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薄荷非挥发性成分研究
目的:为促进薄荷的综合利用,对其非挥发性成分进行系统研究.方法:采用硅胶柱色谱、重结晶和光谱法分离鉴定化合物.结果:从薄荷中分离并鉴定了8个化合物,分别是刺槐素(Ⅰ)、椴树素(Ⅱ)、蒙花苷(Ⅲ)、正丁基-β-D-吡喃果糖苷(Ⅳ)、熊果酸(Ⅴ)、齐墩果酸(Ⅵ)、β-谷甾醇(Ⅶ)和胡萝卜苷(Ⅷ).结论:化合物Ⅰ～Ⅴ均为首次从该植物中分离得到.
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RP-HPLC测定野菊花中槲皮素、木犀草素、芹菜素和刺槐素
目的:建立HPLC同时测定野菊花中槲皮素、木犀草素、芹菜素和刺槐素含量的方法.方法:Eclipse XDB-C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相A为甲醇,B为0.2%磷酸溶液,线性梯度洗脱;检测波长350 nm;柱温25℃;流速1.0 mL·min~(-1);进样量20μL.结果:槲皮素、木犀草素、芹菜素和刺槐素的质量浓度与峰面积分别在1.02～20.48(r=0.999 4),1.03～20.54(r=0.999 2),1.12～22.40(r=0.999 5),1.01～20.22 mg·L~(-1)(r=0.999 8)呈良好的线性关系;平均加样回收率依次为101.3%,100.6%,98.4%,99.02%,RSD为1.3%,1.4%,1.7%,0.83%.不同来源药材间4种被测黄酮组分及总黄酮含量差异均极显著.结论:该方法快速,简便,重复性好,适合于同时测定野菊花样品中槲皮素、木犀草素、芹菜素和刺槐素的含量.
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刺槐素对小鼠Th17细胞的分化功能的影响及其机制的初步探讨
目的 建立小鼠Th17细胞的体外诱导及培养方法并探索刺槐素(Acacetin)对Th17细胞的分化、功能的影响及其机制的初步探索.方法 分离、纯化BABL/C小鼠脾脏CD4+ CD62L+ T细胞,用转化生长因子-β、IL-6、IL-23等促进CD4+ CD62L+ T细胞向Th17细胞分化.培养的Th17细胞分为五组:正常组、模型对照组、Acacetin 1 μM组、Acacetin 10 μM组、Acacetin 30 μM组.流式细胞术检测Th17细胞的比例,酶联免疫吸附试验检测IL-17A的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测IL-17A mRNA及ROR-γt mRNA的表达.结果 该培养方法可使Th17细胞的比例明显升高(P＜0.01).与模型对照组相比,Acacetin 1 μM组、Acacetin 10 μM组、Acacetin 30 μM组的Th17细胞的比例呈剂量依赖性降低(P值均＜0.05).IL-17A蛋白的表达也呈剂量依赖性降低(P值均＜0.05),IL-17A mRNA和ROR-γt mRNA的表达与模型对照组比较明显降低(P＜0.05),以Acacetin(30 μM)组明显(P＜0.01).结论 Acacetin在体外可以抑制小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞向Th17细胞的分化,并抑制IL-17A mRNA和IL-17A蛋白的表达,其机制可能与抑制细胞内孤儿受体ROR-γt的表达有关.
关键词： 刺槐素 CD4+ CD62L+ T细胞 诱导 白介素17 -
刺槐素通过抑制NF-κB通路活化减少TNF-α诱导气道平滑肌细胞表达、分泌MCP-1
目的 探讨刺槐素(Acacetin)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人气道平滑肌细胞(HASMCs)分泌、表达单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)的影响及可能的机制.方法 CCK-8法测HASMCs增殖活性;酶联免疫吸附法(ELISA)测HASMCs上清液中MCP-1含量;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测MCP-1 mRNA表达量;蛋白印迹法(Western blot)检测HASMCs中磷酸化P65(P-P65)蛋白的表达情况.结果 ①Acacetin及NF-κB抑制剂JSH-23均能显著降低TNF-α诱导的HASMCs MCP-1生成,且Acacetin的抑制作用具有浓度依赖性(P＜0.05);②同时,Acacetin及JSH-23均能显著减少TNF-α诱导的MCP-1mRNA的表达(P＜0.05);③Acacetin 能显著降低TNF-α引起的HASMCs P65蛋白磷酸化(P＜0.05).结论 降低NF-κB通路的活化水平可能是Acacetin抑制TNF-α诱导HASMCs合成、分泌MCP-1及其mRNA,从而发挥抗炎作用的机制之一.
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黄花酢浆草的化学成分研究
目的 研究酢浆科植物黄花酢浆草(Oxalis pes-capraeL)干燥全草的化学成分.方法 采用硅胶柱色谱、凝胶色谱等方法进行化学成分的分离纯化,,通过理化性质和波谱数据进行结构鉴定.结果 分离得到12个化合物,鉴定了其中10个化合物,分别为胡萝苷苷(daucosterol,1),β-谷甾醇(β-sitosterol,2),牡荆素(vitexin,3),异牡荆素(isovitexin,4),刺槐素(acacetin,5),刺槐苷(robinin,6),β-生育酚(β-tocopherol,7),酒石酸(tartaric acid,8),香草酸(vanillic acid,9)和木樨草素(luteolin,10).结论 所有化合物都是首次从该植物中分离得到.
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阔刺兔唇花全草的化学成分研究
目的 研究阔刺兔唇花Lagochilus platyacanthus的化学成分.方法 利用多种色谱方法进行分离纯化,综合运用各种光谱方法鉴定化合物的结构.结果 从阔刺兔唇花全草95％乙醇提取物中分离鉴定了21个化合物,包括15个黄酮类化合物:芹菜素-7,4'-二甲醚(1)、刺槐素(2)、芹菜素(3)、木犀草素-7,3',4'-三甲醚(4)、木犀草素-7,4'-二甲醚(5)、香叶木素(6)、金圣草素(7)、槲皮素-3-O-芸香糖-7-O-葡萄糖苷(8)、芦丁(9)、horridin (10)、芹菜素-6,8-二-C-葡萄糖苷(11)、异鼠李素-3-O-芸香糖苷(12)、异鼠李素-3-O-刺槐二糖苷(13)、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷(14)、异鼠李素-3-O-芸香糖-4'-O-葡萄糖苷(15);3个木脂素类化合物:1-(4-hydroxy-3-methoxy)-phenyl-2-[4-(1,2,3-trihydroxypropyl)-2-methoxy]-phenoxy-1,3-propandiol (16)、(+)-异落叶松脂醇3-α-O-β-D-葡萄糖苷(17)、(-)-异落叶松脂醇3-α-O-β-D-葡萄糖苷(18);2个环烯醚萜类化合物:8-O-乙酰哈巴苷(19)、京尼平苷酸(20)及1个苯乙醇苷类化合物:lavandulifolioside (21).结论 21个化合物均为首次从阔刺兔唇花植物中分离得到,除化合物1、3、9、19及20外,其余化合物均为首次从兔唇花属植物中分离得到.
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白花败酱草的化学成分研究
目的 对白花败酱草Patrinia villosa的化学成分进行研究.方法 通过大孔吸附树脂、Sephadex LH-20、反相HPLC等多种色谱方法分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构.结果 从白花败酱草干燥全草的70％乙醇提取物中分离得到了14个化合物,分别鉴定为异地芰普内酯(1)、citroside A(2)、grasshopper ketone (3)、(E)-4-hydroxy-3,3,5-trimethy 1-4-(3-oxobut-1-en-1-yl)-cyclohexan-1-one (4)、bluemenol A(5)、pubinemoidA(6)、刺槐素(7)、葛根素(8)、5-(1'-hydroxyethyl)-methyl nicotinate(9)、2-[4-(3-hydroxypropyl)-2-methoxyphenoxy]-propane-1,3-diol(10)、1-O-(β-D-glucosyl)-2-[2-methoxy-4-(3-hydroxypropyl)-phenoxy]-propan-3-ol(11)、二氢芥子醇(12)、3,5-dimethoxyl-4-hydroxyl-phenylpropanol-9-O-β3-D-glucopyranoside(13)、2-phenylethyl-α-L-arabinopyranosyl-(1"→÷6′)-β-D-glucopyranoside (14).结论 所有化合物均为首次从败酱属植物中分离得到.
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刺儿菜中刺槐素-7-鼠李葡萄糖苷和芦丁的分离鉴定
刺儿菜Cephalanoplos segetum(Bunge)Kitam.系菊科植物,为刺儿菜属[1].刺儿菜的中药名小蓟,是常用的中药材,主治各种内科出血症、黄疸型肝炎,也有良好的降血脂、利胆退黄作用.对刺儿菜的药理研究较多,表明它具有多种生理活性.
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刺槐素通过下调NF-κB/COX-2表达抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖
目的:探讨刺槐素对卵巢细胞系SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,并分析可能的作用机制.方法:体外培养的SKOV3细胞,用不同浓度刺槐素(浓度0、4、8、16、32 μμ mol/L)分别处理SKOV3细胞24、48、72 h,MTT法测定细胞增殖;刺槐素(浓度分别为0、8、16、32μmol/L)处理SKOV3细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblot法检测Bax、Bcl-2、COX-2、p-NF-κB的表达.结果:刺槐素对SKOV3细胞的活性具有显著抑制作用,且呈剂量、时间依赖性;SKOV3细胞经刺槐素作用48 h后,细胞凋亡率从16.7％增加到37.5％;促凋亡蛋白Bax表达量上调,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量下调;刺槐素可抑制SKOV3细胞COX-2及其上游调控基因p-NF-κB的表达.结论:刺槐素对SKOV3细胞活力具有抑制作用,并可促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制p-NF-κB、下调COX-2表达,继而上调促凋亡蛋白Bax表达、下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达相关.
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RP-HPLC法同时测定小蓟中绿原酸、蒙花苷和刺槐素的含量
目的 建立HPLC法同时测定小蓟中绿原酸、蒙花苷和刺槐素的含量.方法 采用Themo ODS-2 HYPERSIL色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为体积分数1％的乙酸水溶液-甲醇-乙腈混合溶剂,梯度洗脱,流速为0.8 mL·min-1,柱温为30℃,检测波长为327 nm.结果 绿原酸、蒙花苷和刺槐素的质量浓度分别在0.976 ～5.856 mg·L-1(r =0.999 6)、12.24～ 63.24 mg·L-1(r =0.999 9)和0.140 4～0.491 4 mg·L-1 (r=0.999 2)内与峰面积呈良好的线性关系.绿原酸、蒙花苷和刺槐素的平均加样回收率分别为96.4％、97.0％和104.5％,RSD(n=6)分别为0.9％、1.1％和0.5％.结论 该方法准确可靠,重复性好,为小蓟药材的质量控制提供了方法参考.
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刺槐素在SH-SY5Y细胞氧-葡萄糖剥夺和小鼠脑缺血再灌注中的神经保护作用
目的 探讨刺槐素在SH-SY5Y细胞氧-葡萄糖剥夺和小鼠脑缺血再灌注中的神经保护作用.方法 培养神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,分为正常培养组、氧-葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)组以及刺槐素小剂量组(1μmol/L)、中剂量组(5μmol/L)和大剂量组(10 μmol/L),复氧24 h后应用噻唑蓝染色法测定细胞存活率,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法测定LDH漏出率.60只C57小鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组以及小剂量组、中剂量组和大剂量刺槐素组,每组12只.采用线栓法制作大脑中动脉闭塞模型,缺血再灌注时给予刺槐素腹腔注射(小、中、大剂量组分别为6.25、12.5和25 mg/kg).再灌注后24 h时进行神经功能评分,应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色检测脑梗死体积.结果 体外实验显示,1 μmol/L、5μmol/L和10 μmol/L刺槐素组SH-SY5Y细胞存活率分别为(90.34±6.87)％(P=0.000)、(85.47 ±2.24)％ (P=0.001)和(81.79±1.77)％(P=0.008),均显著高于OGD组的(70.62± 8.89)％.1μmol/L、5μm/L和10 μm/L刺槐素组SH-SY5Y细胞LDH漏出率分别为(159.11 ±13.11)％ (P=0.021)、(155.12±24.72)％(P=0.011)和(160.92 ±7.83)％ (P =0.027),均显著低于OGD组的(180.35±10.60)％.体内实验显示,大剂量刺槐素组神经功能评分显著低于与脑缺血再灌注组[(1.67±0.85)分对(2.50±0.55)分;P=0.018].小剂量、中剂量和大剂量刺槐素组梗死体积分别为(24.14±7.10)mm3、(17.18±3.19)mm3和(12.86±1.88)mm3,均显著小于脑缺血再灌注组的[(48.81±9.48) mm3](P均=0.000).结论 体外和体内实验均显示,刺槐素具有神经保护作用.
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水解法提取纯化刺槐素的工艺研究
目的 优选野菊花中刺槐苷的水解工艺.方法 采用均匀设计法,以高效液相色谱法( HPLC)测定野菊花中刺槐素含量,探讨影响刺槐素提取效率的因素,并筛选出佳提取条件.结果 佳水解工艺为盐酸与药液比为5∶2,盐酸浓度3 mol/L,水解时间为3h,水解温度为100℃.结论 HPLC法测定野菊花中刺槐素含量的方法,快速、可行.均匀设计法优选的野萄花中刺槐素提取工艺,操作简单,节约时间,提取率比原工艺有明显提高.
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高效液相色谱法测定野菊花中刺槐素的含量
目的建立高效液相色谱法测定野菊花中刺槐素含量.方法刺槐苷使用甲醇超声提取并用盐酸水解,在Lichrospher ODS ( 5 μm,4.6×150 mm)柱上,以甲醇-水-冰乙酸(325∶175∶0.5)为流动相进行分离,流速1 ml*min-1,340 nm波长检测.结果本法准确、精密度高、重现性好,浓度线性范围2.08～10.46 μg*ml-1(r=0.999 9);平均回收率在99.6%,RSD为0.73%.结论该法可作野菊花质量控制一种方法.
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刺槐素对乳腺癌 T47D 细胞增殖的影响
目的：研究刺槐素对乳腺癌 T47D 细胞增殖的影响，探究刺槐素雌激素样作用的主要介导受体。方法磺酰罗丹明 B（SRB）法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期的变化，qPCR 检测雌激素受体-α（ERα）、雌激素受体-β（ERβ）、细胞增殖抗原标记物（Ki67）mRNA 表达，Western blot 法检测 ERα、ERβ蛋白表达。结果刺槐素浓度为0.001～10μmol·L －1，能促进 T47D 细胞增殖，使 S 和 G2／M期的细胞比例明显增加，增殖指数升高，同时增加 Ki67 mR-NA 的表达，此作用可被雌激素受体拮抗剂 ICI 182．780所拮抗。刺槐素及17β-雌二醇（E2）均可上调 ERα和 ERβ的表达，刺槐素联合 ERα受体拮抗剂（MPP）可逆转刺槐素的促增殖作用，使 S 和 G2／M期的细胞比例明显降低，减少 Ki67 mRNA 的表达；但刺槐素联合 ERβ受体拮抗剂（PHTPP）处理虽可抑制细胞增殖效应，使 S 和 G2／M期的细胞比例降低，减少 Ki67 mRNA 的表达，但作用不明显。结论刺槐素具有雌激素样作用，在0.001～10μmol·L －1浓度范围内，可通过调节 ERα受体表达来促进 T47D 细胞的增殖。
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刺槐素腹腔注射对局灶性脑缺血小鼠脑再灌注损伤的预防作用及其机制
目的 观察剌槐素对局灶性脑缺血小鼠脑再灌注损伤的预防作用,并探讨其可能机制.方法 36只清洁级雄性C57BL/6J小鼠随机分为剌槐素组、模型组、对照组各12只,刺槐素组、模型组小鼠均制备局灶性脑缺血模型,剌槐素组于再灌注时腹腔注射刺槐素,模型组同时点给予等量0.9％生理盐水;对照组小鼠仅分离颈内动脉,但不闭塞大脑中动脉,同时点给予等量刺槐素.制模24h后,对各组小鼠进行神经功能评分,并测算小鼠脑梗死体积,计数小鼠海马区、皮层区离子钙接头蛋白1(Iba-1)阳性细胞数.结果 刺槐素组、模型组、对照组小鼠神经功能评分分别为(1.67±0.52)、(2.83 ±0.41)、0分,剌槐素组与模型组比较,P＜0.05.剌槐素组、模型组、对照组小鼠梗死体积分别为(22.15±3.85)、(70.48±12.57)、0mm3,剌槐素组与模型组比较,P＜0.05.剌槐素组、模型组、对照组海马区Iba-1阳性细胞数分别为(8.480±1.633)、(12.370±2.150)、(3.670±0.790)个/HP,皮层区Iba-1阳性细胞数分别为(8.330±0.983)、(13.130±1.860)、(4.470±0.370)个/HP,刺槐素组、对照组分别与模型组比较,P均＜0.05.结论 刺槐素对局灶性脑缺血小鼠脑再灌注损伤有预防作用,机制可能与抑制小胶质细胞的增殖及激活有关.
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野菊花的药用
野菊花又名山菊花、九月菊,其茎、叶、花均可入药.野菊花中含有刺槐素、苦味素、侧柏酮、樟脑、挥发油、多糖和香豆精类物质.中医认为它性味苦寒,有清热解毒、凉血祛肿之功.现代临床常用野菊花治疗疔疮疖肿、乳腺炎、淋巴结核、胃肠炎、高血压等,并可预防和治疗流感、感冒、流行性脑膜炎、肺炎、百日咳等多种疾病.
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刺槐素的不同给药时间对小鼠局灶性脑缺血的影响
目的 探讨刺槐素在不同时间点给药对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,并分析刺槐素的治疗时间窗.方法 将36只雄性昆明小鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、刺槐素(治疗)组,治疗组又根据不同给药时间分为0、2、4、8h4个给药组,每组各6只;采用线栓法制作大脑中动脉闭塞模型,治疗组予缺血0、2、4、8h腹腔注射刺槐素(12.5 mg/kg);再灌注后24 h进行神经功能评分,应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色测定脑梗死体积.结果 缺血0、2、4h给药组神经功能评分均显著低于缺血再灌注组(p均＜0.05),8h给药组神经功能评分有改善,但无统计学意义(p=0.052);不同时间给药组间神经功能评分无统计学意义(p＞0.5).缺血再灌注组脑梗死体积为(65.18±5.96) mm3,与缺血再灌注组相比,缺血0 h[(22.15±3.02)mm3,p=0.000],2 h[(28.61±4.19) mm3,p=0.000],4 h[(49.8±4.08) mm3,p=0.000]给药组脑梗死体积均显著降低,8 h[(56.09±7.92)mm3,p=0.075]给药组脑梗死体积有减小,但无统计学意义.结论 在缺血早期应用刺槐素治疗可有效改善神经功能评分,缩小脑梗死体积.
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HPLC法测定香菊感冒颗粒(无糖型)中刺槐素的含量
目的:建立高效液相色谱法测定香菊感冒颗粒(无糖型)中刺槐素的含量.方法:刺槐苷使用甲醇超声提取并用盐酸水解在ODS(5 μm,4.6×250 mm)柱上,以甲醇-水-冰醋酸(350∶150∶2)为流动相进行分离,流速1.0ml/min,340 nm波长检测.结果:方法准确、精密度高、重现性好,浓度在2.00～10.00 μg/ml范围内线性关系良好,r=0.9998,平均加样加收率为99.9%,RSD=0.41%(n=6).结论:方法简便、专属、重现性好,可作为香菊感冒颗粒质量控制的一种方法.
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高效液相色谱法测定追风伞提取物中5种酚酸类成分含量
目的 建立同时测定追风伞提取物中绿原酸、芦丁、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素及刺槐素含量的高效液相色谱(HPLC)法.方法 色谱柱为Phenomenex C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇(A)-0.2％醋酸水溶液(B),梯度洗脱,流速为1 mL/min,柱温为30℃,检测波长为334 nm.结果 绿原酸、芦丁、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素及刺槐素质量浓度分别在4.1325～165.3000 mg/L,6.4400～257.6000 mg/L,3.9800～159.2000 mg/L,4.3525～174.1000 mg/L,3.5925～143.7000 mg/L范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率分别为98.28％,99.10％,98.23％,98.61％,98.02％,其样品含量分别为1.701,3.940,2.179,3.070,1.881 mg/g.结论 该方法快速、准确、重复性好,可用于评价和控制追风伞提取物的质量.
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基于植物代谢组学的栽培型与野生型野菊花的化学成分比较及定量分析
目的:研究栽培型与野生型野菊花药材之间的化学成分差异.方法:采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术,结合化学计量学,对栽培型和野生型野菊花药材的整体化学组成进行比较,并采用超高效液相对其中的主要差异成分进行定量分析.结果:主成分分析结果显示,栽培与野生型野菊花在t[1]主成分方向区分明显,表明两者的化学组成存在显著差异.随后采用正交偏小二乘法判别分析(OPLS-DA)方法筛选和鉴定两者的差异成分,结果显示,香叶木素-7-0-芸香苷、刺槐素-7-0-(6”-0-α-L-鼠李吡喃糖-β-槐糖苷)、木犀草素、蒙花苷、5-羟基-4'-甲氧基-黄酮-7-0-α-L-吡喃鼠李糖(1÷6)[2-0-乙酰-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)]-β-D吡喃葡萄糖苷、芹菜素、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸和刺槐素含量在两者间存在显著性差异,可以作为区分栽培型和野生型野菊花的特征性成分.结论:植物代谢组学技术能快速筛选特征性化学成分,为野菊花的质量评价提供有效手段.
