜炎；左眼无光感；高血压病。急诊术后第五天，患眼疼痛无减轻，眼球突出，上睑不能上举，眼球固定不动。因眼部感染未能有效控制，于当日在局部浸润麻醉下行左眼内容物剜除术，术中见玻璃体腔前部见淡黄色液体，后部见大量血性脓液，术后取材送病理检查及微生物培养，予以全身和局部抗炎对症治疗。病理检查结果示：结膜及巩膜组织充血、出血、坏死，其间质及玻璃体眼内容物中见大量中性粒细胞、淋巴细胞浸润，符合眼内化脓性炎症。涂片和微生物培养：无细菌、真菌生长。眼内容物摘除术后第三天，眼部检查示：左眼睑无红肿、启闭正常，结膜充血（＋）、切口对位良好、缝线在位，未见分泌物。病情稳定，出院。
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蜡样芽孢杆菌总蛋白双向电泳方法的建立和优化
目的 探索建立有效的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)蛋白质组双向电泳体系,为进一步揭示其促进氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)产酸的作用机制奠定基础.方法 以培养的B.cereus为材料,比较蛋白质制备超声破壁时间、新型细胞裂解液、pH梯度和不同上样量对B.cereus蛋白双向电泳结果的影响.结果 与结论 采用15 min超声破壁提取B.cereus总蛋白,选用新型蛋白质裂解,用长24 cm、pH 4~7的IPG胶条,采用80 μg上样量进行等电聚焦,于60 V 15 min、120 V 6 h条件下进行SDS-PAGE垂直电泳,可以获得背景清晰、重复性好的双向电泳图谱,建立一套用于B.cereus蛋白质组分析的双向电泳方法.
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一起由蜡样芽孢杆菌引起食物中毒的调查报告
2008年6月20日.吉林省东丰县猴石镇某酒店招待集体就餐发生一起由蜡样芽孢杆菌引起食物中毒事件.共有48名就餐者先后发病,短潜伏期约4小时.长潜伏期10小时30分.发病呈单峰型分布.主要症状为恶心(占52.08%)、呕吐(占10.42%)、腹痛(占89.58%),腹泻(占83.35%).中毒餐次确定为6月20日午餐.根据现场流行病学调查.结合患者临床表现及实验室检测(致病菌检测及菌落计数).依据WS/T 82--1996蜡样芽胞杆菌食物中毒诊断标准及处理原则.确定本次食物中毒为蜡样芽胞杆菌食物中毒.
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一起由蜡样芽孢杆菌引起食物中毒的调查报告
2008年6月20日.吉林省东丰县猴石镇某酒店招待集体就餐发生一起由蜡样芽孢杆菌引起食物中毒事件.共有48名就餐者先后发病,短潜伏期约4小时.长潜伏期10小时30分.发病呈单峰型分布.主要症状为恶心(占52.08%)、呕吐(占10.42%)、腹痛(占89.58%),腹泻(占83.35%).中毒餐次确定为6月20日午餐.根据现场流行病学调查.结合患者临床表现及实验室检测(致病菌检测及菌落计数).依据WS/T 82--1996蜡样芽胞杆菌食物中毒诊断标准及处理原则.确定本次食物中毒为蜡样芽胞杆菌食物中毒.
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葡萄糖酸锌联合蜡样芽孢杆菌活菌片对小儿抗生素相关性腹泻的治疗效果
目的：探究葡萄糖酸锌联合蜡样芽孢杆菌活菌片对小儿抗生素相关性腹泻的治疗效果。方法选取2013年2月至2015年4月来北京丰台医院就诊的抗生素相关性腹泻患儿112例，依据抽签法随机分为观察组和对照组，各56例。两组均应用蒙脱石散等常规止泻方案进行治疗。对照组在常规治疗方案基础上加用口服葡萄糖酸锌（10 mL／d）；观察组在常规治疗方案的基础上加用口服葡萄糖酸锌（10 mL／d）及蜡样芽孢杆菌活菌片（每次0.25 g，每日3次）。比较两组患儿治疗前后血锌水平、粪检乳杆菌、双歧杆菌水平，白细胞阳性、潜血阳性、脱水率，大便次数、腹泻时间及治疗过程中不良反应（恶心、呕吐及肌肉酸痛）情况。结果治疗24、72 h后，观察组血锌、粪便乳杆菌及双歧杆菌水平呈上升趋势，且各时点血锌、粪便乳杆菌及双歧杆菌水平高于对照组，差异有统计学意义（ P＜0.05）；对照组治疗24 h血锌及治疗24、72 h粪便乳杆菌及双歧杆菌水平下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗72 h 观察组白细胞阳性率、潜血阳性率低于对照组[3.6％（2／56）比17.9％（10／56），1.8％（1／56）比14.3％（8／56）]，差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗24 h观察组脱水率低于对照组[8.9％（5／56）比25.0％（14／56）]，差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗72 h，观察组大便次数少于对照组[（2.9±0.8）次比（3.6±1.1）次]，腹泻时间短于对照组[（3.2±0.8） d 比（5.1±1.7） d]，差异有统计学意义（P＜0.05）。两组患儿恶心、呕吐及肌肉酸痛的发生率比较差异无统计学意义（ P＞0.05）。结论葡萄糖酸锌联合蜡样芽孢杆菌活菌片可明显促进抗生素相关性腹泻患儿肠道正常菌群比例的恢复，改善患儿临床症状，减少腹泻时间及腹泻次数且无明显不良反应。
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蜡样芽孢杆菌致急性眼内炎1例
1 临床资料患者女,19岁,会计.自诉4 d前因戴隐形眼镜后出现右眼疼痛,畏光,流泪,异物感,无头痛,无恶心呕吐,无飞蚊症状.外院诊断"右眼角膜炎",并给予抗炎对症治疗,病情无明显好转,遂转入本院眼科.检查显示,结膜充血水肿,眼睑红肿,巩膜充血,角膜中央见8 mm×8 mm溃疡,基底水肿,前房隐见积脓,瞳孔、晶状体、玻璃体及眼底均混浊不清.见图1.实验室检查白细胞12.3×109/L,中性粒细胞占86.2%.
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蜡样芽孢杆菌食物中毒研究近况
蜡样芽孢杆菌(以下称蜡样菌)是一种需氧芽孢杆菌、能腐败食物的肠道致病菌.自然界中分布极广,常存于空气、土壤、灰尘、水、植物中,在食品、海产品、人的粪便中也可以查出.蜡样菌引起的食物中毒近年来有上升的趋势.
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一起食物中毒的调查分析
2002年8月13日,北京朝阳区一家3口在家食用前一天吃剩的烤羊腿,造成3人不同程度食物中毒,经流行病学调查,临床及实验室检查分析,诊断为一起由蜡样芽孢杆菌污染引起的食物中毒,现将调查结果报告如下.
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一起由蜡样芽孢杆菌引起的食物中毒
2006年8月25日YC市第一中学发生一起食物中毒,根据流行病学调查和实验室检验结果,确认该起食物中毒是由腊样芽胞杆菌所致,现将调查情况报告如下: 一材料与方法 1、检验依据:按照<食品卫生微生物学检验>GB/T4789.4.6.7.10.11.14-2003执行.2、样品采集:该餐档剩余的炒饭2份(200g/份),剩米饭1 份(200g),患者呕吐物8份(50g/份),腹泻患者肛拭4份,食堂用具(案板、餐具)3份,共18份.
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涟水县一起蜡样芽孢杆菌食物中毒的调查报告
目的：对一起蜡样芽孢杆菌引起的食物中毒的发生原因进行。方法根据流行病学调查、临床症状和实验室检验结果进行判断分析。结果从采集到的5份标本中，2份呕吐物标本检出蜡样芽孢杆菌，检出率为100%，汪某吃剩米中也检出蜡样芽孢杆菌，且3份标本蜡样芽孢杆菌生化性状相同，其余均未检出蜡样芽孢杆菌。结论这是1起由蜡样芽孢杆菌污染米饭而引起的食物中毒，提示应加强食品卫生监管工作。
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一起蜡样芽孢杆菌引起的食物中毒
1999年10月13日晚,驻长沙某部招待所发生一起食物中毒.经流行病学调查、临床和实验室检查,证实为一起由蜡样芽孢杆菌引起的食物中毒.
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零售米饭中蜡样芽孢杆菌污染情况调查
目的 对零售的米饭中蜡样芽孢杆菌污染情况进行调查.方法 GB/T4789.14-2003 《食品卫生微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验》.结果 30份零售米饭中检出19份蜡样芽孢杆菌阳性,其中有11份样品蜡样芽孢杆菌计数＞106(CFU/g).结论 做好食品的冷藏和加热,搞好环境卫生,保持食品经营场所整洁卫生,做好个人卫生,卫生监管部门应加强食品零售摊位食品卫生的监管力度,确保人民群众的饮食安全.
