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利拉鲁肽激活Akt通路改善乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤
目的:研究利拉鲁肽对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及机制.方法:分离乳鼠心肌细胞,分为对照组、缺氧/复氧组和利拉鲁肽组,体外构建缺氧/复氧损伤模型,使用流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、Akt以及Akt磷酸化水平.结果:对乳鼠心肌细胞进行缺氧/复氧损伤处理后,流式细胞术检测发现,与对照组相比,缺氧/复氧损伤能明显诱导细胞凋亡,而利拉鲁肽则有抗凋亡作用;Western blot结果提示,缺氧/复氧损伤可诱导caspase-3表达,激活凋亡相关信号通路,促进细胞凋亡,而利拉鲁肽组细胞Akt磷酸化水平明显增加,caspase-3表达减少、活性降低.结论:利拉鲁肽可以通过增加Akt磷酸化以激活Akt通路,抑制caspase-3的表达,发挥抗凋亡作用,改善缺氧/复氧损伤.
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促红细胞生成素对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的:观察促红细胞生成素(eryrthropoietin,EP)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的影响及其相关机制探讨.方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,建立H/R模型.心肌细胞随机分为4组:①H/R组缺氧2 h,复氧4 h;②EP组在缺氧前1 h予EP(10 U/ml),随即缺氧2 h,复氧4 h;③Wortmannin+EP组(W+EP) 在EP预处理前30 min予3-磷脂酰肌醇激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3-K)特异性阻断剂Wortmannin(100 nmol/L);④正常对照组流式细胞仪检测细胞凋亡率.Western blot法检测心肌细胞EP受体表达和p-AKt/AKt比值.结果:EP可明显降低缺氧/复氧引起的心肌细胞凋亡,并明显增强SD乳鼠心肌细胞p-AKt/AKt比值;而Wortmannin减弱了EP的抗细胞凋亡作用,显著降低了p-AKt/AKt比值.结论:细胞凋亡参与了心肌缺氧/复氧损伤;EP可减少缺氧/复氧引起的SD乳鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与EP激活PI-3K/AKt信号通路有关.
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脂氧素A4通过激活PPARγ/Nrf2/HO-1途径保护HK-2细胞缺氧/复氧损伤
目的:探讨脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)在人肾脏近曲小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧损伤中的保护作用及可能机制.方法:LXA4预处理HK-2细胞后进行缺氧/复氧处理,CCK-8法检测细胞活性水平,ELISA法检测细胞上清液γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、氨基葡萄糖苷酶(NAG)和亮氨酸氨基肽酶(LAP)水平,羟胺法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法检测细胞丙二醛(MDA)水平,实时定量PCR和Western blot法分别检测HK-2细胞的过氧化物酶体增殖子活化受体γ(PPARγ)和血红素加氧酶-1(HO-1)的mRNA和蛋白表达的变化,利用RNA干扰技术干扰PPARγ表达后检测HO-1和核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达.结果:LXA4预处理的缺氧/复氧组细胞活性和SOD活性明显升高,细胞中γ-GT、NAG、LAP和MDA水平降低,而加入HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP)和转染PPARγ的siRNA后,LXA4对HK-2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用被阻断;此外,LXA4预处理的缺氧/复氧组HO-1、PPARγ和Nrf2表达均明显升高,并且LXA4预处理诱导的HO-1和Nrf2过表达能够被PPARγsiRNA所抑制.结论:LxA4预处理能够通过诱导HK-2细胞的HO-1高表达对抗HK-2细胞缺氧/复氧损伤,其机制与激活PPARγ/Nrf2有关.
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LXA4通过p38MAPK/Nrf2信号通路诱导H9c2心肌细胞HO-1高表达
目的:探讨脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)诱导心肌细胞H9c2中血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)-1表达可能涉及的信号转导通路.方法:分别用核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2 related factor 2,Nrf2)的抑制剂ATRA、p38MAPK的抑制剂SB203580、LXA4联合ATRA、LXA4联合SB03580预处理H9c2细胞后进行缺氧/复氧处理,RT-PCR、Westem blot、免疫荧光等检测HO-1、Nrf2以及p38MAPK mRNA和蛋白表达的变化.结果:与只行缺氧/复氧处理的细胞相比,LXA4预处理的H9c2细胞HO-1 mRNA和蛋白的表达明显升高(P＜0.05),而ATRA、SB203580分别抑制了Nrf2的聚集和p38MAPK的磷酸化(P＜0.05),从而抑制了LXA4对HO-1的诱导(P＜ 0.05).结论:LXA4预处理诱导心肌细胞H9c2的HO-1高表达,具有抗缺氧/复氧损伤的作用,其机制与p38MAPK/Nrf2信号通路有关.
关键词： 脂氧素 血红素加氧酶 核因子E2相关因子2 p38MAPK 缺氧/复氧损伤 -
葛根素对培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的 研究葛根素(Pue)处理后对培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制.方法 原代培养新生大鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,分为缺氧/复氧对照组和缺氧/复氧+葛根素保护组(葛根素浓度分别为1、0.1、0.01g/L).观察各组心肌细胞形态结构及超微结构的变化,测定心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)含量和一氧化氮(NO)分泌量,以及Pue对上述指标的影响.流式细胞仪计数各组细胞凋亡率.结果 Pue可明显提高SOD和LDH活性,降低MDA含量,减少NO分泌量,差异均有高度统计学意义(均P<0.01);电镜下治疗组心肌细胞结构接近正常;流式细胞仪计数治疗组细胞凋亡率明显低于对照组,差异有高度统计学意义(P<0.01).结论 葛根素处理对体外培养心肌细胞模拟缺氧/复氧损伤模型有明显的保护作用,其保护机制可能与葛根素稳定心肌细胞膜和减轻氧自由基损伤,并且抑制缺氧/复氧损伤中的心肌细胞凋亡有关.
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硫氢化钠后处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的 探讨硫化氢供体--硫氢化钠(NaHS)后处理对原代培养的新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用.方法 体外培养原代新生大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,并随机分为4组:对照组(Normal组)、缺氧/复氧组(H/R组)、缺氧后处理组(HPC组)和硫氢化钠后处理组(H/R+NaHS组).4组均为缺氧2 h后复氧2 h,并取5个时间点(缺氧前、缺氧2 h和复氧后 0.5 h、1 h、2 h)检测下列指标: ①心肌细胞存活率;②乳酸脱氢酶(LDH)活性;③丙二醛 (MDA)含量;④超氧化物歧化酶 (SOD)活性.结果 缺氧2 h时,H/R组、HPC组和H/R+NaHS组各个指标检测值均无显著差异(P﹥0.05).经缺氧后处理和NaHS后处理后,HPC组和H/R+NaHS组的细胞存活率分别为(70.5±2.2)%、(66.2±2.5)%,比H/R组显著升高[(61.3±1.8)%,P﹤0.05)];同时HPC组和H/R+NaHS组LDH活性分别为(36.2±1.3)U·L-1、(39.5±1.5)U·L-1,显著低于H/R组[(44.6±1.7)U·L-1,P﹤0.05];HPC组和H/R+NaHS组MDA含量分别为(0.905±0.033)mmol·g-1、(0.986±0.042)mmol·g-1,也明显低于H/R组[(1.120±0.045)mmol·g-1,P﹤0.05];而HPC组和H/R+NaHS组SOD活性分别为(16.9±1.0)U·L-1、(15.9±1.2)U·L-1,却明显高于H/R组[(13.3±1.5)U·L-1,P﹤0.05].在2 h复氧期内,HPC组和H/R+NaHS组细胞存活率和SOD活性始终明显高于H/R组,而LDH活性和MDA含量始终明显低于H/R组(P﹤0.05).结论 NaHS后处理可以提高心肌细胞清除氧自由基的能力,从而有效减轻缺氧/复氧造成的心肌细胞损伤.
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三白草中一个新的降碳木脂素类成分
从三白草的95％乙醇提取物中分离得到3个化合物,分别鉴定为Sauchinolide A(1),rel-(7S,8S,7'R,8'R)-3,3',4,4',5,5'-hexamethoxy-7.O.7',8.8'-lignan(2),galgravin(3).其中化合物1为新的降六碳木脂素,命名为三白草内酯A;化合物2和3为首次从三白草科植物中分离得到.初步评价了化合物1～3对内皮细胞EA.hy926的缺氧/复氧损伤的保护作用,化合物2对EA.hy926细胞缺氧/复氧损伤具有中等的保护作用.
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大蒜素对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤细胞凋亡的影响
目的探讨大蒜素对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及对心肌细胞凋亡的影响.方法利用乳鼠培养心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤模型,将培养心肌细胞分为正常对照组(C组)、缺氧预处理组(AP组)、缺氧/复氧组(A/R组)、大蒜素预处理组(G组),测定各组缺氧后、复氧后细胞损伤指标乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,并应用DNA琼脂糖凝胶电泳及原位末端标记(TUNEL)法检测各组凋亡指数(AI).结果 G、AP组LDII、MDA明显较A/R组降低(P＜0.01),SOD明显增高(P＜0.01);A/R、AP、G组AI较C组明显增高(P＜0.01),AP、G组AI较A/R组显著降低(P＜0.01),G组AI较AP组稍高(P＞0.05).结论大蒜素具有抗心肌细胞凋亡作用,可减轻心肌细胞A/R损伤.
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PKC 在枸橼酸舒芬太尼预处理大鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤模型中的作用
目的：蛋白激酶C（protein kinase C， PKC）信号通路是预处理早期保护机制细胞信号传递的共同通路，PKC是预处理早期保护的必备信号传递物质。文中探讨PKC在枸橼酸舒芬太尼预处理大鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤模型中的作用。方法原代心肌细胞分离培养。将5d的心肌细胞分成对照组、缺氧／复氧组、舒芬太尼组和佛波醇＋枸橼酸舒芬太尼组。对照组细胞培养不予任何处理，建立培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤模型，舒芬太尼组加入舒芬太尼至终浓度0．0003μmol／L，佛波醇＋舒芬太尼组使用佛波醇干预10 min后再给予枸橼酸舒芬太尼，并在各组相应处理后取材检测细胞增殖情况。免疫荧光共聚焦技术观察Connexin43（Cx43）蛋白的平均光密度，流式细胞术检测各期的凋亡率，Western blot检测细胞缝隙连接蛋白Cx43总蛋白。结果与对照组相比，缺氧／复氧组、舒芬太尼处理组、佛波醇＋舒芬太尼组细胞增殖明显增多（ P＜0．05）；与缺氧／复氧组增殖（0．3258±0．0235）相比，舒芬太尼组（0．4980±0．04324）、佛波醇＋舒芬太尼组（0．7240±0．1234）的细胞增殖增多（P＜0．05）。与舒芬太尼组增殖（0．4980±0．04324）相比，佛波醇＋舒芬太尼组（0．7240±0．1234）的细胞增殖增多（P＜0．05）。流式细胞术检测显示，与对照组相比，缺氧／复氧组、舒芬太尼组、佛波醇＋舒芬太尼组早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率升高（P＜0．05）；与缺氧／复氧组早、晚、总凋亡率[（4．96±0．59）％、（18．77±0．92）％、（23．73±0．51）％]相比，舒芬太尼组[（5．86±0．38）％、（10．37±0．38）％、（16．23±0．32）％]、佛波醇＋舒芬太尼处理组[（5．71±0．58）％、（5．54±0．43）％、（11．24±0．62）％]均显著降低（P＜0．05），其中舒芬太尼处理组较佛波醇＋舒芬太尼处理组晚期总凋亡率均低，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论枸橼酸舒芬太尼对缺氧复氧损伤的心肌具有保护作用， PKC激动剂联合枸橼酸舒芬太尼对心肌细胞缺氧／复氧损伤有叠加的保护效应。
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1-磷酸鞘氨醇后适应对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的 研究1-磷酸鞘氨醇(S1P)后适应对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法 将培养的H9c2心肌细胞随机分为5组,即正常对照组、缺氧/复氧组、S1P低浓度组、S1P中浓度组和S1P高浓度组.测定各组H9c2心肌细胞的存活率;收集细胞培养液测定超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡百分率;Fura 2-AM标记细胞内游离钙离子,检测荧光强度以反映细胞内游离钙离子浓度的变化;Westernblot法测定保护性蛋白热休克蛋白70(HSP70)的表达情况.结果 对于缺氧/复氧损伤的H9c2心肌细胞,S1P能够提高细胞的存活率,降低细胞内MDA含量及细胞内钙离子浓度,提高细胞内SOD活力,增强抗凋亡蛋白HSP70的表达,且呈一定的浓度依赖性.结论 S1P可以减轻心肌细胞氧化应激损伤,改善心肌细胞活力并减少凋亡.S1P对心肌细胞的保护作用可能是通过减少Ca2+超负荷,增加抗凋亡蛋白HSP70表达来实现的.
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附子多糖对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的保护机制
目的 以细胞凋亡的线粒体信号通路为着眼点,对附子多糖对缺氧/复氧后心肌细胞的保护机制进行探讨.方法 建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、缺氧后适应组和附子多糖组.缺氧/复氧组给予心肌细胞缺氧3h后复氧6h；缺氧后适应组在细胞缺氧3h后,复氧前即给予3个循环的5 min复氧/5 min缺氧,随后复氧6h;附子多糖组在缺氧3h后,将心肌细胞换入含附子多糖浓度为10 g·L-1的培养液中常规培养6h.流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率和线粒体膜电位,进行凋亡诱导因子(AIF)的Western blotting分析,检测心肌细胞内SOD活性和MDA含量.结果 与缺氧/复氧组相比较,附子多糖后处理可以保护心肌细胞SOD活性,减少MDA的生成,阻止线粒体膜电位的下降,抑制AIF自线粒体向胞浆的释放,减少心肌细胞凋亡率.结论 附子多糖后处理对缺氧/复氧后心肌细胞的保护机制与其抗氧化损伤,抑制细胞凋亡的线粒体信号途径有关.
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吡那地尔、美托洛尔、谷氨酰胺、胰岛素单独及联合使用对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制
目的 研究吡那地尔(pinacidil,Pin)、美托洛尔(metoprolol,Met)、谷氨酰胺(glutamine,Glu)、胰岛素(insulin,Ins)四药联用对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)所致H9c2心肌细胞损伤的保护作用并探讨其作用机制.方法 将培养的H9c2心肌细胞随机分为7组,即①正常对照(Con)组；②H/R组；③Pin组；④Met组；⑤Glu组；⑥Ins组；⑦四药联用(PMGI)组.测定各组H9c2心肌细胞的存活率；收集培养液测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性；Western印迹法检测保护性蛋白热休克蛋白70 (heat shock protein 70,HSP70)的表达情况.结果 对于H/R损伤的H9c2心肌细胞,四药联用组与药物单用组或H/R组相比能明显提高细胞存活率,保护细胞膜,减少LDH渗漏；增加抗氧化能力,提高SOD含量；增加HSP70的表达.结论 联合用药组与药物单用组相比保护作用增强.
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丹红注射液对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及与细胞凋亡的关系
[目的]明确丹红注射液（Danhong Injection，DHI）对心肌细胞（myocardial cells，MCs）生长的影响，探讨DHI对缺氧/复氧（hypoxia/ reoxygena－tion，H/R）MCs的保护作用及其与细胞凋亡的关系。[方法]收集和纯化新生SD乳鼠的MCs进行原代培养。将96孔板的MCs随机分为正常组，DHI 200、100、50、25、12．5、6．25、3．13、1．56、0．78、0．39、0．20mg生药（包括丹参与红花）/mL组，细胞接近融合状态后，加入相应浓度DHI培养24h，MTT检测细胞的活性。将96孔板的MCs分为正常组，模型组，DHI 200、100、50、25、12．5、6．25、3．13、1．56、0．78、0．39mg生药（包括丹参与红花）/mL组，加入相应浓度的DHI，同时进行H/R损伤造模（除正常组），MTT检测细胞的活性。将12孔板的MCs随机分为正常组，模型组，维拉帕米组，DHI 200、100、50mg生药（包括丹参与红花）/mL组，细胞长满孔底后，加入相应的维拉帕米和DHI，同时进行H/R损伤造模（除正常组），Annexin V/PI双标法在流式细胞仪上检测细胞凋亡率。[结果]与正常组比较，DHI 200、100、50、25mg生药（包括丹参与红花）/mL组的MCs活性显著增加（P﹤0．01）。模型组的MCs活性显著下降（P﹤0．01）；与模型组比较，DHI200、100、50、25mg生药（包括丹参与红花）/mL组H/R损伤MCs活性显著增加（P﹤0．01， P﹤0．05）。与正常组相比，模型组、DHI 100、50mg生药（包括丹参与红花）/mL组H/R损伤MCs凋亡率显著增加（P﹤0．01）；与模型组相比，维拉帕米组和DHI200、100、50mg生药（包括丹参与红花）/mL组H/R损伤MCs凋亡率显著降低（P﹤0．01，P﹤0．05）。[结论]DHI可增加MCs的细胞活性，保护H/R的MCs，降低H/R的MCs的凋亡率。
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黄蜀葵花总黄酮对海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用
目的:研究黄蜀葵花总黄酮(total flavones of abelmoschl manihot,TFA)对海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用以及可能的内皮衍生超级化因子(endothelium-dependent hyperpolarizing factor,EDHF)相关机制.方法:采用原代培养的海马神经元建立缺氧4h/复氧24 h损伤模型,预先在细胞培养上清内加入大鼠脑基底环动脉(basilar artery,BA)环,分别给予乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)联合一氧化氮(nitric oxide,NO)合酶抑制剂Nω-nitro-L-arginine-methyl-ester(L-NAME)和前列环素(prostacyclin,PGI2)抑制剂indomethacin(Indo);TFA联合L-NAME和Indo预处理.检测缺氧/复氧损伤后海马神经元存活率、培养上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力的变化;另外,用激光共聚焦法检测细胞内游离Ca2+浓度.结果:与单独应用Ach或者TFA预处理比较,Ach或者TFA联合脑基底动脉环均能明显改善缺氧/复氧后海马神经元存活率的降低,培养上清中LDH活力降低.此外,TFA联合脑基底动脉环抑制海马神经元细胞内游离Ca2+的增高,L-NAME及Indo对此结果并无显著影响.结论:TFA对缺氧/复氧致海马神经元损伤有明显的保护作用,其机制可能与促进EDHF释放,抑制细胞内Ca2+超载有关.
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右美托咪定对A549细胞缺氧/复氧损伤时JNK的影响
目的:观察右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)对缺氧/复氧所致的A549细胞损伤的干预作用以及对c-Jun氨基末端激酶(JNK)的影响.方法:培养A549细胞株,将细胞随机分为4组(n=10):正常对照组(N组),DEX组(D组),缺氧/复氧损伤组(H组),缺氧/复氧损伤+ DEX干预组(HD组).造模结束后,在倒置显微镜下观察细胞形态学的变化.CCK-8法检测A549细胞活力.原位末端标记(TUNEL)法检测A549细胞的凋亡指数(AI).蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、p-JNK、caspase-3蛋白的表达水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测GRP78、JNK mRNA的表达水平.结果:与N组比较,H组贴壁细胞数量明显减少,细胞形态发生改变.A549细胞的吸光度(OD)值明显下降(P＜0.01),AI值升高(P＜0.01),凋亡细胞数明显增加(P＜0.01).HD组与H组相比,细胞损伤减轻,OD值上调(P＜0.01),凋亡细胞数相对减少,AI值下调(P＜0.01).p-JNK、caspase-3蛋白和JNK mRNA表达下降(P＜0.01).结论:DEX可有效减轻A549细胞缺氧/复氧损伤,机制可能与其抑制JNK通路激活所致的细胞凋亡有关.
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pFLAG-AMPKα2真核表达质粒构建及对心肌缺氧/复氧损伤的作用
目的:构建大鼠pFLAG-AMPKα2真核表达质粒,分析AMPKα2过表达对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响.方法:提取H9c2心肌样细胞的mRNA,反转录为 cDNA.PCR扩增AMPKα2基因的cDNA全长,并将其克隆至pFLAG-CMV-4构建pFLAG-AMPKα2重组质粒.转染pFLAG-AMPKα2至H9c2细胞,Western Blot测定AMPKα2的蛋白表达情况,建立缺氧/复氧(A/R)损伤模型,MTT法检测心肌细胞的存活率,生物自动分析仪检测LDH活性,流式细胞术检测各实验组心肌细胞凋亡程度、细胞内ROS的变化,试剂盒检测细胞内抗氧化酶(SOD、GSH-Px)活性.结果:AMPKα2全长基因序列克隆至真核表达载体pFLAG-CMV-4,酶切鉴定片段大小为1700 bp,Western blot检测转染pFLAG-AMPKα2后,AMPKα2蛋白在H9c2细胞中高表达.H9c2细胞遭受A/R损伤,心肌细胞存活率下降,LDH活性增加,细胞凋亡加重,ROS生成增加,SOD及GSH-Px的酶活性下降,pFLAG-AMPKα2重组质粒的导入可明显逆转、改善上述各项指标,从而对抗A/R损伤.结论:构建成功的pFlAG-AMPKα2重组质粒能对抗A/R所致的心肌细胞损伤,其机制与改善心肌细胞的氧化应激作用有关.
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冠欣舒胶囊对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤保护作用的拆方实验研究
目的:研究冠欣舒胶囊对抗心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤作用,通过正交设计进行拆方实验,以求其佳配比方案.方法:按原方中丹参、三七、降香分离所得的有效部位及基本配比,设计正交表L16(44)；取培养4d的大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为18组(n=8):(1)Cont组、(2)A/R组、(3)～(18)受试组进行实验；检测细胞存活率、超氧化物歧化酶(SOD)、Catalase、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性、丙二醛(MDA)含量及孵育液乳酸脱氧酶(LDH)活性；用综合平衡法进行分析,得出冠欣舒佳配比方案,并进行验证实验.结果:不同配比组合的冠欣舒处理组可使细胞存活率与SOD、Catalase、GPx活性均有不同程度的升高,LDH活性与MDA含量均有不同程度的降低(P＜0.01或P＜0.05)；三七总皂苷与丹参总酚酸分别在保护细胞与提高细胞抗脂质过氧化作用方面发挥重要作用；冠欣舒的佳配比组合为:A3B3C2D4.结论:冠欣舒不同的配比具有对抗心肌细胞A/R损伤的作用,其机制可能与抗脂质过氧化作用有关；冠欣舒的佳配比组合为丹参总酚酸0.027 mg、三七总皂苷0.048 mg、降香油0.002625mg、降香总黄酮0.01326 mg.
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阿片受体激活对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用
目的:观察δ阿片受体激活剂D-丙(2)-D-亮(5)脑啡肽(DADLE)对培养心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用.方法:采用培养的SD大鼠乳鼠的心肌细胞,建立H/R损伤模型,检测指标包括:(1)心肌细胞形态;(2)心肌细胞存活率;(3)超氧化物歧化酶(SOD)活性;(4)丙二醛(MDA)含量; (5)乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果:模型组缺氧后心肌细胞存活率降低,复氧 30 min 后进一步下降,各个时间点细胞内SOD活性下降,MDA含量升高,LDH活性升高,与正常组比较差异有统计学意义(P＜0.01),复氧 60 min 后各指标逐渐趋于正常状态;DADLE 1 μmol/L 组细胞存活率升高, LDH活性降低,MDA含量逐渐趋于正常,SOD活性逐渐回升,表明经DADLE干预后,心肌细胞抗损伤能力加强,发生损伤的程度减轻;δ阿片受体抑制剂纳曲吲哚 10 μmol/L 抑制DADLE的保护作用.结论:DADLE通过δ阿片受体对乳鼠心肌细胞H/R损伤具有保护作用.
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羟丁酸钠在大鼠海马脑片缺氧/复氧损伤中的保护作用机制
目的:研究羟丁酸钠(SO)在大鼠海马脑片缺氧/复氧(H/R)损伤中的保护作用,揭示SO在缺血性脑损伤中的保护作用机制.方法:采用大鼠海马脑片H/R损伤模型.设正常对照组,H/R组,SO 1、10、100 μmol/L 组,NCS-382 100 μmol/L+SO 100 μmol/L(NCS-382+SO)组、NCS-356 100 μmol/L (NCS-356)组.测定脑片孵育液中乳酸脱氢酶(LDH)释放率,γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)含量;脑片进行TTC染色计算组织损伤百分率;HE染色观察组织病理形态学变化,流式细胞仪测定细胞内钙;酶组织化学法检测一氧化氮合酶(NOS)的表达.结果:SO明显降低H/R海马脑片LDH释放率(P＜0.01),提高TTC染色的A490值,降低组织损伤百分率(P＜0.01),升高GABA/Glu比值(P＜0.01),减轻H/R所致的组织病理损伤.H/R组脑片细胞内钙荧光强度和NOS阳性神经元明显高于正常对照组(P＜0.01);SO 100 μmol/L 组、NCS-356组细胞内钙荧光强度较H/R组显著减弱(P＜0.01),NOS阳性神经元的数目明显减少(P＜0.01).用γ-羟基丁酸(GHB)受体选择性阻断剂 NCS-382后再使用SO,细胞内钙荧光强度、NOS阳性神经元的数目均接近H/R组.结论:SO对大鼠海马脑片H/R损伤有明显的保护作用,其机制可能与升高GABA/Glu比值,激动GHB受体抑制细胞内钙的增高及NOS的表达有关.
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Fas/caspase-8/3和ERK信号通路在Fas siRNA减轻 心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用
目的 评价Fas/caspase-8/3和细胞外信号调节激酶(extracellular signaling-regulated kinase,ERK)信号通路在Fas siRNA减轻心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中的作用.方法 培养H9c2心肌细胞,随机分为4组(n=3):①正常对照组:H9c2细胞置于DMEM/F12细胞培养液中培养;②H/R组:将H9c2细胞进行5 h缺氧和1 h复氧处理;③Fas siRNA组(H/R+Fas-siRNA):H9c2细胞转染Fas siRNA 24 h后进行H/R损伤;④siRNA阴性对照组(H/R+siRNA-NC):H9c2细胞转染Fas siRNA-NC 24 h后进行H/R损伤.处理结束后,采用CCK-8法检测细胞活力;微量酶标法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性;Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;荧光定量RT-PCR法检测细胞Fas mRNA表达水平;Western blot法检测细胞内Fas、caspase-8/3、ERK和GSK-3β蛋白表达.结果 与对照组相比,H/R组细胞活力降低,LDH活性和细胞凋亡增加,Fas mRNA及蛋白水平升高,cleaved caspase-8/3、p-ERK、p-GSK-3β蛋白表达升高(P<0.05);与H/R组相比,H/R+Fas-siRNA组细胞活力明显提高,LDH活性和细胞凋亡率降低,Fas mRNA及蛋白表达水平降低,cleaved caspase-8/3蛋白表达降低,p-ERK、p-GSK-3β蛋白表达增高(P<0.05),而H/R+siRNA-NC组上述指标差异无统计学意义.结论 Fas/caspase-8/3和ERK信号通路在Fas siRNA减轻心肌细胞H/R损伤中发挥着重要作用.
