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消疹止痒喷剂治疗EGFRI相关性皮疹的细胞学机制研究
目的:探究消疹止痒喷剂对皮肤角质细胞增殖分化及巨噬细胞浸润的影响及其作用机制.方法:MTT法观察不同浓度消疹止痒喷剂对皮肤角质细胞HaCaT生长能力的影响;划痕实验(Wound healing)及Transwell实验考查消疹止痒喷剂对HaCaT及巨噬细胞RAW264.7运动能力的影响,采用western blotting实验考察消疹止痒喷剂对HaCaT细胞的PI3K、AKT、tPA、CD147及RAW264.7细胞中基质金属蛋白酶MMP-2(Matrix metalloproteinases-2,MMP-2)、MMP-9蛋白表达的影响,采用RT-PCR考察消疹止痒喷剂对RAW264.7细胞的MMP-2、MMP-9 mRNA水平的影响.结果:消疹止痒喷剂可以剂量依赖性地促进HaCaT细胞的增殖,抑制其分化;Wound healing实验和Transwell小室迁移实验中,随着消疹止瘁喷剂浓度提高,HaCaT及巨噬细胞RAW264.7迁移数目呈递减趋势;随着消疹止瘁喷剂浓度的提高,HaCaT及巨噬细胞RAW264.7侵袭能力呈递减趋势;消疹止瘁喷剂可以剂量依赖性抑制HaCaT细胞PI3K和AKT增殖蛋白表达,同时降低分化蛋白tPA和CD147的表达;此外消疹止痒喷剂可以显著抑制RAW264.7 MMP2和MMP9的mRNA和蛋白水平表达.结论:消疹止痒喷剂促进皮肤角质细胞增殖并抑制巨噬细胞浸润是其治疗EGFRI相关性皮疹的重要机制之一.
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槲皮素抑制乳腺癌细胞迁移侵袭及分子机制研究
目的:探究槲皮素(naringenin)对乳腺癌细胞MDA-MB-231转移的影响及其作用机制.方法:MTT法观察经不同浓度槲皮素对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长能力的影响;划痕实验(wound healing)及Transwell实验分析考查槲皮素对MDA-MB-231水平运动能力的影响;采用Western blotting考察槲皮素对MDA-MB-231细胞整合素Integrinβ3,β1及基质金属蛋白酶MMP-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2),MMP-9蛋白表达的影响;运用计算机虚拟对接技术体外评价槲皮素与整合素Integrinβ3的结合能力.结果:槲皮素可以剂量依赖性抑制MDA-MB-231细胞的增殖;Wound healing实验和Transwell小室迁移实验中,随着槲皮素浓度提高,MDA-MB-231迁移数目呈递减趋势;随着槲皮素浓度的提高,乳腺癌细胞侵袭能力呈递减趋势;槲皮素可以剂量依赖性抑制Integrin β3蛋白表达,而对Integrin β1的表达不甚明显,此外槲皮素可以显著抑制MMP-2和MMP-9 的蛋白表达;计算机虚拟对接结果发现槲皮素与Integrin β3的结合能力数值为较低负值,表明槲皮素与IntegTin β3有较好的亲和力.结论:槲皮素具有抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞生长能力,阻断MDA-MB-231细胞迁移、运动以及侵袭,其机制为槲皮素与Integrin β3结合后,下调MMP-2,MMP-9的表达.
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乙型肝炎病毒反式激活因子XTP4促进肝癌细胞系迁移和侵袭
目的 探讨在肝癌细胞系HepG2中过表达或干扰XTP4表达对细胞迁移和侵袭能力的影响.方法 实验分对照组、过表达组和干扰组,将构建成功的XTP4质粒和化学合成的XTP4小干扰RNA(siRNA)瞬时转染入HepG2,培养48 h后,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和蛋白印迹(Western blot)检测细胞内XTP4 mRNA和蛋白表达;Snail和NF-κB以及上皮间质转化(EMT)相关分子的表达.并通过细胞划痕愈合实验、Transwell迁移侵袭实验观察细胞迁移侵袭能力.结果 成功重培养并提取出XTP4质粒;过表达组XTP4的转录水平和翻译水平均明显高于对照组(P<0.05);迁移和侵袭能力明显增加(P<0.05);下游分子NF-κB、Snail和MMP-9表达均增加(P<0.05);干扰组XTP4的转录水平和翻译水平较对照组均明显降低(P<0.05);迁移和侵袭能力也明显降低(P<0.05);NF-κB、Snail和MMP-9表达减少(P<0.05).结论 乙型肝炎病毒反式激活因子XTP4可促进HepG2迁移和侵袭,与NF-κB、Snail和MMP-9调节相关,EMT相关分子E-cadherin、N-cadherin可能参与其中.
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ST7L基因抑制甲状腺癌细胞恶性行为的机制
目的 探讨肿瘤抑癌基因7-L(ST7L)抑制人类甲状腺癌细胞系K1和TPC-1恶性行为的具体分子机制.方法 运用实时荧光定量PCR技术检测20对甲状腺癌患者及其癌旁组织的ST7L mRNA水平;应用PCR扩增出ST7L过表达质粒(pcDNA3/ST7L),并用退火引物构建出ST7L的敲降质粒(siST7L);利用脂质体转染技术在甲状腺癌K1和TPC-1细胞中过表达或者敲降ST7L基因,用实时荧光定量PCR验证质粒的有效性;MTT、克隆形成实验、流式细胞术周期实验检测ST7L对K1和TPC-1细胞增殖能力、周期影响;应用Transwell迁移和侵袭实验检测ST7L对于K1和TPC-1细胞迁移能力及侵袭能力的影响.两组间独立样本比较采用t检验,使用Graphpad Prism 6统计软件进行统计分析,以P<0.05为差异有统计学意义.结果 18/20对甲状腺癌患者组织内ST7L mRNA水平明显低于其癌旁组织(下降约50%),差异具有统计学意义(均P<0.05).过表达ST7L质粒和敲降的ST7L质粒在mRNA水平是有效的,过表达ST7L后上调约为5.5倍,敲降ST7L后下调约为50%,差异具有统计学意义(均P<0.001);过表达ST7L后抑制甲状腺癌K1和TPC-1细胞生长活性(下调约38%)及集落形成能力(下调约42%),抑制K1和TPC-1细胞G1/S期的转化,差异具有统计学意义(均P<0.001);过表达ST7L后能够显著抑制K1和TPC-1细胞的迁移(下调约45%)和侵袭能力(下调约39%),而敲降ST7L后明显促进了K1和TPC-1细胞的迁移(上调约2.2倍)和侵袭能力(上调约1.8倍),差异具有统计学意义(均P<0.001).结论抑癌基因ST7L抑制甲状腺癌细胞的细胞活性和克隆形成能力,抑制甲状腺癌细胞周期进程,抑制甲状腺癌细胞的迁移和侵袭能力.
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Ezrin在前列腺癌中的功能研究及临床意义
目的 研究Ezrin蛋白在前列腺癌细胞中的功能及其在高危前列腺癌患者根治术术后生存的预测意义.方法 用pcDNA3.1为载体,过表达及干扰Ezrin基因(A:空白组,B: pcDNA3.1-NC组,C:pcDNA3.1-Ezrin组,D: si-pcDNA3.1-Ezrin组和E:si.pcDNA3.1-NC组).RT-PCR检测22RV1、PC-3细胞及前列腺癌组织中Ezrin基因mRNA表达,迁移和侵袭实验评估Ezrin表达变化后对各组细胞的影响.免疫组化验证高危前列腺癌患者组织中Ezrin表达与术后生化复发、临床进展及总体生存之间的差异.结果 对比BPH,Ezrin在前列腺癌细胞22RV1和PC-3表达明显升高[(1.00±0.01)(3.52±0.39) vs(1.00±0.01) (6.27±0.53),P＜0.05].Ezrin基因的mRAN表达与前列腺癌危险分级呈正相关(P＜0.05).A-E组两株细胞处理后Ezrin基因的表达为:22RVl (1.00±0.01、1.12±0.06、1703.27±153.62、67.35±11.49和0.23±0.02);PC-3 (0.96±0.01、1.16±0.03、1931.65±183.50、58.71±15.24和0.19±0.02).结果表明,22RV1和PC-3细胞中,A组与B组差异均无统计学意义(P=0.785、P=0.721);B组与C组、B组与D组、B组与E组、C组与D组差异均有统计学意义(P＜0.001).C组相对B组的迁移和侵袭能力均明显增强(P≤0.001).免疫组化验证Ezrin蛋白阳性表达率为75.29％(192/255),免疫组化评分3分、4分、5分三组中生化复发(P＜0.00l)、进展(P=0.015)及总体生存(P=.036)均有统计学差异.结论 过表达Ezrin蛋白使肿瘤细胞的迁移和侵袭能力明显增强,高危列腺癌患者术后5年的生化复发、进展及总体生存与Ezrin表达量呈正相关性.
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细胞外基质金属蛋白酶诱导因子对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡和迁移侵袭的影响
目的 探究细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡和迁移侵袭的作用.方法 建立稳定表达EMMPRIN基因的SKOV3细胞为实验组,分别以转染pcDNA3.0空载体的SKOV3细胞和正常卵巢上皮细胞IOSE80分别作为对照组和空白组.用流式细胞术检测凋亡率,用划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力,用免疫印迹法检测EMMPRIN、Bcl-2和Bax的表达水平.结果 空白组、对照组和实验组的凋亡率分别为(10.27±1.35)％,(12.40±0.70)％和(5.67±0.96)％,平均相对迁移指数分别为(0.25±0.03),(0.64±0.03)和(0.83±0.02),平均侵袭细胞数分别为(45.75±2.87),(120.00±3.92)和(153.25±8.06),EMMPRIN表达量分别为(0.12±0.02),(0.22±0.01)和(0.34±0.02),Bcl-2表达量分别为(0.06±0.01),(0.55±0.02)和(0.87±0.03),Bax表达量分别为(0.37±0.02),(0.28±0.01)和(0.12±0.01).实验组的上述指标与空白组和对照比较,差异均有统计学意义(P＜0.001,P＜0.01).结论 EMMPRIN过表达后人卵巢癌细胞SKOV3细胞凋亡能力降低,细胞迁移和侵袭能力增强.
关键词： 细胞外基质金属蛋白酶诱导因子 卵巢癌 细胞凋亡 迁移侵袭 -
氯化锂调控人肺腺癌A549细胞增殖及侵袭转移的体外研究
目的:探讨氯化锂对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭转移能力的影响及其调控机制.方法:应用MTT法、平板克隆形成实验评价细胞生长活力和增殖的生物学特征变化;划痕实验、Transwell小室细胞体外侵袭实验检测肿瘤细胞迁移、侵袭能力;Western-blotting法检测肿瘤细胞GSK-3β、P-GSK-3β和β-catenin的表达水平变化.结果:MTT法显示细胞分化增殖能力随氯化锂浓度的增加受到明显抑制,具有浓度依赖性变化.同时,随着检测时间的延长,在低浓度药物作用下(＜10 mmol/L)细胞出现增殖增强现象,可能存在药物时间耐受;平板克隆形成实验显示细胞增殖受到不同浓度氯化锂的抑制,增殖能力的变化亦具有氯化锂浓度依赖性;划痕实验、Transwell实验证实:氯化锂处理细胞后,细胞迁移、侵袭能力下降;Western-blotting法显示:氯化锂处理肺腺癌A549细胞后,GSK-3β总蛋白表达下降、P-GSK-3β表达增加,β-catenin总蛋白表达增多.结论:高浓度的氯化锂能够抑制肺腺癌A549细胞的增殖和侵袭迁移,氯化锂抑制肺腺癌A549细胞增殖和侵袭迁移可能是通过GSK-3β/β-catenin信号通路实现的.
关键词： 肺腺癌 氯化锂 迁移侵袭 GSK-3β/β-catenin通路 -
microRNA-199 a／b-3 p对乳腺癌细胞运动能力的影响
目的：探讨microRNA-199a／b-3p抑制乳腺癌细胞运动能力的机制。方法：在乳腺癌MDA-MB-231细胞中，转入miR-199a／b-3p mimcs，免疫印迹法检测PAK4的表达量变化；迁移和侵袭实验检测，超表达miR-199a／b-3p和干扰PAK4表达对乳腺癌迁移侵袭的影响；细胞膜皱起检测，超表达miR-199a／b-3p和干扰PAK4表达对乳腺癌细胞细胞膜皱起的影响。结果：在MDA-MB-231细胞中，超表达miR-199a／b-3p或干涉内源PAK4蛋白表达，均能下调细胞的迁移率、侵袭率和平均细胞膜皱起面积。结论：miR-199a／b-3p抑制乳腺癌细胞运动能力部分是通过抑制PAK4表达实现的，且miR-199a／b-3p具有抗乳腺癌迁移药物开发的潜质。
关键词： 乳腺癌 microRNA-199a/b-3p 迁移侵袭 细胞膜皱起 PAK4 -
β-arrestin1激活 STAT3信号通路影响白血病细胞 K562体外迁移侵袭能力
目的：：探讨β-arrestin1对白血病细胞生物学功能的影响及相关机制的研究。方法：特异性的β-Arrestin1-siRNA和阴性对照siRNA转染K562细胞,形成β-Arrestin1-siRNA组、阴性对照siRNA组和空白组对照组。以此为实验分组,应用transwell小室法检测各组细胞的迁移侵袭能力变化,Western blot检测pSTAT3蛋白的表达。结果：β-Arrestin1-siRNA处理组细胞的迁移和侵袭能力较对照组分别下降43%及52%( P<0.05)；且pSTAT3蛋白表达减少；STAT3抑制剂能抑制K562细胞体外迁移侵袭能力。结论：白血病细胞K562中β-arrestin1蛋白高表达激活STAT3信号通路,从而促进细胞的迁移侵袭能力。
关键词： β-arrestin1 STAT3 迁移侵袭 -
注射用磷酸肌酸钠对体外培养人卵巢癌细胞SKOV3侵袭能力的影响及其机制
目的:观察注射用磷酸肌酸钠(CP)对人卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭能力的影响,并探讨其作用机制.方法:体外培养人卵巢癌细胞SKOV3,随机分为空白对照组(生理盐水)及药物处理组(1、6和12 mmol·L-1CP );分别用生理盐水、CP处理细胞72 h后,采用MTT比色法和Transwell小室法观察细胞黏附和迁移侵袭能力;采用RT-PCR和FCM测定nm23-h1、c-myc mRNA及蛋白表达和MMP-2、MMP-9蛋白表达水平.结果:与空白对照组比较,1 mmol·L-1 CP组各项指标差异无统计学意义(P>0.05);6和12 mmol·L-1 CP组细胞黏附、迁移侵袭抑制率明显增加(P<0.01),nm23-h1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.01),c-myc mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.01);但6与12 mmol·L-1CP组间比较差异无统计学意义(P>0.05).与空白对照组比较,1、6和12 mmol·L-1CP组MMP-2、MMP-9蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05).结论:一定浓度注射用CP可抑制体外培养SKOV3细胞的黏附和迁移侵袭能力,其机制可能与上调nm23-h1、下调c-myc基因表达有关.
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Chk1反义寡核苷酸联合顺铂抑制卵巢癌侵袭转移的分子机制
目的:探究Chk1反义寡核苷酸(CHK1-ASODN)单独或联合顺铂(DDP)对卵巢癌细胞系SKOV-3侵袭转移能力的影响,并阐明其可能的分子机制.方法:体外培养人卵巢癌细胞系SKOV-3,CHK1-ASODN单独或联合DDP处理48 h后,划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;显微镜下观察细胞上皮或间质表型特征;Western blot及实时定量PCR技术分别检测上皮间质转化(EMT)特异性标志物(E-cadherin、N-cadherin)以及EMT关键调控分子ZEB1的蛋白及mRNA的表达水平.结果:与对照组相比较,CHK1-ASODN单独或联合DDP均能显著抑制SKOV-3细胞的迁移及侵袭(P＜0.05);细胞表现为间质化表型;E-cadherin的表达显著升高(P＜0.05),而N-cadherin的表达则显著降低(P＜ 0.05);ZEB1的表达显著降低(P＜0.05).结论:CHK1-ASODN单独或联合DDP下调ZEB1的表达进而逆转EMT可能是其抑制卵巢癌侵袭转移的重要机制之一.
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金丝桃苷对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移以及侵袭的影响
目的 探讨金丝桃苷(hyperin)对卵巢癌细胞SKOV3的增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响及其作用机制.方法 将SKOV3细胞分为:正常对照组、金丝桃苷组和阳性对照顺铂组.MTT检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western Blot检测cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、Bcl-2、p65和p-IκB-α的蛋白表达;划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭.结果 与正常对照组相比,金丝桃苷处理显著抑制SKOV3的细胞增殖(P＜0.05),促进细胞凋亡(P＜0.05),上调cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9而下调Bcl-2的蛋白水平(P＜0.05),降低细胞的迁移和侵袭能力(P＜0.05),减少p65和p-IκB-α的蛋白水平(P＜0.05),抑制NF-κB信号通路的激活,且以上作用均随金丝桃苷处理浓度的增大而增强.结论 金丝桃苷抑制SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡,这可能与抑制NF-κB信号通路有关.
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人间充质干细胞来源外体诱导胃癌细胞恶性转化
目的 探讨人间充质干细胞(MSCs)能否通过外体(exosome)促进胃癌细胞迁移、侵袭和化疗抵抗,诱导胃癌的恶性转化.方法 提取不同细胞来源的exosome(HFL-ex和MSC-ex),并用可视型纳米颗粒分析仪及westem blot进行鉴定;Transwell实验检测不同处理因素下对照组、HFL-ex组和MSC-ex组细胞的迁移、侵袭能力;构建免疫缺陷小鼠模型,处理7d后分别检测对照组、5-FU组、HFL-ex组和MSC-ex组小鼠的肿瘤体积.结果 可视型纳米颗粒分析仪结果表明,HFL-ex和MSC-ex的直径约为(110±49)nm,westem blot证实其表面均表达CD63蛋白;Transwell实验结果表明,与HFL-ex比较,MSC-ex可促进SGC-7901细胞的迁移与侵袭(P均＜0.05);荷瘤实验结果显示,MSC-ex组小鼠肿瘤体积大于5-FU组和HFL-ex组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MSCs可通过旁分泌exosome的方式促进胃癌细胞迁移、侵袭和化疗抵抗,诱导胃癌的恶性转化.
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鼻咽癌组织中微小RNA?328的表达及其对细胞侵袭和迁移的影响
目的 探讨鼻咽癌组织中微小RNA?328(miR?328)的表达及其对鼻咽癌CNE?2细胞侵袭和迁移的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测86例鼻咽癌组织和15例慢性鼻咽炎组织及鼻咽癌细胞系CNE?2、HK1和正常鼻咽上皮细胞NP69中的miR?328水平,分析miR?328水平与鼻咽癌临床病理特征(年龄、性别、临床分期、淋巴结转移、复发和生存状态)的关系;采用脂质体Lipofectamine 2000法向对数生长期CNE?2细胞转染miR?328模拟物(mimics)或阴性对照( NC),采用QPCR检测转染48 h后的miR?328水平以评价转染效率,采用Transwell迁移和侵袭实验检测转染后CNE?2细胞的穿膜细胞数目.结果 QPCR检测结果显示,鼻咽癌细胞CNE?2、HK1中miR?328水平低于正常鼻咽上皮细胞株NP69(P＜0. 05);86例鼻咽癌组织的miR?328水平亦低于15例慢性鼻咽炎组织,差异有统计学意义(P＜0. 05). miR?328水平与鼻咽癌患者的复发状态(P＝0. 037)、临床分期(P＝0. 005)和生存状态(P＝0. 012)有关,但与年龄、性别和淋巴结转移无关( P＞0. 05).转染mimics 48 h后的细胞中miR?328水平大幅升高,与转染NC的细胞比较,差异有统计学意义( P＜0. 05). Transwell实验结果显示,转染miR?328 mimics后,迁移和侵袭实验中CNE?2细胞的穿膜数目均降低,与转染NC的细胞比较,差异有统计学意义( P＜0. 05).结论 miR?328在鼻咽癌组织和细胞中低表达,且参与鼻咽癌的发生发展,上调其水平可抑制迁移侵袭过程,在鼻咽癌防治中有一定价值.
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TMEM158在乳腺癌的表达及其对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响
目的 分析跨膜蛋白158(transmembrane protein 158,TMEM158)在乳腺癌组织中的表达,探讨其对乳腺癌细胞侵袭能力的影响及作用机制.方法 分析TCGA数据库中下载的1094例乳腺癌组织和120例癌旁组织的mRNA表达谱数据;Western印迹验证癌组织及其对应癌旁组织中TMEM158蛋白表达差异;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺癌细胞系中TMEM158表达水平.通过小干扰RNA技术转染乳腺癌SUM1315细胞,Transwell及细胞划痕实验观察沉默TMEM158后对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响,同时Western印迹和qRT-PCR实验分析干扰TMEM158对EMT(epithelial-mesenchymal transition)相关标志物E-Cadherin、Vimentin、Snail、N-Cadherin表达量的影响.结果 分析TCGA数据库中下载的1094例乳腺癌组织和120例癌旁组织的mRNA表达谱数据显示,TMEM158在乳腺癌组织中的表达水平(6.65±1.76)高于癌旁组织(5.81±1.22)(P<0.05);分析120对乳腺癌及其对应的癌旁组织,结果表明,TMEM158在乳腺癌组织中表达(6.50±1.76)高于对应的癌旁组织(5.81±1.22)(P<0.05).Western印迹检测4对人乳腺癌及对应的癌旁组织标本中TMEM158蛋白的表达显示,与癌旁乳腺组织比较,乳腺癌组织TMEM158表达升高(P<0.05).qRT-PCR分析乳腺癌细胞水平TMEM158表达显示,相对于正常乳腺导管细胞(MCF-10A),乳腺癌细胞中TMEM158表达水平升高(P<0.05);人乳腺癌细胞株TMEM158表达量也升高(均P<0.05).Transwell实验结果表明,与对照组细胞(SUM1315-SiNC)相比,干扰TMEM158(SUM1315-SiTMEM158),癌细胞的迁移和侵袭能力降低[(346±59)比(196±33),P<0.05;(202±68)比(99±21),P<0.05)].细胞划痕实验结果显示,沉默TMEM158后癌细胞迁移能力降低[(54.68±10.85)比(25.54±7.64),P<0.05].Western印迹和qRT-PCR结果证明,沉默TMEM158后E-Cadherin表达量增加,而Vimentin、Snail、N-Cadherin表达量下降(P<0.05).结论 TMEM158在乳腺癌组织与细胞系中高表达,可通过调控EMT相关蛋白的表达干扰TMEM158,从而抑制乳腺癌细胞迁移侵袭.
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Toll样受体4在肿瘤相关巨噬细胞诱导Hep3B肝癌细胞侵袭转移中的作用
目的 探讨肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)促进Hep3B肝癌细胞侵袭转移的机制.方法 将人白血病单核细胞株(THP-1)成功诱导为TAMs.用Western blot检测TAMs的Toll样受体(TLR4)表达水平.质粒瞬时转染短发卡RNA(shRNA)方法下调TAMs TLR4的表达水平.分别用TAMs上清液(TAM-CM组)以及转染了shRNATLR4的TAMs上清液(shRNA TLR4-CM组)干预Hep3B肝癌细胞.细胞划痕实验检测Hep3B细胞的迁移能力.Transwell侵袭实验检测Hep3B细胞的侵袭能力.结果 成功将THP-1细胞诱导为TAMs,用TAM-CM干预Hep3B肝癌细胞后,Hep3B细胞的迁移距离增加,透膜细胞数为(21.670±1.764)个比(65.330±2.333)个,P=0.000,差异有统计学意义.当下调TAMs的TLR4表达后重新干预Hep3B细胞,发现Hep3B细胞的迁移距离减少,透膜细胞数[(10.000±5.777)个比(4.333±0.333)个],P=0.001,差异有统计学意义.结论 TAMs促进Hep3B肝癌细胞的侵袭转移.其机制与肿瘤相关巨噬细胞表面TLR4受体的表达密切相关.
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敲低皮层肌动蛋白的表达下降胶质瘤细胞迁移和侵袭能力
目的 探讨运用特异性干扰RNA抑制皮层肌动蛋白表达后对人胶质瘤细胞迁移、侵袭能力的影响.方法 免疫组化染色检测天津医科大学总医院神经外科癫痫及胶质瘤手术治疗患者的正常脑组织及胶质母细胞瘤标本中皮层肌动蛋白的表达;体外常规培养人恶性胶质瘤细胞系U251并分为RNA干扰组、阴性对照组、空白对照组,分别转染干扰RNA序列、阴性对照序列及等量Lipofetmiane 2000.48 h后Western blotting、免疫荧光染色检测3组细胞皮层肌动蛋白的表达;细胞划痕实验和Transwell细胞侵袭实验评价细胞迁移、侵袭能力的高低.结果 免疫组化染色检测显示皮层肌动蛋白在正常脑组织呈弱阳性表达.在胶质母细胞瘤为强阳性表达;Westernblotting检测显示RNA干扰组细胞皮层肌动蛋白表达低于空白对照组与阴性对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);免疫荧光染色显示皮层肌动蛋白表达于细胞质特别是与细胞伪足密切相关的细胞膜周围.划痕实验结果显示RNA干扰组、空白对照组、阴性对照组迁移细胞数分别为18.17±4.07、94.00±4.33、92.67±5.24; Transwell细胞侵袭实验显示侵袭细胞数分别为31.25±2.98、125.00±4.57、127.00±3.56;与空白对照组与阴性对照组比较,RNA干扰组迁移、侵袭细胞数均减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 皮层肌动蛋白在胶质母细胞瘤组织中的表达高于正常脑组织.敲低U251细胞皮层肌动蛋白的表达后细胞的迁移、侵袭能力下降,提示皮层肌动蛋白可作为脑胶质瘤治疗的一个靶点.
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ABL2基因表达沉默对胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响
目的 研究非受体酪氨酸激酶ABL2基因表达沉默对胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响及机制. 方法 免疫组化染色检测正常脑组织和经病理证实的胶质母细胞瘤组织标本(分别来自天津医科大学总医院神经外科自2012年9月至2014年8月期间的癫痫、胶质瘤手术患者)中ABL2的表达.将携带ABL2抑制物核苷酸序列(shRNA-ABL2)、阴性对照核苷酸序列(shRNA-NC)的重组慢病毒转染体外培养的SNB19胶质瘤细胞,分别作为shRNA-ABL2组、shRNA-NC组,同时设不做任何处理的空白对照组,转染后48 h实时荧光定量PCR检测3组细胞ABL2 mRNA的表达;Western blotting检测3组细胞ABL2、皮层肌动蛋白、Y-421位点酪氨酸磷酸化的皮层肌动蛋白(pY-421 cortactin)的表达;划痕实验和Transwell实验评价各组细胞的迁移和侵袭能力;免疫荧光染色检测ABL2、皮层肌动蛋白在SNB19细胞中的定位情况. 结果 免疫组化染色显示ABL2在正常脑组织中表达较低,在胶质母细胞瘤中表达则较高.与shRNA-NC组、空白对照组比较,转染后shRNA-ABL2组细胞ABL2 mRNA和蛋白、pY421 cortactin蛋白的表达降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);划痕实验显示shRNA-ABL2组细胞迁移数(72.33 ±7.64)少于shRNA-NC组、空白对照组(187.67±5.03、190.33±7.23),Transwell实验显示shRNA-ABL2组穿膜细胞数低于shRNA-NC组、空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光染色结果显示ABL2与皮层肌动蛋白在细胞前端伪足处共定位. 结论 ABL2在胶质母细胞瘤组织中表达较正常脑组织高.沉默ABL2表达可能通过调节pY-421 cortactin的水平来抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭.
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DACT1对Ⅰ型卵巢癌恶性侵袭行为的影响
目的 探讨β-环连蛋白抑制基因1(dapper antagonist of catenin-1,DACT1)对Ⅰ型上皮性卵巢癌迁移侵袭能力的影响及可能机制.方法 免疫组织化学检测Ⅰ型人卵巢癌临床组织中DACT1的表达;采用人黏液性卵巢癌细胞株3AO构建外源性转染DACT1的稳转株,通过划痕实验、Transwell迁移及基质胶侵袭实验检测细胞运动能力;免疫荧光观察DACT1对细胞骨架重塑的影响.结果 Ⅰ型卵巢癌组织中DACT1表达低于正常卵巢组织(P＜0.01).外源性转染DACT1后3AO细胞株迁移侵袭能力降低(P＜0.01),且腹腔内成瘤能力有所下降,细胞骨架中特化膜结构减少.结论 DACT1对Ⅰ型卵巢癌浸润转移具有抑制效应,其在Ⅰ型卵巢癌组织中的低表达可能与其疾病发生相关.
关键词： Ⅰ型卵巢癌 β-环连蛋白抑制基因1 卵巢癌细胞株3AO 迁移侵袭 -
凝溶胶蛋白抑制乳腺癌细胞MCF7/Her2增殖及迁移侵袭的作用
目的 研究凝溶胶蛋白(gelsolin,GSN)对雌激素受体α(ERα)阳性、人表皮生长因子受体2(Her2)过表达乳腺癌细胞MCF7/Her2生长的作用.方法 构建GSN的真核表达载体,并稳定转染MCF7/Her2细胞,以RT-PCR及Western Blot鉴定得到稳定过表达GSN的乳腺癌细胞系MCF7/Her2/GSN.以空载体转染的稳定表达细胞MCF7/Her2/V作对照,比较其细胞形态、增殖和迁移能力的改变;Western Blot及RT-PCR检测Her2、组织金属蛋白酶抑制剂-3(TIMP3)表达和细胞外调节蛋白激酶(ERK)的活化,探索深层次的作用机制.结果 MCF7/Her2稳定过表达GSN后,细胞形态改变且增殖及迁移、侵袭能力明显低于对照细胞;发现Her2表达下降,TIMP3的表达上调,而雌激素导致的MCF7/Her2细胞ERK活化增强被逆转.结论 凝溶胶蛋白能降低Her2的表达,并通过下调ERK的活化及上调TIMP3的表达,抑制乳腺癌细胞MCF7/Her2增殖及迁移侵袭作用.
