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11,12-环氧二十碳三烯酸对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的影响
目的 通过观察11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-EET)对缺氧/复氧人脐静脉内皮细胞损伤程度的影响,了解EET血管保护的可能途径,并初步探讨其作用机制.方法 采用原代培养人脐静脉内皮细胞,随机分为对照组、缺氧/复氧组、11,12-EET对照组、11,12-EET缺氧/复氧组、细胞外信号调节的蛋白激酶(ERK1/2)抑制组和一氧化氮合酶抑制组.通过向培养瓶内通入混合气体(2%O2,5%CO2,93%N2)3 h,复氧1 h复制缺氧/复氧损伤模型.采用MTT法检测细胞存活率,比色法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的变化,Western blot方法检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和ERK1/2的表达.结果 11,12-EET在常氧条件下可对细胞造成轻度损伤,而在缺氧/复氧条件下能显著提高内皮细胞的存活率,降低LDH的漏出率,提高SOD的活性,降低MDA的含量,并且促进eNOS、磷酸化ERK1/2的表达.结论 11,12-EET具有拮抗内皮细胞缺氧/复氧损伤作用,这与其提高缺氧/复氧内皮细胞SOD活性、清除氧自由基、减少缺氧/复氧对eNOS及磷酸化ERK1/2表达的抑制有关.
关键词： 11 12-环氧二十碳三烯酸 内皮细胞 缺氧/复氧损伤 -
EGCG通过PI3-K/Akt信号通路抗神经细胞缺氧/复氧损伤
目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对神经细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的影响及其作用机制.方法 原代培养神经细胞,实验分4组:对照组、A/R组、EGCG预处理组(EGCG+A/R组)、EGCG+LY294002+A/R组.检测细胞存活率与乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞仪检测细胞凋亡和[Ca2+]i;Western blot法检测总-Akt和磷酸化-Akt (p-Akt)蛋白表达.结果 与对照组相比,A/R组中细胞存活率降低;LDH、[Ca2+]i与细胞凋亡增加.与A/R组相比,EGCG预处理显著降低LDH、[Ca2+]i与细胞凋亡,提高细胞存活率,表明EGCG可对抗神经细胞A/R损伤.进一步结果显示EGCG预处理后,显著增加神经细胞中p-Akt蛋白表达.然而,PI3K-Akt信号转导通路阻断剂LY294002显著抑制EGCG介导的神经保护作用与p-Akt蛋白上调.结论 EGCG对A/R介导的神经细胞损伤具有保护作用,其保护作用与PI3K-Akt信号转导通路有关.
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栀子苷预处理对 H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及机制研究
[目的]探讨栀子苷预处理对 H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及机制。[方法]体外培养 H9C2心肌细胞，制备缺氧/复氧损伤模型。实验分为正常对照组，缺氧/复氧模型组，栀子苷预处理组。分光光度法测定细胞培养液中肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）含量以及过氧化物歧化酶（SOD）活性，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞存活率，Annexin V-FITC/PI 双染法流式细胞术测定细胞凋亡率。[结果]与模型组比较，栀子苷预处理组能明显减少心肌细胞 CK、LDH 的漏出量，提高 SOD 活力，降低 MDA 含量，同时提高心肌细胞的存活率，减少心肌细胞的凋亡。[结论]栀子苷预处理对 H9C2心肌细胞的缺氧/复氧损伤具有保护作用，其机制可能与增强心肌抗氧化能力、清除氧自由基以及抑制心肌细胞凋亡有关。
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右美托咪定对A549细胞缺氧/复氧损伤时细胞凋亡及CHOP的影响
目的:探讨右美托咪定(Dex)对缺氧/复氧所致的A549细胞(起源于肺泡Ⅱ型上皮细胞系)损伤及对CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的影响.方法:将处于对数生长期的A549细胞随机分为4组(n=10):常氧培养组(N组),Dex常氧组(D组),缺氧/复氧组(H组),缺氧/复氧+Dex组(HD组).D组和HD组在造模开始时加入1 nmol/L Dex,N组和D组细胞常氧培养30 h,H组和HD组细胞缺氧6h,复氧24 h.之后用倒置显微镜观察细胞形态学变化.采用CCK-8法检测A549细胞活力.原位末端标记(TUNEL)法检测A549细胞的凋亡指数(AI).蛋白免疫印迹法(Western blot)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测A549细胞CHOP、Grp78、caspase-3蛋白和CHOP、Grp78 mRNA表达水平.结果:与N组比较,H组细胞数量减少,细胞形态发生改变.A549细胞的吸光度值明显下降(P＜0.01),AI值升高(P＜0.01),凋亡细胞数明显增加.CHOP、Grp78、caspase-3蛋白和CHOP、Grp78 mRNA表达显著上升(P＜0.01).与H组相比,HD组细胞损伤减轻,吸光度值上调(P＜0.01),凋亡细胞数明显减少(P＜0.01).CHOP、caspase-3蛋白,CHOP mRNA表达降低(P＜0.01).结论:Dex可有效减少缺氧/复氧引起的A549细胞凋亡,其机制可能与Dex对抗CHOP信号通路所致的凋亡有关.
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外周型苯二氮(艹卓)受体在缺氧/复氧损伤大鼠心肌细胞凋亡中的作用
外周型苯二氮(艹卓)受体(PBR)是一种由169个氨基酸组成的线粒体外膜蛋白,是线粒体通透性转换孔(PTP)的重要组成部分[1].PBR基因敲除鼠在发育早期死亡,提示PBR在细胞中扮演了极重要的作用[2].有关PBR抗缺氧性保护作用正成为国内外的研究热点,本研究以此作为重点,报告如下.
关键词： 外周型苯二氮(艹卓)受体 缺氧/复氧损伤 凋亡 心肌细胞 -
microRNA20b调节PPARγ抑制缺氧/复氧诱导的内皮细胞凋亡
目的:观察microRNA20b对缺氧/复氧诱导内皮细胞凋亡的影响.方法:采用人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)建立缺氧/复氧损伤细胞模型.将生长状态良好的HUVECs随机分为正常对照组(Normal组)、缺氧后阴性对照组(HR+NC组)、缺氧后microRNA20b过表达组(HR+20b组)、缺氧后阴性对照抑制组(HR+IN NC组)和缺氧后microRNA20b抑制组(HR+IN 20b组).缺氧前24 h采用lipofectamine2000将Negative Control、microRNA20b mimics、inhibitor Negative Control、microRNA20b inhibitor分别转染入后四组细胞,然后缺氧培养12 h后复氧4 h.采用免疫荧光检测过氧化物酶体增值物受体γ(PPARγ)蛋白的变化,AnnexinV-FITC/PI流式双染法检测细胞的早晚期凋亡率,Western blot检测PPARγ以及凋亡相关蛋白Bax、抗凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达水平.结果:与Normal组相比,缺氧/复氧损伤后各转染组PPARγ蛋白表达升高,凋亡率升高.与HR+NC组相比,HR+20b组的PPARγ及凋亡相关蛋白Bax表达降低、抗凋亡相关蛋白Bcl-2表达升高,凋亡率降低[(7.70+0.85)%vs(18.20+1.05)%,P<0.05].与HR+IN NC组相比,HR+IN 20b组的PPARγ及凋亡相关蛋白Bax表达升高、抗凋亡相关蛋白Bcl-2表达降低,凋亡率升高[(18.9+3.05)%vs(13.0+2.25)%,P<0.05].结论:microRNA20b靶向作用于PPARγ抑制缺氧/复氧损伤诱导的内皮细胞凋亡.
关键词： microRNA20b 过氧化物酶体增值物受体γ 缺氧/复氧损伤 凋亡 -
脑源性神经营养因子可减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤
目的：探讨脑源性神经营养因子（BDNF）预处理对H9c2心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤的影响及其作用机制。方法体外培养H9c2心肌细胞并以缺氧（95%N2+5%CO2）培养4 h后复氧（95%O2+5%CO2）培养12 h建立H/R模型，并分为Control组、H/R组、不同浓度（1、10、100μg/L）BDNF预处理后H/R组、酪氨酸蛋白激酶受体B（TrkB） inhibitor组（同时加入100μg/L BDNF和1∶1000的TrkB inhibitor预处理后H/R组）。利用MTT方法检测各组心肌细胞的细胞存活率；并测定各组心肌细胞H/R损伤后乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量及活性；流式细胞术测定各组心肌细胞的凋亡率；Western-blot检测TrkB、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与Control组相比，H/R组细胞存活率明显下降，LDH、CK和MDA含量升高，SOD活性降低，细胞凋亡率升高，抗凋亡Bcl-2蛋白表达下降，促凋亡Bax蛋白表达升高（均P<0.05）。与H/R组相比，不同浓度BDNF预处理H9c2心肌细胞后H/R，各组细胞存活率均明显上升，CK、LDH、MDA含量逐渐下降，SOD活性升高，细胞凋亡率下降，TrkB和Bcl-2蛋白表达升高，而Bax蛋白表达降低，但BDNF的作用均受到TrkB inhibitor的抑制。结论 BDNF预处理能够提高H9c2心肌细胞H/R损伤的细胞存活率，通过降低细胞凋亡率和提升细胞抗氧化能力而发挥保护作用，并与BDNF-TrkB信号通路有关。
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当归、红芪超滤膜提取物对培养乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的影响
目的 探讨当归、红芪超滤膜提取物对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响.方法 通过给原代培养乳鼠心室肌细胞进行缺氧1 h/复氧1 h,建立缺氧/复氧(A/R)心肌细胞损伤模型.于复氧期开始随机将心肌细胞分为正常对照组(C)、缺氧/ 复氧组(A/R组)、药物低剂量组(LD)、药物高剂量组(HD),于药物作用24 h后测定各组缺氧/复氧后细胞损伤指标肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO).结果 LD、HD组MDA、MPO、肌酸激酶(CK)明显较A/R组降低(P<0.01),SOD明显增高(P<0.01).结论 当归、红芪超滤膜提取物(10万分子量)可减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤.
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苦参素对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞氧化应激和细胞凋亡的影响
目的：研究苦参素(OMT)对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞氧化应激和细胞凋亡的影响。方法无菌环境下分离 SD大鼠乳鼠心肌细胞并培养72 h后随机分为：空白对照组、缺氧/复氧(H/R)模型对照组、OMT(20μg/mL、40μg/mL和80μg/mL)干预组和舒血宁注射液(SXN,100μg/mL)干预组(阳性对照组),每组设10个复孔。药物干预6 h后,通过MTT法检测细胞存活率；检测细胞培养液中心肌酶[谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)]释放量；测定细胞中抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH Px)、过氧化氢酶(CAT)]活性和丙二醛(MDA)含量；通过流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,通过 RT PCR检测细胞中bcl 2mRNA、BaxmRNA表达并计算bcl 2/Bax比值,通过Western blot方法检测细胞caspase 3蛋白表达水平并进行半定量分析。结果与模型对照组比较,OMT40μg/mL、80μg/mL干预组、SXN干预组乳鼠心肌细胞存活率显著升高,培养液中 AST、CPK、LDH释放量显著降低,细胞中 SOD、CAT活性显著升高且 MDA含量显著降低,细胞凋亡状况显著改善、凋亡率显著降低,细胞中 bcl 2 mRNA 表达显著上调且 Bax mRNA 表达显著下调、bcl 2/Bax 表达比值显著升高,细胞中caspase 3蛋白表达显著升高,上述差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；其中 OMT 80μg/mL干预组细胞中 GSH Px活性显著升高(P<0.05)。结论苦参素对缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞氧化应激和细胞凋亡具有抑制作用,其作用机制可能与苦参素能有效改善抗氧化酶活性、调节凋亡相关基因表达有关。
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心肌细胞缺氧/复氧损伤模型研究与应用进展
心肌细胞缺氧/复氧损伤模型是体外筛选抗心肌缺血/再灌注损伤活性物质的模拟模型,有效建立该模型是筛选结果可靠的保证.本文从心肌细胞缺氧,复氧损伤模型建立的一般程序,心肌细胞种类的选择与培养,心肌细胞缺氧,复氧损伤模型建立的方法等方面就近年来国内外心肌细胞缺氧,复氧损伤模型的研究与应用情况进行了综述,并就模型建立中需要注意的相关问题进行了探讨.为有效复制该模型提供参考.
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甘木通总黄酮对乳鼠原代心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的:研究甘木通总黄酮(TFCD)对大鼠乳鼠原代心肌细胞缺氧复氧(H/R)损伤的保护作用.方法:采用原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞建立H/R损伤模型,实验分为正常组、模型组、TFCD组(75、150、300μg/mL)及地奥心血康阳性药物对照组.采用MTT法测定TFCD对心肌细胞的存活率;Hoechest染色观察细胞核形态变化;比色法测定培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的含量;荧光法测定细胞内钙离子浓度.结果:TFCD可显著提高H/R损伤心肌细胞内SOD的活性,能显著抑制LDH、CK的活性、MDA的生成以及细胞内钙浓度.结论:TFCD对乳鼠H/R损伤的心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能与抗脂质过氧化和减轻细胞内钙超载有关.
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人脐静脉血管内皮细胞缺氧复氧损伤时黏结合蛋白多糖1及细胞外信号调节酶表达与肝素酶Ⅰ的调节
背景:研究发现肝素酶可以促使肿瘤细胞的syndecan-1脱落,而且低氧增加的巨噬细胞运动也可能与硫酸已酰肝素蛋白多糖的生物合成调节相关.目的:观察肝素酶Ⅰ对缺氧复氧损伤人脐静脉血管内皮细胞黏结合蛋白多糖1及细胞外信号调节酶的调节作用.方法:采用缺氧复氧处理肝素酶Ⅰ预培养的人脐静脉血管内皮细胞,用免疫组织化学、RT-PCR及western blot枪测人脐静脉血管内皮细胞细胞黏结合蛋白多糖1、ERK2的表达.结果与结论:单纯缺氧复氧后人脐静脉血管内皮细胞的黏结合蛋白多糖1和ERK2表达轻度上调.缺氧复氧处理肝素酶预培养人脐静脉血管内皮细胞的黏结合蛋白多糖1和ERK2明显上调,与单纯缺氰复氧处理人脐静脉血管内皮细胞相比差异有显著性意义.黏结合蛋白多糖1与ERK2上调表达成正相关.结果表明,黏结合蛋白多糖1和细胞外信号调节酶参与了人脐静脉血管内皮细胞缺氧复氧损伤的病理生理过程,肝素酶Ⅰ可能通过调节黏结合蛋白多糖1来影响细胞外信号调节酶的表达.
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Na+/H+交换体阻滞剂对糖尿病鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护机制
目的 探讨Na+/H+交换体(NHE)阻滞剂抗糖尿痛心肌细胞内钙超载和抗细胞挛缩作用.方法 利用培养的糖尿病鼠心肌细胞进行缺氧/复氧处理,模拟心肌缺血/再灌注(I/R)损伤,动态监测单个心肌细胞在缺氧/复氧时Ca2+浓度的变化和NHE阻滞剂阿米洛利(EIPA)对其细胞面积和细胞生存的影响.结果 动物模型显示EIPA可以减轻再灌注心肌细胞损伤.在复氧前给予以常规剂量EIPA,虽能有效拮抗细胞挛缩,但不能阻止细胞内钙超载,故未能显著提高心肌细胞的存活率.在复氧前给予大剂量的EIPA或在缺氧/复氧全程常规剂量EIPA给药均能有效地抑制缺氧期和复氧期Ca2+浓度的上升,防止糖尿病鼠细胞内钙超载,同时拮抗细胞挛缩,显著提高细胞的存活率.结论 在缺氧前或复氧前给予常规剂量或增大剂量的EIPA均能有效地拮抗心肌细胞挛缩,发挥其对心肌细胞的保护作用.
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芍药苷对原代培养大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的:探讨芍药苷对原代培养的大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用.方法:体外培养原代大鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,MTT法观察芍药苷对缺氧复氧乳鼠心肌细胞存活及培养液LDH活力的影响;流式细胞仪观察芍药苷对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响;荧光定量PCR法观察芍药苷对缺氧复氧乳鼠心肌细胞Caspase-3 mRNA表达的影响.结果:与模型损伤组比较,与缺氧模型组比较,芍药苷可抑制缺氧引起的心肌细胞损伤,减少LDH的漏出(P＜0.05);明显抑制心肌细胞缺氧复氧所致的早期凋亡(P＜0.01);明显抑制缺氧复氧后心肌细胞Caspase-3 mRNA的表达.结论:芍药苷对原代培养大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用机制可能与其减少缺氧引起的细胞损伤、通过caspase-3蛋白抑制缺氧/复氧心肌细胞早期凋亡有关.
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洋参果总皂苷对缺氧及缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用
目的:研究洋参果总皂苷对培养心肌细胞缺氧及缺氧/复氧损伤的保护作用.方法:对培养的心肌细胞建立缺氧及缺氧/复氧损伤型,实验分9组:正常细胞培养组、缺氧/复氧损伤模型组、缺氧/复氧损伤+洋参果(100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625μg/ml)组.分别观察单纯缺氧和缺氧/复氧后心肌细胞搏动次数及心肌细胞形态.结果:洋参果总皂苷12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml浓度,增强缺氧后心肌细胞搏动次数;从形态学观察:单纯缺氧及缺氧/复氧后,洋参果总皂苷在3.1μg/ml～50μg/ml浓度范围,给药组比阴性对照组细胞形态完整.结论:洋参果总皂苷对心肌细胞缺氧及缺氧/复氧损伤有保护作用.
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两种方法提取乳鼠神经细胞建立缺氧/复氧损伤模型的研究
目的 比较两种不同方法培养乳鼠神经细胞稳定性,并探讨H2O2对原代培养神经细胞造成缺氧/复氧损伤模型的佳处理时间.方法 两种方法培养原代神经细胞,加入600 μmol/L H2O2培养50 min、2h、3h后换正常培养液继续培养18 h,造成神经细胞缺氧/复氧损伤.MTT法检测各组细胞生存率,检测LDH活性、SOD、MDA含量和RhoA活性.结果 与空白组相比,缺氧50 min、2h、3h培养各组细胞存活率下降,LDH活性增加,SOD含量下降,MDA含量升高,RhoA含量增加P均＜0.05.与直接法组相比,种植法组细胞在缺氧50 min、2h各组细胞存活率高,细胞LDH漏出少,SOD含量高,MDA生成少P均＜0.05.结论 与直接法相比,种植法培养的神经细胞状态更稳定,缺氧50 min、复氧18 h时制作神经细胞损伤模型接近体内缺氧损伤状态,可用于实验.
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中医药治疗心肌缺血再灌注损伤的实验研究进展
从抑制氧化应激损伤、抑制炎症反应、抑制细胞自噬、降低细胞凋亡率、诱导延迟保护作用等方面出发,综述中医药预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤实验模型的保护机制,分析研究中的不足并提出解决方法,为今后临床治疗心肌缺血再灌注损伤提供更扎实的理论基础.
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Ⅰ型磷酸酶抑制亚基1对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的 探讨Ⅰ型磷酸酶抑制亚基1(PPI1)对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制.方法 用PPI1野生型和活化型突变体表达质粒分别转染乳鼠心肌细胞,并建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧H/R模型,测定各组心肌细胞的存活率、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量、caspase-3活性及超氧化物歧化酶(SOD)活力,此外用流式细胞术测定各组心肌细胞凋亡率,Western blot分析PPI1对凋亡相关蛋白表达及PI3K/Akt信号通路的影响.结果 与正常组比较,模型组LDH、MDA含量、caspase-3活性及细胞凋亡率增高(P<0.05),细胞存活率和SOD活性降低(P<0.05);PPI1活化型突变体转染组细胞的LDH、MDA含量、caspase-3活性和细胞凋亡率则降低,细胞存活率和SOD活性升高,与缺氧/复氧组比较各实验指标差异均具有统计学意义(P<0.05).Western blot表明该组细胞P53、Bax 表达下调,pAkt表达上调.结论 PPI1活化型突变体对H/R造成的心肌细胞损伤具有保护作用,其机制与稳定心肌细胞膜、减轻氧自由基损伤及减少细胞凋亡有关.
关键词： Ⅰ型磷酸酶的抑制亚基-1 心肌细胞 缺氧/复氧损伤 凋亡 -
活络效灵丹拆方对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用研究
目的 探讨活络效灵丹含药血清对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制.方法 取体外培养的乳鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧心肌细胞损伤模型.实验分为正常组、模型组(H/R组)、活络效灵丹拆方组和阳性药对照组(单硝酸异山梨酯组).用MTT比色法检测活络效灵丹对H/R损伤心肌细胞存活率和细胞上清液中LDH漏出量的影响,优选活络效灵丹的佳配伍组合,并测定各组细胞浆丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性；用RT-PCR法检测心肌细胞Bcl-2 mRNA、Bax mRNA的表达.结果 实验优选出活络效灵丹全方、丹参当归配伍、丹参乳香配伍、丹参当归乳香配伍为佳配伍.与正常组比较,模型组MDA含量升高、SOD活性降低(P＜0.01),细胞Bcl-2 mRNA表达降低、Bax mRNA表达增高(P＜0.01)；与模型组比较,优选的活络效灵丹各配伍组胞浆SOD活性增高、胞浆MDA含量减少(P＜0.01),心肌细胞Bax mRNA表达减少、Bcl-2 mRNA表达增高(P＜0.01).结论 活络效灵丹对H/R损伤的心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能与清除氧自由基、抗脂质过氧化、上调Bcl-2 mRNA和下调Bax mRNA表达等有关.
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肾衰康灌肠液含药血清对HK-2细胞缺氧/复氧损伤的预防作用
目的 考察肾衰康灌肠液含药血清对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧损伤的预防作用.方法 家兔灌肠给药后采血,离心取血清,分为空白组、PBS组及含药血清高、中、低剂量组.各组血清预培养HK-2细胞24h后,将细胞随机分为对照组、PBS组及含药血清高、中、低剂量组,二氯化钴(CoCl2)进行缺氧/复氧造模,CFSE/PI染色、Annexin V-FITC/PI双染色、流式细胞分析检测造模后细胞凋亡/死亡率,ROS荧光探针检测观察含药血清对空白组、模型组、预防组细胞ROS水平的影响,PCR技术测定PBS组、含药血清组细胞AKT、NF-κB、MAPK mRNA表达.结果 与对照组、PBS组比较,含药血清组细胞死亡率明显降低,以高剂量组显著,并表现出明显的凋亡/死亡率抑制作用.造模后,预防组细胞ROS升高水平明显低于模型组,而且恢复至正常水平时间明显缩短.含药血清组AKT、NF-κB、MAPK mRNA表达先下降(0～4 h)再逐渐上升(4～12h),并对NF-κB、MAPK mRNA表达呈现一定剂量依赖性,与PBS组比较有显著差异(P＜0.05).结论 肾衰康灌肠液含药血清可预防HK-2细胞缺氧/复氧损伤,其机制可能与抑制细胞氧化应激、减少细胞ROS过量聚积有关.
