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常见革兰阴性杆菌临床分离株对碳青霉烯类等抗菌药物的耐药性分析
目的 调查常见革兰阴性杆菌临床分离株对碳青霉烯类等抗菌药物的耐药性,为临床治疗提供依据.方法 采用回顾性分析方法,调查2009年1月至2011年12月从温州医学院附属第一医院住院患者分离的2361株革兰阴性杆菌对碳青霉烯类等抗菌药物的耐药性,其中肠杆菌科细菌1832株,非发酵菌529株.结果 肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药较低.大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌、粘质沙雷菌、摩根摩根菌和产酸克雷伯菌对亚胺培南的耐药率分别为0.2％(2/1053)、3.0％ (15/504)、2.9％(3/102)、9.5％(7/74)、21.7％(10/46)、10.7％ (3/28)和16.0％ (4/25)；对美罗培南的耐药率分别为0.4％ (4/1053)、3.4％(17/504)、3.9％ (4/102)、8.1％(6/74)、19.6％ (9/46)、14.3％ (4/28)和16.0％(4/25).非发酵菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率高,鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌对亚胺培南的耐药率分别为76.8％(209/272)、37.2％(55/148)和73.4％ (80/109)；对美罗培南的耐药率分别为73.9％(201/272)、33.8％(50/148)和69.7％(76/109).肠杆菌科细菌和非发酵菌对其他10种抗生素均呈较高的耐药率.结论 碳青霉烯类抗菌药物对检测的肠杆菌科细菌具有很好的体外抗菌活性,但对非发酵菌的体外抗菌活性较差.
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耐药菌感染抗菌药物应用策略
由于各种抗菌药物的广泛使用,耐药微生物越来越多,耐药程度越来越严重,形成多耐药性(MDR).对此类耐药菌引起的感染,可选用万古霉素或其与利福平联合治疗.但随着万古霉素广泛使用,万古霉素敏感性逐渐降低,又出现了万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌(VRSA)、万古霉素中介敏感金黄色葡萄球菌(VISA)、及万古霉素异质性耐药金黄色葡萄球菌(hVRSA),这就意味着抗菌药物的后一道防线被撕破.2000年调查显示,该菌对一线药物碳青霉烯类耐药率从2%上升到46%～52%.此后其耐药性仍在发展.近年来抗菌药物治疗策略研究取得了较多成就,诸多治疗策略与方案为临床治疗耐药菌感染提供了可能.
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碳青霉烯类抗生素多尼培南的研究进展与应用
目的 概括多尼培南的研究进展,评价其临床应用.方法 从多尼培南的作用机制、抗菌活性、临床应用等方面进行分析、评价.结论 多尼培南作为目前新型注射用碳青霉烯类抗生素能有效治疗严重细菌感染.
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耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌医院感染监测
目的 了解住院患者耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌感染分布特征及耐药情况,探索有效防控措施.方法 通过临床标本细菌分离培养和药敏试验,对某医院住院患者送检病原学标本检测结果进行分析.结果 2014年全年从住院患者送检标本中共检出鲍曼不动杆菌444株,其中含耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌249株,构成比为56.1％.有81.2％耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌分离自痰液标本,其次是手术切口和创面分泌物.耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌感染患者主要分布于重症监护病房、神经外科、呼吸内科和神经内科以及脊柱外科.耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌除对替加环素耐药率较低外,对常用抗菌药物几乎都耐药.结论 该医院住院患者送检标本耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的检出率较高,普遍耐药,应实时监控耐药菌和加强消毒隔离措施以有效防控.
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住院患者多重耐药菌感染监测及防控
目的 调查住院患者多重耐药菌(MDRO)感染情况并提出感染防控措施.方法 通过病原学标本检验和药敏试验方法,对某医院住院病人病原学标本进行监测和全程追踪调查.结果 连续3年从该医院住院患者送检标本中,共检出多重耐药菌117株,主要为耐碳青霉烯类的铜绿假单胞菌,构成比为52.99％;其次是耐甲氧西林金黄葡萄球菌,构成比为15.38％.检出多重耐药菌的标本主要分离自重症监护病房、创伤骨科和呼吸内科.以痰标本为主,其次是伤口分泌物和尿液.结论 该医院住院患者送检标本检出的多重耐药菌主要是耐碳青酶烯类菌株,应加强MDRO感染患者的监测,落实消毒隔离措施并加强抗菌药物使用管理.
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我国碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌感染 危险因素Meta分析
目的 应用Meta分析方法探讨碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)感染的相关危险因素,为制定CRKP感染防控策略提供依据.方法 检索PubMed、万方和中国知网(CNKI)数据库,收集2018年3月前发表的国内CRKP感染危险因素研究文献报道.采用Stata12.0软件计算OR值及其95％CI.结果 16篇研究文献报道的研究对象为2126例患者,纳入了26项危险因素分析.与CRKP感染相关的危险因素有15项,分别为心血管系统、肾脏和神经系统等基础疾病,动静脉置管、机械通气、气管插管/切开、留置导尿管等侵入性医疗操作,检出前使用抗菌药物及碳青霉烯类、氨基糖苷类、酶抑制剂、喹诺酮类、三代/四代头孢、抗真菌药等抗菌药物使用,近期住院史等其他因素.结论 抗菌药物使用、侵入性医疗操作、近期住院史是CRKP感染的危险因素,应制定针对性干预策略,预防和减少CRKP感染发生.
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2012-2016年某医院肺炎克雷伯杆菌分布及耐药性变迁
目的 了解医院临床分离的肺炎克雷伯杆菌的分布及耐药性特点,以指导临床合理用药.方法 收集某医院2012-2016年临床分离的肺炎克雷伯杆菌,采用VITEK-2 Compact进行菌种鉴定,K-B纸片法进行药敏试验,并进行数据分析.结果 5年共分离出2582株肺炎克雷伯杆菌,痰液标本中检出1498株,占58.0％;科室分布以ICU和呼吸内科为主,分别占20.2％和18.6％;2012-2016产ESBLs肺炎克雷伯杆菌的检出率分别为13.9％、15.3％、18.8％、22.3％和29.0％;产ESBLs大肠埃希菌耐药率明显高于非产ESBLs大肠埃希菌,5年共检测出对碳青霉烯类耐药菌株315株,占12.2％.结论 肺炎克雷伯杆菌对抗菌药物的耐药性呈增长趋势,尤其是对碳青霉烯类抗菌药物耐药性明显增加,应加强耐药性监测,防止其在医院内的流行.
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耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的传播和分子特征
目的 分析多个患者多种标本中分离的耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的传播及分子特征.方法 用wHONET 5.4软件分析耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌菌株的一般情况,结合患者病历复习,了解所分离菌株的传播和致病作用;利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析基因型,采用多重PCR检测碳青霉烯酶基因,确定菌株的分子流行特征以及相互之间的亲缘关系.结果 从13例患者的2种或2种以上来源的标本中共获得耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌29株.PFGE分型显示共有两种不同基因型,其中A型22株,来自11名患者;B型7株,来自4名患者.PCR扩增结果显示,除1株菌外,所有菌株均含有碳青霉烯酶基因0XA-23;除3株菌外,均含有Ⅰ类整合子基因.结论 所检测的耐碳青霉烯的鲍曼不动杆菌有2个基因型,以A型为主.绝大多数鲍曼不动杆菌含OXA-23型碳青霉烯酶基因和Ⅰ类整合子基因.该菌很容易通过患者自身传播及相互传播,引起医院内耐药菌感染流行.
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武汉某医院重症监护室分离碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌分子流行病学分析
鲍曼不动杆菌(A.baumannii,Ab)是医院获得性感染的主要条件致病菌.近3年来,其在武汉某医院的临床分离率明显高于其他非发酵菌,尤其是在重症监护室(ICU)中分离率更高,且碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌(CRAB)数量也呈递增趋势,对危重患者威胁很大.2009年2-4月,本院ICU连续分离出30株CRAB,为了解这些菌株间的亲缘关系、碳青霉烯类耐药基因的类型及传播机制,为进一步采取预防控制措施提供有力的实验室依据,笔者抽取了其中13株进行了相关分子流行病学研究.
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碳青霉烯类抗菌药物合理应用管理实效分析及思考
介绍了我院通过多科协作管理的方式对碳青霉烯类药物合理使用进行管控的做法,即医务处对医师进行培训与考核并开展每月病历检查,药事科进行事前审方和事后点评,临床微生物室及感染管理科监测全院感染及细菌耐药信息并实时发布.结果显示,2017年6—12月亚胺培南西司他丁钠用量增加而比阿培南用量降低;耐药结果分析显示碳青霉烯类耐药菌株数增加28%,但患者总例数降低10%,多重耐药患者总数未增加.拟通过进一步推进院内 AMS(antimicrobial stewardship)建设来实现合理用药,遏制细菌耐药.
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碳青霉烯类抗生素诱导耐药铜绿假单胞菌外膜蛋白D2表达与编码基因多点突变
目的 探讨对碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌编码外膜蛋白D2(OprD2)基因变异与OprD2表达的关系.方法 由临床分离敏感铜绿假单胞菌,使用不同浓度亚胺培南与美罗培南含药琼脂平板法筛选耐药菌株.应用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、凝胶成像系统分析OprD2.应用聚合酶链反应及测序分析OprD2基因编码区.结果 人工诱导能产生出与临床分离株一样的对碳青霉烯类抗生素耐药的菌株.在SDS-PAGE图谱上亚胺培南与美罗培南耐药株与同源敏感株相比均有OprD2的减少.测序结果显示在多株耐药菌中,OprD2基因编码区3个基因位点同时出现碱基突变:在+84位点产生突变,胞嘧啶突变为胸腺嘧啶(C→T);在+401位点突变(C→A),造成第134位氨基酸苏氨酸突变为天冬氨酸(Thr→Asp);在+959位点突变(A→G),造成第320位氨基酸赖氨酸突变为精氨酸(Lys→Arg).结论 同时出现3个或更多的碱基点突变可能导致铜绿假单胞萧OprD2缺失或表达减少,可能是对碳青霉烯类抗生素产生耐药性的原因.
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部分发酵类肠杆菌科细菌耐药性及耐碳青霉烯类基因检测分析
目的 检测部分发酵类肠杆菌科细菌对临床推荐用抗生素的敏感性并筛查耐碳青霉烯类基因. 方法 采集鄂西北地区2013年1-12月间住院病人的血、痰、中段尿、前列腺液、分泌物或引流液等,常规琼脂培养法分离发酵类肠杆菌肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)、大肠埃希菌(Escherichia coli)、阴沟肠杆菌(Enterbacter cloacae)及沙雷氏菌(Serratia);利用Vitek-2分析系统鉴定菌株并检测其耐药性;PCR法扩增抗碳青霉烯类(亚胺培南和/或美罗培南)菌株耐药基因. 结果 共获得2 291株肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌和沙雷氏菌等分离株,产ESBLs率分别为47.4％、62.6％、9.1％、22.6％;临床推荐用抗生素耐药率:头孢唑啉(Ⅰ)分别为45.4％、73.7％、93.3％、100％,头孢西丁(Ⅱ)分别为17.3％、15.2％、84.9％、33.3％,头孢曲松(Ⅲ)分别为48.4％、65.0％、43.8％、44.4％;阿米卡星分别为17.4％、10.4％、28.1％、24.4％,氨曲南分别为35.4％、38.9％、49.1％、38.9％,亚胺培南(分别为1.8％、1.8％、17.6％、2.4％,美罗培南分别为1.1％、0.8％、6.7％、20％.其中分离出46株耐亚胺培南和/或美罗培南菌株,肺炎克雷伯菌P2964和肺炎克雷伯菌B195携带blaKPC-2基因,肺炎克雷伯菌P6558和产酸克雷伯菌B1645-1携带blaNDM-1基因. 结论 鄂西北地区部分发酵类肠杆菌耐药率呈上升趋势并出现耐碳青霉稀类菌株,菌株间可能存在耐药基因的传递并有造成感染扩散的风险,尤其在住院病人之间,应予以高度重视.
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耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌耐药机制及1型整合酶基因的研究
铜绿假单胞菌(PAE)是医院感染的重要病原菌之一,探讨本地区临床分离的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌耐药性及金属β内酰胺酶、外膜蛋白通道OprD2基因和1型整合酶基因存在状况有实用意义.用PCR法对金属β内酰胺酶IMP、VIM、SPM、GIM基因和外膜蛋白通道OprD2基因及1型整合酶基因等6种耐药基因进行检测与研究,并用K-B纸片扩散法和微量稀释法测定对庆大霉素等18种抗菌药物的敏感性.
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一株产碳青霉烯酶IMP-26阴沟肠杆菌的分离鉴定
在过去的几年中,产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌不断被发现,这引起了临床工作者的强烈担忧.我院发现一株碳青霉烯类抗菌药物耐药的阴沟肠杆菌,此临床菌株分离自一位9个月的哮喘患儿,对亚胺培南和厄他培南表现为耐药,其低抑菌浓度分别为4 μg/ml和16μg／ml.对青霉素类,头孢类及头孢与酶的复合制剂都表现为耐药.进一步的实验显示此菌株的Hodge试验阳性,确定该菌株产碳青霉烯酶.通过对亚胺培南与亚胺培南+EDTA的纸片的抑菌圈直径的比较,发现此种碳青霉烯酶能被EDTA抑制.通过PCR扩增,发现此阴沟肠杆菌含有blaInt11、blaIMP和blaTEM基因,通过测序和比对确定blaIMr的基因型为blaIMP-26,balTEM基因的基因型为blaTEM-104.通过等电聚焦电泳,也证实此阴沟肠杆菌产IMP和TEM酶.
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肺炎克雷伯菌耐药遗传元件样本和指标聚类分析初探
我们从新生儿中分离到1组(19株)厄他培南等碳青霉烯类药物耐药的多重耐药肺炎克雷伯菌( multidrugresistant Klebsiella pneumoniae,MDRKPN),对该组菌株进行了β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、氯霉素类等药物的耐药相关基因和多药外排泵基因,以及毒力基因、可移动遗传元件的遗传标记检测,并对检测结果作了样本和指标聚类分析,以探讨菌株的亲缘性和耐药基因与可移动遗传元件相互关系.
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儿科患者中对碳青霉烯类不敏感肠杆菌科细菌耐药性和耐药基因的研究
目的 研究儿科临床分离的对碳青霉烯类抗生素不敏感的肠杆菌科细菌耐药性和产生碳青霉烯酶的耐药基因特征.方法 收集2008年1月至2010年12月北京儿童医院住院患儿分离出的46株对碳青霉烯类抗生素不敏感的肠杆菌科细菌.使用琼脂稀释法进行药敏试验,测定抗菌药物的低抑菌浓度(MIC)值,按照临床实验室标准化研究所(CLSI) 2011年推荐标准判断结果.使用改良Hodge试验和双纸片协同试验,进行产碳青霉烯酶的表型确证.使用PCR方法进行碳青霉烯酶相关耐药基因的检测.采用WHONET5.6软件进行数据分析.结果 46株对碳青霉烯类抗生素不敏感的肠杆菌科细菌,26株为肺炎克雷伯菌,占56.5％,13株为阴沟肠杆菌,占28.3％,7株为大肠埃希菌,占15.2％.对亚胺培南和美罗培南不敏感率分别为肺炎克雷伯菌69.2％和80.8％,阴沟肠杆菌76.9％和100％,大肠埃希菌85.7％和100％.46株肠杆菌科细菌,改良Hodge试验阳性40株(87.0％),双纸片协同试验阳性41株(89.1％).IMP基因阳性38株(82.6％),其余8株均未扩增出特异性条带检测均为阴性.结论 目前儿科临床分离对碳青霉烯类抗生素不敏感菌株中,肺炎克雷伯菌多,占56.5％.肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌和大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素亚胺培南不敏感程度低于美罗培南,对碳青霉烯不敏感肠杆菌科细菌主要产生B类金属酶,均为IMP基因型.
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产IMP-4和KPC-2碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌PMQR基因检测及分子流行病学研究
产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌是近些年来导致医院内感染常见的条件致病菌之一，其耐药特征、产生碳青霉烯酶的基因型、质粒介导喹诺酮耐药基因（ PMQR）的分布及流行的克隆株等会随地域的差异而不同。我们研究发现本地区24株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌中均携带 KPC-2基因，还有5株携带IMP-4基因，且24株产酶菌株中均携带PMQR，包括 qnrS112株， qnrA111株， qnrB411株，其中3株同时携带有包括qnrS1、qnrA1、qnrB4基因，1株同时携带qnrS1、qnrA1、qnrB4、acc （6′）-cr 基因；另外17株携带有acc（6′）-Ib基因，其中9株为acc（6′）-Ib-cr基因，7株为acc（6′）-Ib-suzhou基因，1株为acc（6′）-Ib基因野生型。不携带碳青霉烯类酶基因肺炎克雷伯菌的携带1种PMQR基因以上的阳性率（23．7％）显著低于携带碳青霉烯类酶基因菌株（91．7％），差异有统计学意义（χ2＝62．00，P＜0．01）。
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体内诱导耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌膜蛋白质组学研究
目的 研究膜蛋白在耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌中的作用.方法 从同一住院病人体内分别收集碳青霉烯类敏感和耐药的鲍曼不动杆菌各1株.经多序列位点测序分型(MIST)和细菌基因组外回文结构重复序列分型(REP-PCR)分析后,等电聚焦电泳检测其已知碳青霉烯类水解酶的表达,在此进行膜蛋白二维电泳和质谱鉴定分析,并后应用PABN(Phe-Arg-β-naphthylamide)外排泵抑制剂检测其外排泵相关膜蛋白表达.结果 MIST和REP-PCR结果表明耐药株来源与敏感菌株属于同一型别;等电聚焦电泳在P17.6和P19.0处两株菌中检测到β-内酰胺酶,没有检测到任何已知的碳青霉烯类水解酶;耐约株和敏感株的差异膜蛋白组学鉴定出相对分子质量(M_r)为34×10~3外排泵膜蛋白和0prD与CarO膜孔蛋白,且后续的外排泵抑制剂试验表明,在PAβN存在的情况下,耐药株的亚胺培南低抑菌浓度(MIC)由大于32 μg/ml下降到8 μg,/ml.结论 本研究发现外排泵膜蛋白的过度表达伴随OprD和CarO膜孔蛋白的下调是临床分离耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌主要耐药机制.
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7株泛耐药克雷伯菌的耐药特征及其耐药基因
从浙江丽水市中心医院分离到无重复泛耐药克雷伯菌7株:5株肺炎克雷伯菌(K1-K5)、1株臭鼻克雷伯菌(K6)、1株解鸟氨酸克雷伯菌(K7).菌株鉴定及药敏:取患者痰液标本在血平板上,37℃,18～24 h生长分离单个菌落.采用Vitek2 -compact鉴定仪经GNI卡鉴定为克雷伯菌.取M-H平板上37℃,18 h生长的单个菌落,采用鉴定仪配套的GN13卡鉴定菌株药敏.结果所有菌株对亚胺培南、厄他培南、头孢他啶、头孢吡肟等碳青霉烯类、头孢类抗生素耐药,且均对氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、复方新诺明、氨曲南、呋喃妥因耐药;除解鸟氨酸克雷伯菌(K7)外,其他菌株同时对左氧氟沙星、环丙沙星等喹诺酮类抗生素耐药.
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产气肠杆菌中发现碳青霉烯酶KPC-2型
肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(Klebsiella pneumoniae Carbapenemase,KPC),属A类β-内酰胺酶.2010年3月25日我们从一家三等甲等医院老年患者的痰液中分离到1株碳青霉烯类耐药的产气肠杆菌(标本编号:20100323BAA049,经gyrA和parC基因扩增与测序,GenBank比对确认).为了解该菌株的β-内酰胺类耐药机制,我们采用E-test法检测了该菌对26种抗菌药物敏感性,并进行了A类、B类、C类、D类等4类41种β-内酰胺酶基因检测,用改良的三维试验法检测AmpC酶、ESBLs和金属β-内酰胺酶活性,用改良Hodge试验法检测碳青霉烯酶活性.
