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脂多糖促进大鼠肝星状细胞系HSC-T6细胞自噬
目的 研究脂多糖(LPS)对大鼠肝星状细胞系HSC-T6自噬的影响及NF-κB通路在其中的作用.方法 1)常规培养的HSC-T6细胞以不同质量浓度(0、0.01、0.1、1和10 mg/L)的LPS分别处理不同时间(0、3、6、12、18和24 h)后,Western blot检测细胞内微管相关蛋白轻链Ⅱ(LC3Ⅱ)及Beclin1含量;2)常规培养的HSC-T6细胞随机分为对照组、LPS组、PDTC组、LPS+PDTC组、PMA组和LPS+PMA组,各组经相应处理后,Western blot检测各组LC3Ⅱ及Beclin1含量;免疫荧光法观察NF-κB P65细胞内分布情况;比色法检测各组细胞培养上清羟脯氨酸(Hyp)含量;ELISA检测细胞培养上清层黏蛋白(LN)及透明质酸(HA)含量.结果 经LPS处理后HSC-T6细胞中LC3Ⅱ及Beclin1含量增加且在LPS质量浓度为0.1 mg/L作用6 h达到峰值,同时细胞培养上清中肝纤维化指标Hyp、LN和HA含量明显增加(P<0.05);经PDTC预处理后,LPS刺激的HSC-T6中LC3Ⅱ及Beclin1含量增加,上清中Hyp、LN和HA含量明显降低(P<0.05);而经PMA预处理则LC3Ⅱ、Beclin1含量降低而Hyp、LN和HA含量增加(P<0.05).结论 LPS可促进HSC-T6细胞自噬及NF-κB通路的活化,NF-κB的活化可能抑制HSC-T6细胞自噬.
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二烯丙基三硫通过NF-κB抑制脂多糖诱导小鼠肺组织IL-1β表达
目的 探讨核因子-κB(NF-κB)在二烯丙基三硫(DATS)抑制脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)小鼠IL-1β表达中的作用.方法 小鼠随机分为对照组、ALI组、DATS组、DATS预防组和DATS治疗组.RT-PCR检测肺组织中IL-1β mRNA表达.电泳迁移率改变(EMSA)检测肺组织NF-κB活性,Western blot检测肺组织中磷酸化及非磷酸化IκB的表达.结果 ALI组小鼠肺组织中IL-1β mRNA表达明显升高(P＜0.01),NF-κB活性及磷酸化IκB表达也明显高于对照组(P＜0.05).DATS预防组可显著抑制肺组织中IL-1β mRNA表达(P＜0.05)、NF-κB活性及磷酸化IκB表达(P＜0.05),但DATS治疗组的抑制效果不明显.结论 DATS可通过抑制LPS诱导的IκB磷酸化及随后的NF-κB活化,进而抑制ALI小鼠肺组织IL-1β mRNA表达,这是DATS发挥抗ALI作用的信号传导机制之一.
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RhoA介导凝血酶或脂多糖诱导内皮细胞株单层通透性增高
目的探讨RhoA在凝血酶或脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)单层通透性改变中的作用.方法用免疫荧光和改良的Boydon小室分别检测HUVECs F-肌动蛋白和单层通透性;用Western blot和免疫组化分析HUVECs内RhoA的表达;用RT-PCR检测RhoA mRNA表达.结果HUVECs经凝血酶或LPS处理后,F-肌动蛋白解聚,细胞周边形成应力纤维,HUVECs单层通透性增高;RhoA蛋白和mRNA表达上调;Rho激酶抑制剂Y-27632能明显缓解上述变化.结论RhoA参与凝血酶或LPS诱导的HUVECs的F-肌动蛋白的重构和单层通透性的改变.
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LPS触发的TLR4对NF-κB和IRF3信号通路的调控差异
目的 探讨脂多糖(LPS)触发的Toll样受体4(TLR4)对NF-κB和干扰素调节因子3(IRF3)信号通路的调控差异.方法 LPS刺激小鼠原代腹腔巨噬细胞,用免疫荧光法检测TLR4及两种转录因子p65及IRF3的定位,用Western blot方法检测转录因子p65和IFR3的磷酸化水平.结果 巨噬细胞经LPS刺激30 min内,细胞膜上的TLR4荧光强度增加(P<0.01),胞质中TLR4荧光强度显著增加(P<0.01),且与早期内体抗原1(early endosome an-tigen 1,EEA1)共定位;当LPS刺激90和180 min时,胞膜和胞质内的TLR4信号均显著下降(P<0.01),与EEA1共定位的信号也明显减少(P<0.01).静息状态下,TLR4的下游信号通路分子p65和IRF3的荧光信号均出现在胞质中;LPS刺激后,两者的荧光信号在细胞核中逐渐增加(P<0.05),但p65荧光信号比IRF3增强得更早,且更持久.p65磷酸化的修饰也明显早于IRF3,且持续时间更长.结论 TLR4活化后的定位变化导致其下游IRF3信号通路的传递时间明显延后,且比NF-κB信号通路短暂.
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MAPK和NF-κB上调脂多糖诱导的小鼠肺微血管内皮细胞Toll-like受体4的表达
目的 观察MAPK和NF-κB在经脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)Toll-like受体4(TLR4)表达增强中的作用.方法 分离培养PMVECs.不同浓度的LPS与PMVECs共培养2 h,或与LPS(100 μg/L)作用不同时间.用ELISA法检测培养上清液中TNF-α含量.分别用ERK抑制剂PD98059和P38MAPK抑制剂SB203580或NF-κB抑制剂PDTC进行干预.用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TLR4和TNF-αmRNA.用Western-blot检测ERK/P38 MAPK和核蛋白NF-κB的表达.结果 在LPS浓度为50～500μg/L时,作用于PMVECs 2 h,或LPS 100 μg/L作用不同时间时,培养上清液中TNF-α含量呈剂量和时间依赖性显著增加(P＜0.01).PMVECs表达TNF-α及TLR4 mRNA增加,6 h时达高峰.分别用上述抑制剂均可缓解上述变化,而同时联合使用PD98059和SB203580则进一步增强该抑制作用.上述抑制剂分别缓解LPS诱导的PMVECs表达ERK/P38 MAPK和NF-κB蛋白增强.结论 MAPK和NF-κB上调给脂多糖诱导的小鼠PMVECs TLR4的表达.
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静脉注射脂多糖上调小鼠肺及肝CD14和Toll-like受体4表达
目的观察静脉注射脂多糖(lipopolysacchafide,LPS)致小鼠肺、肝组织及血液中LPS受体CD14、Toll-like receptor 4(TLR4)表达的变化.方法BALB/C小鼠随机分为5组,尾静脉注射LPS(7 mg/kg),分别于注后0、2、6、12和24 h取血及肺、肝组织.采用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western Blot法分别检测肺和肝组织中CD14和TLR4 mRNA及蛋白表达,血清CD14(sCD14)蛋白表达.结果CD14和TLR4 mRNA在肺、肝组织中固有表达,LPS可使肺组织CD14和TLR4表达明显上调(P＜0.05),高峰出现在2-6 h(P＜0.05),24 h降至基础水平;而肝组织的变化明显滞后于肺,12 h达高峰(P＜0.05),24 h仍高于基础水平(P＜0.05).蛋白的变化与mRNA基本一致.血清CD14的表达则随时间延长而增加.结论LPS进入体内可诱导肺、肝和血液中内毒素受体CD14和TLR4的表达.不同组织中内毒素受体表达的时间差异表明肺是内毒素血症中较早受损的器官,肺组织损伤可能进一步引发肝损伤.
关键词： 脂多糖 CD14 Toll-like receptor4 小鼠 -
LPS上调大鼠HIF-1和GLUT表达
目的 探讨脂多糖(LPS)致大鼠内毒素血症早期,葡萄糖转运体(GLUT)家族在脑、心和肝组织等表达水平及低氧诱导因子-1(HIF-1)调控的相关性.方法 雄性SD大鼠分为对照组(腹腔注射0.9％氯化钠注射液)和给药组(腹腔注射2 mg/kg LPS),每组6只.测定给药后0～24h体温.ELISA法检测血清IL-1水平.RT-PCR法测定GLUT家族mRNA表达.Western blot法检测GLUT1和HIF-1蛋白表达.结果 在大鼠脑、心及肝等组织中,GLUT1和GLUT4均有表达;GLUT2在脑和肝组织中有表达;GLUT3仅在脑组织特异性表达.LPS作用24h可引起大鼠体温升高,血清IL-1水平上调(P＜0.05).LPS可上调脑组织GLUT1 mRNA水平和蛋白翻译水平(P＜0.01);同时LPS可促进脑组织HIF-1蛋白稳定表达(P＜0.001).结论 LPS促进大鼠HIF-1稳定表达,上调GLUT1表达及调控糖代谢.
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小鼠动情周期与脂多糖诱导肝、肺组织病理变化的关系
目的探讨小鼠动情周期与脂多糖(LPS)所致肝、肺组织病理损伤的关系及可能的机制.方法小鼠分别于动情期、动情后期、动情间期等不同阶段腹腔注射亚致死量(12.5 mg/kg)LPS,观察LPS注射后肝、肺病理的损伤,并于LPS注射后0、5、10、20 h同步测定血浆E2、P及血浆和卵巢TNF-α、EGF含量,分析它们之间的关系.结果小鼠于动情间期血浆E2和P含量低,LPS组与对照组比较血浆E2和P含量均于10 h明显下降(P＜0.05和P＜0.01),并持续至20 h(两者P＜0.01);血浆和卵巢TNF-α于5 h明显升高(P＜0.05),并持续至20h(两者P＜0.01);血浆和卵巢EGF于5 h明显下降(P＜0.05)并分别持续至20 h(P＜0.01)和10 h(P＜0.05).与动情期和动情后期LPS组比较,动情间期肝、肺组织病理损伤程度较重,血浆E2、P含量明显下降(P＜0.01),血浆和卵巢中TNF-α含量升高(P＜0.01),而EGF含量下降(P＜0.05).结论动情期和动情后期高水平的E2和P对LPS造成的组织损害有保护作用,其机制可能与TNF-α产生减少和EGF产生升高有关.＃
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内毒素诱导退变人椎间盘髓核细胞凋亡
目的 观察内毒素(LPS)刺激退变人椎间盘髓核细胞前后,核因子kappB(NF-κB)的活化与细胞凋亡的相互关系.方法 体外培养退变的人椎间盘髓核细胞,采用CCK-8法测定LPS在不同浓度下(100、200、500和1 000 μg/mL)对髓核细胞增殖影响,并筛选合适的刺激浓度;设立空白对照组,单纯LPS(500 μg/mL)刺激组,NF-κB 抑制剂(BAY11-7082)+LPS(500 μg/mL)刺激组,以Hochest33258染色以及AnnexinV-PI双标法检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、PARP、NF-κB 结合蛋白P65以及磷酸化P-P65的表达.结果 CCK-8实验结果 显示当LPS浓度为500 μg/mL能明显降低细胞的活力.与空白对照组相比,单纯LPS刺激组细胞凋亡率上升(P<0.05),P-P65表达明显增加,其凋亡蛋白活化型caspase-3和PARP降解产物表达也增高(P<0.05).而与单纯LPS刺激组相比,NF-κB 抑制剂+LPS刺激组细胞凋亡率下降(P<0.05),P-P65表达明显降低,其凋亡蛋白活化型caspase-3和PARP降解产物表达也降低(P<0.05).结论 NF-κB信号通路可能与椎间盘退变时髓核细胞凋亡的发生密切相关,值得进一步研究.
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银杏叶提取物对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的保护作用
探讨银杏叶提取物(GBE)对脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用.给大鼠静注LPS复制ALI动物模型.首先动态观察ALI的形成过程,注LPS 后2 h已形成明显的ALI.另批大鼠随机分成:对照组(静注生理盐水),LPS组(静注LPS,5mg/ kg体重), GBE+LPS组 (注LPS前三天开始每天灌胃给GBE一次,按黄酮甙8mg/kg 体重计算,当日在给LPS前2 h再给一次GBE),每组6只大鼠.注LPS或盐水后2 h收集标本,进行测定.发现:注LPS后肺湿/干重量比,肺泡灌洗液中蛋白含量及肺血管通透指数均升高(均P＜0.01);血中乳酸(LD),一氧化氮(NO),内皮素-1(ET-1), 肿瘤坏死因子-α (TNF-α)含量及血乳酸脱氢酶(LDH)活性,均有显著升高(P＜ 0.01,P＜0.001).而肺组织细胞膜Na+-K+-ATPase活性显著下降(P＜0.01).预先给予GBE 可显著缓解上述变化(P＜0.05, P＜0.01).提示 GBE在防治肺的急性炎症性疾病中有一定应用前景.
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移植骨髓间充质干细胞减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤
目的 观察移植骨髓间充质干细胞(MSCs)对脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤(ALI)的治疗修复作用.方法 全骨髓培养法培养小鼠骨髓MSCs;细胞免疫化学染色鉴定MSCs特异表面标记;小鼠咽后壁吸入LPS制造小鼠肺损伤;尾静脉注射引入MSCs;称重计算肺水肿指数;肺组织切片HE染色观察组织病理改变;ELISA检测肺泡灌洗液和肺组织匀浆中IL-1β含量;Brdu(5-Bromo-2-Deoxyuridine)标记供体MSCs,免疫组织化学染色及双染色观察移植细胞的迁移和分化状态.结果 培养的MSCs细胞表面标记CD44阳性,而造血系表面标记CD34阴性.吸入LPS后,小鼠出现典型的肺损伤病理改变,肺水肿指数和肺组织匀浆IL-1β含量明显增加.标记的MSCs移植入同种异体的肺损伤小鼠,其肺部出现标记的MSCs,并表达上皮细胞标志抗原-细胞角蛋白(CK).治疗后小鼠的肺水肿指数和肺组织匀浆IL-1β含量下降.结论 外源性MSCs移植到肺损伤小鼠体内,可迁移至肺损伤部位,并表达上皮细胞标志;移植MSCs可减轻肺水肿程度,减少炎性因子释放.
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雨蛙素及脂多糖诱导小鼠急性胰腺炎效果分析
目的 观察雨蛙素(CAE)诱导小鼠急性胰腺炎模型中胰腺及肺组织损伤时间变化规律;对比雨蛙素及脂多糖(LPS)不同给药方案诱导的小鼠急性胰腺炎模型效果.方法 雨蛙素不同给药频次以及雨蛙素联合脂多糖诱导小鼠急性胰腺炎模型,收集小鼠血浆以淀粉-碘比色法检测淀粉酶活性;取胰腺及肺组织行HE染色观察组织损伤严重程度.结果 CAE7组小鼠胰腺及肺组织损伤在4 h达高峰,24 h开始修复,5 d基本恢复正常;造模后4 h,CAE7组和CAE9组小鼠血淀粉酶活性较对照组升高[(6461± 1078)U/dl比(3093± 331)U/dl;(6821± 495)U/dl比(3093± 331)U/dl,P< 0.001],且CAE7+LPS组较CAE9组更高[(8912±465)U/dl比(6821±495)U/dl,P<0.001],CAE7组和CAE9组小鼠胰腺组织病理评分较对照组升高(4.750±0.524比0±0;4.917±0.664比0±0,P<0.001),且CAE7+LPS组较CAE9组更高(7.167±0.258比4.917±0.664,P<0.001).结论 雨蛙素50 μg/kg连续7次给药可诱导出小鼠急性胰腺炎模型,增加给药频次未见胰腺组织损伤加重,而联用脂多糖可加重急性胰腺炎模型严重程度.
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一氧化氮在脂多糖抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用
本研究采用MTT法,3H-TdR 掺入实验、分光光度计测量和免疫组织化学的方法,观察了脂多糖对离体培养SD大鼠血管平滑肌细胞殖增、DNA合成、一氧化氮产量和一氧化氮合酶表达的影响.结果发现,脂多糖可明显抑制血管平滑肌细胞的增殖和DNA合成,推测该效应可能是通过iNOS-NO-cGMP通路实现的.
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高容量血液滤过减轻脂多糖诱导犬急性肺损伤
目的 研究高容量血液滤过(HVHF)对脂多糖(LPS)诱导犬急性肺损伤(ALI)的治疗作用,并探讨其机制.方法 健康犬16条,静脉注入LPS(650 μg/kg) ,随机分为对照组(C组)和HVHF治疗组(T组).监测动脉血气.放免法测定血TNF-a、IL-6和IL一10含量,流式细胞仪测定肺组织NF-κB活性,免疫印迹法测定肺表面活性蛋白(SP-B)含量,电镜下观察肺组织病理改变.结果 动物注入LPS后Pa和PaO/FiO2下降,HVHF治疗后上述指标明显高于C组(P<0.01).治疗1 h血中TNF-α、IL-6和IL-IO的浓度即有明显下降,低于同时点C组(P<0.01).治疗4 h后,NF-κB活性度下降(P
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大鼠脑黑质区注射LPS致多巴胺能神经元及血清TNF-α的变化
目的 研究脂多糖(LPS)对黑质多巴胺(DA)能神经元的毁损情况及其与血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平之间的关系.方法 向大鼠右侧黑质立体定位注射LPS或PBS后,用免疫组化法观察DA能神经元的损伤状况,用放射免疫法测定血清TNF-α水平.结果 LPS注射后24 h右侧黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元较左侧显著减少(P<0.001),14 d达到低点,14～28 d没有明显改变;血清TNF-α水平在LPS组24 h、14 d和28 d显著高于对照组(P<0.01);LPS组大鼠的黑质TH阳性神经元存留率与其血清TNF-α水平之间存在负直线相关(P<0.05).结论 LPS注入黑质能诱导DA能神经元变性、血清TNF-α水平升高,且两者之间存在负直线相关.
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脂多糖诱导的急性肾损伤小鼠模型肾脏中JNK信号通路的激活
目的 探讨JNK信号通路激活在脂多糖(LPS)诱导的急性肾损伤(AKI)发病中的作用.方法 48只小鼠随机分为对照组和AKI组,分别检测血清尿素氮、肌酐以及胱抑素C,HE染色观察肾组织病理改变,免疫组化、West-ern blot检测肾组织p-JNK和p-c-Jun蛋白表达部位及强度,ELISA检测血中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素1β(IL-1β)水平.结果 小鼠腹腔注射LPS后,血清尿素氮、肌酐、胱抑素C均较对照组均明显升高,肾组织病理损伤呈进行性加重.正常小鼠各时间点可见p-JNK和p-c-Jun在肾小管、肾小球系膜区有微量表达.AKI组小鼠p-JNK及p-c-Jun在肾小管等部位大量表达.与对照组相比,AKI组p-JNK和p-c-Jun蛋白水平在1h后即开始升高,以造模4h时增高明显,30 h时逐渐下降.与之相应,血中TNF-α和IL-1β水平亦明显升高,于4h达峰值后逐渐下降.结论 JNK信号通路激活在LPS诱导的AKI发病中起重要作用,JNK信号通路活化后可诱发TNF-α和IL-1 β等炎性因子的表达,继而介导AKI的发生和发展.
关键词： 脂多糖 急性肾损伤 c-Jun氨基末端激酶(JNK) 信号通路 -
单磷酸类脂A预处理对内毒素血症小鼠丙二醛生成的影响
迄今,脓毒症休克仍旧是威胁人类生命的重要原因之一.脓毒症休克的发病原因多是由革兰氏阴性菌内毒素引起的,其发病机制非常复杂,尚无有效的治疗措施.单磷酸类脂A(Monophosphoryl Lipid A, MPLA)为脂质A的无毒衍生物,它不仅毒性小,且保留了脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)的免疫调节性[1～3].本实验旨在探讨MPLA预防性保护内毒素血症小鼠的可能机制.
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大鼠肠道缺血再灌注损伤前后血浆LPS和TNF-α的变化
为了探讨肠源性内毒素(主要成分为脂多糖,LPS)血症在继发性肝损伤中的作用,我们检测了大鼠肠道缺血再灌注损伤前后血浆LPS及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化,现将结果报告如下.
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脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞形态及酶学的影响
肺微血管内皮主要由肺微血管内皮细胞和基膜组成,与ARDS、脓毒症、免疫反应、肿瘤转移和多器官功能障碍的发生密切相关.本实验主要观察脂多糖(LPS)对大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)形态及血管紧张素转换酶(ACE)、乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响.
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脂多糖对人脐静脉血管内皮细胞的直接损伤作用
血管内皮细胞(endothelial cells,EC)炎症反应是感染性休克向不良方向演变的重要原因,有关激活剂(LPS、IL-1)导致EC活化的研究是败血症病理反应的中心课题.内毒素引起微循环EC损伤是内毒素性组织损伤的重要环节之一.本实验探讨了LPS对体外培养脐静脉EC的直接损伤作用.
