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结核分枝杆菌耐药机制的研究进展
结核病是仅次于艾滋病的,在世界范围内由单一传染性病原体引起的重大感染性疾病.2013年,全球有900万人罹患结核病,其中包括55万名儿童,150万人死于该疾病.近些年,由于用药不严谨,新药研发速度缓慢,出现了一种新型的耐多药结核病,加大了结核病的防控难度.本文着眼于结核分枝杆菌耐药性这一领域,对一些常用抗结核药物的耐药机制、分枝杆菌外排泵基因调控机制等展开分析研究并进行综合论述.
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耐碳青酶烯类药物铜绿假单胞菌的耐药机制研究
目的 研究药物外排泵系统及膜孔蛋白及产金属β-内酰胺酶在耐碳青酶烯类铜绿假单胞菌中的表达水平或携带状况,为临床了解其耐药机制提供实验室依据.方法 用SYBR Green I实时定量RT-PCR法检测多药耐药与全敏感铜绿假单胞菌中多药外排泵MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM及膜孔蛋白OprD的mRNA表达水平.结果 在40株耐碳青酶烯类铜绿假单胞菌中,mexAB表达水平均无升高,mexCD、mexEF和mexXY升高的也分别仅有3、8、6株,其中还有3株同时有两种泵表达升高,即只有14株菌存在多药外排泵表达升高的现象(35.0%),40株菌中有10株菌oprD低表达,另外2株oprD表达缺失,与多药外排泵表达升高综合考虑,共有21株菌存在泵和孔蛋白表达异常(52.5%).结论 一株细菌中可同时存在多种耐药机制,这些机制间又并非简单的复合相加作用,探索耐药机制对新药研制及控制医院内感染的播散具有重要意义.
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多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因及同源性分析
目的：分析临床多药耐药鲍氏不动杆菌外排泵耐药基因 adeA、adeB、adeC及其调控基因adeR、adeS分布与抗菌药物耐药的关系，为IC U感染鲍氏不动杆菌的同源性有效应对医院感染。方法2012年IC U检出鲍氏不动杆菌102株，采用K‐B法进行药敏试验，PCR测定所有菌株的药物外排泵基因，并利用脉冲场凝胶电泳进行同源性分析。结果94株耐药鲍氏不动杆菌对头孢唑林和呋喃妥因耐药率均为100．0％，对亚胺培南和氨苄西林／舒巴坦的耐药率为75．8％和95．0％，对其他抗菌药物耐药率均＞85．0％；102株鲍氏不动杆菌中 adeA、adeB、adeC、adeR、adeS基因型的阳性株分别为78、79、76、77、74株；5种基因均以阴性为主；敏感株中调控基因 adeR、adeS表达率较低分别为37．5％和25．0％。结论 ICU分离的鲍氏不动杆菌中呈现严重的多药耐药，adeABC外排泵耐药基因相对于敏感株在耐药菌株中大量存在，外排泵基因的高表达与鲍氏不动杆菌的多药耐药存在相关性关系，而且其基因的播散主要通过克隆播散得以传播。
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靶向MDR1基因的小分子干扰RNA治疗卵巢上皮性癌的动物体内研究
卵巢上皮性癌(卵巢癌)是妇科恶性肿瘤中病死率高的一种肿瘤,其5年生存率仅50%左右.化疗是治疗卵巢癌的一种重要方法,然而由于肿瘤细胞的耐药,化疗的有效性一直不理想.肿瘤细胞的多药耐药主要与多药耐药基因MDR1编码的P糖蛋白(P-glyeoprotein,P-gp)过度表达有关.P-gp能够转运多种结构、功能不同的化学药物,是一种细胞内药物外排泵,从而降低细胞内药物浓度,使细胞产生耐药[1].
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临床分离铜绿假单胞菌株的碳青霉烯类耐药机制研究
目的 了解临床分离的碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌的耐药机制.方法 对临床分离的40株碳青霉烯类耐药和10株对常用药物都敏感的铜绿假单胞菌及标准株ATCC27853,用抑制剂增效试验和双纸片协同试验筛选金属β-内酰胺酶;用SYBRGreen Ⅰ实时定量RT-PCR法检测多药外排泵MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM及膜孔蛋白oprD的mRNA表达水平.结果 在40株碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌中有33株金属β-内酰胺酶阳性,而10株敏感菌中无一株金属β-内酰胺酶阳性.与敏感菌相比,40株碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌中无MexAB-OprM过表达株,2株MexCD-OprJ过表达,8株MexEF-OprN过表达,6株MexXY-OprM过表达,10株OprD低表达,2株OprD缺失.一株菌中可同时存在几种异常.结论 产金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制,一株细菌中可同时存在多种耐药机制,且这些机制间并非简单的相加作用.
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多药耐药相关蛋白及其在肿瘤耐药中的作用
多药耐药(multidrug resistance,MDR)是导致肿瘤患者化疗失败的主要原因.介导多药耐药的重要机制之一是多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated proteins,MRPs)的表达增加.MRPs是一类ATP能量依赖型跨膜转运蛋白,是具有选择性和特异性的药物外排泵.本文主要针对MRPs的生理特征、结构特点、耐药谱特征及其逆转进行综述.
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微生物药物外排泵及其抑制剂研究
细菌自身的不断进化及抗生素的不合理使用导致了耐药性细菌的出现和蔓延,微生物的主动外排是导致细菌产生多重耐药的重要原因.微生物外排泵的研究是目前的热点之一,也被认为是开发新抗生素的理想靶标.本文从基因组和比较基因组水平对外排泵的类型、作用机制、表达调控及研究方法等方面概述,并结合正在开展的分枝杆菌的药物外排泵进行了比较基因组分析.这些工作有利于开发新的抗生素或抗生素增效剂.
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分枝杆菌药物外排泵及其在耐药机制中作用
近年来,分枝杆菌耐药现象日趋严重,耐多药结核分枝杆菌也日渐增多,导致其感染的难治性.分枝杆菌内在性耐药主要是细胞壁通透性障碍,导致药物进入高疏水性细胞壁间隙比较慢;而获得性耐药主要是基因突变,导致抗生素靶位变异或药物在细胞内处于无活性状态.但仅凭天然细胞壁屏障作用和基因突变因素尚不足以解释分枝杆菌耐药机制.研究表明,分枝杆菌存在药物主动外排泵的表达,并被视为是可能的另一种重要耐药机制[1,2].现就分枝杆菌外排泵的生物学功能及其基因调控机制研究进展综述如下.
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多药耐药基因MDRI在乳腺癌中的表达及意义
多药耐药(multidrug resistance,MDR)的机制是与MDR1基因过表达有关,该基因同编码一种药物外排泵P-170(蛋白Pgp)[1].该基因存在于某些正常组织和肿瘤细胞中,影响化疗效果[2].本文应用免疫组化技术对MDR1基因在56例乳腺癌组织中的表达特点及其意义进行探讨和分析.
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药物外排泵基因表达与结核分枝杆菌耐药关系分析
目的 了解药物外排泵基因表达与结核分枝杆菌耐药性之间的关系,为结核病患者寻找到新的治疗药物提供有效的医学理论依据.方法 选择本地区结核病防治所的结核病采样190例,随机分为两组,对照组95例做常规治疗,观察组95例通过药物外排泵进行治疗,在两组临床资料中进行对比分析.结果 观察组的耐药程度明显低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).观察组治疗后结核病人的药物吸收状况、症状的好转程度明显优于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 通过药物外排泵的基因表达来分析结核分枝杆菌的耐药性能高低,研究出更加科学、合理的结核病防治措施,减少结核病的传染频率,提高医学对症治疗手段.
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铜绿假单胞菌RND外排泵研究进展
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA），是一种广泛分布于自然界的革兰阴性非发酵菌，也是临床上常见的、引起院内获得性感染的重要条件致病菌，尤其是来自 ICU 重症、气管插管等侵袭性操作、长期使用抗生素的感染患者［1］。1990年初Poole 等人在铜绿假单胞菌野生株中发现编码外排泵 MexAB-OprM的操纵子，以及其在固有耐药中发挥的作用。在2013年，美国疾病预防与控制中心［2］列出当前的耐药危机，其中包括假单胞菌属。国内已有多项大型流行病学调查显示我国 PA 感染的严重性［3］，以及外排泵机制在抗药性方面发挥了重要作用［4］。铜绿假单胞菌药物外排泵介导了具有临床重要意义的多重耐药性（包括天然耐药和获得性耐药）。本文主要对铜绿假单胞菌常见外排泵的特点、底物谱、调控机制等进行综述。
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类泛素-蛋白酶体系统和药物外排泵抑制剂对结核分枝杆菌单纯利福平耐药性影响的研究
目的 探讨类泛素-蛋白酶体系统对结核分枝杆菌单纯利福平耐药性的影响.方法 采用刃天青显色法检测利福平对结核分枝杆菌的低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),比较分析结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA、Mpa基因的过表达或缺失突变对结核分枝杆菌利福平MIC的差异;检测分别加入羰基氰氯苯腙、利血平、维拉帕米和氯丙嗪4种外排泵抑制剂前后各菌株对利福平MIC的影响.结果 结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA和Mpa基因的过表达均能增强单纯耐利福平结核分枝杆菌对利福平的耐药性,而Pup、Mpa、Dop和PafA基因的缺失均能显著降低单纯耐利福平结核分枝杆菌对利福平的耐药性,P值均＜0.05.4种药物外排泵抑制剂能不同程度的降低各过表达菌株对利福平的MIC,P值均＜0.05,并且,类泛素-蛋白酶体系统与外排泵抑制剂之间存在一定交互作用.结论 类泛素-蛋白酶体系统对结核分枝杆菌单纯利福平耐药性的产生有影响;类泛素-蛋白酶体系统可能通过调控外排相关通路蛋白来影响结核分枝杆菌单纯利福平耐药性的产生.
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白假丝酵母菌对唑类药物耐药机制的研究进展
近年来,真菌感染的发病率呈逐年上升趋势,抗真菌药物被广泛地应用于临床,同时耐药菌株的发生逐渐增多.白假丝酵母菌作为临床常见的病原真菌,对一线唑类抗真菌药物经常出现耐药.白假丝酵母菌基因多样性与其对抗真菌药物的耐受性有着密切的关系.白假丝酵母菌对唑类抗真菌药物产生耐药是治疗白假丝酵母菌感染失败的关键问题之一.目前认为假丝酵母菌耐药与多种分子机制有关,主要包括以下几方面:麦角甾醇合成通路中关键靶酶的变化造成的膜成分的改变;编码药物外排泵的基因表达增加;生物被膜的形成.很多专家就此问题做过研究,本文现就此问题作一综述.
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大肠杆菌对氟喹诺酮药物耐药机制的研究
目的:研究大肠杆菌耐药菌株对亲水或相对疏水性的氟喹诺酮类药物的耐药机制有无差异.方法:测定亲水性药物环丙沙星、氧氟沙星和洛美沙星及相对疏水性药物托舒沙星在菌体内的蓄积量和主动外排泵的作用(荧光测定法):检测细菌膜孔蛋白OmpF有无缺失(SDS-PAGE法);检测细菌DNA回旋酶A亚基编码基因gyrA常见突变点(Ser-83)是否突变(3'BS-PCR法和PCR产物测序).所研究的大肠杆菌菌株包括野生株Ecs及其实验室诱变耐药株R2、R256,临床分离耐药株R5、R6和膜孔蛋白标准株JF701(OmpF+)、JF703(OmpC+).结果:三种亲水性氟喹诺酮药物在敏感菌株(Ecs、JF701、JF703)中的蓄积量高于耐药菌株(R2、R256、R5、R6)2-9倍,OmpF缺失株JF703的蓄积量仅较JF701(OmpF+)减少约1/3-1/2.加入质子驱动力抑制剂DNP后,细菌主动外排药物泵的能量供应发生障碍,药物在敏感株中的胞内蓄积量增加不到一倍,但在耐药株中的蓄积量升高达2-4倍,蓄积量的增加比例与细菌原有的耐药水平呈正相关,药物泵出现象越明显的细菌其耐药水平越高,提示耐药株具有较强的药物外排泵能力.而相对疏水性药物托舒沙星在敏感菌和耐药菌中的蓄积量于加入DNP前后未见明显差异.耐药菌株R2、R256有OmpF缺失.R5、R6和R256均存在gyrA基因Ser-83的突变;对R2、R5和R6的序列分析显示R5和R6还发生了Asp-87突变.结论:大肠杆菌对亲水性氟喹诺酮的耐药同时涉及gyrA基因的突变和细菌内膜上主动外排泵的功能增强,后者是菌体内药物蓄积量减少的主要原因;对疏水性氟喹诺酮类药物的耐药可能仅由gryA基因的突变所决定;而OmpF缺失可能不是一个重要的因素.
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克班宁对耐药细胞K562/HHT逆转作用的研究
多药耐药(MDR)是肿瘤化疗失败的主要原因之一,MDR的原因与肿瘤细胞膜上的P-糖蛋白(P-gp)的高表达有关,P-gp为一能量依赖的单向药物外排泵,可以将进入细胞内的药物排出细胞外,引起细胞内药物积聚减少,是MDR的主要原因.克班宁(Creban-ine)及维拉帕米与高三尖杉酯碱(HHT)合用对敏感株
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药物外排泵和转运蛋白对口服药物吸收影响的研究进展
人体肠道的药物外排泵和转运蛋白对口服药物的吸收有较大影响,常见的药物外排泵有P-糖蛋白和多药耐药相关蛋白,会降低相关底物吸收;其它的一些转运蛋白如有机离子转运蛋白家族、H+/单羧酸共转运蛋白和肽转运蛋白可促进相关底物的吸收.作者对药物外排泵和转运蛋白近年来的相关研究进行了综述,并指出了药物外排泵和转运蛋白今后可能的研究方向.
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碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌外排泵表达研究
目的 了解临床分离的碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌多药外排泵及膜孔蛋白表达情况.方法 用SYBR GreenⅠ实时定量RT-PCR法检测多药外排泵MexAB-OprM,MexCD-OprJ,MexEF-OprN,MexXY-OprM及膜孔蛋白OprD的mRNA表达水平.结果 在40株碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌中,13株有耐药泵基因表达异常;12株oprD表达异常.结论 外排泵和膜孔蛋白的表达异常是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的重要原因,探索耐药机制对新药研制及控制医院内感染的播散是十分重要的.
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简并PCR结合RACE法克隆希木龙念珠菌CDR1基因
目的 克隆希木龙念珠菌中药外排泵基因(CDR1),为探讨希木龙念珠菌的耐药机制奠定基础.方法 首先从NCBI基因数据库中找到已知的白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌和光滑念珠菌Cdr1蛋白的氨基酸保守序列,并设计简并引物,PCR扩增获得希木龙念珠菌CDR cDNA部分片段,接着使用RACE方法分别扩增其5'和3'端序列得到完整的CDR1编码序列(CDS).结果 简并PCR扩增得到预期2 210bp大小的片段;5'RACE和3'RACE分别得到CDR1 cDNA 5'和3'端片段,经纯化、克隆、测序、比对和拼接分别得到两株菌完整的CDR1 cDNA序列;其编码的蛋白序列经比对发现与其它念珠菌的Cdr1蛋白高度同源.结论 利用简并PCR联合RACE方法能够有效、准确地克隆出希木龙念珠菌CDR1基因.
关键词： 希木龙念珠菌 简并PCR 快速cDNA末端扩增法 药物外排泵
