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hTEFT重组绿色荧光表达载体的构建与表达
目的 构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)片段的真核表达质粒.方法 用RT-PCR方法从肝癌组织中提取总RNA扩增出hTERT基因片段,将其连接pGEM-TEasy质粒上,将重组质粒pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3真核绿色荧光蛋白表达载体同时用HindⅢ和BamHⅠ双酶切后进行连接,再将重组的pEGFP-C3-hTERT基因片段转染NIH3T3细胞,经G418筛选获得稳定转染的细胞系,荧光倒置显微镜观察并检测转染细胞的hTERT mRNA表达水平.结果 DNA序列分析证实了重组载体pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3-hTERT内插入片段的碱基组成与公开发表的hTERT序列一致.转染pEGFP-C3-hTERT的NIH3T3细胞可见绿色荧光,并检出高水平表达的hTERT.结论 成功构建高效表达hTERT的真核表达载体,为以hTERT为靶点的肿瘤治疗打下实验基础.
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外源性端粒酶催化亚单位对人视网膜血管内皮细胞的影响
目的探讨外源性人端粒酶催化亚单位(hTERT)对人视网膜血管内皮细胞(hRCEC)端粒酶活性、相关基因表达和体外生存时间的影响.方法阳离子脂质体介导hRCEC转染;RT-PCR法检测人类端粒酶RNA组份(hTR)、端粒酶相关蛋白1(TEP1)及hTERT基因的表达;TRAP法检测端粒酶活性;细胞计数法绘制生长曲线.结果hTR、TEP1基因在hTERT转染hRCEC前后都表达,hTERT基因在转染前不表达,转染后24 h及稳定转染克隆形成时表达,细胞停止分裂时又失去表达;转染前无端粒酶活性,转染后24h及稳定转染克隆形成时可检测到端粒酶活性,细胞停止分裂时端粒酶活性消失;稳定转染了hTERT基因后hRCEC的生存时间没有延长.结论hTERT转染可显著提高hRCEC中hTERT基因表达水平,hTERT基因表达与端粒酶活性一致,但只用hTERT转染的方法不能使hRCEC细胞生存时间延长.
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Bmi-1、hTERT在乳腺癌细胞中的表达及与凋亡的关系
目的 研究原癌基因Bmi-1和hTERT的表达变化及其与细胞凋亡的关系,探讨它们在乳腺癌发生、发展过程中的作用. 方法 采用MTT法检测乳腺癌细胞的增殖抑制情况,并确定所选用的药物浓度.RT-PCR、Western Blot检测Bmi-1、hTERT的mRNA及蛋白的表达情况;TUNEL、流式细胞技术检测乳腺癌细胞的凋亡情况.结果 5-FU对乳腺癌细胞有明显抑制作用,各实验组与对照组OD值的差异有统计学意义(P＜0.05).用5-FU干预后,实验组Bmi-1和hTERT的mRNA及蛋白表达水平均降低,细胞凋亡指数增加,与对照组相比差异显著有统计学意义(P＜0.05),经统计学分析两者呈正相关(P＜0.05),且两者的表达与凋亡呈负相关(P＜0.05).结论 Bmi-1和hTERT的表达下调可促进乳腺癌细胞凋亡.
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靶向c-myc基因的siRNA基因干扰对大肠癌Lovo细胞增殖与凋亡的影响
目的 阐述靶向c-myc基因的siRNA基因转染干扰对大肠癌Lovo细胞增殖与凋亡的影响作用. 方法 将靶向c-myc基因的siRNA片段转染入大肠癌Lovo细胞,特异沉默c-myc基因,通过实时荧光定量PCR法检测c-myc mRNA表达水平,原位末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferasedUTP nick end labeling,TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡情况及噻唑蓝法[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]检测细胞的增殖能力. 结果 经过转染的Lovo细胞组与未转染的对照组c-myc mRNA表达量比率为0.22:1,c-myc mRNA表达量比例有统计学差异(P＜0.05).经过转染的Lovo细胞与未转染的对照组的凋亡指数分别为32.4％与65.4％,具有显著性统计学差异(P＜0.01).MTT检测经过转染的Lovo细胞与未转染的对照组的细胞增值率,分别为79.28％与38.32％,具有极其显著性统计学差异(P＜0.001). 结论 将靶向c-myc基因的siRNA片段转染入大肠癌Lovo细胞,特异沉默c-myc基因,从而证实c-myc抑制大肠癌细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用,从而为大肠癌的基因治疗寻求更多的治疗靶点.
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短发夹RNA沉默hTERT基因对人喉癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用
背景与目的:RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指双链RNA导入细胞后诱导靶mRNA发生特异性的降解,导致基因转录后沉默的现象.RNAi在基因功能和抗病毒基因治疗等方面均有报道.但对喉癌等头颈恶性肿瘤中高表达的人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因,目前尚未见报道.本课题利用RNAi技术,研究短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)抑制hTERT基因表达对裸鼠喉鳞状细胞癌皮下移植模型的抑瘤作用.方法:根据hTERT cDNA序列构建表达hTERT mRNA特异的、含荧光素基因的shRNA真核表达质粒pshRNA.建立人喉癌Hep-2细胞株裸鼠皮下接种模型.将pshRNA转染入荷瘤裸鼠瘤体内,观察肿瘤生长情况.以激光共聚焦显微镜观察质粒在瘤组织内的表达;以HE染色法观察质粒治疗后瘤组织的病理改变;以原位末端标记法(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况;以免疫组化SP法检测hTERT蛋白在肿瘤内的表达;光镜下观察心、肝、肾、脾结构的改变并测量血液学和血液生化指标.结果:pshRNA组(A组)、空质粒载体组(B组)与生理盐水组(C组)之间比较,A组与C组瘤体积有显著性差异(P＜0.01),B组与C组之间瘤体积无显著性差异(P＞0.05),抑瘤率为76.50%.pshRNA及空质粒载体转染入瘤体后,共聚焦显微镜下见大量的癌细胞表达绿色荧光.病理学检查及TUNEL检测发现:A组肿瘤生长受到抑制,细胞分裂相少见,可见大量肿瘤细胞坏死及凋亡,该组肿瘤细胞的凋亡指数[(26.47±4.25)%]明显高于B组[(3.40±1.41)%]和C组[(2.73±1.35)%].给予pshRNA后瘤体内hTERT蛋白表达明显下调,而且对心、肝、肾、脾无明显损害,对造血系统无影响.结论:表达shRNA的DNA载体质粒沉默hTERT基因可显著抑制人喉癌裸鼠肿瘤的生长,而且对心、肝、肾、脾及造血系统无明显的毒副作用.
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RNA干扰技术靶向hTERT基因治疗肝癌的实验研究
背景与目的:RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA介导的、在转录后mRNA水平关闭相应基因表达的新基因阻断技术,在基因功能研究、基因治疗方面已显示出巨大的前景.目前,利用RNAi已抑制了包括cyclophilin、GAPDH、p53、c-myc在内的多个内源基因的表达.同时在艾滋病、病毒性肝炎等的治疗研究中也已取得一定进展.但对肝癌等恶性肿瘤中高表达的hTERT基因,国内外还未见相关研究报道.本研究利用RNAi技术,在体内外抑制hTERT基因表达,探讨RNAi对肝癌治疗的可行性.方法:设计干扰hTERT基因的小片段RNA,构建重组表达质粒pTZU6+1-shRNA-hTERT并导入肝癌SMMC7721细胞株和裸鼠移植瘤,在体内外诱导RNAi,采用流式细胞检测技术、RT-PCR法、免疫组化等同时检测RNAi治疗组和对照组hTERT基因表达及细胞增殖变化.结果:体外细胞实验显示,重组质粒pTZU6+1-shRNA-hTERT导入肝癌SMMC7721细胞株3～7天后,肝癌细胞生长抑制率达37.5%;细胞周期相分布发生显著变化,S期细胞明显减少,G1/G0期细胞显著增加;hTERT的mRNA表达由99.4%下调到53.1%,hTERT蛋白表达由86.3%下调到46.6%.裸鼠体内实验结果显示,质粒pTZU6+1-shRNA-hTERT注射裸鼠皮下移植瘤7天后,瘤体积明显缩小,hTERT的mRNA表达由99.1%下调到76.2%,hTERT蛋白表达由87.2%下调到61.8%.体内、外对照组各指标均无变化.结论:RNAi明显抑制了靶基因hTERT的表达及肝癌细胞增殖,是潜在的肿瘤治疗新方法.
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EB病毒潜伏膜蛋白1对人支气管上皮细胞转化作用机理的研究
背景与目的:目前许多研究显示潜伏膜蛋白 1(latent membrane protein1,LMP1)在一些上皮源性肿瘤的发生中可能起重要作用,但有关 LMP1对正常上皮细胞作用的研究并不是很多.因而,本研究拟观察 EBV LMP1对人支气管上皮细胞( human bronchial epithelial,HBE)的转化作用,并初步探讨其作用机制.方法:将 LMP1单独或与 hTERT逆病毒表达载体共同转染 HBE细胞,经抗性药物筛选获得阳性细胞克隆;通过绘制细胞生长曲线,进行软琼脂集落形成试验、端粒酶活性检测和 cyclin A、 p21、 CDK4蛋白表达的检测,研究 LMP1对 HBE细胞生物学特性的影响.结果:共同转染 LMP1和 hTERT的 HBE细胞生长旺盛.各组细胞 HBE/LMP1+ hTERT、 HBE/LMP1和 HBE/pLNSX+ pBabe的软琼脂集落形成率分别为 22.98%、 16.94%和 8.85%;端粒酶活性分别为 2.825、 2.441、 1.876.我们进行 Western blot检测发现前两组细胞 cyclin A表达上调、 p21表达下调,且两组之间无明显差异;而 CDK4蛋白在各组之间表达一致.结论:在转化 HBE细胞的过程中, LMP1和 hTERT可能具有协同作用,通过调节 cyclin A和 p21蛋白的表达水平,引起细胞异常增殖,使细胞向恶性化转变.
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hTERT启动子调控osm基因表达在体外的抑癌作用
背景与目的:肿瘤基因治疗中基因特异表达具有重要意义,构建特异表达载体是肿瘤基因治疗的基础.本研究探讨端粒酶催化亚基( human telomerase reverse transcriptase, hTERT)启动子调控抑瘤素( oncostatin M,osm)基因在端粒酶阳性肿瘤细胞中表达的特异性,以及 osm对肿瘤细胞增殖的影响.方法:构建 phTERT- osm表达载体,瞬时转染肿瘤细胞;采用 RT- PCR法检测外源基因表达,用 MTT法检测 osm基因表达对肿瘤细胞生长的影响.结果: hTERT启动子调控 osm基因在端粒酶阳性 HepG2细胞中明显表达,而在正常人胚肺成纤维细胞( human embryonic lung fibroblast,HEL)中未见表达.osm的表达对端粒酶阳性 HepG2、HeLa、Glc和 A549细胞的增殖有明显的抑制作用,抑制率为 12 4%～ 46 0%;而对端粒酶阴性的 HEL细胞没有明显的影响.结论: hTERT启动子在端粒酶阳性肿瘤细胞中能明显激活 phTERT- osm载体表达 osm,并抑制肿瘤细胞的生长.
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3种卵巢癌细胞中hTERT转录水平及其与端粒酶活性的相关性研究
背景与目的:端粒酶在约 90%的肿瘤细胞中有活性而在绝大多数正常细胞中受抑,催化亚单位端粒酶逆转录酶( human telomerase reverse transcriptase,hTERT)是端粒酶的重要组成部分,其表达的调控主要发生在转录水平.端粒酶、 hTERT、 hTERT启动子三者之间密切相关. 本研究探讨卵巢癌细胞系中 hTERT启动子的活性及其与 hTERT mRNA表达和端粒酶活性之间的关系.方法:应用脂质体转染法将 hTERT核心启动子基因转入 3种卵巢癌细胞 OVCAR3、 SKOV3、 3AO及正常卵巢上皮细胞中,并用荧光素酶检测实验检测其中 hTERT启动子的活性;应用 RT- PCR半定量法检测这 4种细胞中 hTERT mRNA的表达水平;应用 PCR- ELISA定量检测这 4种细胞中端粒酶的活性.同时以端粒酶阳性的永生化人胚肾成纤维细胞 HEK293作为阳性对照,以端粒酶阴性的人胚肺成纤维细胞 HELF作为阴性对照.结果: OVCAR3、 SKOV3、 3AO细胞及正常卵巢上皮细胞中的 hTERT启动子活性(视每种细胞中 pGL3- control的启动子活性为 100%)分别为 31.4%、 20.3%、 17.7%和 0.3%; hTERT mRNA的相对表达水平(视 SKOV3的表达水平为 1.00)分别为 1.30、 1.00、 0.63和 0;端粒酶活性分别为 0.580、 0.414、 0.386和 0.103( >0.200时定为阳性). 3种卵巢癌细胞中 hTERT启动子活性、 hTERT mRNA表达水平和端粒酶活性均特异性增高,且以 OVCAR3水平为高;而在正常卵巢上皮细胞中则被抑制或不表达. hTERT 启动子活性水平与 hTERT mRNA表达水平和端粒酶活性之间有显著性相关 (P< 0.01, P< 0.02).结论:端粒酶阳性的卵巢癌细胞中 hTERT启动子被特异激活,且其活性与端粒酶活性呈正相关; hTERT可作为靶向启动子用于端粒酶阳性卵巢癌的基因治疗.
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FCM-DNA倍体分析、AgNOR染色及hTERT、PCNA表达在良恶性胸腹水鉴别诊断中的临床意义
背景与目的:良恶性胸腹水的鉴别诊断仍然是临床的一大难题,本研究应用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)-DNA倍体分析、核仁组成区嗜银蛋白(argyrophilic nucleolar organizer region,AgNOR)染色及端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达来探讨其对良恶性胸腹水的鉴别诊断价值.方法:选取2004年6月至2005年6月间因胸腹水就诊的患者67例,每位患者除常规胸腹水脱落细胞学检查外,还分别进行FCM-DNA倍体分析、AgNOR染色和应用免疫细胞化学SP法检测胸腹水脱落细胞hTERT和PCNA的表达状况.结果:FCM-DNA倍体分析、AgNOR染色及hTERT、PCNA的表达在良恶性胸腹水之间差异显著.上述诸指标与细胞学比较显示,AgNOR染色敏感性高为89.1%;细胞学及hTERT和PCNA检测特异性高,为100%;而AgNOR染色及hTERT检测准确率高,为89.6%.联合检测发现细胞学联合bTERT检测敏感性提高至91.3%(42/46).结论:DNA异倍体、hTERT和PCNA的表达及AgNOR颗粒数增多均是恶性胸腹水的特征,可作为胸腹水脱落细胞学检查的重要辅助手段,而细胞学联合hTERT免疫细胞化学检测可提高单纯细胞学的阳性率.
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靶向hTERT基因表达载体的构建和其对人乳腺癌细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响
目的 构建靶向端粒酶hTERT基因mRNA的shRNA质粒表达载体,转染人乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系,探讨其对细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响.方法 设计合成端粒酶hTERT基因特异性shRNA干扰序列,重组pSuper-retro-puro质粒.转染乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系(转染组),设立正常培养乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系(阴性对照组)和pSuper-retro-puro质粒转染的乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系(空白对照组).利用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附测定法(TRAP-ELISA)检测细胞端粒酶活性,MTT实验及琼脂糖细胞集落形成实验检测细胞增殖能力等.结果 成功构建pSuper-retro-puro-TERT RNAi#1、#2 质粒并转染乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系,转染后细胞端粒酶活性较转染前明显下调,差异有统计学意义(P<0.005);MTT法检测细胞增殖能力显示.MCF-7及MDA-MB231转染组细胞增殖活性较阴性对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);软琼脂集落形成实验表明MCF-7和MDA-MB231转染组细胞克隆形成能力较阴性对照组显著下降,差异有统计学意义(P<0.001).结论 通过RNAi技术特异性干扰hTERT基因mRNA表达可显著下调细胞端粒酶活性,并可导致细胞增殖能力的减弱.以端粒酶为靶点的基因治疗可能是乳腺癌治疗的一种有效方法.
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含hTERT片段的重组逆转录病毒感染对树突状细胞功能的影响
目的观察含人端粒酶逆转录酶(hTERT)片段的重组逆转录病毒感染对树突状细胞(DCs)功能的影响.方法 ELISA试剂盒检测DCs培养液中IL-12水平;混合白细胞(MLR)反应检测含hTERT片段的重组逆转录病毒感染的DCs(hTERT-DCs)和未感染的DCs(N-DCs)刺激同种异体淋巴细胞增殖能力;流式细胞术检测DCs表面分子CD80、CD83、CD86和HLA-DR的变化;CytoTox 96非放射性细胞毒性检测试剂盒检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应.结果 hTERT-DCs和N-DCs在分泌IL-12的水平、刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力方面无明显差异;hTERT-DCs的CD83表达水平低于N-DCs,同时,hTERT-DCs激发的CTL对端粒酶阳性的靶细胞杀伤率明显高于端粒酶阴性的靶细胞(P＜0.05).结论 hTERT-DCs尽管有可能阻止DCs自身的成熟,但在活化淋巴细胞、刺激淋巴细胞分化增殖的能力方面并没发生明显改变,并且还能激发hTERT特异性CTL.
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鼻咽良恶性病变中NF-κB、c-Myc和hTERT的表达及意义
目的:探讨NF-κB、c-Myc、hTERT在鼻咽粘膜慢性炎和鼻咽癌中的表达及意义.方法:用免疫组化SP法检测27例鼻咽粘膜慢性炎和30例鼻咽癌中NF-κB、c-Myc、hTERT的表达.结果:NF-κB、c-Myc和hTERT在鼻咽粘膜慢性炎组中的阳性表达率分别为55.5%、74.1%和59.3%;在鼻咽癌组中的阳性表达率分别为83.3%、93.3%和90.0%,与鼻咽粘膜慢性炎组比较差异均有显著性(P＜0.01或P＜0.05);在鼻咽癌中NF-κB和c-Myc、NF-κB和hTERT的表达均呈显著正相关(分别P＜0.05, P＜0.01).结论:在鼻咽癌中NF-κB、c-Myc和hTERT均高表达,它们的过表达可能参与了鼻咽癌的发生和发展过程.
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乙肝癌变肝组织中HBX、hTERT的表达水平及意义
目的:研究乙肝癌变肝组织中HBX、hTERT的表达水平及意义.方法:以动物实验研究HBx对肝肿瘤形成与转移的影响,并以TRAP-PCR-ELISA、DNA印迹法及RT-PCR明确HBx对hTERT产生的直接调控作用.结果:HBx稳定表达裸鼠动物模型肿瘤体积、肿瘤重量均明显大于表达敲低裸鼠动物模型(P<0.05),且产生转移,而HBX表达敲低裸鼠动物模型无转移;HBx稳定表达裸鼠动物模型细胞有明显梯状条带,而HBx表达敲低裸鼠动物模型细胞则无明显梯状条带;HBx稳定表达裸鼠动物模型端粒长度(4.28±1.06)kb,明显短于HBx表达敲低裸鼠动物模型(9.64±3.67)kb(P<0.05),且细胞hTERT mRNA表达量为(76028.00±13685.12),明显高于HBx表达敲低裸鼠动物模型(42536.00±8963.24)(P<0.05).结论:HBx能够通过各类途径产生致癌作用,其中包括激活hTERT,导致细胞出现永生化癌变,故HBX、hTERT表达水平的检测可为乙肝癌变临床诊治提供指导.
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抑癌基因TCEAL7在乳腺组织中的表达及与人端粒酶逆转录酶的关系
目的 探讨抑癌基因TCEAL7在乳腺组织中的表达特征及其与人端粒酶逆转录酶(hTERT)间的相互关系.方法 运用RT-PCR技术检测乳腺良性组织及乳腺癌组织中TCEAL7、hTERT的表达状况,收集对应患者的临床及基本病理资料[包括年龄、淋巴结转移状态、TNM分期及免疫组化结果(ER、PR及HER2表达情况)],利用统计学方法分析讨论它们之间的相互关系.结果 TCEAL7基因在14例乳腺良性组织中全部表达,但在55例乳腺癌组织中却没有发现表达;hTERT在乳腺良性组织中有1例表达,在乳腺癌组织中有40例表达.hTERT(+)及APBs(+)组之间年龄、肿瘤大小、淋巴结转移及病理分期均差异无统计学意义.在分析hTERT与临床基本资料时,发现其与临床分期相关.结论 抑癌基因TCEAL7在乳腺正常组织中高表达,在乳腺癌组织中几乎没有表达.在细胞水平,TCEAL7基因在端粒延长替代机制细胞中高表达,而在端粒酶阳性细胞中低表达,并且促进hTERT的转录,发现hTERT表达与肿瘤的病理分期相关.
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hTERT和MDM2在宫颈鳞状细胞癌中的表达及意义
目的 检测 hTERT、MDM2 在宫颈鳞状细胞癌中的表达情况,分析其与组织分级、临床分期、淋巴结转移和患者生存率的关系.方法 收集宫颈鳞状细胞癌标本 78 例,采用免疫组化方法检测 hTERT、MDM2 蛋白的表达.结果 (1)hTERT 在宫颈鳞状细胞癌的阳性率为78.2%,在不同组织学分级的宫颈鳞状细胞癌中 hTERT 的阳性率分别为高分化 46.7%,中分化 83.0%,低分化 93.4%(P＞0.05).MDM2 在癌组织中的阳性率为82.1%,正常组织和癌旁组织不表达MDM2,在不同组织学分级的宫颈鳞状细胞癌中 MDM2 的阳性率分别为高分化60.0%,中分化 85.1%,低分化 93.4%(P>0.05).(2)hTERT 在有淋巴结转移组和无转移组的阳性率分别为 84.6% 和 46.2%(P<0.05);MDM2 在有转移组和无转移组的阳性率分别为 87.7% 和 53.8%(P<0.05).(3)hTERT 阳性表达、阴性表达的 5 年生存率分别为 41.9%和83.3%,差异有统计学意义(P<0.05).MDM2阳性表达、阴性表达的 5 年生存率分别为 44.4%和80.0%,差异有统计学意义.结论 hTERT、MDM2 蛋白表达与宫颈鳞状细胞癌的发生、组织病理分级、淋巴结转移密切相关.hTERT、MDM2 阳性表达是肿瘤预后不良的生物学指标.
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苦参素注射液与顺铂联合对人肝癌细胞SMMC-7721端粒酶活性及wtp53、hTERT mRNA表达的影响
目的:探讨苦参素注射液与顺铂(DDP)联合对人肝癌SMMC-7721细胞端粒酶活性及wtp53、hTERT mRNA表达的影响.方法:采用MTF法测定细胞的增殖抑制率,应用金氏公式分析药物间的相互作用,TRAP-ELISA检测端粒酶活性,半定量RT-PCR法检测wtp53和hTERT mRNA表达.结果:苦参素注射液、DDP单独应用均能抑制SMMC-7721细胞增殖,两药联合具有单纯相加或协同作用,与DDP单药组相比,联合用药组的细胞抑制率明显增加(P＜0.01),端粒酶活性显著下降(P＜0.01),wtp53 mRNA表达明显升高(P＜0.01),hTERT mRNA表达明显减少(P＜0.01).结论:苦参素注射液和DDP联合应用具有单纯相加或协同抗肝癌SMMC-7721细胞增殖的作用,其机制可能通过上调wtp53和下调hTERT基因表达,从而有效抑制端粒酶活性.
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超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A对活化T细胞端粒长度影响及其相关机制研究
目的:研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对T细胞端粒长度的作用及机制.方法:SEA、K562细胞、SEA联合K562细胞以及抗CD3单克隆抗体分别刺激脐带血单核细胞,SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测端粒、hTERT及IL-7R表达.结果:SEA组、K562细胞组、SEA联合K562细胞组及抗CD3单抗组活化T细胞的端粒相对长度比值为1.63±0.08、1.06±0.06、3.24±0.61、1.37±0.07:hTERT的表达差异倍数为1.88±0.07、1.95±0.05、3.93±0.23、1.30±0.06;IL-7R表达差并倍数为6.61±0.52、12.81±0.34、17.42±0.50、4.87±0.66;SEA联合K562细胞组均明显高于其他3组(P＜0.01),SEA组对端粒长度影响大于单纯K562细胞组.结论:超抗原SEA可以直接刺激T细胞的端粒酶活性及上调表达IL-7R,联合特异性抗原K562细胞株诱导T细胞活化上调效果更明显.
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双靶点沉默hTERT和Bi-1基因诱导人鼻咽癌细胞凋亡的初步研究
目的 利用RNA干扰阻抑hTERT和Bi-1基因的表达并诱导人鼻咽癌细胞的凋亡.方法 收集CNE-2Z细胞,设未处理组、Lip组、pcDNA3.1(+)/Lip对照组、TR/Lip组、TRs/Lip组、Bi-1/Lip组、Bi-1 s/Lip组、TR-Bi-1/Lip组和TRs-Bi-1s/Lip组,采用MTT法观察质粒载体及转染试剂对CNE-2Z细胞生长增殖的影响;采用流式细胞术检测CNE-2Z细胞凋亡,Hoechst 33258染色,采用荧光显微镜观察鼻咽癌细胞形态学的变化.结果 TR、Bi-1和TR-Bi-1组的CNE-2Z细胞增殖能力显著降低,且TR-Bi-1组的生长增殖能力低(P＜0.05);凋亡细胞有所增加.转染TR、Bi-1和TR-Bi-1重组质粒48 h后,荧光显微镜下可见部分鼻咽癌细胞出现典型的凋亡形态学变化;而pcDNA3.1(+)、TRs、TRs-Bi-1s、Lip和未处理组则无明显变化.结论 双基因表达载体可以同时特异、有效地沉默hTERT和Bi-1两种基因,与沉默单基因的效果相比较,双基因沉默组鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖率受到明显抑制.
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MicroRNA138、hTERT和K17在寻常型银屑病中的表达及意义
目的:探究MicroRN A138、hTERT和K17在寻常型银屑病中的表达及意义.方法:本文选取本院2015年6月至2017年1月的28例寻常银屑病患者以及24例皮肤正常患者作为研究对象,银屑病患者为观察组,正常患者为对照组,将两组患者的基本情况以及MicroRN A138、hTERT和K17的情况进行记录以及对比.结果:MicroRN A138、hTERT和K17的表达水平差异具有统计学意义,观察组患者的MicroRN A138、hTERT和K17表达情况与对照组存在显著差异,满足P<0.05,具有统计学意义.结论:MicroRN A138、hTERT和K17在寻常银屑病中的表达效果十分显著,随着以上指标升高,则患有寻常银屑病的严重程度也随之提升,可见以上指标在银屑病发病中起到重要作用,在今后判断银屑病的临床中可以对这一方法进行应用.
关键词： MicroRNA138 hTERT K17 寻常银屑病 表达意义
