载脂蛋白E检测在病理科的应用与指导意义

载脂蛋白E在人体肝脏和脂肪代谢中起着重要作用,可修复组织和调节免疫.载脂蛋白E基因型别与高脂血症、肝病、冠心病及寿命长短等有关.随着病理科室在临床诊断中作用越来越重要,人们对病理科的要求不再仅是为临床确诊提供直接依据,而是需要对未发病状态和未来情况提供诊疗依据.本研究简要介绍载脂蛋白E基因型检测法在病理科的应用方法和引入该技术对病理科发展的展望.

微卡治疗难治性煤工尘肺结核病人的疗效观察

微卡是"冻干治疗用母牛分枝杆菌菌苗"的商品名,系由母牛分枝杆菌经高温灭活纯化后制成的免疫调节剂,是20世纪90年代被世界卫生组织(WHO)唯一推荐的辅助抗结核化疗的免疫制剂[1].其在单纯肺结核病人中的治疗作用已有报导[2].本文将微卡应用于难治性煤工尘肺结核患者的辅助治疗,现将结果报告如下.

梅毒螺旋体Tp0453和TpN47抗原的制备及应用

目的 表达纯化梅毒螺旋体Tp0453和TpN47蛋白,评价2种蛋白的检测效果,并建立一种新的梅毒抗体检测方法.方法 以梅毒螺旋体Nichols菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增Tp0453和TpN47蛋白基因,构建原核表达载体;转化表达菌株后经IPTG诱导表达,并优化表达条件,大规模培养后采用N2+亲和柱纯化目的 蛋白;纯化蛋白用过碘酸钠法进行HRP标记,采用双抗原夹心ELISA法分别评价两种蛋白的检测效果,在此基础上,按比例混合两种抗原,并建立双抗原夹心ELISA检测法.结果 构建了Tp0453和TpN47蛋白的原核表达载体,在低温(27℃)和低剂量IPTG(0.1 mmol/L)诱导条件下,有效的实现了Tp0453和TpN47蛋白的可溶性表达.采用Ni2+亲和纯化方法成功纯化出了高纯度的Tp0453和TpN47融合蛋白,ELISA检测结果显示Tp0453比TpN47具有更强的反应性,两种蛋白混合,建立的双抗原夹心ELISA检测法通过血清学试验表明具有很好的敏感度和特异性.结论 实现了梅毒螺旋体Tp0453和TpN47蛋白快速高效的表达,并结合2种抗原优势,建立了一种高效的梅毒双抗原夹心ELISA检测方法.

7种结核分枝杆菌重组蛋白的纯化及血清学特性

目的 分离纯化结核分枝杆菌重组蛋白38-kDa、16-kDa、Mtb81、ESAT-6、CFP10、Rv3425、Rv3391,并比较7种蛋白的免疫学特性,评价其在结核血清学诊断中的应用价值.方法 利用间接酶联免疫吸附试验评价确诊结核病人、非结核病人、健康人血清中7种重组蛋白的抗原性.结果 成功分离纯化了7种重组蛋白；酶联免疫吸附试验结果表明,7种抗原均能有效区分确诊结核病人、非结核病人和健康人,其中阳性率高的是ESAT-6为47.3％,特异性高的是Rv3391为98.3％.联合抗原中阳性率和特异性高的是CFP10+ ESAT-6+ Rv3391抗原组合.结论 单一抗原中ESAT-6具有较高的免疫原性,联合抗原中CFP10+ ESAT-6+ Rv3391抗原具有很高的阳性率和特异性,在结核诊断具有很高的诊断潜力.

GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白的表达和纯化鉴定

目的 通过杆状病毒表达系统,获取高纯度GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白,为制备抗GⅡ.3型诺如病毒单克隆和多克隆抗体提供免疫原.方法 将GⅡ.3型诺如病毒衣壳蛋白基因片段修饰后插入pHTA表达载体中,经测序鉴定,将鉴定正确的重组质粒转化到MAX Efficiency(R)DH10BacTM感受态细胞中,获取表达杆粒并转染SF9细胞,表达GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白.重组蛋白用Ni-NTA His蛋白亲和柱纯化,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹(Western blot)方法鉴定.结果 SDS-PAGE和Western blot结果表达了分子量约为60 kDa的重组蛋白,动物试验表明重组蛋白具有较好的免疫原性,为制备抗GⅡ.3型诺如病毒单克隆抗体和多克隆抗体、建立相应的免疫学检测方法奠定了基础.结论 构建了GⅡ.3型诺如病毒衣壳蛋白表达载体,并获得GⅡ.3型诺如病毒重组衣壳蛋白.

小鼠PDL1胞外区的克隆、表达及生物学效应研究

目的:克隆小鼠PDL1膜外区(简称mPDL-1IgV)基因,构建原核表达载体,检测其表达和生物学活性.方法:提取小鼠脾细胞总RNA,采用RT-PCR克隆mPDL-1IgV基因,并将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建原核表达质粒pET28a(+)/rap.DL-1IgV,转化大肠杆菌DH5et,进行PCR和双酶切鉴定,并测序.筛选阳性菌落,提取质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Westemblot检测分析,同时纯化mPDL-1 IgV蛋白,进行生物学活性检测.结果:从小鼠脾细胞总RNA中成功获得mPDL-1IgVcDNA克隆,重组质粒pET28a(+)/mPDL-1IgV构建正确.转化pET28a(+)/mPDL-1 IgV的E.coli BL21(DE3)成功诱导性表达重组小鼠PDL-1胞外区蛋白,并纯化mPDL-1IgV蛋白,对其进行了复性和浓缩,复性后的蛋白显示出良好的生物学活性.结论:成功地克隆、表达和纯化了小鼠PDL1胞外区蛋白,为进一步研究其功能提供了条件.

氢化物原子荧光法测定牛奶中砷和锑

目前,砷的测定方法主要有Ag-DDC法(二乙基二硫代氨基甲酸银法)和原子荧光法[1],Ag-DDC比色法操作繁琐,所用试剂需纯化并有毒性;锑的测定方法主要有孔雀绿分光光度法和石墨炉原子吸收法[1],前者操作繁琐,条件严格,而且还需要毒性很大的苯进行提取,使该方法难以推广,后者灵敏度较低.

胎鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养、纯化与鉴定

目的 探讨胎鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养、纯化与鉴定的方法,为胎儿和早产儿骨骼肌发育程序化的研究提供实验基础. 方法 Sprague-Dawley大鼠孕18 d时剖宫取出胎鼠,手术显微镜下取胎鼠四肢骨骼肌肌肉,采用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶两步消化法分离胎鼠骨骼肌卫星细胞,差速贴壁法进行纯化.原代培养的生长培养基为(DMEM/F12+ 20％ FBS+ 10％ HS+5 ng/ml bFGF).分化培养基为(DMEM/F12+ 2％ HS).CCK-8法绘制胎鼠骨骼肌卫星细胞生长曲线图,细胞免疫组化染色鉴定纯化后细胞的肌源性标志蛋白Desmin,观察分化培养基条件下骨骼肌卫星细胞的成肌分化特性. 结果 胎鼠原代骨骼肌卫星细胞在培养的第3天进入对数生长期,5～6d达增殖平台期;纯化后的细胞90％以上表达结蛋白(Desmin).在分化培养基的诱导下细胞之间相互融合形成具有自发节律性收缩特性的多核肌管. 结论 采用消化法和差速贴壁法分离纯化胎鼠骨骼肌卫星细胞,能够获得高活性和高纯度的具有成肌分化能力的骨骼肌卫星细胞.

次氯酸钠对乙型肝炎表面抗原的破坏作用

用双博XD-150型消毒水雾发生器电解含5 g食盐的400 ml水,生成次氯酸钠溶液(有效氯含量为810 mg/L,pH值为8.68).用含5%小牛血清的0.01 mol/LPBS,将纯化HBsAg(北京北方生物技术研究所提供)稀释至含量为50 000 ng/ml的HBsAg悬液.

评价肾综合征出血热疫苗效果的攻击毒株的选择

肾综合征出血热(HFRS)是一种严重危害人体健康的自然疫源性疾病.我国占全球发病总数的90%,病死率约为3%～10%,波及全国30个省市和自治区.在各种预防HFRS的措施中,疫苗是一种特异和有效的预防手段.迄今为止,本实验室已经研究出HFRS Ⅰ型、Ⅱ型和双价及双价纯化沙鼠肾灭活疫苗,并已取得正式生产文号,为预防HFRS起到了重要的作用[1,2].

肾综合征出血热疫苗的纯化与人体观察

肾综合征出血热(HFRS)足由汉滩病毒引起的急性传染病,世界各地均有发生.用长爪沙鼠肾原代细胞培养HFRS病毒,经β-丙内脂灭活病毒,研制成功汉坦型、汉城型及汉坦型加汉城型三种疫苗,已取得很好的预防效果[1,2].为使产品的质量进一步提高,进行了疫苗纯化的研究.

进口和国产Vero细胞狂犬病疫苗安全性分析

近年我国已推广应用国产经Vero传代细胞培养制成的纯化狂犬病疫苗.我们于2002年2～12月按<国际临床试验规范>(GCP)方法对进口和国产Vero细胞狂犬病疫苗的安全性进行了临床试验观察.

国产纯化Vero细胞狂犬病疫苗暴露前免疫效果观察

狂犬病一般而言发病潜伏期很短,即使在暴露后马上接种狂犬病疫苗和被动免疫制剂,发病的概率仍很高.因此,WHO建议对于以犬为主要传染源的狂犬病疫区人群,应使用人用狂犬病疫苗进行暴露前免疫,并且在1987年推荐了纯化Vero细胞狂犬病疫苗(PVRV)用于暴露前和暴露后接种[1].为评价国产纯化Vero细胞狂犬病疫苗的暴露前免疫效果,开展此项临床观察.

纯化流行性乙型脑炎灭活疫苗临床观察及免疫原性研究

流行性乙型脑炎(乙脑)在亚洲是病毒性脑炎中严重的一种,每年约有5万临床病例,有20%死亡,其中大部分是10岁以下儿童.我国每年有8000例以上的病例发生,每年因乙脑造成的死亡和残疾达数千人[1].目前对于乙脑还无特异的治疗药物,接种乙脑疫苗仍然是重要的预防措施.我们于2003-2004年对纯化地鼠肾细胞乙脑灭活疫苗进行临床副反应和免疫原性观察研究,现将结果报道如下.

广州市番禺区2000～2001年被动物致伤者免疫效果监测

广州市番禺区自1990年以来,虽已无狂犬病发生,但每年因犬类等动物咬伤人的数量有不断增多的趋势,从而增加了发生狂犬病的危险.自1990年开始,开展了狂犬病疫苗免疫效果的监测.监测中发现,老年人的免疫效果一直不理想.2001年引入法国进口纯化的Vero细胞培养狂犬病疫苗--维尔博疫苗,主要针对老年人进行暴露后接种.现将番禺区2000～2001年50岁以上人群狂犬病疫苗接种后的抗体检测情况报告如下.

纯化鸡胚细胞狂犬病疫苗瑞必补尔TM临床试验概述

国产新型人用狂犬病疫苗临床观察及免疫学效果评价

　　 1994年后，我国部分狂犬病疫苗的生产厂家在中国药品生物制品检定所的倡议下，开始研究 纯化狂犬病疫苗，现完成新药临床观察的有十余家企业。笔者就 这些疫苗的临床效果进行综合评价。　　1.纯化原代地鼠肾细胞狂犬病疫苗：近几年来我们对已完成的9家企业的9批纯化地鼠肾细胞 狂犬病疫苗的临床观察进行综合分析。这些临床研究由中国药品生物制品检定所主持，邀请 地方防疫站参加现场工作，人体血清抗体水平测定和总结由中国药品生物制品检定所完成。 这9批疫苗除第9号为未加佐剂疫苗，其余均为加入氢氧化铝佐剂的疫苗。临床研究受试人群 基本上随机选择，不分性别年龄。有的临床研究依新药临床批件要求设立对照组(多为法国 产Vero细胞狂犬病疫苗，商品名维尔博)。研究一般分两阶段，第一阶段注射少量受试者， 观察无严重的副反应，再进行第二阶段的扩大观察。第二阶段通常分3组即全量组、减半剂 量组和大人群观察组，前两组采血测定免前和免疫后一针2周后的人血清抗狂犬病抗体水 平(每组约30人)。大人群观察组不采血，只观察副反应。人血清抗体阳转标准为WHO规定 的≥0.5 IU/ml，低于此值则为阴性。

何首乌根际土壤真菌的分离纯化与鉴定

建立何首乌根际土壤真菌菌种库,为筛选具有生物转化活性菌株提供菌种资源,为确定适用于何首乌栽培的菌肥组成提供理论依据.通过纯培养的方式分离、纯化何首乌根际土壤中的真菌菌株,经过分子生物学鉴定确定该真菌的种属,其中根霉属真菌能产生一系列的有机酸,从而对何首乌的生长起到保护和促进生长作用.

百里香叶中酸性多糖的纯化及其生物活性

丁香中抗血栓物质的纯化与特征