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NKG2D配体在小鼠异位气管移植模型中的作用
目的 观察小鼠异位气管移植后不同时间点NKG2D配体Rae-1和H60表达水平的变化,探讨其在肺移植后闭塞性细支气管炎(BOS)中的重要作用.方法 建立小鼠异位气管移植模型并于术后7、14、28 d取材.苏木素-伊红(HE)和Mallory染色形态学观察,并检测术后气管闭塞率,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测不同时间点移植物Rae-1和H60的mRNA表达;免疫组织化学检测不同时间点移植物的Rae-1和H60蛋白表达.结果 移植后随时间延长,HE染色提示BOS病理学不断进展,与对照组比较,气管移植物14 d和28 d管腔闭塞率不断增加[(30.82±7.61)％和(83.52±13.12)％比(3.75±1.78)％,P=0.012、0.007],Mallory染色和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达不断增强.RT-qPCR检测结果显示与对照组比较,移植后小鼠气管移植物14 d的H60(12.712 2±2.828 0比0.7396±0.0428,P=0.014)和28 d的Rae-1 mRNA(10.464 9±2.1091比0.6176±0.041 3,P=0.022)表达强度均明显提高.免疫组织化学检测结果显示气管移植物H60和Rae-1在蛋白水平表达分别在14 d(207.97±25.87比31.63±9.42,P=0.023)和28 d(185.34±24.06比32.84±7.85,P=0.026)明显高于对照组.结论 NKG2D配体可能参与了肺移植后BOS的发生发展,加强主要组织相容性I类相关基因(MIC)配型或特意性阻断NKG2D通路有可能延缓并减少肺移植后BOS的产生.
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顺铂和氟尿嘧啶增强食管癌细胞NKG2D配体的表达及CIK细胞的杀伤活性
目的 研究顺铂(Cisplatin,DDP)和氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)对人食管癌EC9706细胞NKG2D配体表达及CIK细胞杀伤活性的影响.方法 MTT法测定DDP、5-Fu的50％抑制浓度(IC50)；以1/2 IC50浓度DDP、5-Fu作用EC9706细胞72h,RT-PCR检测DNA损伤修复系统相关信号分子的表达.流式细胞仪检测DDP、5-Fu作用前、后EC9706细胞NKG2D配体的表达.乳酸脱氢酶释放法检测效靶比20∶1时,CIK细胞对DDP、5-Fu作用前、后EC9706细胞的杀伤活性.结果 DDP、5-Fu的IC50分别为5μg/ml、10μg/ml.DDP、5-Fu可上调DNA损伤修复系统相关信号分子mRNA的表达.DDP与EC9706细胞共孵育72h后,EC9706细胞MICA、MICB、ULBP2、ULBP3表达较DDP作用前明显增强(P＜0.05),ULBP1无明显变化(P＞0.05).5-Fu与EC9706细胞共孵育72h后,EC9706细胞MICA、ULBP2、ULBP3表达明显增强(P＜0.05),MICB、ULBP1无明显变化(P＞0.05).效靶比20:1时,CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性为(37.08±0.62)％,CIK细胞对1/2 IG50DDP、1/2 IC50 5-Fu作用后的EC9706细胞杀伤活性分别为(59.33±2.10)％、(52.44±0.97)％,与作用前相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 DDP、5-Fu通过激活DNA损伤修复系统相关信号分子,提高EC9706细胞NKG2D配体的表达,从而增强EC9706细胞对CIK细胞杀伤的敏感度.
关键词： 食管癌 顺铂 氟尿嘧啶 细胞因子诱导的杀伤细胞 NKG2D -
IL-15上调NKG2D表达对CIK细胞杀伤活性的增强效应
目的 观察IL-15对细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-induced killer cells,CIK)NKG2D受体表达及其对食管癌EC9706细胞杀伤活性的影响.方法 体外分离外周血单个核细胞,分为两组.对照组:干扰素-γ、白细胞介素-2、CD3单抗诱导培养CIK细胞.IL-15组:加用IL-15培养.流式细胞仪检测细胞免疫表型及CD3+细胞、CD56+细胞表面NKG2D的表达,LDH法测定第14天细胞在效靶比20:1、30:1时对EC9706细胞的杀伤活性;效靶比30:1时,观察NKG2D单抗封闭细胞表面NKG2D分子后对两组细胞杀伤活性的影响.结果 随着培养时间的延长,CIK群体细胞及CD56+细胞表面NKG2D表达逐渐增强,IL-15组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);效靶比20:1、30:1时,IL-15组细胞时EC9706细胞的杀伤活性均较对照组明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05);效靶比30:1时NKG2D单抗封闭CIK细胞表面NKG2D分子后,对照组细胞、IL-15组细胞对EC9706细胞的杀伤活性均较阻断前明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 IL-15上调CIK细胞表面NKG2D分子表达,增强CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性,CIK细胞通过NKG2D发挥作用.
关键词： 细胞因子诱导的杀伤细胞 NKG2D 食管癌 细胞治疗 IL-15 -
硼替佐米诱导ABCG2High耐药鼻咽癌细胞高表达NKG2D配体的实验研究
目的 探讨硼替佐米诱导高表达ABCG2耐药鼻咽癌细胞对Allo-NK细胞杀伤敏感性的机制.方法 利用免疫磁珠技术分离ABCG2High CNE2/DDP细胞及Allo-NK细胞,流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经硼替佐米处理前后靶细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测经硼替佐米处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性.结果 ABCG2HighCNE2/DDP细胞分离后ABCG2表达率为(91.40±2.32)%,分选后NK细胞CD3-CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上.经硼替佐米处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率,由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别上升到(17.52±2.04)%、(12.53±3.68)%、(15.24±2.91)%、(62.02±6.85)%、(35.69±3.23)%.在效靶比为10:1、20:1、Allo-NK细胞对硼替佐米处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞的杀伤率分别为(15.32±13.86)%、(27.26±6.81)%及(35.06±5.10)%、(52.34±4.78)%.处理前后杀伤率差异有统计学意义(F=26.03,P=0.000).结论 硼替佐米通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3),使肿瘤细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性增强.
关键词： 硼替佐米 ABCG2 同种异体自然杀伤细胞 NKG2D 杀伤敏感性 -
NKG2D介导NK细胞对鼻咽癌细胞杀伤作用的体外研究
目的 探讨鼻咽癌CNE2细胞表面HLA-I类分子表型和NKG2D配体的表达情况,进一步了解其对同种异体NK细胞杀伤活性的影响.方法 流式细胞仪检测NKG2D的配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3在K562、CNE2细胞的表达情况.PCR-SSP法分析CNE2细胞HLA-A、B、Cw分型和NK细胞KIR分型.LDH释放法测定5例健康者NK细胞在不同效靶比时对K562、CNE2细胞的杀伤活性,效靶比20∶1时观察抗NKG2D配体的单抗对NK细胞杀伤K562、CNE2细胞活性的影响.结果 CNE2细胞表达MICA、MICB、ULBP2,不表达ULBP1、ULBP3.K562细胞表面表达MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3.5例健康者NK细胞抑制性KIR与CNE2细胞表面的HLA-I类分子之间存在错配.效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时NK细胞对K562、CNE2细胞的杀伤活性分别为(29.02±0.45)%、(10.50±2.17)%;(44.43±1.36)%、(27.68±1.47)%;(57.82±1.35)%、(36.99±3.13)%;(71.24±2.36)%、(55.00±2.20)%,在各效靶比时NK细胞对K562细胞的杀伤活性较CNE2细胞明显增强(P=0.000);在效靶比20∶1时anti-MICA、anti-MICB、anti-ULBP1、anti-ULBP2、anti-ULBP3可明显抑制NK细胞对K562细胞的杀伤活性,与阻断前相比有显著性差异(P=0.000);anti-MICA、anti-MICB、anti-ULBP2可明显抑制NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性,与阻断前相比有显著性差异(P＜0.01),但anti-ULBP1、anti-ULBP3不能阻断NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性.结论 NKG2D配体影响NK细胞对靶细胞的杀伤活性,提高NKG2D配体的表达有可能提高NK细胞的抗肿瘤活性.
关键词： 自然杀伤细胞 NKG2D 杀伤细胞免疫球蛋白样受体 -
NKG2D及其配体MICA/B在口腔鳞癌患者外周血NKT细胞中的表达及其意义
目的:探讨NKG2D及其配体在口腔鳞癌患者与正常人中外周血NKT的表达及其临床意义.方法:通过流式细胞术检测28例口腔鳞癌及25例正常人的NKT细胞计数,PCR检测NKG2D及其配体在不同组中NKT及配体MICA/B的表达情况,分析表达率与临床意义.结果:与正常组相比口腔鳞癌病人中的外周血中CD3+ CD56+ NKT的含量较低((1.74±0.15)个/μL),并且口腔鳞癌患者CD3+ CD56+ NKT细胞中NKG2D,MICA和MICB表达均下降,与对照组比较差异有统计学意义.结论:口腔鳞癌患者外周血中的NKT细胞数量和NKG2D及其配体MICA/B表达量相对下降,这可能影响NKT在肿瘤免疫中的作用,使口腔鳞癌细胞逃避免疫监视.他们可以作为口腔鳞癌免疫状态的参考指标,也为口腔鳞癌的治疗提供一种新的方向.
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自然杀伤细胞受体家族NKG2D研究进展
NKG2D是自然杀伤细胞的一种激活性受体,与其配体MICA和MICB结合后,在多肽DAP-10P的介导下激活自然杀伤细胞,导致表达MHC和MICA/B分子的靶细胞被杀伤,在肿瘤的免疫监视中发挥重要的作用.UL16结合蛋白(ULBPs)是NKG2D的另一种新的配体分子,在病毒感染及人类巨细胞病毒逃脱免疫监视过程中可能起着重要作用.
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NKG2D-sMICA在原发性肝细胞癌中的表达及意义
目的 探讨外周血中NK细胞活化性受体NKG2D及其可溶性配体MHC-I链相关蛋白A(sMICA)与原发性肝细胞癌(HCC)发生发展的关系,为HCC免疫治疗提供理论依据.方法 随机选取HCC患者40例,术前收集其外周血,流式细胞术检测NKG2D的表达,ELISA检测血清中sMICA的水平,并与20例健康对照组比较,分析sMICA与HCC I临床病理因素的关系.结果 HCC组NKG2D的表达为(71.97±4.96)%,明显低于对照组的(91.45±3.16)%,两组之间差异有统计学意义(P＜0.05).肝癌sMICA水平较对照组显著升高(中位值191.3 pg/mL vs.74.9 pg/mL,P＜0.05).血清中sMICA水平高低与肝癌TNM分期和是否合并门静脉癌栓有关(P＜0.05).Spearman等级相关分析显示,sMICA水平与NKG2D的表达率呈显著负相关(r=-0.591,P＜0.05).结论 HCC组NKG2D表达下降;其血清中sMICA水平与HCC的发生发展有密切关系,可能与NKG2D-sMICA参与了HCC免疫逃逸机制有关.
关键词： 肝肿瘤 NKG2D MHC-I链相关蛋白A 肿瘤免疫逃逸 -
NKG2D配体在肿瘤免疫中作用新进展
NKG2D 系自然杀伤性细胞(NK)和CD8+ T 淋巴细胞表面的激活受体.NKG2D 配体分子可被细胞在应急状态和发生感染的情况下诱导表达.在肿瘤免疫监视和肿瘤免疫治疗,进行了大量的研究.NKG2D与其配体分子的结合能够激活NK 细胞,并为T 细胞提供协同刺激,继而激活机体体液免疫和细胞免疫机制,诱导机体的免疫杀伤作用.活化的NK 细胞通过IL-15 加强来自供体或受体的抗原递呈细胞(APCs)对T 细胞的反应,导致机体对移植物的排斥反应.从另一面来说,经NKG2D 受体激活NK 细胞后,T 调节细胞的数量可减小,这种调节T 细胞免疫的能力下降.增加NKG2D 与其配体分子的结合,可为寻找新的肿瘤免疫治疗提供研究思路.加强对这方面的研究为提高肿瘤存活期具有重要的临床价值.
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MICA-NKG2D通路及其在垂体腺瘤中的研究进展
垂体腺瘤是颅内常见的肿瘤,临床症状主要以占位效应和(或)内分泌紊乱为主.在垂体腺瘤的发生发展过程中,各种胞内、胞间信号通路起着十分重要的作用,其中MICA-NKG2D信号通路在垂体腺瘤细胞逃脱机体免疫监视过程中发挥了主要作用.主要组织相容性复合物Ⅰ类分子链相关蛋白A(MICA)作为自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)的配体,能与其特异性结合,并活化以自然杀伤细胞为主的免疫效应细胞,从而发挥免疫监视作用.基于MICA-NKG2D信号通路的靶向治疗有望成为治疗垂体腺瘤的新手段.
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白藜芦醇对髓系白血病干细胞增殖和凋亡的影响及其与allo-NK细胞的联合杀伤作用
目的 探讨白藜芦醇(RES)对髓系白血病干细胞(CD34+CD38-KG1a细胞,以下简写为KG1a细胞)增殖和凋亡的影响,并初步探讨RES增强allo-NK细胞对KG1a细胞杀伤作用的机制.方法 免疫磁珠分选法分选人外周血单个核细胞(PBMCs)中的CD16+CD56+CD3-NK细胞(以下简写为NK细胞).流式细胞术检测细胞表面分子CD34、CD38、CD3、CD15和CD56.MTT法、甲基纤维素克隆形成实验检测RES对KG1a细胞增殖抑制作用.DAPI染色法和流式细胞术检测RES对KG1a细胞凋亡的影响.使用IC50的RES作用KG1a细胞24 h后清洗离心获得RES/KG1a细胞.LDH释放法检测NK细胞对KG1a细胞和RES/KG1a 2种细胞的杀伤能力.流式细胞术检测KG1a细胞和RES/KG1a细胞的表面配体ULBP1、ULBP2、ULBP3、MICA和MICB.结果 免疫磁珠分选后,外周血单个核细胞中的NK细胞比例为(90.5±3.2)％;KG1a细胞纯度为(91.2±3.9)％.RES对KG1a细胞的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性,24 h的IC50=24.0 μmol·L-1;48h的IC50=13.7 μmol·L-1.RES抑制KG1a细胞的克隆形成能力并诱导细胞凋亡,具有剂量依赖性(P＜ 0.05).NK细胞对RES/KG1a细胞的杀伤能力比其对KG1a细胞的杀伤能力强(P＜ 0.05).与KG1a细胞比较,RES/KG1a细胞表面配体ULBP1、ULBP2、ULBP3表达明显上调(P＜0.05),MICA和MICB变化不明显.结论 RES能够抑制KG1a细胞增值抑制并诱导细胞凋亡,联合NK细胞对KG1a细胞具有协同杀伤作用,这可能与KG1a细胞表面的ULBP1、ULBP2、ULBP3表达上调相关.
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人NKG2D基因重组质粒的构建及鉴定
目的构建人NKG2D重组质粒.方法应用RT-PCR,自健康人外周血单个核细胞(PBMC)中获取NKG2D cDNA,克隆于pMD18-T载体中,并经酶切和测序鉴定.结果重组载体中插入片段序列与GeneBank登录的cDNA序列一致.结论成功地构建了重组载体pMD18T-NKG2D,为研究NKG2D的生物学活性奠定了基础.
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NKG2D及NF-κB在胃腺癌组织中的表达及意义
目的 探讨NKG2D和核因子-κB(NF-κB)在胃腺癌及癌旁正常组织中的表达及其与临床病理参数之间的关系.方法 通过免疫组织化学的方法,检测南昌大学第一附属医院20例胃腺癌组织及癌旁正常组织中NKG2D和NF-κB的蛋白表达情况,分析组织中表达率及表达强度与临床病理参数之间的关系.结果 ①NKG2D在胃腺癌及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为55%和100%(P<0.01);而NF-κB在胃腺癌及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为95%和20%(P<0.01).②NKG2D在低分化、Ⅲ-Ⅳ期、有淋巴结转移的胃腺癌组织中显著降低,而NF-κB在低分化、Ⅲ-Ⅳ期、有淋巴结转移的胃腺癌中显著升高(P<0.05).③NKG2D和NF-κB的表达之间呈负相关(P<0.05).结论 胃腺癌组织中NKG2D表达下调而NF-κB表达上调,且二者的表达成负相关,NKG2D和NF-κB在胃癌发生发展中可能有重要作用.
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慢性乙型肝炎免疫细胞NKG2D表达在肝病重型化中的作用
目的分析乙型肝炎免疫细胞NKG2D表达与肝病重型化的关系.方法应用免疫荧光技术和流式细胞术(FCM)分选20例慢性重型乙肝(FHB)、10例无症状表面抗原携带者(ASC)、10例健康对照的外周血NK细胞,并定量分析NKG2D表达.应用免疫组化SP法分析20例慢性乙肝(CHB)(轻度8例,其中G1级6例,G2级2例;中度7例,重度5例,其中G3级9例,G4级3例)、11例FHB肝组织内细胞毒细胞NKG2D的表达差异.结果经FACS可获得高纯度、高活性的NK细胞.FHB患者NK细胞的NKG2D蛋白表达量高于ASC和正常对照组,差异有显著性(P＜0.01).免疫组化结果显示,FHB组肝脏免疫细胞NKG2D蛋白表达量分别高于CHB(G3、G4)组、CHB(G1、G2)组和正常对照组,差异有显著性(P＜0.01).CHB(G3、G4)组高于正常对照组(P＜0.01),但CHB(G1、G2)组分别与CHB(G3、G4)组和正常对照组比较,差异无显著性(P＞0.05).结论乙型肝炎外周血NK细胞和肝组织内细胞毒细胞NKG2D过度表达与重型肝炎发生相关.
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NKG2D配体在13种肿瘤细胞系中的表达及意义
背景与目的:NKG2D及其配体的相互作用在肿瘤免疫监视中起着非常重要的作用.本研究探讨NKG2D配体在13种肿瘤细胞系中的表达及其意义.方法:采用半定量RT-PCR法检测肿瘤细胞系中NKG2D配体的mRNA表达.应用MTT法检测人NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性,免疫组织化学技术和Western blot法检测肿瘤细胞中MHC I类相关蛋白A(MHC class Ⅰ chain-related A)蛋白表达情况.结果:13种肿瘤细胞系表达不同水平的NKG2D配体mRNA.其中Hep2细胞中MICA强阳性表达,HeLa、HepG2、MDA231、HT29、SGC7901、M21、K562、Jurkat细胞MICA表达阳性,而Caski、PG、HL-60和Raji细胞中MICA mRNA阴性.MICA和MICB的表达水平与NK细胞杀伤活性具有高度相关性(r=0.851,P＜0.001;r=0.652,P＜0.05).除ULBP3外,其余ULBP成员的表达水平与NK细胞杀伤均无相关性.结论:在6种人NKG2D配体中,MICA的表达水平与肿瘤细胞对NK细胞杀伤的敏感性关系为密切,肿瘤细胞MICA的表达水平可能决定着机体NK细胞抗肿瘤免疫应答的强弱.
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苦参碱通过诱导NKG2D配体高表达增强NK细胞对ABCG2high耐药鼻咽癌细胞杀伤活性
目的 探讨苦参碱提高ABCG_2~(High)[三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2]耐药鼻咽癌细胞对Allo-NK细胞杀伤敏感性的机制.方法 利用免疫磁珠技术分离ABCG_2~(High)CNE2/DDP细胞及Allo-NK细胞,流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经苦参碱处理前后靶细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测经苦参碱处理前后ABCG_2~(High)CNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性.结果 ABCG_2~(High)CNE2/DDP细胞分离后ABCG_2表达率为(91.40±2.32)%,分选后NK细胞CD3~-CD16~+CD56~+细胞的纯度达90%以上,经苦参碱处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率,由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别上升到(11.30±0.89)%、(14.29±2.61)%、(12.56±1.06)%、(43.24±4.43)%、(12.77±1.06)%.在效靶比为10:1、20:1,Allo-NK细胞对苦参碱处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞的杀伤率分别为(15.32±1.34)%、(27.26±6.81)%及(28.53±1.37)%、(42.72±2.80)%.处理前后杀伤率有显著性差异(F=29.05,P=0.000).结论 苦参碱通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3),使肿瘤细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性增强.
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NKG2D配体在耐药鼻咽癌细胞的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响
目的 探讨NKG2D的主要活化性配体在鼻咽癌亲本细胞CNE2和多药耐药细胞CNE2/DDP的表达及其对自然杀伤(NK)细胞杀伤活性的影响.方法 流式细胞仪检测NKG2D的主要活化性配体MHC-Ⅰ类链相关蛋白A和B(MICA、MICB)、UL16结合蛋白1-3(ULBP1、ULBP2、ULBP3)在CNE2、CNE2/DDP细胞的表达情况;PCR-SSP法检测CNE2、CNE2/DDP细胞HLA-A、B、Cw分型和NK细胞KIR分型;LDH释放法测定5例健康者的NK细胞在不同效靶比时对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性;效靶比20∶1时观察不同单抗对NK细胞杀伤CNE2、CNE2/DDP细胞活性的阻断作用.结果 CNE2、CNE2/DDP细胞HLA分型为A2,24,B18,35,Cw4,7;5例健康者的NK细胞表达KIR2DL1,KIR2DL3,KIR3DL1,KIR3DL2与CNE2、CNE2/DDP细胞表面的HLA-I类分子之间存在错配.CNE2、CNE2/DDP细胞均表达NKG2D的配体MICA、MICB、ULBP2,均不表达ULBP1、ULBP3;CNE2细胞MICA、MICB的表达率与CNE2/DDP细胞相比差异有统计学意义(P＜0.01).效靶比5∶1、10∶1、20∶1、30∶1时NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性分别是(10.50±2.17)%、(4.98±0.95)%;(27.68±1.47)%、(15.48±2.10)%;(36.99±3.13)%、(28.46±4.30)%;(55.00±2.20)%、(40.95±2.21)%.在各效靶比时NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性与CNE2/DDP细胞相比差异有统计学意义(P＜0.01);效靶比20∶1时anti-MICA、anti-MICB、anti-ULBP2单抗可明显抑制NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性,与阻断前相比差异有统计学意义(P＜0.05);anti-ULBP1、anti-ULBP3单抗不能阻断NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性.结论 NKG2D的主要活化性配体MICA、MICB在CNE2、CNE2/DDP细胞的表达差异与NK细胞的杀伤活性有关,肿瘤细胞在发生多药耐药的同时获得了免疫逃避能力.
关键词： 鼻咽癌 自然杀伤细胞 NKG2D 杀伤细胞免疫球蛋白样受体 -
人鼻咽癌细胞株CNE2对NK细胞KIR/NKG2D受体的免疫编辑作用及其对NK细胞杀伤功能的影响
目的 探讨NK细胞与表达NKG2D配体的人鼻咽癌细胞株CNE2混合培养后4、24、48h时KIR、NKG2D的变化及其对NK细胞杀伤CNE2细胞活性的影响.方法 PCR-SSP法检测CNE2细胞HLA-A、B、Cw表型、NK细胞KIR表型(选择3例健康者为试验对象),流式细胞仪检测对照组(新鲜分离的NK细胞)KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1、NKG2D的表达情况.IL2组(IL2培养的NK细胞)、CNE2组(CNE2、IL2、NK细胞混合培养)培养后4、24、48 h时KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1、NKG2D的表达情况,LDH释放法测定IL2组及CNE2组培养24 h后的NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性.结果 CNE2细胞表面HLA-A、B、Cw表型为A2,24;B18,35;Cw4,7.3例健康者均表达KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1.CNE2组4、24、48 h时KIR2DL1、KIR2DL3表达较对照组、IL2组明显升高(P＜0.01),NKG2D表达较对照组、IL2组明显降低(P＜0.01),KIR3DL1表达与对照组、IL2组相比无明显变化(P＞0.05).IL2组4、24、48 h时KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1及NKG2D表达与对照组相比无明显变化(P＞0.05).IL2组、CNE2组培养24 h后的NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性在效靶比10∶1时分别为(26.%±1.47)%和(2.74±1.64)%,两者相比差异有统计学意义(P＜0.01);效靶比20∶1时分别为(35.74±3.59)%和(4.57±2.41)%,两者相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 NK细胞与NKG2D配体阳性的肿瘤细胞持续性接触,下凋NK细胞表面NKG2D表达,上调NK细胞表面与HLAⅠ类分子相结合的KIR表达,导致NK细胞对靶细胞杀伤活性减低.本研究阐明了编辑后的NK细胞杀伤活性减低的分子基础,同时提示阻断HLAⅠ类分子与KIR的结合或者增强NK细胞表面NKG2D的表达将有利于提高NK细胞杀伤肿瘤细胞的活性.
关键词： 鼻咽肿瘤 自然杀伤细胞 NKG2D 杀伤细胞免疫球蛋白样受体 免疫编辑 -
IL-2联合IL-21对人外周血NK细胞的诱导作用
目的 体外观察白细胞介素(IL)-2和IL-21联合诱导对人外周血单个核细胞中自然杀伤(NK)细胞、调节性T(Treg)细胞比率以及相关基因NKG2D、Foxp3 mRNA表达的影响.方法 分离人外周血单个核细胞,用IL-2、IL-21单独或联合诱导培养,利用流式细胞仪检测NK、Treg细胞比率,荧光定量PCR检测NKG2D、Foxp3基因mRNA表达.结果 IL-21组和联合诱导组第3、5、7、10天时,NK细胞逐渐增多,在第7天NK细胞比率高;Treg细胞比率无明显差异.IL-21以及联合诱导10 d 的淋巴细胞,NKG2D、Foxp3基因mRNA表达明显上调,Foxp3 mRNA在各组间无明显差异.结论 IL-21及与 IL-21联合诱导,可促进NK细胞增殖,并上调NKG2D mRNA表达,不增多Treg细胞以及相关基因Foxp3的表达.
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人外周血NK细胞亚群的生物学特性
0.05),而CD56+CD16+和CD16+NK细胞亚群之间则差异无显著性(P>0.05).结论 NK细胞乃异质性群体,随着CD56表达减少和CD16表达增加,其生物学功能逐渐成熟.
