首页 > 文献资料
-
白芍总甙对大鼠肝纤维化形成中肝窦内皮细胞的作用及血清TNF-α的表达研究
目的:研究肝纤维化形成中白芍总甙对肝窦内皮细胞血管化的逆转作用及血清,INF-α的表达.方法:用双抗体夹心法测定法分别检测肝硬化血清中TNF-α水平.结果:各组大鼠肝脏超微结构结果示,治疗组在术后3周无明显肝窦细胞血管化,对照组在术后第三周明显出现肝窦细胞血管化;血清TNF-α明显降低,并与对照组差异有显著性(P＜0.05),对照组在术后第2周和第3周均明显升高,且第3周升高更明显(P＜0.05)).结论:白芍总甙能延缓肝纤维化形成,TNF-α水平与肝纤维化程度密切相关,并可反映肝脏损害的程度.
-
五味子酯甲抑制肝窦内皮细胞功能及血管新生的活性评价
探讨五味子酯甲对肝窦内皮细胞细胞功能及血管新生的影响.0 ～ 40 μmol·L-1五味子酯甲与SK-HEP-1细胞孵育24 h,MTr法评估五味子酯甲对SK-HEP-1细胞活力的影响.血管内皮生长因子(VEGF)诱导SK-HEP-1增殖,以VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂索拉非尼为对照,同时设空白对照组,五味子酯甲与SK-HEP-1细胞孵育,EdU法检测细胞增殖;荧光探针法检测胞内NO含量和NOS活性;细胞迁移、Matrigel管腔形成实验检测细胞管腔形成;大鼠主动脉环实验检测血管生长变化;转基因斑马鱼实验观察斑马鱼节间血管、功能血管数变化.与空白对照组比较,VEGF诱导SK-HEP-1细胞增殖、NO含量和NOS活性升高;与模型组比较,五味子酯甲显著抑制VEGF诱导的SK-HEP-1细胞增殖、降低NO含量和NOS活性.五味子酯甲能够显著抑制VEGF诱导的SK-HEP-1细胞迁移和管腔形成,抑制大鼠主动脉环血管形成;对转基因斑马鱼节间血管具有显著抑制作用,显著减少斑马鱼功能血管数量.五味子酯甲能够抑制内皮细胞功能,且具有抑制血管新生活性的作用.
-
虫草菌丝提取物抗二甲基亚硝胺诱致大鼠肝硬化肝窦毛细血管化作用机制的研究
目的 探讨虫草菌丝提取物(CME)对二甲基亚硝胺(DMN)诱致大鼠肝硬化肝窦毛细血管化作用的机制.方法 将63只大鼠分为3组:正常组(18只)、模型组(30只)、用药组(15只,予CME).采用DMN 10 mg/kg腹腔注射, 每周连续3天,每天1次,共4周制作大鼠肝纤维化模型,分别于造模后3天、2周、4周作为观察时相点;透射电镜观察肝组织超微结构,免疫组织化学法观察肝窦壁CD44 、Ⅷ因子相关抗原(vWF)、Ⅳ型胶原(Col Ⅳ),酶谱法测定基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9活性;放射免疫法测定血清透明质酸(HA)含量.结果 DMN造模后3 天MMP-2、MMP-9活性显著增加,肝窦壁Col Ⅳ沉积显著减少、CD44 染色减弱、vWF阳性染色明显增强,肝窦内皮(SECs)窗孔减少,血清HA含量显著升高(P<0.05),4 周时可见SECs失窗孔和SECs下基底膜形成;CME早期(3天,2 周时)能够显著降低MMP-2、MMP-9活性(P<0.05),SECs失窗孔和SECs下基底膜形成减轻;CME灌胃2、4 周后,大鼠血清HA水平下降(P<0.05),肝窦壁CD44 表达增强、vWF阳性染色减弱(P<0.05),SECs窗孔增多,SECs基底膜形成减轻.结论 早期MMP-9、MMP-2活性升高,降解肝窦内皮细胞下正常分布的Col Ⅳ,是肝窦毛细血管化形成的重要因素;CME早期通过降低MMP-2、MMP-9活性,抑制肝窦毛细血管化的启动;CME能够减轻DMN大鼠肝窦内皮细胞损伤和表型改变,抑制肝窦毛细血管化形成.
-
肝玄府学说理论初探
玄府是广泛存在于机体五官九窍、脏腑内外的微观孔窍,具有流通气液、渗灌气血等作用.现代医学研究表明,肝窦内皮细胞(SEC)窗孔构成的肝筛结构是窭周间隙内外进行物质交换的微观通道.据此认为,SEC窗孔构成的肝筛结构与肝内玄府在结构层次上的微观性、物质交换与信息交流的通道性等方面具有共同内涵,提出“肝玄府”及其与SEC窗孔结构可能相关的假说,以期为进一步认识肝的生理病理、指导临床治疗提供依据.
-
疏肝健脾活血方对肝星状细胞/肝窦内皮细胞共培养体系中VEGF/VEGFR表达的影响
目的 探讨疏肝健脾活血方逆转肝纤维化进程中肝窦毛细血管化的可能作用机制.方法 分离正常大鼠肝星状细胞(HSC)、肝窦内皮细胞(LSEC)和肝纤维化模型大鼠LSEC,利用慢病毒转染得到血管内皮生长因子(VEGF)过表达HSC.实验分为6组,1)正常HSC组:正常大鼠HSC空白血清培养;2)正常组:正常大鼠HSC及正常LSEC空白血清共培养;3)模型组:正常大鼠HSC及模型大鼠LSEC空白血清共培养;4)过表达组:VEGF过表达HSC及模型大鼠LSEC空白血清共培养;5)模型加中药组:正常大鼠HSC及模型大鼠LSEC 10％含药血清共培养;6)过表达加中药组:VEGF过表达HSC及模型大鼠LSEC10％含药血清共培养.采用Western Blot法检测各组LSEC中血小板内皮细胞黏附因子CD31及血友病因子(vWF)蛋白表达,HSC中胶原Ⅳ、VEGF及血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)蛋白表达;采用PCR法检测各组HSC中VEGF、血管内皮生长因子受体1(VEGFR-1)及VEGFR-2 mRNA表达.结果 与正常组比较,模型组及过表达组CD31及vWF蛋白表达升高(P＜0.01),而模型加中药组较模型组CD31及vWF蛋白表达降低(P＜0.01);与正常HSC组和正常组比较,模型组及过表达组中胶原Ⅳ、VEGF蛋白表达升高(P＜0.05),而模型加中药组较模型组VEGF、VEGFR-2蛋白表达降低(P＜0.05);与正常HSC组和正常组比较,模型组及过表达组VEGF mRNA表达升高(P＜0.01);模型加中药组VEGF mRNA表达较模型组降低(P＜0.05).结论 疏肝健脾活血方可能通过下调VEGF、VEGFR-2蛋白表达,进而抑制VEGF信号通路,恢复LSEC窗孔结构,从而逆转肝窦毛细血管化.
-
疏肝健脾活血方含药血清对肝纤维化模型大鼠肝窦内皮细胞失窗孔化的影响
目的 探讨疏肝健脾活血方治疗肝纤维化的可能作用机制.方法 10只SD大鼠以10 ml/kg疏肝健脾方浓缩液(浓度2.7 g/ml)灌胃,每日1次,连续3天后制备含药血清.中药血清设5％、10％、15％、20％、25％共5个浓度,采用MTT法筛选实验药物浓度.采用四氯化碳(CCl4)腹腔注射建立肝纤维化大鼠模型后分离肝纤维化肝窦内皮细胞(SEC),同时集正常大鼠肝星状细胞(HSC)和SEC.实验分为正常组、模型组、DAPT组、NF组、中药组、中药加DAPT组、中药加NF组,共7组.各组均加入HSC,正常组加入正常大鼠SEC,其余组加入肝纤维化大鼠SEC,常规培养24h.吸出上清液,DAPT组、中药加DAPT组加入0.2 μmol/L DAPT(Notch通路阻断剂),NF组、中药加NF组加入1 gsu/ml rhNF-κB(Notch通路激动剂).前4组加入含10％ FBS DMEM/12培养基,后3组加入含预筛选浓度中药血清、10％ FBS DMEM/12培养基,培养72h后MTT法检测各组HSC活力,Western Blot法检测SEC中CD31、vWF蛋白表达情况.结果 筛选出10％浓度的中药血清对细胞增殖有抑制作用.与正常组比较,造模2、4、8周模型组HSC活力上升,造模4、8周CD31蛋白表达升高(P＜0.05或P＜0.01);与模型组比较,NF组HSC活力上升,DAPT组和中药组HSC活力、CD31、vWF蛋白表达下降(P＜0.05或P＜0.01);与NF组比较,中药加NF组HSC活力、CD31、vWF蛋白表达下降(P＜0.05或P＜0.01);与DAPT组比较,中药加DAPT组HSC活力、CD31、vWF蛋白表达均下降(P＜0.05或P＜0.01). 结论 疏肝健脾活血方可通过干预Notch通路,抑制HSC活力及SEC失窗孔化,可能是其治疗肝纤维化的作用机制之一.
-
肝窦内皮细胞的窗孔调控与脂肪肝形成的研究进展
衬贴于肝血窦的肝窦内皮细胞具有无隔膜的窗孔,并汇聚成肝筛.窗孔相当于可选择超滤系统,有利于调控肝细胞与肝窦血液的物质交换,尤其是在脂质代谢方面,窗孔结构异常是脂质代谢紊乱的重要因素.本文就窗孔的超微结构、开窗机制和调控因素以及与脂肪肝相关联系的进展做一综述.
-
小鼠肝窦内皮细胞损伤在肝静脉闭塞病中的作用研究
本研究探讨野百合碱诱导的小鼠肝窦内皮细胞损伤在肝静脉闭塞病中的作用.将BALB/c小鼠随机分为2组,即生理盐水组(n=15)和野百合碱组(n=15),分别按10 ml/kg和200 mg/kg灌胃,连续3d.灌胃后第3、4、6、8和10天检测各组小鼠肝功能(总胆红素、丙氨酸转氨酶、碱性磷酸酶)、肝脏指数及活化血小板比例；HE染色、Masson染色及免疫组织化学染色观察肝细胞及肝窦内皮细胞的损伤情况、肝脏纤维化程度等；电子显微镜观察肝窦内皮细胞损伤、炎细胞浸润及血小板聚集情况.结果显示,野百合碱组与生理盐水组相比在光学显微镜和电子显微镜下均可见肝窦内皮细胞损伤、大量血小板黏附和聚集、中央静脉和肝血窦纤维化；与生理盐水组相比,野百合碱组外周血活化血小板比例升高(P＜0.05),肝脏指数升高(P＜0.05),肝功能异常并有腹水形成.结论:野百合碱诱导的肝窦内皮细胞损伤是肝静脉闭塞病的始动因素,且该肝窦内皮细胞损伤可能具有自限性,但纤维化持续存在.
-
大鼠肝部分切除术后肝窦内皮细胞对肝细胞增生的影响
目的:探讨大鼠肝部分切除术后肝窦血管内皮细胞(LSEC)对再生肝细胞增生的影响.方法:建立Wistar大鼠70%的肝切除模型和肝窦血管内皮细胞、肝细胞分离与培养方法,在术后不同的时相点分离残肝的肝细胞和肝窦血管内皮细胞,进行培养.实验分组:肝部分切除组(PO)和假手术组(SO);肝细胞培养分两组:A组(肝细胞)、B组(肝细胞+LSEC上清液),利用放射免疫法测定肝细胞DNA合成率、免疫组化方法测定肝细胞PCNA表达指数的变化.结果:在术后的6、24 h,B组的肝细胞的PCNA表达指数较A组显著升高(5.9±0.1 vs 8.9±0.1 P＜0.05;38.6±2.6 vs 58.0±3.9 P＜0.01).而且B组肝细胞的DNA合成量较A组显著升高(226±18 vs 8.9±0.1 P＜0.05;38.6±2.6vs 58.0±3.9 P＜0.01).结论:体外实验证实肝部分切除术后肝窦内皮细胞上清可以促进肝细胞的增生,促进肝细胞的DNA合成,增强再生肝细胞增生活性.
-
肝窦内皮细胞与免疫耐受
肝脏似乎是一个免疫耐受多于免疫原性的器官.众多的肝脏组成细胞中许多参与肝脏免疫调节,如肝血窦内皮细胞(LSEC).LSEC是定居在肝脏肝血窦的细胞,与经过肝脏的淋巴细胞直接作用,有大量的清道夫受体,能有效摄取抗原.LSEC处理抗原后以MHC限制性呈递给CD4T或者CD8T细胞.与LSEC作用的CD4T,CD8T细胞产生耐受性,是LSEC在肝脏重要的免疫功能:对循环中的可溶性抗原或口服抗原控制了免疫应答的类型.
-
肝窦内皮细胞条件培养基对肝星状细胞表达结缔组织生长因子的影响
肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是肝纤维化时细胞外基质(extracellular matrix,ECM)异常增生的主要细胞来源,其调控机制复杂,许多因素参与[1,2].其中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的研究引起关注[3].
-
HIF-1α、TXB2、6-Keto-PGF1α和HA联合检测在CHB肝脏微循环障碍中的诊断意义
目的:探讨慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)肝脏微循环障碍时,联合检测低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α、血栓烷素(thromboxan,TX)B2、6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)及透明质酸(hyaluronic acid,HA)的临床意义.方法:275例CHB患者肝组织标本通过肝穿刺获得,同时留取外周血待检.15例正常志愿者外周血来自健康体检者.用透射电镜观察肝细胞及肝窦的超微结构变化.用化学发光法检测血清HA,放射免疫法检测血浆TXB2和6-Keto-PGF1α,免疫组织化学法标记肝穿活检标本中的HIF-1α.结果:随着CHB肝组织病变的加重,电镜示肝窦腔内红细胞聚集,肝窦阻塞和狭窄明显,狄氏腔中胶原纤维沉积及基底膜形成率逐步增多.HIF-1α在肝组织中的表达强度和范围逐渐加大,HA、TXB2逐渐上升,6-Keto-PGF1α轻度下降.结论:HIF-1d、TXB2、6-Keto-PGF1α及HA联合检测能较好地反映肝脏微循环障碍状况.
-
肝硬化门脉高压症的防治:新的细胞与分子靶点
肝窦内皮细胞一氧化氮合酶、赖氨酸氧化酶-2表达减少、新生血管形成及病理性肝窦重建是肝硬化门脉高压的病理生理新机制,黑巧克力、咖啡及绿茶可改善肝窦内皮细胞功能障碍及抑制新生血管形成,可能是延缓、逆转肝硬化门脉高压及其并发症的新方法.
-
基于肝窦内皮细胞信号传导的肝纤维化研究概况
肝纤维化是慢性肝病发展为肝硬化或肝癌的前期病理过程,他的形成与肝脏长期遭受各种肝毒性刺激密不可分.肝窦内皮细胞对肝纤维化形成起到重要作用,该细胞具有窗孔结构,能调控物质在血液和肝实质之间的交换,肝窦内皮细胞(hepatic sinusoidal endothelial cells,HSEC)通过多种信号传导通路参与肝纤维化的形成及发展,本文总结并评述近年来HSEC参与肝纤维化形成发展的几种信号通路:Rho-GTPase、CXCR7-Idl/FGFRl-CXCR4、VEGFR-2/p38丝裂原激活蛋白类激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)、MAPK、TLRs等信号传导通路的相关研究,这些信号通路有的是相互影响、级级递联的,而众多通路之中,MAPK信号通路影响范围广.了解HSEC参与肝纤维化的信号传导通路,才能对肝纤维化疾病及基于HSEC的研究做更深入的探索.本研究能为肝纤维化的治疗提供新的思路.
-
剪切力对肝脏切除术后肝窦内皮细胞的作用
肝切除术是肝脏疾病尤其是肝脏肿瘤的重要治疗手段,并且在肝切除术后会出现肝脏血流动力学的改变.肝窦内皮细胞是肝窦毛细血管内一类特殊的内皮细胞,对血流变化十分敏感.本文就肝脏切除术后血流产生的剪切力作用于肝窦内皮细胞,从而调节肝细胞再生和肝组织恢复的作用及机制作一综述.
-
氧化型低密度脂蛋白对人肝窦内皮细胞舒张功能及窗孔的影响
目的：探讨氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)对人肝窦内皮细胞(HLSECs)舒张功能和窗孔调节的影响。方法用100 mg/L浓度的oxLDL刺激HLSECs（oxLDL组），培养24 h，另设正常对照组（不经处理）。使用实时定量聚合酶链反应(RT?PCR)和Western blotting法从基因和蛋白水平检测2组HLSECs中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、内皮素1（ET?1）和小凹蛋白（Cav?1）的表达水平，扫描电镜观察100 mg/L oxLDL干预下HLSECs窗孔分布、数量和直径的变化特点。采用t检验进行数据分析。结果与对照组相比，oxLDL组HLSECs ET?1和Cav?1 mRNA表达分别升高了2.62倍和2.49倍(2.62±0.32比1.00±0.00和2.49±0.27比1.00±0.00)，而eNOS mRNA表达则下降了45%(0.55±0.12比1.00±0.00)；ET?1和Cav?1蛋白表达升高了2.31倍和2.96倍(1.34±0.10比0.58±0.03和0.71±0.03比0.24±0.02)，而eNOS蛋白表达则降低了54%(0.34±0.02比0.74±0.04)，两组间差异均有统计学意义（t=32.54、26.62、6.29、16.71、22.09、15.20，均P<0.05）。与对照组比较，oxLDL组HLSECs窗孔分布稀疏，数量减少，窗孔直径变小，有的区域甚至消失。结论 oxLDL可上调HLSECs ET?1和Cav?1的表达、下调eNOS的表达，引起HLSECs舒张功能失调和发生去窗孔化。
-
氧化型低密度脂蛋白诱导肝窦内皮细胞植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的表达
目的：探讨植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）受体1（LOX-1）在肝窦内皮细胞（HSECs）中的表达和ox-LDL对其表达的调控作用。方法使用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting法从基因和蛋白水平检测未经处理HSECs 中LOX-1的表达。应用不同浓度ox-LDL（0、20、40、60、80和100 mg/L）对HSECs作用24 h并应用80 mg/L ox-LDL对HSECs作用不同时间（0、12、24和48 h），作用后实时定量PCR检测HSECs内LOX-1 mRNA的表达水平，Western blotting法检测细胞内LOX-1蛋白表达。给予80 mg/L ox-LDL干预组多聚肌苷酸250 mg/L作用24 h后，测定LOX-1 mRNA和蛋白的表达。采用单因素方差分析及t检验进行数据分析。结果 LOX-1 mRNA和蛋白在HSECs中均有表达。20～80 mg/L ox-LDL组HSECs中LOX-1 mRNA、蛋白表达水平随ox-LDL剂量增加而升高，与剂量有明显相关性（F＝38.7、3.43，均P＜0.05）。与80 mg/L ox-LDL组相比，100 mg/L ox-LDL 组 LOX-1 mRNA、蛋白表达下降，差异有统计学意义（ t ＝23.75、18.26， P ＜0.05）。80 mg/L ox-LDL对HSECs作用时间在0～24 h时，随着时间延长，LOX-1 mRNA、蛋白表达递增，与ox-LDL作用时间有明显相关性（F＝2.36、0.33，均P＜0.05）。与作用24 h相比，作用48 h组HSECs中LOX-1 mRNA、蛋白表达下降（t＝69.21、36.27，均P＜0.05）。与80 mg/L ox-LDL组相比，多聚肌苷酸组中LOX-1 mRNA和蛋白表达降低，两组差异均有统计学意义（ t＝54.93、28.19，均P＜0.05）。结论LOX-1存在于HSECs。在一定浓度和时间范围内，ox-LDL对HSECs LOX-1的调控作用具有时间和浓度依赖性，而多聚肌苷酸可部分抑制这种效应。
-
肝窦内皮功能障碍：糖尿病肝脏微循环障碍合并脂肪肝的推手
2型糖尿病(T2DM)常常合并有肝脏微血管病变和肝脏炎症，是非酒精性脂肪肝（NAFLD）形成的独立危险因素[1]。近年来，T2DM患者NAFLD患病率逐年上升，据新研究报道，T2DM患者NAFLD的患病率为42.6%～76.0%，约33%的NAFLD患者合并有糖尿病[2]。微循环障碍是NAFLD形成的重要原因之一，而肝窦内皮细胞(LSEC)功能障碍是肝脏微循环障碍的始动和关键环节[3]。LSEC是构成肝窦壁的主要成分，具有提供多窗孔屏障、清道夫、保持肝星状细胞(HSC)的静止状态及介导肝损伤的自我修复等生理功能[4]。LSEC的窗孔结构是区别于血管内皮细胞的特有标志，在调节肝窦血流与周围组织的物质交换中起着重要作用。LSEC功能障碍可造成肝窦血流异常、脂质代谢紊乱、肝窦毛细血管化及肝细胞代谢障碍等，引起肝脏结构和功能异常。糖尿病状态下持续的高糖和脂毒性加剧了LSEC功能的损伤，因此，LSEC功能障碍在NAFLD形成中的作用不容忽视。本文着重分析糖尿病患者LSEC功能在肝脏微循环障碍及NAFLD的发生、发展中作用机制。
-
冷保存供肝肝移植大鼠肝窦内皮细胞损伤机制的研究
目的 探寻肝移植大鼠肝窦内皮细胞(SEC)损伤的详细过程、方式及机制,为冷保存再灌注损伤的保护研究开辟新的途径.方法 雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=6)、UW 1 h肝移植组(n:48)、Uw 12 h肝移植组(n=48).大鼠原位肝移植采用双袖套法,分别于术后不同时相点采取血液及组织标本,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)及透明质酸(HA)水平;HE染色观察肝脏病理学变化;TUNEL法检测凋亡,免疫组化法检测Bcl-2及Cleaved Caspase-3的表达状况.结果 UW 1 h、UW 12 h组肝移植后血清ALT、HA均较假手术组明显升高(P<0.05),UW 12 h组又明显高于Uw 1 h组(P<0.05).UW 12 h组ALT水平于术后6 h达高峰,而HA水平却在术后1 h、24 h呈双峰表现.Uw 12 h组首先出现SEC的凋亡继而出现肝细胞的坏死,且UW 12 h组细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)明显高于UW 1 h组(P<0.01).两组大鼠SEC的AI均于术后6 h达高峰,与血中ALT的高峰时相点一致.肝移植术后Bcl-2表达明显减弱(P
-
肝星状细胞、相关因子与肝纤维化关系的研究进展
目前多数认为肝纤维化的形成机制是致病因子造成肝细胞损伤,引起肝Kupffer细胞(KC)、血小板、肝窦内皮细胞和肝细胞激活,分泌多种细胞因子(cytokine),与某些化学递质共同作用于肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC),使其激活,转化为肌成纤维细胞(myofibroblast, MFB),通过旁分泌与自分泌作用,使HSC增殖,合成大量的细胞外基质(extracellular matrix, ECM),以致其在肝内大量沉积,肝纤维化逐渐形成.即表明,HSC活化是各种病因肝纤维化发生的共同中心环节[1].因此,HSC、相关因子与肝纤维化的关系极为密切,阐明其关系,有助于开发以HSC为靶点的抗肝纤维化措施.笔者就其关系综述如下.
