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脐血免疫学研究进展
1974年Kundtzon等首先发现人类脐血中粒-单系祖细胞集落形成单位产率远较成人外周血高,接着,一些学者证明脐血中造血细胞之质量和数量可与骨髓媲美.在这些实验研究的基础上,20世纪80年代末提出了用脐血代替骨髓作造血干细胞移植的设想,并立题进行了研究.
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人脐血来源神经元样细胞的分离与鉴定
目的探讨人脐血单个核细胞(MNCs)体外培养后的神经元特有分子表达和形态特征. 方法密度梯度离心法分离脐血中单个核细胞,部分接种于培养瓶内,部分细胞接种在6孔培养板内.倒置显微镜下观察培养细胞形态变化.RT-PCR方法检测MNCs培养前后神经细胞标志物nestin、NF-M及MAP2 mRNA的表达,培养14d后行免疫细胞化学鉴定. 结果培养前脐血MNCs胞体小呈圆形,神经干/前体细胞特异性抗体nestin阳性细胞、神经元特异性抗体MAP2和NF-M阳性细胞散在分布,阳性率分别为1.5%、3.4%和2.5%.培养14d后,倒置显微镜下可见一些有多个粗长突起的细胞群,相邻细胞突起连成网状;免疫细胞化学检测MAP2、NF-M染色阳性细胞成片状分布,阳性率分别为27.6%和21.7%.RT-PCR检测脐血单个核细胞nestin、NF-M及MAP2基因表达呈阳性,培养14d后上述基因表达上调. 结论脐血细胞中可能沉寂有神经(干)前体细胞,经体外培养后能分化为具有一定形态的类神经细胞.
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嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展
脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的治疗一直是医学界的难题,现今临床上仍无确实有效的治疗方法.目前,SCI修复的研究策略主要有以下几方面:药物治疗、细胞移植治疗、组织移植治疗、基因治疗以及联合治疗等.近年来细胞移植治疗被广泛研究,包括胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)、雪旺氏细胞(Schwann cells,SCs)、嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)、神经干细胞(neural stem cells,NSCs)、骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)、脐血细胞(umbilical cord blood cells,UCBCs)等,其中OECs以独特的生物学特性和功能引起医学界广泛关注.笔者就OECs移植治疗SCI的研究进展综述如下.
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脐血细胞培养前后的形态改变及神经细胞特有分子表达
目的探讨脐血单个核细胞(MNCs)培养前后的形态改变及神经细胞特有分子表达.方法采用倒置显微镜观察培养过程中脐血MNCs形态的变化,RT-PCR方法检测MNCs培养前后神经细胞标志物nestin,NF-M及MAP2 mRNA的表达.结果培养前,脐血MNCs胞体小呈圆形,培养后细胞胞体变大,有突起形成,相邻细胞连接成网状,类似神经细胞.RT-PCR检测发现,培养前脐血MNCs中的nestin,NF-M及MAP2 mRNA有阳性表达,在培养后表达增强.结论直接分离的脐血MNCs中存在着神经(干)细胞;培养后,出现神经元样细胞,nestin,NF-M及MAP2 mRNA表达增强.
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1例罕见的Ah-分泌型献血员血清学定型
我室在为献血员定型过程中发现1例罕见的Ah-分泌型,现将其血清学定型过程报告如下.对象与方法1.一般资料:女,22岁,汉族,2012年9月初次无偿献血.ABO血型时初定为O型.2.试剂:抗-A(批号:101841)、抗-B(批号:203421)、抗-H(批号:11321/1)为美国IMMU-COR公司产品;抗-Lea(批号:20120809)、抗-Leb(批号:20120809)、抗-AB(批号:20120523)、筛选细胞(批号:201210003)、谱细胞(批号:20120924)为江阴力博医药生物技术有限公司产品;ABO反定型红细胞(批号:20125330)为上海血液生物医药有限责任公司产品;ABO/RhD血型定型卡(批号:50093.43)、Liss/Coombs卡(批号:5031.75)、筛选细胞(批号:45330.60)为瑞士达亚美产品;脐血细胞由北京妇产医院提供;DTT为本室自制.
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天津市2000年医药卫生科研进展
一、中国医学人参皂甙是人参的重要有效成分,对血液系统的作用,除能改善血液的流变性、降血脂、抗动脉粥样硬化外,还可促进骨髓DNA、RNA、蛋白质及脂质的合成.脐血富含造血干/祖细胞,是髓外造血细胞的主要来源,在治疗血液病、难治性贫血、重症免疫缺陷病和实体瘤方面均显示了广阔的前景,天津市血液中心采用体外半固体培养法和流式细胞技术,观察了人参皂甙对脐血细胞造血功能的影响.结果显示,人参皂甙可以刺激脐血造血干/祖细胞形成集落,同时与Epo、BPA、GM-CSF具有协同作用.人参皂甙对脐血细胞的细胞周期无影响,可抑制脐血细胞凋亡,该作用与PKC系统激活有关.由于肝的保存和再灌注损伤,大约15%～30%的患者出现移植后的初无功能,成为肝移植后的主要死亡原因之一.因此,对于肝缺血/再灌注损伤的研究,已成为当代外科重视的课题.天津市第三中心医院通过建立大鼠原位肝移植后肝缺血/再灌注损伤模型,并行趋化因子MIP-2表达情况检测,证实在肝缺血/再灌注损伤中mRNA及血浆蛋白的高表达并与中性粒细胞浸润、肝损伤程度之间,具有正相关关系及其对中性粒细胞的趋化作用.该研究同时观察了预防肠源性内毒素血症所用的承气方剂,对上述病理变化的预防作用,为防治肝缺血/再灌注损伤提供了理论依据.
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干细胞因子与FLT3配基协同促巨核细胞生成因子对脐血单个核细胞的扩增及造血重建功能的影响
脐血移植后常常伴随着造血延迟和感染等危险因素的增加[1].而细胞因子介导的体外扩增有望能解决这一问题,但体外扩增时要想能达到有效的扩增脐血造血细胞,又能使扩增后的脐血造血细胞维持或增加植入潜能,和扩增培养起始细胞的选择及细胞因子的组合密切相关.本实验探讨了不同细胞因子组合对脐血单个核细胞扩增的效果并利用非肥胖性糖尿病/重症联合免疫缺陷(nonobese diabetic-severe combined immunodeficient,NOD/SCID)小鼠评估扩增后的脐血细胞的植入和造血重建功能.
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裸鼠腹腔输注体外扩增人脐血干/祖细胞的研究
脐血由于来源广泛,采集方便,造血干/祖细胞丰富,免疫活性低等优点已成为极有潜力的造血干细胞来源而用于临床.但由于单份脐血细胞绝对数量少,尚不能满足成人移植的需要,解决成人移植的关键问题是进行有效的脐血扩增和采用合适的植入方案以改善移植效率.我们以裸鼠作模型探讨扩增后脐血造血细胞经腹腔输注在体内的植入能力.
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人脐血源性间充质干细胞向心肌细胞的诱导分化
背景:与骨髓间充质干细胞相比,脐带血中的细胞被视为"非常年轻"的细胞,其增殖和分化能力不会随着捐助者的年龄增加而减低,可能是一个极好的骨髓间充质干细胞的替代来源.目的:观察体外诱导脐血间充质干细胞分化成心肌细胞的特点.设计、时间及地点:观察性实验,于2005-03/2007-02在北京世纪坛医院完成.材料:收集获知情同意健康产妇脐血细胞.方法:分离单个核细胞,从中进一步分离间充质干细胞,传代培养至第3代,应用免疫荧光流式细胞仪标记间充质干细胞特异性抗原CD34,CD44和CD90.5-氮胞苷诱导分化4周后,免疫组织化学染色和反转录-聚合酶链反应分别检测心肌细胞标志物肌钙蛋白Ⅰ,GATA4和β-肌球蚩白重链的表达.主要观察指标:心肌细胞标志物肌钙蛋白Ⅰ,GATA4和β-肌球蛋白重链的表达.结果:脐血源性间充质干细胞经5-氮胞苷诱导分化后,呈现成纤维细胞样形态和克隆增殖特点.免疫分型与骨髓来源间质干细胞一致,且免疫组织化学染色和反转录-聚合酶链反可检测到肌钙蛋白Ⅰ,GATA4和β-肌球蛋白重链的表达.结论:脐血源性间充质干细胞能够被诱导分化成心肌样细胞,并显示为心肌细胞的表观特征.
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微囊微环境对脐血细胞造血相关基因表达的影响
[目的]利用基因芯片技术研究微囊微环境对脐血细胞造血相关基因表达的影响.[方法]将新鲜分离的人脐血细胞在生理条件下进行微囊化包封、培养7 d后,对其进行总RNA提取、纯化、体外转录合成cRNA探针、cRNA探针生物素标记、与基因芯片杂交、扫描杂交信号,后进行芯片数据处理和生物学信息分析. [结果]基因芯片筛选结果显示,与平面培养对照组相比,微囊化培养脐血细胞中差异表达2倍及以上的造血相关基因有32个,其中19个表达上调,13个表达下调.[结论]微囊微环境影响脐血细胞造血相关基因的表达.
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贴壁脐血细胞对造血细胞周期及CFU-Mix形成能力的影响
自1989年人们首次开展脐血造血干细胞移植治疗Fanconi's贫血获得成功之后,国内外学者对脐血生物、生理、免疫学特点及临床应用进行了广泛的研究,证明脐血可以作为骨髓外造血的来源[1,2].本实验研究了脐血造血环境因素之一--贴壁层细胞形态特点及其对脐血造血细胞细胞周期和CFU-Mix形成能力的影响,以探讨体外扩增脐血造血干细胞的适宜条件,为更好开发利用脐血奠定实验基础.
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ConA诱导的人脐血基质细胞上清对脐血细胞DNA合成代谢的影响
目的探讨脐血综合利用途径.方法收集脐血基质细胞培养1～5周的上清,观测其对脐血细胞DNA合成代谢的影响.结果ConA诱导的人脐血基质细胞上清对脐血细胞DNA合成随培养时间变化而表现出抑制和刺激作用.结论该上清中至少含有两种以上生长因子.
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人脐血单个核细胞向神经细胞分化
目的:观察培养前后人脐血单个核细胞(MNCs)的形态学及免疫反应性变化,探讨其能否向神经细胞的分化及机制.方法:密度梯度离心脐血中单个核细胞,接种并用EGF和bFGF刺激细胞生长,倒置显微镜下观察培养前后细胞形态变化,并行免疫细胞化学鉴定.结果:培养前脐血MNCs胞体小呈圆形,nestin阳性细胞、MAP2阳性细胞散在分布(阳性率为1.5%和3.4%)无GFAP阳性细胞着色.培养14 d后,细胞群中相邻细胞突起连成网状;MAP2、GFAP染色阳性细胞成片状分布(阳性率33.5%和24.6%),未见nestin阳性细胞.结论:脐血细胞中可能有多能干细胞,经体外培养后能分化为具有一定形态的神经细胞.
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gpl30单抗协同其他造血生长因子对人脐血造血细胞体外集落形成作用
采用甲基纤维素培养体系,观察gpl30激发型单抗联合其他造血细胞生长因子对脐血单个核细胞半固体集落形成的作用.结果表明,gp130激发型单抗具有显著的协同促进造血细胞体外集落形成作用,而且明显优于IL-6对上述因子的协同效应.因此,gp130激发型单抗具有潜在的体外扩增造血细胞的应用价值.
关键词： 脐血细胞 gp130激发型单克隆抗体 造血细胞生长因子 集落形成 -
利用脐血分析O型血清的抗-AB
目的探讨O血清抗AB的抗体性质和效价.方法分别用脐血红细胞和成人红细胞作为吸收细胞完成吸收放散试验.利用A(B)细胞吸收O血清,然后采用适当的放散方法对放散液的抗B(A)的效价进行测定. 结果利用脐血作为吸收细胞,4℃吸收放散试验抗AB效价为4～32,37℃吸收放散试验抗AB效价为4～16;利用成人细胞作吸收放散试验,4℃抗AB效价为4～16,37℃吸收放散试验抗AB效价为0～4.两种温度下利用脐血细胞与利用成人细胞作为吸收细胞吸收放散试验的结果的差异有显著性(P＜0.01). 结论 O血清抗AB既有IgM性质,也有IgG性质,IgM性质抗AB效价为4～32,IgG性质抗AB效价为4～16.
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脐血细胞因子基因表达的免疫学意义
目的研究脐血中造血相关细胞因子和免疫相关细胞因子的基因表达及其与脐血细胞生长发育的关系.方法采用逆转录聚合酶链反应技术(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测了32份脐血单个核细胞中IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、G-CSF、SCF、TNFα和IFNγ等细胞因子基因的表达情况. 结果 IL-1β、IL-3和TNFα为强势表达,G-CSF、SCF中度表达,而IL-2、IL-4和IFNγ表达较低. 结论脐血细胞高表达多种细胞因子,这些细胞因子能促进细胞的生长发育,调节机体的免疫功能.
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体外培养的人脐血单个核细胞MAP2及τ蛋白mRNA的表达
目的:探讨脐血单个核细胞(MNCs)体外培养前后微管相关蛋白2(MAP2)和τ蛋白mRNA的表达.方法:用密度梯度离心法分离脐血MNCs,分组培养.对照组不加任何细胞因子,细胞因子组加入EGF和bFGF,终浓度均为20μg/L,每3 d半量换液1次,共14 d.倒置显微镜下观察培养过程中细胞形态的变化,RT-PCR法检测脐血MNCs培养前后τ蛋白及MAP2 mRNA的表达.结果:培养前,脐血MNCs胞体小呈圆形.培养后细胞因子组细胞胞体较大,有粗长突起形成,类似神经元;对照组细胞胞体较小,突起较短、较细,形似星形细胞.培养前脐血MNCsτ蛋白mRNA阴性表达,而MAP2 mRNA表达阳性;培养后2者均表达阳性,且细胞因子组2者阳性表达强于对照组(P＜0.05).结论:脐血MNCs表达MAP2 mRNA,经培养后同时表达τ蛋白mRNA,细胞因子能增强2者的表达.
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悬浮生长的人脐血细胞中Nestin及MAP2 mRNA的表达
目的:探讨悬浮生长的人脐血细胞中神经元特有标志物的表达特性,进一步阐明脐血单个核细胞(MNCs)向神经细胞分化的条件和机制.方法:取健康自然分娩产妇脐血,密度梯度离心法分离单个核细胞,以1×106 ml-1细胞密度接种于含体积分数为20%胎牛血清的DMEM培养瓶内,置37 ℃、体积分数为5%CO2、饱和湿度的培养箱内培养,倒置显微镜下观察细胞形态变化.收集培养第1 d、3 d、5 d、7 d、10 d悬浮生长的细胞,用RT-PCR法检测培养前后MNCs神经元特有标志物Nestin和MAP2的mRNA的表达.结果:培养前MNCs呈小圆形,Nestin、MAP2 mRNA均表达阳性.培养后细胞体积增大,部分细胞贴壁生长,部分细胞呈悬浮生长.收集悬浮生长细胞,第1 d、3 d Nestin mRNA的表达升高,随后降低直至转阴,而MAP2 mRNA的表达随培养时间的延长而增强.结论:悬浮生长的脐血细胞表达神经元特有标志物Nestin和MAP2 mRNA,随培养时间延长前者表达减弱而后者表达增强.
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脐血单个核细胞培养前后神经细胞特有标志物的变化
目的:探讨脐血单个核细胞培养前后神经细胞特有标志物的表达差异.方法:采用RT-PCR方法对脐血单个核细胞培养前后nestin,神经丝亚单位M(NF-M)及微管相关蛋白2(MAP2 mRNA)的表达进行检测.结果:nestin,NF-M及MAP2 mRNA在培养前的脐血单个核细胞中表达呈阳性,培养后3者表达增强.结论:直接分离的脐血单个核细胞中存在着表达神经细胞特有分子的细胞,培养后,神经元样细胞增多.
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神经细胞特有分子在人脐血细胞中的表达
目的: 探讨神经细胞相关标志物nestin,NF-M及MAP2 mRNA在脐血细胞中的表达情况.方法: 采用RT-PCR方法对脐血单个核细胞进行检测.结果: nestin,NF-M及MAP2 mRNA表达在脐血单个核细胞中呈阳性.结论: 脐血单个核细胞中存在着神经干细胞.
