清胰汤对急性胰腺炎大鼠胰腺及肝细胞钙-镁ATP酶的影响

目的:研究急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺及肝细胞钙-镁ATP酶的变化及清胰汤等药物对其影响,进一步探讨这些药物治疗AP的作用机制.方法:将81只SD大鼠分为正常对照组、AP组、AP后清胰汤(AP+清胰汤)治疗组及粉防己碱(Tet,AP+Tet)治疗组共4组,在制备AP动物模型后1h、5h、10h活体取胰、肝组织,通过钙-镁ATP酶的酶组织化学染色检测其活性;同时通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),测定其组织钙-镁ATP酶的表达.结果:钙-镁ATP酶酶组织化学染色阳性率AP组低于正常对照组(P＜0.05),且AP组5h的阳性率低于1h;清胰汤、AP+Tet组的高于AP组(P＜0.05),且5h的阳性率高于1h.RT-PCR结果显示:胰腺组织钙-镁ATP酶的表达AP组低,且AP组5h的表达低于1h;AP+清胰汤、AP+Tet组的表达高于AP组,且5h的表达高于1h;肝组织钙-镁ATP酶的表达各组均为阳性,各组间差异无显著性.结论:AP时大鼠胰腺及细胞钙-镁ATP酶活性降低,清胰汤、Tet可提高细胞钙-镁ATP酶活性,减轻细胞钙超载.

乳鼠心肌细胞移植对兔急性心肌梗死区微血管密度的影响

目的 观察乳鼠心肌细胞移植对兔急性心肌梗死区微血管密度及微血管再生的影响. 方法 新西兰大白兔16只,新生乳鼠40只.建立兔急性心肌梗死模型后,将培养的SD乳鼠心肌细胞移植到兔心肌梗死区,分别于移植后1、2、3、4周取材,用碱性磷酸酶组织化学法和免疫荧光法进行染色,光镜观察,LEICA Qwin V3图像分析系统分析兔心肌梗死边缘区毛细血管密度及其再生情况. 结果 乳鼠心肌细胞移植后的1、2、3、4周不同的时间段,兔心肌梗死区的毛细血管密度及新生毛细血管数量均明显高于对照组(P<0.05).定量分析显示,毛细血管密度呈现先升后降的趋势. 结论异体异种心肌细胞移植能够促进兔心肌梗死区的毛细血管新生,有利于改善心肌的血液供应.

亚硒酸钠对Bcap-37人乳腺癌细胞体外增殖及3种酶细胞化学的影响

目的观察体外培养中亚硒酸钠的浓度变化和培养时间的延长对Bcap-37人乳腺癌细胞增殖及酶活性的影响. 方法在体外培养Bcap-37人乳腺癌细胞中加入不同浓度的亚硒酸钠,常规染色显示其形态和增殖情况及各组Bcap-37人乳腺癌细胞内的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和非特异性酯酶活性. 结果 2μmol/L的亚硒酸钠对肿瘤细胞的生长具有一定的抑制作用,而10μmol/L、50μmol/L的亚硒酸钠具有一定的细胞毒性.Bcap-37人乳腺癌细胞内的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、非特异性酯酶活性随着硒浓度的加大,培养时间的延长呈下降趋势,并且10μmol/L、50μmol/L亚硒酸钠培养2d后,3种酶的活性完全消失. 结论硒对肿瘤细胞的生长和酶的活性都具有抑制作用,并且两者之间存在着一致性.

糖皮质激素诱导小鼠胸腺细胞死亡的形态学改变

目的 探讨糖皮质激素诱导小鼠胸腺细胞死亡的形态学改变. 方法 4～6周龄雌性BALB/C小鼠腹腔注射地塞米松,采用末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测DNA单链或双链的裂解,TUNEL和酸性磷酸酶(ACP)双重染色法进行酸性磷酸酶的检测,观察细胞凋亡后吞噬细胞的活动,透射电子显微镜检测凋亡细胞和吞噬细胞的超微结构.结果 光镜观察地塞米松组,TUNEL阳性细胞较多并且分散在皮质各处,凋亡指数为0.460±0.012;正常对照组TUNEL阳性细胞数目较少,凋亡指数为0.020±0.001,与地塞米松组比较,差异有显著性(P<0.05).TUNEL和酸性磷酸酶双重染色法显示,所有TUNEL阳性胸腺细胞均被ACP阳性细胞吞噬.透射电子显微镜观察发现,大部分凋亡细胞均被吞噬细胞所吞噬,少量未被吞噬的胸腺细胞表现出大范围的染色质浓集,这些少量未被吞噬的胸腺细胞显然是死细胞. 结论 典型的细胞凋亡的特点是DNA裂解,但这不是糖皮质激素诱导胸腺细胞死亡的主要方式,死亡的胸腺细胞均是被ACP阳性细胞所吞噬;糖皮质激素对胸腺细胞的首要影响是可诱导无DNA裂解的细胞固缩.

大鼠脑缺血区非特异性酯酶阳性细胞的分布和定量研究

目的探查非特异性酯酶阳性细胞的变化和与脑缺血的病理联系. 方法用酶组织化学方法对40只SD大鼠脑局部缺血/再灌流损伤区非特异性酯酶阳性细胞的分布和数量进行了观查. 结果脑缺血区非特异性酯酶阳性细胞的数量增加发生于脑缺血1h再灌流2h,随后逐渐增加,在脑缺血1h再灌流16h达到高峰.阳性细胞的增加显示明显的时间依赖关系.阳性细胞主要位于小血管和微血管的壁内及其周围.在缺血侧基底节区非特异性酯酶阳性细胞比皮质缺血区多. 结论非特异性酯酶阳性细胞对脑缺血刺激反应敏感,在缺血侧基底节区,其反应更为强烈,此因素可能是基底节区易发生中风的原因之一.

两种显示大鼠不同组织微血管方法的比较

目的 比较CD34免疫组织化学法和硝基四氮唑蓝/5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐(NBT/BCIP)酶组织化学法显示不同组织微血管的特性. 方法 选取大鼠小肠、肾、脾、肝、心、肺和皮肤等7种组织,通过形态学分析和显微计数,分析上述两种方法的区别. 结果 CD34免疫组织化学法对所取各器官组织内微血管均能显示,NBT/BCIP酶组织化学法能显示心、肠、肾、肝组织内微血管,而不能显示皮肤、脾和肺组织内微血管;对同一组织同一切面,CD34免疫组织化学法显示微血管密度显著性低于NBT/BCIP酶组织化学法. 结论 CD34免疫组织化学法适于各种组织内微血管的显示,而NBT/BCIP酶组织化学法能够更大密度地显示部分器官组织内的微血管.

苦楝叶对钉螺酶组织化学的影响

目的 钉螺经苦楝叶浸提液浸泡后,检测其体内三磷酸腺苷酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶和一氧化氮合酶的活性,探讨苦楝叶杀螺机制.方法 经苦楝叶浸提液处理48 h的钉螺,冰冻切片,使用酶组织化学染色检测4种酶活性的变化,实验设未经药物处理对照组.结果 实验组钉螺头足部和消化腺的Ca2+-ATPase灰度值分别为0.197±0.059和0.233+0.037,与对照组0.298±0.041和0.413±0.057比较差异有统计学意义(t=9.036和8.594,P＜0.05);实验组钉螺头足部肌纤维的SDH灰度值为0.152±0.038,与对照组0.228±0.041比较差异有统计学意义(t=7.167,P＜0.05);实验组钉螺神经中枢、足部和心脏的NOS灰度值分别为0.616±0.064、0.431±0.043和0.716±0.058,与对照组分别为0.514±0.049、0.302±0.042和0.503±0.045比较差异均有统计学意义(t分别为3.833、6.125和8.608,P＜0.05).结论 经苦楝叶浸提液处理的钉螺NOS水平升高Ca2+-ATPase和SDH水平下降.因此推测钉螺苦楝叶杀螺机制可能是NOS升高增加了钉螺头足部NO的含量,从而抑制头足部有氧呼吸,降低钙泵的活性,引起钙超载,诱导细胞凋亡,终导致钉螺死亡.

湖北钉螺中枢神经节研究概况

钉螺中枢神经节是研究药物或各种生物与理化因素对钉螺的影响及杀灭作用的重要观察指标.不同灭螺药物或影响因素对钉螺中枢神经节的细胞结构、生化指标和酶学特点等可产生不同影响,现就湖北钉螺中枢神经节的解剖方法、解剖形态、组织学结构及酶组织化学特点等研究进行综述.

小柴胡汤对体外病毒性心肌炎模型的心肌细胞酶组织化学的影响

小柴胡汤由柴胡、人参、黄芩、半夏、甘草、生姜、大枣七位中药组成.小柴胡汤具有抗炎作用,能够调节T细胞亚群,影响心肌抗体的产生,有助于机体清除病毒.人参能诱导心肌细胞产生干扰素,提高心肌收缩力,并能改善细胞代谢.

高强度聚焦超声消融兔乳腺移植瘤效果的酶化学检测

目的 比较HE染色和酶组织化学染色法评价高强度聚焦超声(HIFU)消融兔乳腺移植瘤效果的准确性.方法 18只兔乳腺移植瘤模型,随机分成对照组6只、消融组12只,消融组再分成A、B 组各6只分别用80 W、160 W HIFU于肿瘤中央定点消融5 s.消融后即刻取标本行HE染色、琥珀酸脱氢酶(succinate dehy drogenase,SDH)酶组织化学染色光镜下观察.结果 A、B两组HIFU消融后HE染色显示瘤细胞形态无明显改变,酶组织化学染色显示A组靶区SDH活性散在阳性,提示还残留有活性的瘤细胞,B组SDH活性彻底消失,提示瘤细胞已经死亡,两组比较差异显著(P<0.05).结论 酶组织化学法染色测定SDH活性比HE染色能更客观准确地评价HIFU消融兔乳腺移植瘤的效果.

食管鳞癌组织中淋巴管表达的定量分析及其临床病理意义

目的 探讨人食管鳞癌组织中的淋巴管生成及其与淋巴结转移的临床意义.方法 采用酶组织化学法,检测49例食管鳞癌、癌旁及切端正常食管上皮组织中淋巴管的生成及定位特征,并应用图像分析方法测定淋巴管数量和阳性单位、及其与淋巴结癌转移的关系.结果 肿瘤组织中淋巴管生成和阳性单位均与淋巴结转移密切相关(P＜0.01),癌旁组织中淋巴管密度高于癌组织(P＜0.01),酶组织化学法可较好地显示食管鳞癌组织中的淋巴管.结论 食管鳞癌的淋巴管形成与淋巴结转移相关,为肿瘤细胞淋巴道转移提供了条件.

儿童进行性肌营养不良合并心力衰竭一例

患儿男，12岁，因进行性四肢肌无力10余年，胸闷1周于2013年4月16日入院。患儿系第二胎足月顺产，有一姐健康。患儿1岁内发育未见异常，但1岁后运动发育落后于同龄儿童，3岁后仍行走缓慢，不能奔跑，易摔跤，上楼梯困难。近1周患儿出现胸闷，无发热。无明显咳嗽，小便稍减少。查体：体温36.5℃，脉搏132次/min，呼吸22次/min，体重32 kg，血压108/68 mm Hg（1 mm Hg＝0.133 kPa），神志清楚，精神欠佳，呼吸平稳。面部下肢无水肿，两肺呼吸音粗，未闻及干湿性啰音。左侧胸廓稍隆起，心前区搏动弥散，心浊音界向左下扩大，心率132次/min，未闻及杂音。肝脏肋下2 cm，质软。四肢近端、躯干、颈部肌稍萎缩，双下肢腓肠肌肌容积增大，质硬。四肢近端肌力Ⅵ级，远端Ⅴ-级，肌张力正常。指鼻试验、跟膝胫试验、闭目难立征阴性。鸭步，Gower征（＋），膝反射减弱，跟腱反射存在，病理反射未引出。辅助检查：血常规WBC 8×109/L，N 0.735，L 0.213， Hb 135 g/L。血生化：谷草转氨酶80 U/L，肌酸激酶（CK）3760 U/L、CK同工酶99 U/L、乳酸脱氢酶838 U/L、谷丙转氨酶123 U/L，肾功能、电解质正常。cTnI、cTnT阴性。心电图：窦性心动过速伴ST-T改变。超声心动图：EF 25%，左心房、左心室、右心室增大，左心室收缩功能减退，二尖瓣中度反流，轻度肺动脉高压。肌电图检查：左胫前肌、左股四头肌、右三角肌肌源性损害。左肱二头肌肌活检（组织学检查、酶组织化学检查、免疫组织化学染色）：肌纤维出现肥大、萎缩、坏死、再生、间质结缔组织增生，符合肌营养不良病理学特点，抗肌萎缩蛋白（Dystrophin）表达阴性，提示抗肌萎缩蛋白病，特别是Duchenne型肌营养不良（DMD）。血液送检（外院）基因分析提示：DMD基因79个外显子缺失与重复。诊断：（1）进行性肌营养不良（Duchenne型）；（2）心力衰竭。给予磷酸肌酸钠、泼尼松、地高辛、卡托普利、螺内酯、氢氯噻嗪、吸氧、按摩等综合治疗。

妊高征患者胎盘中一氧化氮合酶活性的变化及其意义

目的 探讨胎盘中一氧化氮合酶(NOS)活性在妊高征发病中的作用.方法 采用酶组织化学法(四唑盐法)研究了32例妊高征患者胎盘和32例正常足月孕胎盘中一氧化氮合酶(NOS)活性的变化情况.结果 1.在正常足月孕胎盘和妊高征患者胎盘的绒毛血管内皮细胞和绒毛合体滋养细胞的胞浆内均存在NOS活性.2.妊高征患者胎盘中NOS活性显著低于正常足月孕者(P＜0.05),且轻度妊高征患者胎盘中NOS活性显著高于中度及重度患者(P＜0.025,P＜0.025).3.妊高征患者血压与NOS活性之间存在显著的负相关(P＜0.01).结论 NOS活性降低在妊高征发病中起重要作用.

琥珀酸脱氢酶组织化学可作为毛细胞病理改变的早期标识物

头颈部淋巴管研究方法及进展

鳞状上皮癌是头颈部常见的恶性肿瘤.在原发灶已经控制的情况下,是否出现颈部淋巴转移是影响头颈癌预后的重要因素.因此,深入认识头颈部淋巴管的结构和肿瘤经淋巴管转移的机制对于头颈部鳞癌的治疗至关重要,本文综述了文献中有关淋巴管的研究方法,以期能对淋巴管的进一步研究有所启发.

喉癌组织淋巴管密度和淋巴管生成因子表达与颈淋巴转移的关系

应用酶组织化学5'-核苷酸酶(5'-Nase)染色和逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法分别探讨喉癌癌内和癌旁组织中淋巴管生成、淋巴管生成因子表达与颈淋巴转移之间的关系,报道如下.

实验性冲击波负压暴露后豚鼠耳蜗基底膜AChE和SDH活性的变化

目的探讨冲击波负压(BUP)暴露对豚鼠耳蜗基底膜乙酰胆碱酯酶(AChE)和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的影响.方法中等强度BUP重复暴露3次后2h～3d检测豚鼠听性脑干反应(ABR)阈值,然后处死并应用酶组织化学技术观察其耳蜗基底膜两种酶的活性产物的变化.结果负压峰值为-44.5kPs～-48.8kPa的BUP暴露后2h,耳蜗基底膜外毛细胞下神经末梢区域AChE活性产物明显减少,在负压暴露后24h和3d时有所恢复,但仍低于正常对照组.基底膜SDH活性下降主要发生于外毛细胞,且以第二转第三排为明显;BUP暴露后2h活性下降幅度大,至24h和3d时有所恢复.上述两种酶活性产物的变化,与动物的ABR阈移幅度变化是一致的.结论BUP暴露后豚鼠耳蜗基底膜的AChE和SDH活性有不同程度的下降,这可能是造成BUP暴露后听力损失的一个主要原因.

酶组织化学双重染色法在牙周组织淋巴管研究中的应用

淋巴管和血管在组织液的引流,恶性肿瘤细胞转移和炎症扩散中起着重要的作用.以往有关研究中,常用的染色方法难以将淋巴管和血管、毛细淋巴管和毛细血管以及组织间隙相区分.近年来有学者报道了免疫组化双重染色应用于毛细淋巴管的研究,但较为昂贵.牙周组织的组织液和大分子物质皆通过淋巴管引流,对牙周组织微环境中与组织液相关的管状构筑,虽有作者进行过研究,但是多年来未获得较理想的方法,牙周组织中淋巴管在光镜下的确认尚未见报道.我们应用5＇-Nase-Alpase酶双重染色法对大鼠牙周组织中淋巴管进行实验观察.

褪黑素对吗啡依赖小鼠肝损害的治疗作用

目的:探讨褪黑素对吗啡依赖小鼠肝组织损害的治疗作用.方法:用皮下定量注射吗啡的方法建立吗啡依赖小鼠模型,经褪黑素治疗4周后,用HE染色、酶组织化学染色及图像分析方法,在光镜下观察吗啡依赖小鼠肝脏组织结构及酶组织化学变化.结果:肝细胞变性的发生率在吗啡自然戒断组为10例(10/10);ACP、LDH活性升高,而SDH活性降低.褪黑素治疗组仅1例(1/10),且为个别肝细胞水肿;ACP、LDH和SDH活性正常.结论:褪黑素可使吗啡所致的肝损害得到良好恢复.

重症急性胰腺炎大鼠空肠酶组织化学的变化

目的观察重症急性胰腺炎(SAP)时空肠组织酶活性的变化.方法将大鼠随机分为假手术组(SO组,开腹后牵拉十二指肠、胰腺)、SAP组(用逆行胰胆管注射牛磺胆酸钠复制SAP模型)、谷氮酰胺(Gln)治疗组(SAP+Gln组,制作SAP模型后用Gln治疗),于术后24 h、48 h、72 h分批处死动物,用组织化学染色法对空肠组织中碱性磷酸酶(ALP)、ATPase酶、细胞色素C氧化酶(CCO)、琥珀酸脱氢酶(SDH)进行染色,观察比较酶活性变化及其规律.结果 SAP组ALP、ATPase、CCO、SDH活性明显降低,且随病程发展呈进行性下降,经过Gln治疗后酶的活性显著恢复.结论 SAP时肠道功能随病情进展而下降,谷氨酰胺具有保护肠道功能的作用.