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间变性大细胞淋巴瘤激酶蛋白在神经母细胞瘤中的表达及临床意义
目的 间变性大细胞淋巴瘤激酶蛋白(ALK)基因异常与神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)发病机制有关.本研究探讨ALK蛋白在神经母细胞瘤中的表达及其与临床特点和生存预后的关系.方法 收集2001年5月至2011年10月中山大学肿瘤防治中心初治的、经病理证实的神经母细胞瘤患儿的临床资料和蜡块组织标本,采用免疫组化方法检测组织中ALK蛋白表达情况,并分析其对神经母细胞瘤临床特点、生存预后的影响.结果 76例NB患儿纳入研究,中位年龄4岁(0.1～18岁),男52例,中位随访时间20.1个月.ALK蛋白在神经母细胞瘤中的阳性表达率为36.8％(28/76),其中高表达率26.3％(20/76),ALK蛋白高表达与低表达患儿的5年总生存(OS)分别为(28.3±14.9)％和(51.2±11.0)％,P=0.397.ALK的表达与年龄有关,年龄＞1.5岁的患儿中ALK蛋白高表达率为32.7％,而年龄≤1.5岁患儿仅为6.7％,P=0.043.Ⅲ期NB患儿中ALK的高表达与低表达的3年OS分别为0和(79.5±13.1)％,P=0.023;ALK蛋白表达与Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ期患儿的生存无相关性.结论 ALK蛋白在中国NB患儿中有较高表达率,尤其年龄＞1.5岁的患儿.ALK高表达是Ⅲ期NB患儿的预后不良因素.ALK蛋白与ALK基因之间的关系以及在神经母细胞瘤中的发病机制需进一步研究.
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细胞外信号调控激酶在尿道下裂发病机制中的作用
目的 研究细胞外信号调控激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK) 1/2在正常和尿道下裂患儿包皮组织中的表达,探讨其在尿道下裂发病机制中可能发挥的作用.方法 收集拟行尿道下裂尿道修复术患儿术中切除的包皮组织(30例)和门诊包皮环切术中切除的儿童包皮(30例),采用免疫组织化学和实时定量聚合酶链反应(qPCR)方法检测两组包皮组织中ERK1和ERK2mRNA和蛋白质的表达变化.结果 尿道下裂患儿包皮组织中ERK2 mRNA表达较正常水平有显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).总ERK1/2和磷酸化ERK1/2蛋白主要表达于包皮皮下间充质细胞层,其中磷酸化ERK1/2蛋白在尿道下裂患儿包皮组织的表达较正常对照有明显增强趋势.结论 ERK1/2的表达异常与尿道下裂发生相关,其介导的空间调控异常可能是导致尿道下裂发生的重要机制之一.
关键词： 尿道下裂 细胞外信号调节MAP激酶类 蛋白激酶类 -
降钙素基因相关肽对尾加压素Ⅱ诱导的血管平滑肌增殖的影响
目的: 观察降钙素基因相关肽(CGRP)对尾加压素Ⅱ(UrotensionⅡ, UⅡ)刺激的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及机制.方法: 贴块法培养大鼠胸主动脉VSMC;3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入测定VSMC DNA合成;γ-32P-ATP标记的同位素法测定丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性.结果: UⅡ(10-8 mol/L)显著促进VSMC3H-TdR掺入和激活MAPK.与对照组比较,分别增加48%和226%(P<0.01).CGRP有效抑制UⅡ诱导的VSMC 3 H-TdR掺入和MAPK激活.与UⅡ组比较10-9、10-8、10-7 mol/L CGRP分别使VSMC3H-TdR掺入降低18%、25%和31%(P<0.01),使MAPK活性分别降低26%、50%和64%(P<0.01).结论: CGRP抑制UⅡ诱导的VSMC增殖,其机制可能与CGRP拮抗UⅡ刺激的MAPK活性有关.
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MAPK信号转导通路与肿瘤细胞分化
丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路是近年来细胞信号转导方面活跃的研究领域.该通路具有调控肿瘤细胞分化的功能,已确定出4条MAPK信号转导通路,其中ERK(P42/P44MAPK),SAPK/JNK,p38MAPK三条通路与肿瘤细胞分化关系密切.
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毒蕈硷乙酰胆碱受体表达和功能的调节及其介导新的信号途径
毒蕈硷乙酰胆碱受体(mAChR)通过与G蛋白偶联介导信号转导过程.许多因素参与调节mAChR基因表达和亚细胞定位,包括发育调节因子、细胞因子等.脱敏和增敏是调节mAChR表达和功能的主要方式.参与mAChR脱敏过程的蛋白激酶包括:第二信使激酶、蛋白激酶A(PKA)和C(PKC)、G蛋白偶联受体激酶(GRKs)和有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)等.mAChR除了通过介导经典的信号转导途径,还可以通过活化PTX非敏感型G蛋白介导G蛋白活化的内在调整K通道(GIRKs)的抑制.
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小鼠GSK-3β慢病毒表达载体的构建及其在骨髓树突状细胞DC2．4中的表达
目的构建pLVX‐IRES‐TDtomat‐GSK‐3β慢病毒表达载体，感染小鼠骨髓DC2．4细胞，建立过表达GSK‐3β的小鼠DC2．4细胞系。方法利用RT‐PCR方法扩增小鼠GSK‐3β基因的编码区，并将其重组于表达载体pLVX‐IRES‐TDtomat中，经酶切、测序鉴定后包装成慢病毒，感染小鼠DC2．4细胞。实验分3组，分别为DC2．4细胞对照组，空病毒感染组，GSK‐3β慢病毒感染组，用实时荧光定量PCR方法和Western Blotting方法检测各组GSK‐3β的表达水平。结果经酶切和测序鉴定结果证实pLVX‐IRES‐ TDtomat‐GSK‐3β构建成功，并在包装细胞中高水平表达，慢病毒滴度高达1．26×108 TU／mL。GSK‐3β慢病毒感染组的GSK‐3β在mRNA表达水平和蛋白表达水平上均高于DC2．4细胞对照组及空病毒感染组。结论成功构建了表达GSK3β基因的重组慢病毒载体，并可在DC2．4细胞中稳定表达，为后续DC2．4的免疫功能研究奠定了基础。
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黄芪甲苷对肺纤维化大鼠的治疗作用及对肺组织中血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1表达的影响
【目的】研究黄芪甲苷对肺纤维化（PF ）大鼠的治疗作用及对肺组织中血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1（SGK1）表达的影响。【方法】36只SD大鼠，随机分为对照组、模型组和黄芪甲苷干预组。模型组和干预组气管内注射博来霉素（BLM ，5 mg／kg）诱导PF ，对照组在相同条件下给予生理盐水。干预组大鼠d2开始每天经胃管灌服0．1 g／L黄芪甲苷2 m L ，其余两组相同条件下给予生理盐水。治疗的d7和d28处死动物取出肺组织，进行病理学观察；用免疫组化和RT‐PCR检测各组鼠肺组织SGK1蛋白及mRNA表达的水平。【结果】病理学观察显示：与模型组比较，干预组肺泡炎和纤维化程度均减轻，SGK1蛋白及mRNA表达显著降低；与对照组比较，干预组存在一定程度肺泡炎和纤维化，SGK1蛋白及mRNA表达明显高于对照组。【结论】黄芪甲苷可能通过抑制SGK1的过度表达，对实验性大鼠PF具有良好的治疗作用。
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ERK1/2和P38在7-二氟甲氧基金雀异黄素抗H2O2损伤PC12细胞中的作用
[目的]探讨7-二氟甲氧基金雀异黄素(FMGEN)对神经细胞氧化应激损伤的保护作用机制.[方法]以H2O2损伤PC12细胞为神经细胞氧化应激模型,多功能生化分析仪测定培养液上清中的乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western-Blot测定磷酸化ERK1/2蛋白和磷酸化p38蛋白的表达水平.[结果]H2O2孵育的PC12细胞培养液中LDH量明显增高,FMGEN呈浓度依赖性的降低H2O2诱导PC12细胞LDH的释放;FMGEN处理细胞后均可使ERKl/2蛋白的磷酸化水平升高,ERK1/2特异性抑制剂U0126可显著阻断FMGEN对H2O2损伤PC12细胞的拮抗作用;FMGEN抑制H2O2激活PC12细胞P38,P38特异性抑制剂SB203580可显著减轻H2O2对PC12细胞的损伤作用.[结论]FMGEN对PC12细胞氧化应激损伤的拮抗作用可能与其激活ERK1/2和抑制P38的活性有关.
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葛根素对大鼠颈动脉球囊损伤术后MMP-2、Collagen 1和ERK的影响
[目的]观察葛根素对大鼠颈动脉球囊损伤术后血管再狭窄形成过程中基质金属蛋白-2(MMP-2)、1型胶原(Collagen 1)及细胞外信号调节激酶(ERK)表达的影响.[方法]采用球囊扩张方法,建立大鼠颈总动脉损伤模型.20只Wistar大鼠随机分为单纯球囊扩张组(对照组)和球囊扩张+葛根素治疗组(治疗组).球囊损伤术后,高脂饲料喂养4周后观察血管形态学变化,免疫组织化学法检测MMP-2和Collagen 1水平,Western blot方法检测ERK磷酸化水平.[结果]治疗组较对照组管腔面积明显增大,新生内膜面积明显减少(P<0.05);MMP-2和Collagen 1表达降低,ERK磷酸化水平降低(P<0.01).[结论]葛根素能抑制大鼠球囊损伤部位再狭窄,该作用可能与葛根素能降低MMP-2和Collagen 1的表达及ERK磷酸化水平有关.
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mTOR和p70S6K在主动脉夹层中的表达及意义
[目的]探讨雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和p70核糖体S6蛋白激酶(p70S6K)在主动脉夹层中的表达及意义.[方法]取因A型急性主动脉夹层手术治疗的主动脉夹层标本(距夹层撕裂边缘1 cm) 15例(观察组),取自同期瓣膜性心脏病主动脉瓣置换术患者的升主动脉壁标本10例(对照组).采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测mTOR及p70S6K基因的mRNA表达变化,采用Western Blot检测mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)、p70S6K、磷酸化p70S6K(p-p70S6K)蛋白的表达变化.[结果]与正常对照组比较,观察组mTOR与p70S6K的mRNA的相对表达量均显著下降(p＜0.01);mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达均显著降低(P＜0.05).[结论]mTOR/p70S6K信号通路可能参与调控主动脉夹层的发生发展.
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mTOR及其抑制剂的研究进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,在细胞生长、增殖、分化、周期调控等多个方面起“中心调节”作用.mTOR的过度激活,与许多肿瘤的发生发展密切相关.以mTOR为靶点的靶向治疗已成为肿瘤治疗的一个新方向.目前,多种mTOR抑制剂已经应用于临床,并取得良好的效果.本文就近年来有关mTOR通路及其抑制剂的研究进展作一综述.
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丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号传导通路与膀胱肿瘤
肿瘤细胞的一个典型特征是增殖增强,其主要原因是由于细胞内信号传导通路活性增强所引起,而MAPK信号传导通路尤其重要.MAPK通路与从尿路上皮衍生而来的膀胱移行细胞癌(BTCC)的增殖作用直接有关.本文就MAPK信号通路对膀胱癌的发病原因、机理以及治疗等方面的作用的研究情况作一综述.
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Rho／Rho激酶信号通路及其在腹膜纤维化中的作用
腹膜透析是终末期肾脏病患者肾替代治疗方法之一，其利用腹膜作为半透膜通过弥散和超滤而发挥透析作用。然而，长期腹膜透析患者因反复腹膜感染及腹透液的生理不相容性等诸多因素终导致腹膜纤维化的发生。 Rho／Rho激酶信号通路是机体各组织中普遍存在的一条信号转导通路。它能被多种炎症介质和细胞因子受体后耦联机制的活化而激活，通过激酶级联反应直接调节细胞内微丝骨架的聚合状态，参与细胞的多种生物学行为。近年研究发现，Rho／Rho激酶信号通路参与多种器官及组织纤维化的发生过程。本文对该通路的组成、活化、调节等生物学特征及其在器官纤维化疾病中的作用特别是在腹透相关性腹膜纤维化中的作用作一综述。
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血管内皮细胞中NF-κB和p38MAPK的激活
高糖在血管内皮细胞中引起氧化应激将激活细胞内一系列应激激活的信号通路,包括NF-κB、p38MAPK等,主要结果是以不同基因表达产物引起内皮细胞功能紊乱,在糖尿病慢性血管并发症的病因学中起重要作用.近年来有许多研究报道了NF-κB和p38MAPK信息通路在高糖引起的内皮细胞凋亡中的作用,为防治糖尿病血管并发症提出了新的靶向治疗策略.
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P38MAPK信号通路与肾脏纤维化
有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)是所有真核生物细胞将信号从感受器传递到细胞的主要信号转导通路.P38MAPK属于MAPK的一个亚族,是广泛存在于细胞浆内的含有丝氨酸/苏氨酸残基的蛋白质激酶.通过许多不同的刺激(分裂素、分化因子、应激信号)而激活磷酸化而改变基因的表达水平,参与多种胞内信息传递过程,调节许多病变过程的重要基因表达,参与细胞外基质的合成,介导细胞生长、发育、增殖、分化、老化及死亡全过程.近年研究发现,P38MAPK在肾脏纤维化过程中起一定作用.
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整合素连接激酶与肾脏疾病
整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,可以同整合素b1、b3亚基胞浆域结合,参与多种信号传导通路,包括整合素、生长因子及Wnt信号传导通路,在调节细胞粘附、凋亡、铺展、迁移、生长、细胞周期、基质积聚、肿瘤形成等过程中起重要作用,与肾脏疾病的发生过程相关.
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有丝分裂原蛋白激酶与糖尿病肾病
糖尿病时,多种因素激活肾脏细胞内有丝分裂原蛋白激酶(MAPK)信号通路.MAPK激活后通过调节下游转录因子活性,控制基因表达,终引起肾小球肥大和细胞外基质(ECM)积聚,导致糖尿病肾病(DN)的发生.
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MAPK信号转导途径在糖尿病肾病发病中的作用
糖尿病状态下多种因素的作用激活MAPKs4,促进肾脏细胞肥大,ECM积聚,导致肾小球硬化和肾小管间质纤维化.应用MAPKs阻断剂可对抗上述作用,为临床治疗糖尿病肾病提供一条新的思路.
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miR-362-3p的表达及其靶基因与胆囊癌恶性特征的关系
目的:探讨miR-362-3p在胆囊癌中的表达及功能.方法:用qRT-PCR检测手术切除的44例胆囊癌患者手术标本中miR-362-3P的表达,并分析其表达与胆囊癌临床病理特征及预后的关系.miR-363-3p模拟物转染胆囊癌细胞后,分别用MTT法、细胞划痕试验及Transwell侵袭试验观察细胞增殖、迁移及侵袭的改变.通过生物信息学方法及双荧光素酶报告基因试验分析miR-362-3p的靶基因,并采用补救试验验证.结果:miR-362-3p在胆囊癌组织的表达明显低于相应癌旁组织(P＜0.05).miR-362-3p的低表达与肿瘤TNM分期、淋巴结转移及远处转移明显有关(均P＜0.05).低表达miR-362-3p患者总体生存率较高表达miR-362-3p患者明显降低(P＜0.05).转染miR-362-3p模拟物后,胆囊癌细胞的增殖,迁移及侵袭能力明显减弱(均P＜0.05).Nemo样激酶(NLK)被确定为miR-362-3p的潜在靶基因,转染 NLK过表达载体后,miR-362-3p模拟物对胆囊癌细胞的上述作用被明显逆转(均P＜0.05 ).结论:miR-362-3p在胆囊癌中表达下调,下调的miR-362-3p减少了对靶基因NLK的抑制,从而促进了胆囊癌细胞的增殖、迁移和侵袭.
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基质硬度对PKN3表达及肝细胞癌侵袭转移的影响
目的:探讨蛋白激酶C相关激酶N3(PKN3)表达与肝细胞癌(HCC)细胞侵袭转移的关系及机制.方法:检测72例出血坏死表型HCC (HN-HCC)与32例无出血坏死表型HCC(NHN-HCC)组织标本中胶原纤维含量与PKN3的表达;将肝癌HCCLM3细胞在不同硬度的聚丙烯酰胺水凝胶培养后,检测HCCLM3细胞的运动侵袭能力、PKN3基因与蛋白的表达,以及RhoC活性.通过PKN3干扰以及PKN3干扰同时加RhoC过表达,观察HCCLM3细胞运动侵袭能力以及FAK、ROCK2、E-cadherin、Fibronectin蛋白表达的变化.结果:与NHN-HCC组织比较,HN-HCC组织胶原纤维含量与PKN3蛋白表达明显增加(均P＜0.05);与软基质中培养的HCCLM3细胞比较,在硬基质中培养的HCCLM3细胞PKN3的基因与蛋白表达明显增加、侵袭运动能力明显增强、RhoC活性明显升高(均P＜0.05),后者活性随PKN3表达的抑制而抑制.与对照组细胞比较,干扰PKN3表达后,HCCLM3细胞运动侵袭能力明显降低,FAK、ROCK2、Fibronectin蛋白表达明显下调,E-cadherin蛋白表达明显下调(均P＜0.05),而PKN3干扰同时增加RhoC表达,HCCLM3细胞以上变化不明显(均P＞0.05).结论:基质硬度增加能上调PKN3-ROCK2信号通路活性,从丽促进HCC侵袭转移,该机制可能是HN-HCC侵袭转移能力较高的重要原因.
