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刺五加与短梗五加种子的蛋白质电泳分析
目的:建立适用于刺五加和短梗五加种子的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴别方法,为二者种子的鉴别及质量评价提供参考.方法:采用15%分离胶的SDS-PAGE电泳对15个产地的刺五加种子和2个产地的短梗五加种子中可溶性蛋白进行电泳分析,利用BandScan 5.0软件对蛋白谱带蛋数目、谱带强度和相对分子质量等方面的差异进行比较.结果:17个种子样品共分离出31条清晰的蛋白谱带,其中2种种子的10条共有特征谱带和各自的1条标准特征谱带可作为刺五加和短梗五加种子的标准蛋白图谱.不同产地的刺五加种子蛋白电泳图谱具有一定的种内差异性.结论:该电泳方法和标准蛋白图谱可作为刺五加及短梗五加种子的鉴别依据.
关键词: 刺五加 短梗五加 蛋白质 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 电泳图谱 -
高低转移表型大肠癌细胞株蛋白质表达谱差异初步分析
目的:应用蛋白质组学技术分析高低转移表型大肠癌SW480细胞株和LoVo细胞株间的蛋白质表达谱差异.方法:以双向电泳技术分离两种细胞株总蛋白质,银染显色,进行差异蛋白质分析.结果:SW480和LoVo细胞株双向电泳图谱蛋白质点数分别为1184±47和1124±54,共获得88±5的蛋白质差异点,其中48±3个点仅在SW480细胞株中表达或表达明显增强,41±3个点仅在LoVo细胞中表达或表达明显增强.结论:高低转移表型大肠癌SW480细胞株和LoVo细胞株间的蛋白质表达谱存在一定的差异,对这些差异点进行鉴定将为研究大肠癌转移机制提供一定的线索.
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构象敏感凝胶电泳快速检测HBV准种序列异质性的方法
目的:建立一种快速检测乙型肝炎病毒(HBV)准种遗传异质性的方法并验证其敏感性和特异性.以满足研究HBV准种需要检测大量病毒序列的要求.方法:在构象敏感凝胶电泳(CSGE)检测方法的基础上,针对HBV核酸序列组成的特殊性,调整凝胶中使用的甲酰胺和乙二醇浓度并加入一定量的尿素,另外通过一次预电泳优选驱动序列.后用改进地CSGE检测已知序列的HBV C-ORF区片段克隆,并把检测结果与DNA序列分析结果进行比对,验证该方法的敏感性和特异性.结果:用改进地CSGE检测克隆的HVC C-ORF区片段获得了清楚地电泳图谱.对已知序列的HBC C-ORF区克隆片段进行检测:在34个克隆中发现了27种不同的克隆型,准种内病毒株(克隆)频率介于2.9~17.6%,克隆型之间的遗传距离介于0.2~2%.CSGE所得结果与DNA序列分析结果高度一致.结论:我们建立的CSGE具有高度的敏感性和特异性,完全可以用于检测HBV准种序列的异质性及其他相关研究
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人卵巢癌细胞系A2780及顺铂耐药系蛋白质双向电泳图谱的差异分析
近年来,生命科学研究领域的热点,蛋白质组学理论和技术的迅速发展和完善,可望从组织或细胞蛋白质整体水平这一全新角度,探讨卵巢癌顺铂耐药的机理[1].本研究应用固相pH梯度双向凝胶电泳技术,分离人卵巢癌细胞系A2780及顺铂(DDP)耐药系(A2780-DDP)的总蛋白,建立双向凝胶电泳(2-DE)图谱,再应用基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,及数据库鉴定部分差异蛋白质,希望发现与顺铂耐药有关的特异性蛋白质.
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急性心肌梗死患者血清乳酸脱氢酶同工酶电泳出现第六带临床意义探讨
绝大多数人血清中的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶经琼脂糖电泳并显色后只有LDH1~LDH55条色带.急性心肌梗死患者若出现充血性心力衰竭、心源性休克等并发症,其血清LDH同工酶电泳图谱中有时会出现第六条色带,即LDH6,其处在LDH5的阴极端,这种患者的预后极差,现介绍如下.
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钉螺AFLP分子标记电泳图谱信息数量化数据的分析
目的探讨扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记电泳图谱信息数量化数据的分析方法.方法从现场采集的钉螺中筛选出40只阴性钉螺,随机分为两组,用于基因组DNA模板的制备.再用Glyko BandScan软件将钉螺扩增片段长度多态性电泳图谱信息数量化,使用不同的读带标准读带,得到相应的数据集,然后对这些数据集进行遗传学统计分析与描述性总结.结果不同的标准所得到的遗传变异结果均有所差别,但随着读带标准值的增加,反映钉螺种群遗传多样性指标(如:Shannon's信息指数)也增加,当其增加到一定水平时,又开始下降,而基因流和基因一致度则相反.不同读带标准所得的遗传变异结果均呈明显的正态分布(P>0.05).以总灰度或以总灰度百分比划分读带标准,所得遗传变异结果的平均值均十分接近.两组钉螺平均基因一致度在总灰度百分比数据中为0.956,在总灰度数据中为0.958;两组间的平均遗传距离在总灰度百分比数据中为0.045,在总灰度数据中为0.043.结论将电泳图谱信息数量化,再以不同的读带标准去处理与分析数据的模式,是一种较为合理且准确的分析方法.
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电泳图谱中白蛋白的疏散现象对白蛋白测定结果的影响
对大量蛋白电泳图谱的分析过程中,发现在某些患者的白蛋白区域存在疏松增宽现象,即在白蛋白带的阳极侧边缘出现粗糙的淡染区,这里称之为疏散现象,报道如下.
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PCR在变形链球菌基因分型中的初步应用
目的 探索利用PCR法来对变形链球菌进行基因分型.方法:采用两组针对变形链球菌的随机引物,于不同的反应体系中,研究不同条件下进行聚合酶链反应的结果,寻找满意的聚合酶链反应条件.并对变形链球菌群(血清型 c、e、f、d、g)及3个临床分离株进行PCR扩增,对变形链球菌的电泳图谱进行分析,鉴定其基因型的多态性.结果 运用两组随机引物均可鉴别不同血清型的变形链球菌,对同一血清型的链球菌还可鉴别其不同的基因型.结论 两组随机引物均能对变形链球菌进行基因分型.随机引物PCR法简便、快速、分辨率较高,是鉴定变形链球菌基目型的有效方法.
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恙虫病立克次体蛋白抗原及其编码基因研究进展
恙虫病立克次体(Rickettsia tsutsugamushi)是恙虫病(Scrub typhus)的病原体,专性活细胞内寄生,革兰氏阴性,恙螨是其传播媒介。在分类地位上,恙虫病立克次体原属于立克次体科立克次体属,但由于其在许多生物学和遗传特性方面不同与其他立克次体,1995年将其另立一属一东方体属(Orientia),称为恙虫病东方体(Orientiatsutsugamushi)[1]。近十多年来,新的技术方法尤其分子生物学方法不断引入恙虫病立克次体的研究,使病原学研究更加系统深入广泛。现对其蛋白抗原与其编码基因的研究综述如下。1 恙虫病立克次体的多肽组成 纯化的恙虫病立克次体裂解物或蛋白抗原或多肽经SDS-PAGE电泳,发现有30多条带[2]。其中主要的多肽为56kD,58kD,47kD,70kD。由于各实验室实验条件的不一致,使得恙虫病立克次体多肽的命名也较为混乱,同一多肽有不同的名称。例如58kD(Hanson称为63kD,Tamura称其为60kD),56kD(Hanson称为60kD),47kD(Hanson称为50kD)。恙虫病立克次体各株SDS-PAGE电泳图谱是相似的,但某些多肽的分子量有细微的差别。如Kato株56kD多肽比其他株47kD(Gilliam,Karp,Shimokoshi)的分子量大。这与Melinda F.Moree等的发现是一致的[3](见表1)。菌体蛋白的迁移还受温度,2-巯基乙醇等样品制备条件的影响[4,3]。同一多肽分子,不同制备条件下会以不同的状态存在(见表2)。由表2可见,56kD蛋白是一个热修饰蛋白,其存在状态依温度不同而异。
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强直性脊柱炎患者血清蛋白的分析
强直性脊柱炎(AS)是一种血清类风湿因子阴性的脊柱关节病, 一般呈慢性病程, 临床上表现为脊柱疼痛及活动受限,其发病机制仍不清楚[1].
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家种及野生秦艽、麻花秦艽的rRNA基因间隔区PCR产物电泳图谱的初步研究
目的:分析甘肃不同地区家种及野生中药材秦艽Gentiana macrophylla、麻花秦艽G. straminea中提取的DNA中rRNA基因内转录间隔区PCR扩增产物的电泳图谱,为秦艽、麻花秦艽等不同品种鉴别和品质评价从分子水平提供依据.方法:提取中药材家种及野生秦艽、麻花秦艽的核基因组DNA,利用合成的特异性PCR引物对所提取的DNA中rRNA基因内转录间隔序列进行nPCR扩增,扩增产物行琼脂糖凝胶电泳以得到电泳图谱并进行分析.结果:琼脂糖凝胶电泳图谱显示不同秦艽DNA中rRNA基因内转录间隔区长度均在360bp左右,已具备足够的遗传信息量进行碱基序列分析.结论:不同秦艽DNA中rRNA基因内转录间隔区PCR扩增产物可作为从分子水平进行鉴别的标记之一.
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儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白组的双向电泳及PDQuest图像初步分析
微小病变型肾病约占儿童肾病综合征(NS)78%,我们以微小病变型肾病综合征的蛋白尿为研究对象,经条件优化后,以固相pH梯度(IPG)等电聚焦为第1向,SDS-PAGE均一胶(T=10%)的垂直电泳为第2向,即双向电泳(2DGE),对NS儿童的尿蛋白进行了研究.结果获得了满意的电泳图谱,将2DGE银染后,以扫描仪获取电泳图像,对图谱进行分析.
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醋纤膜电泳金染色检测体液微量蛋白
体液(尿,脑脊液)微量蛋白电泳一般采用浓缩标本进行.然而,浓缩方法非常费时,并可能由于吸附、分离或蛋白变性而导致误差.本文介绍未浓缩标本直接电泳,用稍加改进的Rightti[1]金染色法染色,微量蛋白可现清晰电泳图谱.
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肿瘤患者血清乳酸脱氢酶及其同工酶电泳图谱的变化
目的:探讨不同肿瘤患者血清乳酸脱氢酶(lachic dehydrogenase,LDH)活性及其升高者同工酶图谱的变化规律.方法:我们用比色法对1297例肿瘤患者的LDH活性进行测定,用琼脂糖凝胶电泳法对290例LDH活性升高肿瘤患者和30例健康者的同工酶进行观察.结果:22.4%的肿瘤患者血清LDH升高,LDH活性升高的肿瘤患者84.4%的存在着同工酶图谱异常.LDH活性升高的肿瘤患者的同工酶谱异常表现为L3↑、L4↑、L5↑、L1 ↓、L2 ↓的规律.结论:LDH及其同工酶可作为恶性肿瘤诊断的参考指标.
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STR分型异常图谱5例分析
DNA检验常要面对两大问题:一是如何提取高质、足量的模板DNA,另一个是如何分析检验结果.往往我们把重点放在第一个问题上,会不自觉地忽视第二个问题,认为原始图谱都是仪器自动分析的结果.本文作者在日常检案过程中遇到一些问题,发现通过正确地分析电泳图谱,找到异常图谱的原因,可有效提高检验成功率.现报道如下.