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高糖对胰岛β细胞功能影响研究进展
诸多研究表明长期而持续的高血糖是导致β细胞功能缺陷的重要因素,包括早期减少葡萄糖刺激的胰岛素分泌和终不可避免地减少胰岛素基因转录和β细胞数量,本文就近几年来有关高血糖对胰岛β细胞功能影响的研究进展作简要归纳,深入认识糖尿病的发病机制和致病过程,将更好地防治2型糖尿病具有重要意义.
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高糖通过诱导HT22细胞衰老和凋亡抑制细胞生长
目的 探讨高糖(High glucose,HG)对小鼠海马神经元细胞HT22细胞的生长抑制作用,分析其是否通过HG诱导细胞衰老以及凋亡而实现.方法 采用台盼蓝染色计数法检测细胞生长状况并绘制生长曲线,β-半乳糖苷酶(Senescence asso-ciated acidic-β-galactosidas,SA-β-Gal)染色法检测衰老的HT22细胞,Hoechst 33258染色法检测HT22细胞凋亡形态.结果(1)HG(13.5、27、40.5 mg/ml,48 h)能显著抑制HT22细胞生长(P<0.05,P<0.01);(2)HG(13.5、27、40.5 mg/ml)处理48 h可明显诱导SA-β-Gal染色阳性率增加(P<0.001);(3)HG(13.5、27、40.5 mg/ml,48 h)能诱导HT22细胞发生凋亡(P<0.001),且呈浓度依赖性.结论 HG可通过诱导 HT22细胞衰老和凋亡而抑制 HT22细胞生长.
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神经外科重症合并高糖高渗非酮症昏迷27例
高糖高渗非酮症昏迷(HHNC)病死率为20%～40%,神经外科病人合并HHNC常起病急促,临床表现易与原发病混淆,而延误诊治,病死率达80%[1].1995年3月至2003年3月我科收治神经外科重症合并HHNC27例,现报告如下.
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胰岛素对高糖引起H9c2细胞损伤的保护作用及机制研究
目的:观察胰岛素对高糖诱导H9c2细胞凋亡的对抗作用,并探讨与内质网应激的相关机制.方法:培养大鼠心肌来源的H9c2细胞,以低糖(5.5 mmol/L)作为对照.H9c2细胞用高糖(35 mmol/L)培养基孵育不同时间(6h、12 h、24 h、48 h、72 h),建立心肌细胞高糖损伤模型,后用胰岛素(100 nmol/L)处理细胞,采用MTT法和Hoechst染色检测细胞活力和凋亡;不同时间收集细胞mRNA,RT-PCR检测内质网应激分子标志物GRP78的表达;在高糖损伤的基础上分别用胰岛素以及LY294002(PI3K/Akt抑制剂)处理细胞,Western blotting检测各组细胞中t Akt和p-Akt的蛋白表达平.结果:高糖刺激H9c2细胞48 h后,与对照组比较,细胞发生凋亡,细胞活力下降(P＜0.05).与对照组比较,高糖处理24 h时,GRP78 mR-NA表达水平上调(P＜0.01);与高糖组相比,胰岛素+高糖组p-Akt蛋白的表达显著增加(P＜0.01),且LY294002能明显抑制胰岛素引起的p-Akt的表达上调(P＜0.01).结论:高糖可通过内质网应激引起心肌细胞凋亡,胰岛素通过PI3K/Akt信号通路的活化,保护心肌细胞因高糖刺激引起的内质网应激损伤.
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胰高血糖素样肽-1对葡萄糖刺激下胰岛β细胞胰岛素原合成的短期作用
目的:探讨胰高血糖素样肽-1(GLP-1)在高浓度、低浓度葡萄糖作用下对胰岛β细胞胰岛素原合成的短期影响.方法:将NIT-1细胞随机分为低浓度葡萄糖(LG)组、低浓度葡萄糖+GLP-1(LGG)组、高浓度葡萄糖(HG)组和高浓度葡萄糖+GLP-1 (HGG)组4组.检测基线0h及葡萄糖和(或)GLP-1刺激后4h各组细胞胰岛素原基因和蛋白表达.结果:基线时各组胰岛素原表达无显著差异(P＞0.05),4h后HG组、HGG组胰岛素原表达均明显增高(P＜0.05),而LG和LGG组无明显变化(P＞0.05).组间比较,HGG组胰岛素原表达量明显高于LG组、LGG组及HG组(均P＜0.05).HG组胰岛素原表达量显著高于LG组、LGG组(均P＜0.05).结论:在高浓度葡萄糖条件下,短期GLP-1刺激可显著增加胰岛β细胞胰岛素原合成；GLP-1联合高糖对胰岛素原合成具有协同作用.
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厄贝沙坦对高糖诱导胰岛NIT-1细胞Caspase-3 mRNA表达及凋亡的影响
目的：观察厄贝沙坦对高糖诱导胰岛 NIT-1细胞Caspase-3 mRNA 表达及凋亡的影响。方法将对数生长期胰岛NIT-1细胞分为空白对照组（A组），高糖组（25 mmol／L）（B组），高糖加厄贝沙坦（0．1 mmol／L）组（C组），厄贝沙坦（0．1 mmol／L）培养24 h后加高糖培养组（D组），各组细胞分别培养48 h。通过Hochest 33342荧光染色观察各组细胞形态，反转录聚合酶链反应（ RT-PCR）技术检测各组细胞Caspase-3 mRNA的表达。结果 Hochset 33342荧光染色结果：A组细胞呈均匀弥漫性蓝光着色，B组细胞呈不均匀强蓝光着色，可见细胞核浓缩和细胞碎片，C组和D组大部分细胞着色与A组细胞一致，少数呈不均匀强荧光蓝色减少。 RT-PCR结果：B组Caspase-3 mRNA表达量高于A、C、D组（P＜0．05），A、C 、D组间比较，差异无统计学意义（P＞0．05）。结论高糖可诱导胰岛 NIT-1细胞凋亡；厄贝沙坦可降低Caspase-3 mRNA表达量，减少细胞凋亡，在体外，对高糖诱导胰岛NIT-1细胞可能具有一定的保护作用。
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高糖刺激对体外培养大鼠肾小球系膜细胞表达TGF-β1和PDGF-BB的影响
目的 探讨高糖刺激对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)表达转化生子因子(TGF-β1)和血小板源性生长因子( PDGF- BB)的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,传代后分为正常组(葡萄糖浓度为5.6 mmol/L)、高糖A组(葡萄糖浓度为15 mmol/L)、高糖B组(葡萄糖浓度为30 mmol/L),分别培养12h、24 h、48h后,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组细胞TGF-β1和PDGF-BB mRNA的表达水平,应用免疫细胞化学法检测各组细胞中TGF-β1和PDGF-BB蛋白的表达.结果 ①正常组细胞可表达TGF-β1及PDGF-BB;②与正常组相比,高糖各组细胞TGF-β1和PDGF-BB的mRNA及蛋白表达均升高(P＜0.01)；③与高糖A组比较,高糖B组系膜细胞中TGF-β1和PDGF-BB的mRNA及蛋白表达均升高(P＜0.01).结论 高糖刺激可以上调大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1和PDGF-BB的表达.
关键词： 糖尿病肾病 高糖 肾小球系膜细胞 转化生子因子-β1 血小板源性生长因子-BB -
300例糖尿病人饮食问卷调查分析
目前全世界有糖尿病患者1.3亿,我国有糖尿病患者约2000多万,糖尿病对人类正构成越来越大的威胁.在我国,近年来由于生活条件的改善,人们大量摄入高糖、高脂饮食,体力活动减少,导致肥胖,使Ⅱ型糖尿病患者逐年增加.因此控制糖尿病首先要从生活习惯入手.我们通过300例糖尿病人的问卷调查资料中可以看出有相当比例的病人缺乏有关饮食方面的知识,现报告如下.
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高糖环境肾小管上皮细胞Smad1的表达
目的 模拟糖尿病条件,观察人肾小管上皮细胞(HK-2)生长情况和Smad1表达的变化,探讨高糖对肾小管上皮细胞的损伤机制.方法 用DMEM/F12细胞液培养HK-2细胞,分为对照组,中糖组(12.5mmol/L葡萄糖),高糖组(25mmol/L葡萄糖),分别培养24h、48h、72h后倒置显微镜下观察HK-2的形态和数量变化,采用蛋白印迹技术检测Smad1的蛋白表达.结果 高糖组刺激72h后,与对照组相比HK-2细胞数为(105.333±6.429)×105/mL,而对照组HK-2细胞数为(50.333±2.51)×105/mL,差异有统计学意义(P＜0.01);高糖组HK-2细胞形态改变,Smadl蛋白表达明显增加.结论 高糖能够诱导肾小管上皮细胞数量及形态发生改变,并且这一作用可能与Samd1表达增加有关.
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GLP-1对高糖诱导内皮细胞损伤的保护作用及分子机制研究
目的:研究胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)对高糖诱导内皮细胞损伤的保护作用及分子机制.方法:培养内皮细胞HUVECs并分为三组,对照组用不合血清的低糖培养基处理、高糖组用含有40 mmol/L葡萄糖的无血清培养基处理、GLP-1组用含有10 mmol/L GLP-1及40 mmol/L葡萄糖的无血清培养基处理.处理后24小时,测定细胞中凋亡基因、自噬基因的表达量以及氧化应激产物、抗氧化物的含量.结果:高糖组细胞中JAK2、STAT3、Bax、Caspase-9、Caspase-3、Nrf2、NQO1、HO1、GSH-Px的mRNA表达量以及ROS、gp91phox、MDA、ox-LDL的含量显著高于对照组,STSQM1、Atg-5、LC-3的mRNA表达量显著低于对照组;GLP-1组细胞中JAK2、STAT3、Bax、Caspase-9、Caspase-3的mRNA表达量以及ROS、gp91phox、MDA、ox-LDL的含量均显著低于高糖组,Nrf2、NQO1、HO1、GSH-Px、STSQM1、Atg-5、LC-3的mRNA表达量显著高于高糖组.结论:GLP-1能够通过抑制凋亡、减轻氧化应激、增强细胞自噬的途径来减轻高糖诱导的内皮细胞损伤.
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高糖诱导的心肌细胞损伤的内质网应激机制研究
目的:本文对高糖诱导的心肌细胞损伤的内质网应激机制研究,为临床治疗提供借鉴.方法:心肌细胞随机分为3组:对照组、高糖组和4-BPA组.高糖组给予高糖处理12h,4-BPA组细胞在高糖处理的第6h给予4-BPA处理.免疫印迹法分析各组细胞内质网应激蛋白CHOP、BIP、PERK的表达.结果:高糖引起心肌细胞内质网应激蛋白CHOP、BIP、PERK的增强表达,且与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01);4-BPA处理后上述蛋白的异常表达得到部分改善,且与高糖组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:高糖损伤心肌细胞可能是通过激活细胞内内质网应激信号通路实现.
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高浓度葡萄糖对Notch2信号通路及破骨细胞分化的影响
目的 探讨高浓度葡萄糖对RANKL诱导破骨细胞分化及Notch信号通路的影响.方法 高糖(5～40 mmol/L)条件下,RANKL刺激小鼠骨髓源性破骨前体细胞向破骨细胞分化,TRAP染色检测破骨细胞分化情况,实时定量PCR检测Notch信号通路相关基因(Notch1、Notch2、Jagged1)的表达情况.结果 RANKL诱导破骨细胞分化过程中,实验组(20 mmol/L和40 mmol/L葡萄糖)破骨细胞个数分别为(110.3±6.81)和(72.0±8.0); Notch1相对表达量分别为(1.25±0.43)和(1.14±0.45),Notch2相对表达量分别为(1.65±0.23)和(1.1±0.11),Jagged1相对表达量分别为(1.16±0.38)和(1.09±0.23);对照组(20 mmol/L和40 mmol/L甘露醇)破骨细胞个数分别为(152.7±7.0)和(157±12.5),Notch1相对表达量分别为(1.84±0.38)和(1.66±0.40),Notch2相对表达量分别为(2.82±0.28)和(2.42±0.27),Jagged1相对表达量分别为(1.52±0.26)和(1.45±0.34).其中,破骨细胞数量和Notch2基因表达量在实验组与对照组间差异具有显著统计学意义(P＜0.05).结论 高浓度葡萄糖抑制Notch信号及破骨细胞分化,该结果提示Notch2信号可能参与高糖抑制破骨细胞分化过程.
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多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1介导高糖致大鼠肾脏系膜细胞tPA/PAI-1的紊乱
目的 探讨多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1(PARP-1)在高糖(25 mmol/L)作用下大鼠肾脏系膜细胞tPA/PAI-1纤溶系统紊乱中的作用.方法 (1)体外培养大鼠肾脏系膜细胞株(MCs 1097),使用高糖(25 mmol/L)处理大鼠肾脏系膜细胞,部分实验组中应用PARP-1特异性抑制剂PJ34(3×10-6 mol/L)进行干预处理.(2) RT-PCR及Western blot检测PARP-1的mRNA及蛋白表达.(3)高通量比色测定法检测PARP-1的活性.(4) ELISA法测定细胞上清液tPA、PAI-1的分泌蛋白.结果 (1)高糖显著诱导大鼠肾脏系膜细胞PARP-1mRNA和蛋白的表达,PJ-34可明显抑制高糖诱导的PARP-1 mRNA和蛋白的过度表达.同时,高糖显著诱导大鼠肾脏系膜细胞PARP-1激活,PJ-34可显著抑制高糖诱导的PARP激活.(2)高糖轻度减少大鼠肾脏系膜细胞分泌型tPA的蛋白表达,显著增加大鼠肾脏系膜细胞分泌型PAI-1的蛋白表达,导致tPA/PAI-1比值降低,PJ-34显著预防高糖诱导的上述改变.结论 高糖可以诱导培养的大鼠肾脏系膜细胞内PARP激活,PARP1表达增加,PJ-34预处理可以明显降低高糖诱导的大鼠肾脏系膜细胞内PARP的激活以及下游tPA/PAI-1纤溶系统紊乱,提示高糖可能通过过度激活PARP来诱导tPA/PAI-1功能紊乱.
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高糖培养对神经膜细胞株 EG R2蛋白表达的影响及其意义
目的：研究不同浓度葡萄糖对神经膜细胞早期生长反应蛋白2（EGR2）表达产生的影响。方法将神经膜细胞株用两种不同浓度的葡萄糖培养后，分组为正常葡萄糖浓度组（5．5 mmol/L ，N组）和高糖组（25 mmol/L ，H组），用免疫细胞化学法和蛋白质印迹法研究EGR2蛋白表达情况。结果 H组EGR2蛋白表达比N组高，差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论高糖导致神经膜细胞株EGR2蛋白表达升高，EGR2可能在糖尿病导致的神经病变中发挥作用。
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1,25-二羟维生素D3协同槲皮素抑制高糖诱导SH-SY5Y细胞凋亡的研究
目的 利用高糖环境中的神经母瘤SH-SY5Y细胞产生炎性反应制备糖尿病神经受损细胞模型,观察1,25-二羟维生素D3协同槲皮素对高糖环境中神经细胞保护作用,探讨其分子机制.方法 采用100mmol/L葡萄糖模拟神经瘤细胞高糖环境,噻唑蓝(MTT)观察不同槲皮素浓度(0、25、50、100、200 μmol/L)对细胞的增殖影响.蛋白免疫印迹(Western blot)观察Bcl,Bax,MMP-9蛋白表达,流式细胞仪Annexin-FITC/PI方法分析细胞凋亡,酶联免疫吸附测定法检测细胞上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的表达.结果 100 mmol/L葡萄糖明显诱导SH-SY5Y细胞凋亡,MMP-9蛋白表达升高,分泌炎症因子,表现为神经细胞受损.加入1,25-二羟维生素D3(1 nmol/L)和25、50μmol/L槲皮素及两者联合用药可以明显逆转这些变化,其中槲皮素剂量依赖性抑制细胞凋亡和炎症因子表达.结论 槲皮素和1,25-二羟维生素D3能有效保护高糖引起的神经细胞凋亡受损,联合用药有明显的协同作用,实验对指导糖尿病患者使用1,25-二羟维生素D3联合槲皮素预防糖尿病患者神经损伤有积极指导意义.
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阿托伐他汀对高糖诱导的系膜细胞凋亡的影响
目的：探讨不同浓度阿托伐他汀对大鼠系膜细胞凋亡的影响。方法体外培养大鼠永生系膜细胞，分为5组：对照（C）组；高糖（30 mmol／L）（H）组；高糖（30 mmol／L）＋阿托伐他汀（10－7 mmol／L）（H＋ A1）组；高糖（30 mmol／L）＋阿托伐他汀（10－6 mmol／L）（H＋A2）组；高糖（30 mmol／L）＋阿托伐他汀（10－5 mmol／L）（H＋ A3）组。采用Annexin V‐FITC和PI双染法检测细胞凋亡。采用caspase‐3活性检测试剂盒检测系膜细胞caspase‐3活性。结果与C组相比，H组系膜细胞凋亡率明显增加，caspase‐3活性明显增加，差异有统计学意义（ P＜0．05）。与H组相比，高糖加不同浓度阿托伐他汀组细胞凋亡率明显降低，caspase‐3活性明显降低，差异有统计学意义（ P＜0．05） ，且呈浓度依赖。结论阿托伐他汀可以通过caspase途径抑制醛固酮诱导的大鼠系膜细胞凋亡。
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爱你的肝脏,从嘴巴开始
从根本上说,身体的健康与否跟食物之间的关系是密切.专家认为、高糖和高碳水化合物饮食的人容易患上脂肪肝.食物为我们每天的脑力和体力劳作提供能量,过量摄入或者消耗不足就容易造成脂肪堆积.如果不首先管好自己的嘴巴,丰富的食物选择反而成了健康的敌人.
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肝硬化的饮食原则
肝硬化是一种常见的慢性进行性肝脏疾病.肝硬化病人一般食欲较差,消化功能下降.因此,妥善安排肝硬化病人的饮食,保证病人的合理营养,是肝硬化治疗过程中举足轻重的事.由于肝功能受到损害的程度轻重不一,往往出现不同的并发症,因而对饮食的要求也不一样.但肝硬化病人饮食的一般原则是相同的.肝硬化病人需要足够的营养,但要防止因强调“营养”而大量服用高糖、高蛋白、高热量和低脂肪饮食.一般说来,肝硬化病人的饮食要注意以下几个方面.
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可溶性鸟苷酸环化酶激活剂Cinaciguat对高糖环境下人脐静脉内皮细胞的保护作用
目的：研究可溶性鸟苷酸环化酶激活剂Cinaciguat（以下简称CIN）对高糖环境下人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的保护作用。方法：以33.3 mmol/L的葡萄糖作用于HUVECs细胞复制氧化应激损伤模型。将HUVECs细胞分为正常组、高糖组和高糖+CIN 0.01、0.1、1、10μmol/L组，采用MTT法检测细胞活力，计算细胞存活率；另将HUVECs细胞分为正常组、正常+CIN 1μmol/L组、高糖组、高糖+CIN 1μmol/L组，采用硫代巴比妥酯法、黄嘌呤氧化酶法检测细胞中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性，采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测细胞中细胞间黏附分子1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）mRNA的表达。结果：与正常组比较，高糖组细胞存活率降低（P＜0.05）；与高糖组比较，高糖+CIN 0.01、0.1、1、10μmol/L组细胞存活率升高（P＜0.05），且呈浓度依赖性，但高糖+CIN 1μmol/L组与高糖+CIN 10μmol/L组间细胞存活率差异无统计学意义（P＞0.05）。与正常组比较，高糖组细胞中MDA含量增加、SOD活性降低、ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达增强（P＜0.05），但正常+CIN 1μmol/L组细胞上述指标无明显变化（P＞0.05）；与高糖组比较，高糖组+CIN 1μmol/L组细胞中MDA含量降低、SOD活性增强、ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达减弱（P＜0.05）。结论：CIN对体外高糖诱导的HUVECs细胞损伤具有保护作用，其机制可能与抑制氧化应激和炎症反应有关。
关键词： cinaciguat 高糖 人脐静脉内皮细胞 氧化应激 炎症反应 -
金丝桃苷对高糖和氧化损伤所致内皮细胞凋亡的影响
目的:研究金丝桃苷(HP)对高糖和氧化损伤所致内皮细胞凋亡的影响.方法:体外培养内皮细胞,分为正常细胞、正常细胞+HP、高糖损伤、高糖+HP、H2O2损伤与H2O2+HP组,采用MTT法测定内皮细胞的活力,并采用RT-qPCR法、Western blot法分别测定B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)蛋白及其mRNA表达水平,Bcl-2相关X蛋白(Bax)及其mRNA表达水平.结果:与各自损伤组比较,高糖+HP、H2O2+HP组内皮细胞损伤程度显著减轻(P＜0.01),高糖+HP、H2O2+HP组内皮细胞Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著增强(P＜0.01),Bax mRNA和蛋白表达显著减弱(P＜0.01).结论:HP通过抑制Bax的表达,上调Bcl-2的表达而拮抗高糖、氧化损伤导致的内皮细胞凋亡,对糖尿病性视网膜病变血管内皮细胞具有一定的保护作用.
