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MEKK3在肾透明细胞癌中的表达和临床价值
目的 探讨有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶3(MEKK3)在肾透明细胞癌(CRCC)中的表达及其临床意义. 方法 采用免疫组织化学SP法检测70例CRCC组织和30例癌旁正常肾组织中MEKK3的表达,采用免疫印迹法检测4例CRCC组织和癌旁正常肾组织中MEKK3蛋白表达. 结果 CRCC组织中,MEKK3的表达高于癌旁正常肾组织,MEKK3蛋白高表达的患者预后明显低于低表达者.多因素Cox回归显示,年龄、肿瘤大小、TNM分期、MEKK3表达水平是CRCC预后的独立危险因素. 结论 MEKK3在CRCC的发生发展中可能起重要作用,与CRCC的预后密切相关.
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plk1、Raf-1和Ki-67在胃癌组织中的表达及其意义
目的 探讨plk1、Raf-1和Ki-67在胃癌组织中的表达及其相关性,分析它们的表达与胃癌临床病理指标之间的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测80例胃癌组织和15例癌旁正常胃组织中plk1、Raf-1和Ki-67的表达水平.结果 80例胃癌组织中plk1、Raf-1和Ki-67的阳性表达率分别为82.5%(66/80)、81.3%(65/80)、80.0%(64/80),15例癌旁正常胃组织中均未见表达.plk1和Raf-1表达与胃癌的浸润深度、TNM分期以及淋巴结转移显著相关(P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤部位、分化程度无相关性;Ki-67表达与胃癌的分化程度、浸润深度、TNM分期以及淋巴结转移显著相关(P<0.01),而与其它因素无关.plk1与Ki-67、Raf-1与Ki-67、plk1与Raf-1的表达显著相关(P<0.01).结论 plk1、Raf-1和Ki-67的过表达可能与胃癌的发生发展有关,三者联合检测可为判断胃癌生物学行为乃至预后提供重要的参考指标.
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JNK通路可能介导MPTP诱导的黑质神经元凋亡
目的探讨氧化应激激活的c-jun NHz-terminal kinase(JNK)细胞凋亡通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导帕金森病(PD)小鼠黑质神经元凋亡中的可能作用.方法采用MPTP制备PD小鼠模型,应用生化技术检测黑质区域谷胱甘肽(GSH)浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活力,尼氏体染色和酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色观察黑质神经元的损害情况,原位缺口末端标记(TUNEL)染色和活化型Caspase 3免疫组织化学染色观察黑质神经元的凋亡情况,同时采用蛋白免疫印迹法检测磷酸化JNK及磷酸化c-jun蛋白表达水平.结果MPTP诱导的PD小鼠黑质区域GSH浓度明显降低,SOD活力明显升高,黑质致密带尼氏体阳性神经元和TH阳性神经元显著脱失,磷酸化JNK及磷酸化c-jun蛋白表达水平上升,同时活化型Caspase 3表达阳性细胞增多,黑质神经元TUNEL染色的阳性率增高.结论MPTP可诱导小鼠黑质神经元凋亡,机制与增强氧化应激并激活JNK细胞凋亡通路有关.
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胰岛素对NIH3T3细胞生长和Ras-MAPK信号途径的影响
目的探讨胰岛素激活的Ras-MAPK信号途径对鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞)生长的影响. 方法藉四唑蓝比色法(MTT法)和蛋白免疫印迹试验分别观察胰岛素对NIH3T3细胞生长和胞内丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)活性的影响. 结果胰岛素对NIH3T3细胞的促增殖作用呈时间和浓度依赖性,10 mU/ml胰岛素对NIH3T3细胞的促增殖作用效果佳,对NIH3T3细胞作用的EC50是0.2 mU/ml(48 h);0.14 mU/ml(72 h).MAPK在10 mU/ml胰岛素刺激1 min后即出现酪氨酸磷酸化,10 min达到高峰.胰岛素作用10 min,MAPK酪氨酸磷酸化程度随浓度增高(0.1, 1.0, 10 mU/ml)而递增. 结论胰岛素对NIH3T3细胞促增殖作用与激活Ras-MAPK信号途径相关.
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突触可塑性在慢性痛发病中的作用研究进展
突触是神经元之间的连接部位，是神经元之间传递信息的重要结构，其数量和功效发生改变都可引起突触可塑性的改变［1］，进而增强或减弱神经元之间的信息传递。突触可塑性主要表现形式-长时程增强（long term potentiation ，LTP）和长时程抑制现象已被公认为是学习记忆活动的细胞水平的生物学基础，其中 LTP是突触可塑性的功能指标，也是研究学习与记忆的理想模型［2］。动物体内（包括人在内）突触可塑性的增强或减弱与外周信息的传入、新信息的学习、重要信息的中枢储存相适应。生理条件下，突触可塑性有利于适应自然环境变化；病理条件下，突触可塑性增强了疾病相关因素的致病作用［3］。慢性疼痛就是这种中枢增强效应的典型例子。
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不同蛋白激酶C同工酶亚型对卵巢癌细胞耐药性的影响
目的:检测不同的蛋白激酶(PKC)同工酶亚型在人卵巢癌耐药细胞中的表达和功能,探讨它们与P-糖蛋白(P-gp)介导的多药耐药性之间的关系.方法:采用免疫荧光及免迹印迹方法检测PKCα和PKCβI在人卵巢A2780细胞和A2780/ADM耐药细胞中的表达,免疫印迹法检测P-gp的表达,并用流式细胞仪测定细胞内柔红霉素(DNR)及罗丹明123(Rh123)的荧光强度.结果:在A2780/ADM细胞中,PKC与P-gp的表达较A2780细胞增高,PKCβI表达在两者间无明显改变;在A2780/ADM中DNR及Rh123的荧光强度较A2780中降低.A2780/ADM细胞与抗PKCα抗体共同卵孕育后细胞内DNR含量上升,与十字孢碱(SP)作用后细胞内Rh123泵出减少,积聚量升高.结论:PKCα可能在P-gp介导的人卵巢癌细胞多药耐药中起重要作用.
关键词： 卵巢肿瘤 蛋白激酶类 P糖蛋白类 多药耐药性相关蛋白质 流式细胞术 -
Pim-2基因与造血系统肿瘤
Pim-2原癌基因属于丝氨酸苏氨酸激酶家族,具有抗凋亡以及在生长因子与细胞因子刺激下维持造血细胞生存、调节造血细胞生长及分化的特性.Pim-2过表达可以协同c-myc基因促进鼠及人类淋巴瘤的形成,深入研究Pim-2基因及其抑制剂可望为造血系统恶性肿瘤的治疗开辟新途径.
关键词： 丝氨酸 蛋白激酶类 血液肿瘤 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 -
MAPK信号转导通路在肿瘤化疗耐药中的作用
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路是调节细胞增殖和凋亡的重要通路.近研究发现,MAPK信号转导通路可能参与肿瘤化疗耐药,其作用机制可能是调控耐药相关基因的表达,通过对该通路的干预可以提高肿瘤的化疗敏感性,从而逆转化疗耐药.
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肺癌中P-AKT的表达与血管生成
目的:探讨磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与肺癌血管生成的关系.方法:应用免疫组织化学S-P法检测P-AKT、血管内皮细胞生长因子(VEGF)以及微血管密度(MVD)在46例NSCLC组织中的表达,并分析三者的表达与NSCLC临床病理特征的关系以及三者之间的相关性.结果:NSCLC中P-AKT、VEGF的阳性率分别为43.5%和67.4%,明显高于正常肺组织的0%和22.2%(P＜0.05).P-AKT的表达与肺癌的分化程度、分期、淋巴结转移密切相关(P＜0.05).VEGF的表达与肺癌的分期、淋巴结转移密切相关(P＜0.05).肺癌、正常肺组织中MVD值分别为24.62±6.21和13.26±5.96,两者相比,差异有统计学意义(P＜0.05).MVD值的高低与肺癌的分期、转移、分化程度密切相关(P＜0.05).P-AKT在肺癌中的表达与VEGF和MVD值密切相关(P＜0.05).结论:P-AKT在肺癌组织中的表达显著增高,并与肺癌的分期、转移和分化相关,P-AKT可以通过促进肺癌血管的生成导致肺癌的转移.
关键词： 癌 非小细胞肺 蛋白激酶类 血管内皮细胞生长因子 微血管密度 -
阻断MAPK通路对前列腺癌细胞增殖的影响
目的:研究前列腺癌进展中细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的变化,探讨阻断此通路对前列腺癌细胞增殖的影响.方法:用MTF法检测表皮生长因子(EGF)、PD98059对前列腺癌细胞系LNCaP、PC-3和DU145增殖的影响;用Western blot法检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达和磷酸化ERK1/2水平的差异,以及EGF、PD98059对细胞ERK1/2磷酸化水平的影响.结果:EGF促进LNCaP、PC-3和DU145的增殖,PD98059抑制细胞增殖;Western blot结果显示,3株前列腺癌细胞的总ERK1/2无明显差异.在血清饥饿的状态下,LNCaP细胞无ERK1/2的活化,而PC-3和DU145细胞ERK1/2处于持续活化的状态.PD98059能够阻断EGF对3株前列腺癌细胞ERK1/2的激活.结论:MAPK通路的持续活化在前列腺癌的恶性进展中起重要作用,阻断此通路可以抑制前列腺癌细胞的增殖.
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乙醇对人肝L02细胞糖原和GSK-3β、P-AMPK的影响
目的 研究乙醇对体外培养的人肝L02细胞糖原含量及糖原合成酶激酶(CSK-3β)、磷酸化的AMP激活的蛋白激酶(P-AMPK)的影响.方法 培养L02细胞,按加入的乙醇浓度分为0、50和100 mmol/L三组,培养24 h,用蒽酮-硫酸比色法测定细胞糖原含量,蛋白免疫印记法(Western Blot)检测GSK-3β及P-AMPK的表达水平;并加入AMPK的激动剂(AICAR)或AMPK的阻断剂(Compound C),检测GSK-3β含量的变化.结果 与0mmol/L组比较,50和100mmol/L组糖原含量下降、GSK-3β及P-AMPK表达增强(P均<0.05),50 mmol/L组与100mmol/L组比较,糖原含量及蛋白表达均未见明显统计学差异(P>0.05);AICAR和Compound C对GSK-3β的表达无明显影响(P>0.05).结论 乙醇能减少L02细胞糖原含量,可能与GSK-3β表达增加有关.
关键词： 乙醇 糖原 Ca(2+)钙调蛋白依赖性蛋白激酶 蛋白激酶类 -
大鼠肺缺血再灌注组织microRNA-451与蛋白激酶B表达
目的 探讨大鼠肺缺血再灌注组织中microRNA-451及蛋白激酶B(p-AKT)的表达及二者之间的相关性.方法 将Wistar大鼠随机分为对照组、缺血组、再灌注lh组、再灌注3h组及再灌注6h组,每组10只,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组microRNA-451及p-AKT蛋白的表达.结果 与对照组比较,缺血组、再灌注1h组、再灌注3h组、再灌注6h组microRNA-451的相对表达量呈现先上调后下调趋势,其中再灌注3h组microRNA-451表达量高,差异有显著性(F=17 244.32,P＜0.05).各组p-AKT蛋白相对表达量比较,对照组及再灌注6h组较高,再灌注3h组低,差异有显著性(F=136.02,P＜0.05).结论 大鼠肺缺血再灌注过程中microR-451可能通过调节AKT蛋白通路促进细胞凋亡.
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hUCMSCs并西格列汀对糖尿病大鼠肝脏蛋白激酶B表达影响
目的 探讨静脉注射人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)联合西格列汀治疗对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肝脏组织蛋白激酶B(AKT)表达的影响.方法 将32只大鼠随机分为正常对照组(8只)及糖尿病组(24只),糖尿病组采用高糖高脂饮食及腹腔注射小剂量STZ(30 mg/kg)方法制备糖尿病大鼠模型;成模后的糖尿病大鼠随机分为糖尿病对照组、hUCMSCs组及hUCMSCs联合西格列汀组(联合组),hUCMSCs组分别在成模后第1、5周行大鼠尾静脉注射hUCMSCs治疗;联合组成模后即开始给予大鼠西格列汀10 mg/(kg·d)灌胃治疗10周,第1、5周给予尾静脉注射hUCMSCs治疗;糖尿病对照组不予治疗.造模成功后10周取大鼠肝脏组织,行免疫组化染色,比较各组大鼠肝脏组织AKT表达.结果 联合组及hUCMSCs组肝脏组织AKT表达均明显高于糖尿病对照组,低于正常对照组,差异有显著性(Hc=25.085,q=3.211～9.275,P＜0.05),联合组高于hUCMSCs组(q=5.967,P＜0.05).结论 hUCMSCs治疗能改善因糖尿病引起的肝脏组织AKT表达降低,hUCMSCs与西格列汀联合能加强这种作用.
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蛋白激酶及蛋白磷酸酯酶活性改变对阿尔茨海默病样神经原纤维变性的影响
目的 了解蛋白激酶与蛋白磷酸酯酶活性改变对阿尔茨海默病(AD)样神经原纤维变性的影响.方法 选择SD大鼠24只,随机分为实验组和对照组,各12只.实验组采用脑立体定位注射技术,向海马区注射20 mmol/L缓激肽(BK)和4.2 mmol/L环孢菌素A(CSA)各0.2 mL,对照组注射人工脑脊液0.4 mL,电跳台法测试大鼠学习与记忆状况;免疫印迹法检测Tau蛋白质磷酸化状况.结果 实验组鼠出现错误次数多于对照组(t=3.362,P＜0.01),受电击时间长于对照组(t=4.537,P＜0.01).实验组海马区12E8显色强于对照组,Tau-1显色弱于对照组.结论 BK和CSA可诱发Tau蛋白多个位点出现AD样异常磷酸化,导致动物学习记忆障碍.
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从痰论治椎动脉型颈椎病的PI3K/Akt/mTOR信号调控机制研究进展
近年来随着人们生活及工作方式的改变,椎动脉型颈椎病(cervical spondylosis of vertebral artery type,CSA)的发病率呈逐年增高趋势,且有明显年轻化趋势,严重影响着人们的身心健康.中医药防治CSA的疗效确切,但往往缺乏客观的分子生物学依据解释其作用机理.磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路在血管的生成及细胞的生长代谢过程中发挥着关键作用,参与调控多种代谢疾病的病理形成过程.近年来PI3K/Akt/mTOR信号通路在CSA的发生发展中的作用日益受到重视.本文就从痰论治CSA的辨治机理和现代研究、PI3K/Akt/mTOR信号通路及其在CSA发病机制中的作用、从痰论治CSA对PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响3个方面,对从痰论治CSA的PI3K/Akt/mTOR信号调控机制的研究进展进行了综述.
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酪蛋白激酶-2相互作用蛋白1基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路参与绝经后骨质疏松症发生发展过程中细胞自噬的机制
自噬及自噬相关蛋白在骨代谢平衡中具有十分重要的作用,是当前骨质疏松研究的重要方向.磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路是细胞自噬的经典信号通路,不仅对成骨细胞和破骨细胞的功能有间接调节作用,而且直接参与了成骨细胞矿化和破骨细胞褶皱缘形成.酪蛋白激酶-2相互作用蛋白(casein kinase 2 interacting protein,CKIP)1可通过增强Smad泛素化调节因子的泛素连接酶活性抑制成骨,是重要的骨形成负调节因子,也可抑制PI3 K/Akt/mTOR信号通路.但目前对CKIP-1与PI3 K/Akt/mTOR信号通路参与细胞自噬的研究较少,且大多集中在肿瘤方面.对于CKIP-1基于PI3 K/Akt/mTOR信号通路参与绝经后骨质疏松症发生发展过程中细胞自噬的机制,目前仍存在很多值得研究的问题.
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血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1在梗阻性肾病肾间质中的表达和血竭素高氯酸盐对其的干预作用
目的 探讨在单侧输尿管梗阻(UUO)性肾病肾间质中血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(serum and glucocorticoid induced kinase 1,SGK1)的表达及血竭素高氯酸盐(Dracohodin Perchlorate,DP)对其的干预作用.方法 用单侧输尿管梗阻的方法致大鼠肾间质纤维化,60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量和高剂量DP治疗组,分别在造模第3、7、14天后处死各组大鼠,采集静脉血检测肾功能(BUN、SCr)变化,肾组织标本用碘酸-席夫(PAS)染色确证发生纤维化病变,免疫组化技术检测肾组织SGK1蛋白的表达及DP干预后的变化.结果 与假手术组比较,模型组大鼠第7、14天血清BUN、SCr水平显著升高(P＜0.05),肾间质纤维化形成;与模型组比较,仅有DP高剂量治疗组大鼠血清肾功能指标好转(P＜0.05),肾间质纤维化好转.模型组大鼠肾间质SGK1蛋白的表达明显高于假手术组(P＜0.05),且随着梗阻时间延长其表达呈增强趋势;仅DP高剂量治疗组大鼠的肾间质SGK1蛋白显著低于模型组(P＜0.05).结论 在梗阻性肾病肾间质纤维化进程中,SGK1蛋白表达明显上调,而DP对SGK1蛋白的表达有显著的抑制作用,可能对肾间质纤维化病变起到一定延缓作用.
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不同强度的游泳训练对脑缺血再灌注大鼠蛋白激酶A表达的影响
目的 探讨强化游泳训练对脑缺血再灌注大鼠神经功能及蛋白激酶A(PKA)表达的影响.方法 采用线栓法建立左侧大脑中动脉阻塞(MCAO)2 h再灌注动物模型.120只造模成功的雄性SD大鼠按随机数字表法分为训练1组、训练2组、训练3组和MCAO对照组,每组30只.训练1组大鼠每日游泳5 min,训练2组大鼠每日游泳10 min,训练3组大鼠每日游泳20 min;MCAO对照组大鼠不给予任何训练.另选30只大鼠为假手术组,不阻塞大脑中动脉血流,不给予任何训练.以上5组大鼠又分别随机分为术后3、7和14 d三个时间点亚组,每个时间点10只大鼠.分别于术后3、7和14d三个时间点,采用Menzies神经行为评分和前肢放置试验评价各亚组大鼠神经功能缺损情况,采用免疫组织化学方法测定各亚组大鼠脑缺血再灌注后脑内PKA阳性细胞的表达率,采用RT-PCR的方法测定各亚组大鼠脑缺血侧大脑皮质PKA的mRNA表达量,并进行统计学分析比较.结果 假手术组神经功能正常.MCAO对照组各时间点的神经功能评分与假手术组同时间点比较,组间差异均有统计学意义(P＜0.05);各训练组分别在训练3、7和14 d后的神经功能改善情况优于同时间点MCAO对照组;训练3组训练14 d后受损神经功能改善明显(P＜0.05),其训练3、7和14 d后的Menzies评分分别为(1.40±0.55)、(1.00±0.71)和(0.80±0.45)分,前肢放置试验评分分别为(5.20±0.84)、(3.80±1.30)和(2.40±1.14)分.训练1、2和3组各时间点的PKA阳性细胞表达率及其mRNA表达量高于同时间点MCAO对照组;且训练3组训练14d后的PKA阳性细胞表达率及其mRNA表达量增加较其它各训练组更为明显(P＜0.05),其训练3、7和14 d后的PKA阳性细胞表达率分别为(32.84±1.66)％、(35.05±1.33)％和(45.92 ±2.03)％,PKA mRNA表达量分别为(32.18±0.86)％、(37.44±1.27)％和(42.77±0.81)％.结论 强化游泳训练可以增加脑缺血再灌注大鼠PKA阳性细胞表达率及其mRNA表达量,改善受损神经功能,促进感觉和运动功能恢复.
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MAPK在前列腺上皮内瘤中的表达及其意义
目的:通过研究有丝分裂活化蛋白激酶(MAPK)在前列腺上皮内瘤(PIN)组织中的表达,探讨MAPK在前列腺肿瘤形成过程中的作用.方法:采用免疫组织化学(IHC)方法对12例PIN标本和16例前列腺增生(BPH)标本进行染色检查.结果:12例PIN标本均表现了不同程度的肿瘤细胞染色,其中6例标本肿瘤细胞的细胞质有较强染色.与对照组相比较,PIN中MAPK染色指数增加了1.48倍(P＜0.05).结论:PIN组织中MAPK的活性高于BPH.PIN中MAPK的过度激活可能是促进肿瘤形成的主要信号传递通路.
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Akt/蛋白激酶B信号传导通路在慢性移植肾肾病早期病变中的作用
目的 探讨Akt/蛋白激酶B(PKB)信号通路在慢性移植肾肾病(CAN)早期病变中的作用. 方法 建立Fisher(F344)大鼠到Lewis(LEW)大鼠的左肾移植CAN模型,术后4、8、12及16周时测定24 h尿蛋白定量及血肌酐水平,并进行移植肾组织学观察,免疫组化法检测移植肾组织中磷酸化Akt(p-Akt)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达,逆转录聚合酶链反应检测肾组织中p-AktmRNA的表达水平.以单纯切除一侧肾脏的LEW大鼠和F344大鼠为对照. 结果 移植组术后各检测时间点的24 h尿蛋白定量及血肌酐水平呈上升趋势(P＜0.05),其组织学改变的Banff评分也呈上升趋势(P＜0.05).移植组各时间点的p-Akt及p-Akt mRNA表达水平均显著高于LEW对照组和F344对照组,且随时间的延长逐步增高(P＜0.05);移植组MMP-9表达水平在术后4、8周显著高于LEW对照组和F344对照组(P＜0.05),术后16周显著低于LEW对照组和F344对照组(P＜0.05). 结论 在CAN早期的肾组织中,p-Akt及MMP的表达上调,其表达水平与肾组织的病理改变程度呈正相关,它们可能在CAN早期的发生进展中发挥重要作用.
