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血管紧张素Ⅱ2型受体活化促进缺氧/复氧损伤PC12细胞的生长
目的 探讨血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)活化对缺氧/复氧(H/R)损伤PC12细胞生长的影响.方法 PC12细胞是大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株,具有神经内分泌细胞的一般特征.将PC12细胞用连二亚硫酸钠(Na2S2 04)处理后复制H/R损伤的神经细胞模型;H/R损伤PC12细胞分别予以AT2R拮抗剂(PD123319)、AT2R激动剂(CGP42112)进行处理,采用MTT法观察细胞存活率的变化;以逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Bax、Bcl-2 mRNA表达的变化. 结果 PC12细胞经40mmol/LNa2S2O4处理lh后,MTF法检测的细胞存活率约为55 ～ 60％,提示复制H/R损伤模型成功;H/R损伤PC12细胞经CGP42112处理后,细胞存活率显著增高,而Bax mRNA表达下调,Bcl-2 mRNA表达上调;而PD123319处理后,细胞存活率显著下降,Bax mRNA表达上调,Bcl-2 mRNA表达则下调. 结论 AT2R活化可改善H/R损伤的PC12细胞的生长,其机理可能与其上调Bcl-2/Bax的比值有关.
关键词： 血管紧张素Ⅱ2型受体 PC12细胞 缺氧/复氧损伤 凋亡 -
附子多糖抗心肌细胞凋亡的Smac/Diablo机制研究
目的:建立体外缺氧/复氧( hypoxia/reoxygenation,H/R)模型,以模拟在体心肌细胞缺血/再灌注损伤,观察附子多糖(FPS)对H/R后心肌细胞凋亡的影响,并以Smac/Diablo为切入点探讨其作用机制.方法:采用原代培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧/复氧模型,随机分为:正常对照组( Control)、缺氧/复氧组(H/R)、附子多糖(0.1、1、10mg/mL)组.MTT法测定细胞的存活率,流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,荧光定量PCR检测BCL-2 mRNA的表达量,Western blot检测胞浆Smac/Diablo蛋白的表达.结果:与对照组比较,H/R组细胞存活率降低,细胞凋亡率显著增加,BCL-2 mRNA的表达量减少,胞浆中Smac/Diablo的表达增加.与H/R组比较,经附子多糖处理24 h后,附子多糖可呈剂量依赖性增加心肌细胞的存活率,抑制细胞凋亡率,促进BCL-2 mRNA的表达,降低胞浆中Smac/Diablo的表达,在10 mg/mL浓度时保护效应达到峰值.结论:FPS可抑制缺氧复氧后心肌细胞凋亡的发生,作用机制可能与其促进BCL-2 mRNA的表达,保护线粒体,抑制Smac/Diablo的释放,从而阻碍细胞凋亡的线粒体信号转导有关.
关键词： 附子多糖 缺氧/复氧损伤 细胞凋亡 Smac/DIABLO -
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ通过介导凋亡加重 H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤
目的:探讨钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)在H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中的作用.方法:H9c2心肌细胞随机分为4组:正常对照(control)组、CaMKII特异性抑制剂KN-93(1μmol/L)对照(KN-93)组、H/R组和KN-93+H/R组,其中KN-93组及KN-93+H/R组先用1μmol/L KN-93预处理2 h后,再进行其它处理.倒置显微镜观察各组H9c2心肌细胞的形态变化,CCK-8法检测各组H9c2心肌细胞的活力,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测各组培养基中LDH的活性,Western blot法检测CaMKII及其底物受磷蛋白(phospholamban,PLN)的磷酸化水平以及凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的表达,TUNEL染色和流式细胞术观察细胞凋亡.结果:与control组相比,KN-93组各项指标均无显著性差异;H/R组细胞皱缩,大量死亡,细胞活力明显降低,培养基中LDH活性明显升高(P<0.01),CaMKII及PLN的磷酸化水平和cleaved caspase-3的蛋白水平显著增加(P<0.01),TUNEL染色阳性细胞数和流式细胞凋亡率显著增加(P<0.01);1μmol/L KN-93干预H/R可明显改善细胞形态,增加细胞活力,降低培养基中LDH活性(P<0.01),减少CaMKⅡ和PLN的磷酸化水平以及cleaved caspase-3的蛋白水平(P<0.05),降低TUNEL染色阳性细胞数和流式细胞凋亡率(P<0.01).结论:CaMKⅡ通过介导细胞凋亡参与H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤.
关键词： 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ 受磷蛋白 H9c2细胞 细胞凋亡 缺氧/复氧损伤 -
黄连素对缺氧复氧诱导大鼠心肌细胞内Nrf2/Keap1的影响
目的 探讨黄连素(BR)对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤后凋亡的影响及其作用机制.方法 将培养的H9c2心肌细胞随机分为:正常对照组(NC组)、单纯药物组(BR组)、缺氧/复氧组(H/R组)、药物低剂量LBR组(1.5×10-6 mol/L)及高剂量HBR组(1.5×10-4 mol/L).处理结束后,用MTT比色法检测H9c2心肌细胞的活力,用Hoechst33258染色检测细胞核形态的变化,用Western blot法检测Nrf2,Keap1蛋白的表达.结果 与NC组比较,单纯BR对H9c2心肌细胞无影响.与H/R组比较,低、高剂量BR组细胞的活力明显上升(65.2±1.6%;82.3±1.4%)(P<0.01),心肌细胞的凋亡率明显减少(P<0.05),Western blot的结果显示,BR可明显促进抗氧化相关蛋白Nrf2表达,抑制Keap1的表达.结论 BR对H9c2心肌细胞H/R损伤后的凋亡具有显著的抑制作用,可能与其促进抗氧化核转录因子Nrf2表达有关.
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毛冬青皂苷E对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响
目的 考察毛冬青皂苷E对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法 将H9C2心肌细胞随机分为正常对照组,模型组,毛冬青皂苷E低、中、高剂量对照组(10,50,250 μg·mL-1)、毛冬青皂苷E低、中、高剂量治疗组(10,50,250 μg· mL-1).造模前24 h给予相应浓度的药物预处理,缺氧4h,复氧4h后,采用CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量,并采用蛋白印迹法(Western Blot)检测Caspase-3和Cleaved caspase-3凋亡蛋白的表达.结果 缺氧/复氧后,与正常对照组比较,模型组细胞存活率显著降低(P＜0.05),细胞内ROS含量显著升高(P＜0.01),毛冬青皂苷E各剂量治疗组预处理后,细胞存活率增加,ROS含量降低.缺氧/复氧损伤可使Caspase-3和Cleaved caspase-3蛋白表达增加.毛冬青皂苷E各剂量治疗组预处理后,Caspase-3和Cleaved caspase-3蛋白表达均下降.结论 毛冬青皂苷E对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,其机制可能与减少ROS生成,抑制凋亡相关蛋白Caspase-3和Cleaved caspase-3的表达有关.
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活络效灵丹对乳鼠缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用研究
目的 探讨活络效灵丹含药血清对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧( hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的保护作用及其机制.方法 取体外培养的乳鼠心肌细胞,建立H/R心肌细胞损伤模型,实验分为4组:正常血清对照组、模型组(H/R组)、活络效灵丹(HXP)血清组和单硝酸异山梨酯(ISMN)血清组,采用MTT比色法检测活络效灵丹对H/R损伤心肌细胞存活率的影响,测定细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量以及胞浆丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并采用流式细胞仪检测活络效灵丹对H/R损伤心肌细胞凋亡的影响.结果 与正常组比较,模型组细胞存活率明显降低,上清液中LDH漏出量和胞浆MDA含量升高,SOD活性降低,细胞凋亡率显著增加(P＜0.01)；与模型组比较,活络效灵丹含药血清可明显提高细胞存活率,增加胞浆SOD活性,减少上清液中LDH漏出量和胞浆MDA含量,并降低细胞的凋亡率(P＜0.01).结论 活络效灵丹对H/R损伤的心肌细胞具有保护作用,其作用可能与其抗脂质过氧化作用有关.
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异芹菜脑在隔山香药材中的含量测定及其对心肌细胞缺氧/复氧损伤保护作用
目的 建立隔山香药材中异芹菜脑(Isoapide,Iso)的高效液相色谱法(HPLC),测定方法并初步探讨异芹菜脑对体外培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用.方法 采用高效液相色谱法,色谱柱:Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:以甲醇-水(70∶30)洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为280 nm,柱温室温,进样量:10μL.并用原代培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧复/氧损伤模型,异芹菜脑在建模前进行预干预,心肌细胞随机分为5组,空白对照组(Control,CON),缺氧/复氧组(hypoxia/reoxygenation,H/R),异芹菜脑低、中、高剂量干预组(IsoL、IsoM、IsoH).缺氧4h/复氧4h后,采用CCK-8法检测心肌细胞存活率.结果 异芹菜脑在0.02096～0.2096 mg· mL-1线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为98.09％,RSD=1.25％.与空白对照组比较,缺氧/复氧组心肌细胞存活率显著降低(P＜0.01);与缺氧/复氧组比较,IsoL、IsoM、IsoH剂量干预组心肌细胞存活率均显著升高.结论 异芹菜脑对体外培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤具有一定的保护作用,隔山香药材中异芹菜脑的HPLC测定方法准确、简便、重现性好,有助于完善隔山香药材的质量控制.
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比索洛尔预处理对缺氧/复氧诱导的H9c2细胞损伤的影响
目的：研究比索洛尔预处理对缺氧/复氧诱导的大鼠心肌细胞损伤的保护作用，并探讨该作用的机制。方法对大鼠心肌细胞株（H9c2）进行缺氧复氧（6 h/2 h），模拟大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，将H9c2细胞随机分成4组：正常对照组（control组）、缺氧/复氧组（H/R组）、缺氧/复氧+比索洛尔预处理组（H/R+B组）、缺氧/复氧+比索洛尔预处理+PI3K/AKT阻滞剂LY294002组（H/R+B+LY组）；分别采用MTT法检测心肌细胞活力，流式细胞仪法检测心肌细胞凋亡、ROS水平，Western免疫印迹法检测心肌细胞p-AKT及p-GSK3β蛋白表达情况。结果与正常组相比，H/R组细胞活力下降，细胞凋亡率增加、ROS水平升高；经比索洛尔预处理后，细胞活力明显提高，细胞凋亡率下降、活性氧水平降低，p-AKT/GAPDH、p-GSK3β/GAPDGH显著提高，而加入PI3K/AKT阻滞剂LY294002后比索洛尔的保护作用消失。结论比索洛尔能减少缺氧/复氧所引起的氧化应激，对心肌细胞具有明显的保护作用，其作用机制是通过激活PI3K/AKT/GSK3β通路而提高AKT、GSK3β磷酸化水平，减少ROS产生，增加细胞的活性实现的。
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Src激酶抑制剂PP2对星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的：探讨Src激酶抑制剂PP2对大鼠星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法实验分为正常对照组，缺氧/复氧组（H/R；缺氧8 h/复氧24 h），PP2+缺氧/复氧组（PP2+H/R；缺氧前给予10μmol/L PP2作用24 h）。MTT法检测各组星形胶质细胞存活率，流式细胞术测定各组星形胶质细胞凋亡率，Western blotting法检测各组星形胶质细胞中Src激酶、Bax及Bcl-2的蛋白表达。结果 MTT检测结果显示H/R损伤后细胞存活率降低，而在使用PP2预处理后细胞存活率增加（P<0.01）；流式细胞术实验结果显示H/R损伤后细胞凋亡增加，而在使用PP2预处理后细胞凋亡显著减少（P<0.01）；Western blotting法检测结果显示H/R损伤后Src激酶表达增加，用PP2预处理后Src激酶表达降低。H/R损伤后凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的比值增加，在用PP2预处理后Bax/Bcl-2的比值显著降低（P<0.01）。结论 PP2可对星形胶质细胞H/R损伤起保护作用，其机制可能与抑制Src激酶的蛋白表达和激活抗凋亡机制有关。
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PPARγ激动剂罗格列酮对缺氧/复氧大鼠心肌细胞氧化应激和凋亡的影响
目的 观察不同浓度PPARγ激动剂罗格列酮对缺氧/复氧大鼠心肌细胞氧化应激影响及细胞活力和凋亡情况.方法 建立大鼠心肌细胞缺氧/复氧模型.培养大鼠心肌细胞分为5组:Ⅰ组(正常组)、Ⅱ组(20μmo/L ROS组)、Ⅲ组(I/R组)、Ⅳ组(FR+20μmol/LROS组)、Ⅴ组(I/R+80μmol/LROS组),Ⅳ组和Ⅴ组在缺氧/复氧前12 h经ROS处理.分别在光镜和透射电镜下观察缺氧/复氧后各组心肌细胞形态改变,采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物岐化酶(SOD)活力,采用2,4-二硝基苯肼法测定乳酸脱氢酶(LDH)含量,采用MTT法比较各组心肌细胞活力和采用流式细胞术测定各组心肌细胞凋亡率.结果 与Ⅰ组相比,Ⅲ组的MDA和LDH含量及细胞凋亡率明显升高(P<0.05),SOD含量和细胞活力降低(P<0.05);Ⅳ组和Ⅴ组MDA和LDH含量及细胞凋亡率较Ⅲ组降低(P<0.05)而SOD含量和细胞活力增加(P<0.05).Ⅴ组MDA和LDH含量及细胞凋亡率较Ⅳ组降低(P<0.05)而SOD含量和细胞活力增加(P<0.05).电镜下观察到Ⅲ组(I/R组)心肌细胞形态出现明显凋亡损伤改变,凋亡小体形成,而Ⅴ组改变轻微.结论 罗格列酮可以显著减轻心肌细胞缺氧/复氧导致的氧化应激损伤,改善细胞活力和减轻心肌细胞凋亡率,并存在量效关系.
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川芎嗪预处理对心肌细胞缺血/再灌注损伤延迟保护作用
目的 探讨川芎嗪预处理对心肌缺血/再灌注损伤延迟保护作用.方法 实验用SD新生(1～3 d)大鼠,雌雄不拘,无菌取出乳鼠心脏,经分离附着组织、胰蛋白酶消化及纯化制成心肌细胞培养,第4 天随机分为4组:正常对照(Control)组、缺氧/复氧(A/R)组、缺氧预处理(APC)组、川芎嗪(TMPZ)组.观察心肌细胞搏动频率、细胞存活率(MTT法)、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果 ①细胞搏动频率:缺氧/复氧组(13±3 )次/min,与正常对照组相比差异有显著性(P＜0.05);APC组(84±6) 次/min,TMPZ组(85±3)次/min,对正常心肌细胞搏动频率无明显影响(P＞0.05),与缺氧/复氧组比较差异有显著性(P＜0.05);APC组、TMPZ组之间差异无显著性(P＞0.05);②细胞存活率: 缺氧/复氧组(36.23±4.05)%,与正常对照组比较,差异有显著性(P＜0.05);APC组(83.76±6.92)%,TMPZ组(80.56±4.65)%分别与缺氧/复氧组比较,差异有显著性(P＜0.05),APC组、TMPZ组之间差异无显著性(P＞0.05);③LDH活性: 缺氧/复氧组(36.73±2.35) U/L与正常对照组比较,差异有显著性(P＜0.05);APC组(5.70±0.63 ) U/L、TMPZ组(5.74±0.34) U/L,分别与缺氧/复氧组比较,差异有显著性(P＜0.05),APC组、TMPZ组之间差异无显著性(P＞0.05).结论 从细胞水平证实TMPZ预处理后24 h心肌细胞对再次缺氧/复氧损伤具有保护作用.
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红景天苷对乳鼠缺氧/复氧心肌细胞及线粒体损伤的保护作用
目的 观察红景天苷对乳鼠缺氧/复氧后心肌细胞及线粒体损伤的保护作用并探讨其机制.方法 将乳鼠心肌细胞分为对照组、对照加红景天苷组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧加红景天苷组,分别用CCK8试剂盒检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡、线粒体膜电位情况,激光共聚焦显微镜观察细胞线粒体形态,并采用蛋白免疫印迹[Western blot]法分别检测线粒体和胞浆细胞色素C(Cytochrome C)蛋白的表达.结果 红景天苷能使缺氧/复氧心肌细胞凋亡减少,增加细胞活力,升高线粒体膜电位,减少线粒体分裂,减少线粒体细胞色素C的释放,实现缺氧/复氧心肌细胞及线粒体损伤的保护作用.结论 红景天苷可减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,减少心肌细胞的凋亡,保护心肌细胞线粒体功能.
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果糖二磷酸钠镁对心肌细胞缺氧复氧损伤修复作用的体外研究
目的:体外研究果糖二磷酸钠镁对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞损伤的修复作用及其机制.方法:采用原代培养4 d的心肌细胞建立H/R损伤模型,分为H/R组和H/R+果糖二磷酸钠镁高、中、低浓度(4.8、2.4、1.2 mg·mL-1)组,另取正常细胞设为正常对照组.加入相应药物处理后分别测定各组细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CPK)活性及细胞内游离钙浓度([Ca2+]i),并用透射电镜观察细胞超微结构的变化.结果:与H/R组比较,果糖二磷酸钠镁组能显著降低细胞中LDH、CPK、[Ca2+]i水平(P＜0.01或P＜0.05),减轻细胞超微结构的损伤.结论:果糖二磷酸钠镁对H/R损伤的心肌细胞具有修复作用,其作用可能与降低钙超载有关,且具有浓度依赖性.
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知母皂苷B对缺氧/复氧损伤星形胶质细胞的保护作用及其机制研究
目的:探讨知母皂苷B对缺氧/复氧损伤星形胶质细胞的保护作用及其可能机制.方法:原代新生SD大鼠星形胶质细胞经培养、鉴定后,随机分为正常组、模型组、阳性对照组(尼莫地平,10μmol/L)以及知母皂苷B低、中、高剂量组(1、10、100μmol/L).正常组和模型组均给予完全培养基1000μL,给药组给予含相应药物的完全培养基1000μL.除正常组外,其余各组细胞均采用氧糖剥夺/再灌注法复制缺氧/复氧损伤模型.复氧后,采用比色法检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)的相对释放率;采用四甲基偶氮唑盐法检测细胞相对活力;采用酶联免疫吸附测定法检测细胞中水通道蛋白4(AQP-4)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.结果:与正常组比较,模型组细胞中LDH相对释放率以及AQP-4、IL-6、IL-1β、TNF-α的含量均显著升高,细胞相对活力显著降低(P<0.01).与模型组比较,各给药组细胞中LDH相对释放率以及AQP-4、IL-6、IL-1β、TNF-α的含量均显著下降,细胞相对活力均显著升高(P<0.05或P<0.01).结论:知母皂苷B可明显降低细胞损伤程度、增强细胞活力,对缺氧/复氧损伤星形胶质细胞具有一定的保护作用,且这种作用可能与其下调AQP-4和IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌有关.
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太子参抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的活性部位筛选及作用机制研究
目的:筛选太子参抗心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的活性部位,并探讨其作用机制.方法:太子参药材水提物经D101大孔吸附树脂柱以水-乙醇梯度洗脱,得水洗脱部位(Fr.A)、30％乙醇洗脱部位(Fr.B)、50％乙醇洗脱部位(Fr.C)、95％乙醇洗脱部位(Fr.D).采用化学缺氧法以连二亚硫酸钠复制大鼠H9c2心肌细胞H/R损伤模型,采用MTS法检测经太子参各部位低、中、高剂量(Fr.A、Fr.B、Fr.C低、中、高剂量均分别为750、1500、3000 mg/L,Fr.D低、中、高剂量分别为5、10、20 mg/L)预处理后的细胞存活率,筛选活性强部位.分别采用微板法、硫代巴比妥酸比色法、WST-1法测定经太子参活性强部位低、中、高剂量预处理后细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性以及细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用蛋白质印迹法检测细胞胱天蛋白酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平.结果:经4个部位预处理后,Fr.A高剂量组,Fr.B高剂量组,Fr.C各剂量组的细胞存活率均较模型组显著升高(P<0.05或P<0.01),且以Fr.C的活性强.经Fr.C预处理后,各剂量组细胞培养液中LDH活性,中、高剂量组细胞内MDA含量、细胞凋亡率及Caspase-3和Bax蛋白的表达量均较模型组显著下降(P<0.05或P<0.01);高剂量组细胞内SOD活性以及中、高剂量组细胞Bcl-2蛋白的表达量均较模型组显著升高(P<0.05).结论:太子参Fr.A、Fr.B、Fr.C部位均具有抗心肌细胞H/R损伤的作用,其中以Fr.C的活性强;Fr.C抗心肌细胞H/R损伤作用可能与其改善细胞的氧化应激状态,提高细胞清除氧自由基的能力,降低细胞脂质过氧化程度,抑制细胞凋亡,上调Bcl-2蛋白表达以及下调Caspase-3、Bax蛋白表达有关.
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丹参酮Ⅱ A对缺氧/复氧损伤肾小管上皮细胞的作用及机制研究
目的:探讨丹参酮磺酸钠Ⅱ A(Tanshinone Ⅱ A,TSN Ⅱ A)对缺氧/复氧(hypoxia/reperfusion,H/R)肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2)氧化应激和凋亡的影响.方法:取传代培养的HK-2细胞建立H/R诱导细胞模型,实验分为正常对照组,单纯H/R组,H/R+20 μg/mL TSN Ⅱ A组,H/R+10 μg/mL TSN Ⅱ A 组,H/R+5μg/mL TSN Ⅱ A组共5组.光镜下观察各组细胞的形态变化;CCK-8法测定H/R HK-2细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平;荧光显微镜观察细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达.结果:与正常对照组比较,单纯H/R组HK-2细胞增殖活性明显减少,为(43.6±10.1)％;中低浓度TSN可提高H/R HK-2细胞的增殖活性,10 μg/mL浓度的TSNⅡA对H/RHK-2细胞的增殖具有明显的保护作用,为(79.1±11.1)％,与单纯H/R组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).20 μg/mL浓度TSN Ⅱ A组相对于10 μg/mL浓度组对细胞增殖有一定的抑制作用,为(51.0±10.4)％(P＜0.05).与H/R组比较,共聚焦荧光显微镜下TSN Ⅱ A减少细胞内活性氧产生.流式细胞术检测发现各浓度TSN Ⅱ A均对H/R HK-2细胞凋亡有一定抑制作用,其中以20 μg/mL为明显(P＜0.05).Western blot结果提示TSN Ⅱ A作用H/R HK-2细胞后凋亡抑制蛋白Bcl-2上调,而促凋亡蛋白Bax下调.结论:TSN Ⅱ A可能通过抑制氧化应激反应减少细胞凋亡,对H/R HK-2细胞产生保护作用.
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LPS预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的 探讨14-3-3γ基因在LPS预处理对抗心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤中的作用.方法 构建pSUPER/14-3-3γRNA干扰重组质粒,转染入心肌细胞,分为5组:对照组、A/R组、LPS+ A/R组、pSUPER+ LPS+ A/R组、pSUPER/14-3-3γ+ LPS+ A/R组.Western blot检测14-3-3γ蛋白表达,生化自动分析仪测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,线粒体肿胀实验检测线粒体通透性转换孔(mPTP)开放.结果 A/R损伤使细胞存活率下降,LDH升高,细胞凋亡增加,mPTP开放；LPS预处理可使14-3-3γ表达明显增加,通过抑制mPTP开放,对A/R损伤的细胞有保护作用；pSUPER/14-3-3γRNA干扰重组质粒通过抑制14-3-3γ蛋白表达,取消LPS预处理的保护作用.结论 LPS预处理可对抗心肌细胞缺氧/复氧损伤,其机制与上调14-3-3γ,从而抑制mPTP开放有关.
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动力相关蛋白-1在缺氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞焦亡机制中的作用
目的 观察人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤时线粒体动力相关蛋白1 (dynamin-related protein 1,Drp1)、Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain containing 3,Nlrp3)以及炎性因子的表达改变和细胞焦亡情况,探讨Drp1在H/R诱导肾小管上皮细胞焦亡中的作用.方法 HK-2细胞用含10％胎牛血清的DMEM/F12液培养于37 ℃、5％ CO2和95％O2的恒温培养箱.将细胞分为正常对照组、H/R组、H/R+ Drp1抑制剂(H/R+Mdivi-1)组、H/R+siNlrp3腺病毒(H/R+siNlrp3)组、H/R+空腺病毒(H/R+ Scra)组.检测细胞培养液上清乳酸脱氢酶LDH活性,Western blot检测Drp1、Nlrp3、凋亡相关蛋白-l(caspase-1)、IL-1β表达,2',7 '-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞活性氧(ROS)水平,流式分析仪检测细胞焦亡情况.结果 与正常对照组比较,H/R组培养液上清LDH和细胞内ROS水平明显升高,Drp1、Nlrp3、caspase-1、IL-1β表达增高,细胞焦亡明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与H/R组比较,H/R+Mdivi-1组培养液上清LDH和细胞内ROS水平明显降低,Nlrp3、caspase-1、IL-1 β表达降低,细胞焦亡明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在H/R条件下,Drp1通过激活Nlrp3炎性体诱导人肾小管上皮细胞焦亡.
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黄精多糖对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用
目的:探究黄精多糖(Polygonatum sibiricum polysaccharides,PSP)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤的保护作用.方法:体外无菌培养H9c2心肌细胞,制备缺氧/复氧损伤模型.应用A0-EB和Hoechst33324染色法观察心肌细胞凋亡形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用MTT法检测心肌细胞存活率,Westen Blot法检测H9c2心肌细胞Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白表达.结果:缺氧/复氧模型组中H9c2细胞存活率明显降低,细胞核浓染致密、固缩,细胞凋亡率明显增加,Caspase-3的表达和Bax/Bcl-2比率显著上调;与模型组比较,黄精多糖1.0、1.5、2.0mg/ml药物组中细胞存活率均明显升高,细胞核淡染,轻微缩小,细胞凋亡率降低,Bax/Bcl-2比率明显下调,Caspase-3表达水平被显著抑制.结论:黄精多糖对H/R诱导的H9c2心肌细胞具有保护作用,其作用可能与抑制心肌细胞凋亡有关.
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川芎内酯A预处理对体外培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的:观察川芎内酯A预处理对体外培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的保护作用.方法:单纯低氧/再给氧为心肌细胞低氧2小时、复氧1 小时.低氧预处理为心肌细胞低氧25min/复氧30min后,再低氧2小时、复氧1小时.川芎内酯A预处理为心肌细胞经药物孵育55min后,低氧2小时,复氧1小时.实验结束后取上清液测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);β液体闪烁计数仪测心肌细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性.结果:川芎内酯A预处理可使上清液中LDH漏出明显减少,MDA含量降低,SOD活性提高.还可降低心肌细胞内MAPK活性与H/R组比较.结论:川芎内酯A预处理对体外培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,MAPK信号传导途径可能参与这一保护作用.
