首页 > 文献资料
-
菟丝子及其主要成分黄酮对肾虚排卵障碍大鼠的影响
目的:探讨单味菟丝子(Cuscutae Semen,CS,醇提+水提总提取物)及其主要成分兔丝子黄酮(Flavones from Cuscutae Semen,FCS)对肾虚排卵障碍模型大鼠的影响.方法:48只雌性SD大鼠随机分为菟丝子高、低剂量组,菟丝子黄酮高、低剂量组,模型组和空白组,以羟基脲(600 mg·kg-1 ·d-1)灌胃建立肾虚排卵障碍模型,羟基脲灌胃后2h各组予相应药物灌胃治疗,共计8d,治疗后比较各组大鼠子宫指数、卵巢指数、血清性激素水平、成熟卵泡比例、黄体数.结果:①与正常组比较,模型组大鼠出现肾虚表现,卵巢病理切片提示排卵障碍,且大鼠血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平(3.68±1.18) pmol·L-1,(2.43 ±0.24) U·L-1,(2.84±1.05)U·L-1明显低下(P＜0.05);②与模型组比较,菟丝子高剂量组大鼠子宫指数、卵巢指数、成熟卵泡比例、血清E2,FSH水平(5.49±1.72) pmol· L-,(2.70±0.22)U·L-1明显增加(P＜0.05);菟丝子黄酮低剂量组大鼠子宫指数、卵巢指数、成熟卵泡比例、血清E2、FSH、LH水平(6.25±2.23) pmol·L-1,(2.78±0.14) U·L-1,(3.65±0.78) U·L-1明显增加(P＜0.05).菟丝子黄酮低剂量组血清LH水平(3.65 ±0.78) U·L-1明显高于菟丝子高剂量组(3.10±0.60)U·L-1(P＜0.05).结论:菟丝子可有效改善羟基脲引起的肾虚排卵障碍,这种影响可能基于其主要成分黄酮的作用.
-
菟丝子黄酮干预雷公藤多苷所致雄性幼鼠生殖损伤
目的:研究不同剂量菟丝子黄酮干预雷公藤多苷(GTW)所致雄性幼鼠生殖损伤的影响.方法:雄性SD幼鼠80只,分2批喂养,每批40只.每批随机分为5组,空白组[ig羧甲基纤维素钠(CMC-Na)],多苷组(ig GTW,9 mg·kg-1 ·d-1),黄酮高、中、低剂量组(ig菟丝子+ GTW,0.2 g·kg-1 +9 mg·kg-1,0.1 g·kg-1 +9 mg·kg-1,0.05 g·kg-1 +9 mg·kg-1),持续给药4,12周,分别在停药时麻醉处死留取睾丸组织,称重检测脏器指数,苏木素伊红(HE)染色观察睾丸组织病理变化,实时荧光定量PCR (Real-time PCR)及免疫印迹法(Western blot)检测雄激素受体(AR)mRNA及蛋白表达.结果:给药4,12周时多苷组大鼠体重、睾丸质量较空白组显著降低(P＜0.01);黄酮组大鼠体重、睾丸质量较多苷组显著提高(P＜0.01);黄酮中剂量组大鼠体重、睾丸质量较黄酮高、低剂组明显增高(P＜0.05).给药4周时,多苷组大鼠睾丸曲细精管间距变宽、曲细精管扭曲、水肿,严重者曲细精管破裂,间质细胞散乱,精原细胞、精母细胞明显减少,12周时损伤程度更重;黄酮组中剂量上述病理损伤较轻.给药4,12周后,多苷组大鼠睾丸组织AR mRNA及蛋白表达明显下调(P ＜0.05,P＜0.01),黄酮中剂量可以明显提高大鼠睾丸组织AR mRNA及蛋白表达(P ＜0.05,P＜0.01).结论:GTW可以明显降低大鼠体重、睾丸质量;下调睾丸组织AR mRNA及蛋白水平表达;GTW对雄性大鼠睾丸组织有明显的损伤作用,且随剂量的增加和时间延长损伤程度越重;菟丝子黄酮中剂量组保护这种损伤作用更加显著.
-
补肾中药对雷公藤多苷所致生殖损伤雄性幼鼠血清睾酮及睾丸组织P450scc的影响
目的:研究雷公藤多苷(glycosides of Tripterygium wilfordii,GTW)对幼年雄性大鼠血清睾酮及睾丸组织中睾酮生成酶细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(cyto-chrome P450 side chain cleavage,P450scc)的影响以及补肾中药(菟丝子黄酮、六味地黄丸)对其损伤的干预作用.方法:3～4周龄SD雄性幼鼠48只,随机分为4组:空白组(CMC-Na)、多苷组(9 mg·kg-1·d-1)单独ig,六味组(六味地黄丸1g·kg-1·d-1 +GTW9 mg· kg-1·d-1),黄酮组(菟丝子黄酮0.1 g·kg-1·d-1+GTW 9mg · kg-1·d-1)混合ig,持续给药12周后,处死大鼠留取血清和睾丸组织,采用放免法检测血清睾酮浓度；采用RT-PCR和Western blot检测睾丸组织中p450scc在基因和蛋白水平的表达.结果:GTW组与空白组相比可以明显降低血清睾酮(P＜0.01)；六味组与多苷组相比可以明显提高血清睾酮(P＜0.05)；在蛋白水平GTW与空白组相比可以明显降低睾丸组织P450scc(P ＜0.05)；在基因水平GTW组与其他组比较无显著性差异.结论:GTW对幼年大鼠生殖系统有一定损伤作用；六味地黄丸可以通过提高雄鼠血清睾酮水平而达到保护生殖损伤的作用.
-
菟丝子黄酮对雷公藤多苷所致生殖损伤的雄性幼鼠睾丸组织中表皮生长因子表达的影响
目的:研究雷公藤多苷(GTW)对幼年大鼠睾丸组织表皮生长因子(EGF)表达的影响以及菟丝子黄酮的干预作用.方法:3周龄SD雄性幼鼠48只,随机分为4组:空白组,多苷组,六味组(六味地黄丸+GTW),黄酮组(菟丝子黄酮+GTW),持续给药12周后,应用原位杂交及Western Blot法检测各组动物睾丸组织EGF mRNA及EGF蛋白表达.结果:GTW可以明显降低EGF mRNA和蛋白的表达,多苷组与空白组比较有显著性差异(P＜0.05);菟丝子黄酮可以明显升高EGF mRNA和蛋白的表达,黄酮组与多苷组比较有显著性差异(P＜0.01).结论:GTW对幼年大鼠睾丸组织EGF mRNA及EGF蛋白表达有一定的抑制作用,菟丝子黄酮能够提高EGFmRNA及EGF蛋白表达量而起到保护GTW所致的雄性幼鼠生殖损伤作用.
关键词： 菟丝子黄酮 雷公藤多苷 睾丸组织 表皮生长因子mRNA 表皮生长因子蛋白 -
菟丝子黄酮通过调节Wnt/β-catenin信号通路干预去卵巢大鼠骨代谢的机制研究
目的 探讨菟丝子黄酮基于Wnt/β-catenin信号通路干预去卵巢大鼠骨代谢的作用机制.方法 将100只健康大鼠随机分为假手术组、模型组、实验组(菟丝子黄酮高剂量组、中剂量组及低剂量组),每组20只.模型组和实验组在输卵管壶腹处进行结扎,然后切除两侧卵巢;假手术组仅行开腹手术.实验组给予相应剂量的菟丝子黄酮混悬液灌胃,假手术组和模型组给予等量的生理盐水灌胃.12周造模结束后,处死大鼠并取材.测定五组大鼠全身、右侧股骨近端2 cm和4～6腰椎骨的骨密度及血清 β-链蛋白(β-catenin)、骨保护素(OPG)、细胞因子Kb受体活化因子配体(RANKL)、DKK1水平.分析血清 β-catenin水平与OPG、RANKL的相关性.结果 假手术组,高、中、低菟丝子黄酮剂量实验组在全身、股骨近端2 cm及4～6腰椎骨密度上均高于模型组(P<0.05);假手术组、高中低菟丝子黄酮剂量实验组的血清 β-catenin、OPG水平高于模型组(P<0.05),假手术组、高中低菟丝子黄酮剂量实验组的血清RANKL、DKK1水平低于模型组(P<0.05);高、中、低菟丝子黄酮剂量实验组的血清 β-catenin水平均与OPG水平呈正相关(P<0.05),与RANKL、DKK1水平呈负相关(P<0.05).结论 菟丝子黄酮能够调节去卵巢大鼠Wnt/β-catenin信号通路相关因子β-catenin、OPG、RANKL、DKK1的水平,从而增加骨密度,改善骨质疏松症状.
-
补肾中药干预雷公藤多苷对原代培养卵巢颗粒细胞影响的实验研究
目的：研究补肾中药干预雷公藤多苷(GTW)对原代培养大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法：取3龄SD雌性幼鼠,采用血清药理学的方法，采用SP法检测其作用24h时对大鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2蛋白表达。结果：SP法检测Bcl-2蛋白表达结果显示，GTW组Bcl-2表达测值明显少于空白组，统计学分析有极显著性差异（P＜0.01）,提示雷公藤多苷组抑制B c l-2表达。黄酮组、六味组B c l-2表达与雷公藤多苷组相比均有极显著性差异（P＜0.01），且黄酮组表达较六味组有所增强，两组间统计学分析无显著性差异（P＞0.05）。结论：雷公藤多苷对体外培养的卵巢颗粒细胞具有一定的影响。表现在促进细胞凋亡。菟丝子黄酮和六味地黄丸能有效的延缓了颗粒细胞的凋亡。
-
补肾中药干预雷公藤多苷对原代培养卵巢颗粒细胞影响的实验研究
目的：：研究补肾中药干预雷公藤多苷(GTW)对原代培养大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法：取3龄SD雌性幼鼠,采用血清药理学的方法，采用SP法检测其作用24h时对大鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2蛋白表达。结果：SP法检测Bcl-2蛋白表达结果显示，GTW组Bcl-2表达测值明显少于空白组，统计学分析有极显著性差异（P＜0.01）,提示雷公藤多苷组抑制Bcl-2表达。黄酮组、六味组Bcl-2表达与雷公藤多苷组相比均有极显著性差异（P＜0.01），且黄酮组表达较六味组有所增强，两组间统计学分析无显著性差异（P＞0.05）。结论：雷公藤多苷对体外培养的卵巢颗粒细胞具有一定的影响。表现在促进细胞凋亡。菟丝子黄酮和六味地黄丸能有效的延缓了颗粒细胞的凋亡。
-
菟丝子黄酮对心理应激雌性大鼠海马-下丘脑-垂体-卵巢轴性激素受体的影响
生殖内分泌系统是易受应激损伤的一个系统,心理应激可引起生殖内分泌紊乱,引发生殖内分泌疾病.目前西医对此类疾病尚缺乏有效的调节手段,主要以激素替代治疗,长期应用激素均有明显的副作用,且疗效不确定,而中医药具有整体调控和多靶点、多方式调节的特点,因而对女性卵巢功能失调类疾病的防治显示出一定的优势.
-
菟丝子黄酮对应激大鼠卵巢内分泌的影响
目的观察菟丝子黄酮对心理应激引起卵巢内分泌功能降低的调节作用.方法采用声-光-电复合应激刺激制造大鼠卵巢内分泌功能降低模型,观察菟丝子黄酮对模型大鼠血清E2,P水平,肾上腺抗坏血酸含量以及垂体、卵巢、子宫重量的影响.结果菟丝子黄酮明显提高模型大鼠血清E2,P水平,增加垂体、卵巢、子宫的重量,但对肾上腺抗坏血酸含量没有明显的影响.结论菟丝子黄酮能够明显改善卵巢内分泌功能.
-
菟丝子黄酮的研究近况
菟丝子黄酮在防治妇科内分泌疾病、男性性功能障碍、更年期综合征以及老年性心血管疾病、脂质代谢紊乱以及骨质疏松等疾病方面均有良好疗效,本文就菟丝子黄酮药理研究的近况进行综述.
-
去卵巢骨质疏松模型大鼠小肠钙结合蛋白mRNA表达与菟丝子黄酮的干预
背景：菟丝子是旋花科植物菟丝子Cuscutachinensis Lam.的成熟种子，为温补肾阳的要药，前期研究表明，由菟丝子组成的补肾复方在抑制骨量丢失，改善骨密度方面有明显疗效。
目的：探讨菟丝子黄酮对去卵巢骨质疏松模型大鼠股骨骨密度、血清和肾脏1，25-二羟基维生素D3(1，25(OH)2D3)含量、小肠钙结合蛋白(CaBp-D9K)mRNA表达的影响。
方法：72只SD雌性大鼠，随机数字表法均分为6组(n=12)：假手术组、模型组、维生素 D3组和菟丝子黄酮小、中、大剂量组。假手术组仅行假手术，其余5组分别行卵巢切除，1周后分别灌胃给予维生素D3(2 mg/kg)以及小、中、大剂量菟丝子黄酮连续给药3个月。腹主动脉取血，分离血清，取出肾脏，采用酶联免疫吸附法检测1，25(OH)2D3含量。之后处死动物，取出股骨，测定骨密度；取出第2腰椎，采用实时荧光反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)测定腰椎和肾脏组织维生素D受体mRNA表达。取出小肠，采用RT-PCR测定小肠CaBp-D9K mRNA表达。
结果与结论：与假手术组相比，模型组股骨骨密度、血清和肾脏1，25(OH)2D3、腰椎组织维生素D受体mRNA、小肠CaBp-D9K mRNA表达均下降。与模型组比较，菟丝子黄酮中、大剂量组和维生素D3组均可使股骨骨密度、血清和肾脏1，25(OH)2D3、腰椎组织维生素D受体mRNA、小肠CaBp-D9K mRNA表达增加。菟丝子黄酮能够显著提高去卵巢大鼠股骨骨密度、血清和肾脏1，25(OH)2D3、腰椎组织维生素D受体mRNA、小肠CaBp-D9K mRNA表达，促进肠钙吸收与成骨细胞活性，增强骨质量。 -
菟丝子黄酮对心肌缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2、Caspase-3表达的影响
目的 观察菟丝子黄酮对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2、Caspase-3表达的影响.方法 结扎大鼠冠状动脉左前降支30 min,再灌注2h建立心肌缺血再灌注模型.将40只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、菟丝子黄酮低、高剂量组及消心痛组.再灌注结束后检测血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH),DNA末端标记法(TUNEL法)计算凋亡指数(AI)与免疫组化法检测心肌Bcl-2和Caspase-3蛋白表达.结果 与空白对照组比较,其余四组心肌酶CK、LDH和AI显著增高(P＜0.0l),Bcl-2和Caspase-3蛋白表达增强(P＜0.o1)；与模型组比较,菟丝子黄酮低、高剂量组及消心痛组能降低CK、LDH含量和AI(P ＜0.05),增加Bcl-2和减少Caspase-3的表达(P＜0.01)；菟丝子黄酮高剂量组与消心痛组比较无差异(p＞0.05).结论 菟丝子黄酮预处理能够减少心肌酶CK、LDH含量,上调Bcl-2蛋白表达,下调Caspase-3蛋白表达,抑制心肌细胞凋亡,与消心痛效果相近.
关键词： 菟丝子黄酮 缺血再灌注损伤 凋亡 BCL-2蛋白 Caspase-3蛋白 -
菟丝子黄酮对去势雌性大鼠血脂和血管雌激素受体的影响
菟丝子是旋花科植物菟丝子(Cuscuta chinenis Lam)的成熟种子,足温补肾阳的要药,该药在临床上应用广泛,疗效确切,其主要成分为黄酮类化合物.
-
白芍总苷和菟丝子黄酮配伍对心理应激大鼠血清SOD和MDA的影响
目的:观察白芍总甙和菟丝子黄酮配伍对心理应激大鼠的调整作用.方法:SD大鼠50只,采用声-光-电复合刺激建立心理应激模型,观察白芍总甙和菟丝子黄酮配伍药对其胸腺指数、丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)的影响.结果:给予白芍总甙和菟丝子黄酮配伍药后,胸腺指数上升、血清MDA含量下降、SOD含量增加,与模型对照组比较有显著的差异.结论:补肾和疏肝配伍药能通过提高抗氧化能力和增强免疫力来抵抗心理应激损伤,其作用明显优于单味菟丝子黄酮及单味白芍总甙.
-
菟丝子黄酮对雷公藤多苷损伤雄性幼鼠睾丸组织凋亡相关蛋白Bcl-2和蛋白Bax表达的影响
目的:研究菟丝子黄酮对雷公藤多苷(GTW)损伤雄性SD幼鼠睾丸组织凋亡相关蛋白蛋白Bcl-2和蛋白Bax的表达的影响.方法:健康3周龄SD雄性幼鼠36只,随机分为三组:空白组、雷公藤多苷组、菟丝子黄酮+雷公藤多苷组.免疫组化法测定Bcl-2/Bax表达.结果:各实验组Bcl-2蛋白表达:雷公藤多苷组表达少,与其他各组之间比较(P＜0.05)差异有统计学意义.空白组表达高,菟丝子组次之,空白组与菟丝子组之间比较(P＞0.05)差异没有统计学意义.各实验组Bax蛋白表达:雷公藤多苷组表达高,与其他各组之间比较(P＜0.05)差异有统计学意义.空白组表达少,空白组与菟丝子组之间比较(P＜0.05)差异有统计学意义.结论:菟丝子黄酮能增强雄性幼鼠生育能力,其机制可能是对抗雷公藤多苷所致雄性幼鼠睾丸组织Bcl-2蛋白表达减少和Bax蛋白表达增强.
-
菟丝子黄酮、雷公藤多苷对体外培养幼鼠生精细胞周期及凋亡的影响
目的 通过观察含雷公藤多苷(GTW)、菟丝子黄酮药物血清对体外培养的大鼠睾丸生精细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,探讨菟丝子黄酮干预GTW所致生殖损伤的作用机制.方法 体外培养大鼠睾丸生精细胞,将其分为空白组、9mgGTW组(多苷1号组)、9mgGTW+菟丝子黄酮组(黄酮1号组)、12 mgGTW组(多苷2号组)、12mgGTW+菟丝子黄酮组(黄酮2号组),加不同含药血清,于培养24h、48h后,通过MTT法检测含药血清对生精细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测含药血清对生精细胞细胞周期及凋亡的影响.结果 生精细胞增殖方面:血清作用24h、48h时,黄酮1号组OD值明显高于多苷1号组;黄酮2号组OD值高于多苷2号组;均具有明显统计学差异(P＜0.05).生精细胞S期细胞百分比:黄酮2号组较多苷2号组明显降低(P＜0.05);而黄酮1号组与多苷1号组比较无统计学意义(P＞0.05).生精细胞凋亡方面:黄酮1号组较多苷1号组明显降低(P＜0.05);而黄酮2号组与多苷2号组比较无统计学意义(P＞0.05).结论 GTW可使体外培养幼鼠生精细胞增殖能力下降,细胞凋亡增多.菟丝子黄酮可干预生精细胞的分裂周期,同时对生精细胞凋亡有明显的调控作用.
-
菟丝子黄酮对氧化损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用
目的 探讨菟丝子黄酮对氧化损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用.方法 体外培养内皮细胞,采用MTT法测定细胞的增殖,分光光度计法检测一氧化氮(N0)、一氧化氮合酶(NOS)、放射免疫方法测定内皮素-1(ET-1),观察菟丝子黄酮对过氧化氢(H202)损伤的HUVECs的影响.结果 ①菟丝子黄酮(0.1 ～ 0.5mg/L)可提高正常培养的HUVECs的细胞活性,且具有浓度依赖性;菟丝子黄酮(0.5 mg/L)能明显减轻H202对HUVECs所致的氧化损伤,使细胞增殖活性增高((P＜0.01).②H202损伤模型组(200mmol/L)与空白组比较,NO释放和NOS活性水平显著下调(P＜0.01),ET-1释放水平显著上调(P＜0.01),菟丝子(0.5mg/L)+H2O2(200mmol/L)组与H2 O2损伤模型组(200 mmol/L)比较,NO释放水平和NOS活性明显上调(P＜0.01),ET-1水平显著下调(P＜0.01).结论 菟丝子黄酮对H2O2诱导的HUVECs的损伤具有保护作用.
-
菟丝子黄酮对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响
目的 观察莬丝子黄酮对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法 结扎大鼠冠状动脉左前降支30 min,再灌注2 h建立心肌缺血再灌注模型.将50只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组及菟丝子黄酮低、高剂量组和消心痛组.再灌注结束后检测血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶,DNA末端标记法计算凋亡指数,免疫组织化学法和Western Blotting法检测心肌Bel-2和Bax蛋白表达,计算Bcl-2/Bax值.结果 与假手术组比较,缺血再灌注组心肌酶肌酸激酶、乳酸脱氢酶和凋亡指数显著增高(P<0.01),Bcl-2和Bax蛋白表达增强(P<0.01);与缺血再灌注组比较,菟丝子黄酮低、高剂量组及消心痛组能降低血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶含量和凋亡指数(P<0.01),增加Bcl-2而减少Bax的表达(P<0.01).结论 菟丝子黄酮能够抑制缺血再灌注损伤大鼠的心肌细胞凋亡,与消心痛效果相近.
-
菟丝子黄酮对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织中炎症反应的影响
目的:研究菟丝子黄酮对缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织中炎症因子反应的影响.方法:对大鼠以颈内动脉线栓法复制大脑中动脉栓塞脑缺血再灌注模型.实验分为假手术(等容生理盐水)、模型(等容生理盐水)、尼莫地平(12 mg/kg)与菟丝子黄酮高、低剂量(100、50 mg/kg)组.再灌注结束后进行神经功能缺失症状评分；免疫组化法和Western Blot法检测大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、细胞间黏附分子(ICAM)-1的表达.结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺失症状明显,脑组织TNF-α、IL-1 β、ICAM-1的表达显著增强(P＜0.01)；与模型组比较,菟丝子黄酮高、低剂量组大鼠神经功能缺失症状明显改善,TNF-α、IL-1β、ICAM-1的表达显著减弱(P＜0.01).结论:菟丝子黄酮对脑缺血再灌注损伤模型大鼠具有一定保护作用,其机制可能与抑制炎症因子的分泌和表达及减轻脑组织的炎症反应有关.
-
菟丝子黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响
目的:观察菟丝子黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法:成年雄性SD大鼠80只,随机分为假手术组、模型组、菟丝子黄酮50 mg/kg、100 mg/kg剂量组、尼莫地平组(12 mg/kg),采用颈内动脉线栓法阻断大脑中动脉制备局灶性脑缺血再灌注模型,Longa法进行神经功能缺失症状评分,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白表达,计算Bcl-2/Bax值,Western Blot法检测Caspase-3蛋白表达.结果:与模型组比较,菟丝子黄酮治疗组大鼠神经功能评分明显降低,缺血侧大脑皮质细胞凋亡程度减轻,且均以100 mg/kg剂量组较为明显,免疫组化检测显示Bcl-2蛋白表达增加而Bax蛋白表达减少,Western blot检测显示Caspase-3蛋白表达明显减少.结论:菟丝子黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,其机制可能是通过下调Bax和Caspase-3,上调Bcl-2蛋白的表达来抑制细胞凋亡的发生.
