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大黄素激活AMPK/SREBP-1通路减少脂肪酸诱导的HepG2细胞脂肪变性
目的 研究大黄素对游离脂肪酸(FFAs)诱导的人源肝癌细胞HepG2细胞脂质蓄积的脂质调节和氧化应激作用及其可能的相关机制.方法 以噻唑蓝(MTT)法测定大黄素对HepG2细胞存活率的影响;采用1 mmol/L FFAs(油酸∶棕榈酸=2∶1)诱导HepG2细胞脂肪变性,将HepG2细胞分为5组:正常对照组、模型组、大黄素低剂量组、大黄素中剂量组、大黄素高剂量组.采用油红O染色及甘油三酯含量测定评价大黄素对肝细胞脂肪变性程度的影响.流式细胞术检测各组细胞脂质蓄积引起的活性氧(ROS)的变化;Western blot检测各组细胞单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK (p-AMPK)、固醇调节元件蛋白1(SREBP-1)的表达变化.结果 1 mmol/L FFAs处理后的HepG2细胞24h后出现大量脂滴,TG含量明显增加(P＜0.05).与模型组相比,大黄素组的脂滴减少,甘油三酯蓄积下降(P＜0.05),并呈剂量依赖性;还可以降低脂肪酸氧化后的ROS水平(P＜0.01).另外,大黄素处理后增加AMPK与p-AMPK的表达水平(P＜0.01),下调SREBP-1的表达水平(P＜0.01).结论 大黄素可抑制FFAs诱导的HepG2细胞脂肪蓄积,减轻氧化应激损伤,其作用可能与激活AMPK/SREBP-1通路有关.
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抑制 PKD2介导8-硝基白杨素诱导 U937细胞凋亡
目的：研究8-硝基白杨素（ NOC）诱导单核细胞白血病U937细胞凋亡作用是否涉及调控蛋白激酶D2（ PKD2）活性。方法体外培养U937细胞系细胞。碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡率。 DNA琼脂糖凝胶电泳检定细胞DNA梯形条带图谱。 Western blot分析PDK2磷酸化蛋白表达。结果 NOC（2.5、5.0、10.0μmol/L）增高U937细胞凋亡率，呈浓度依赖性（ P ＜0.05）。 NOC（5.0和10.0μmol/L）处理24 h，U937细胞呈现典型DNA梯形条带图谱。同时，NOC有效下调磷酸化PDK2蛋白表达；并与PKD2特异性抑制剂G?6976协同增高U937细胞凋亡率。结论 NOC诱导U937细胞凋亡作用与其抑制PKD2激酶活性相关。
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脑缺血再灌注损伤中FKBP51对JNK通路的影响
目的 探讨脑缺血再灌注损伤中FK506结合蛋白51(FKBP51)对c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响.方法 采用四血管阻塞制作大鼠全脑缺血模型.将体质量220 ～ 250 g健康雄性清洁级SD大鼠按随机数字表法进行分组:假手术组、缺血再灌注组、FKBP51反义寡核苷酸组、FKBP51错义寡核苷酸组、溶剂对照组.假手术组仅电凝双侧椎动脉,不夹闭双侧颈总动脉;缺血再灌注组电凝双侧椎动脉,夹闭双侧颈总动脉;FKBP51反义寡核苷酸组在电凝双侧椎动脉时侧脑室注射反义寡核苷酸进行干预,连续注射3d,第4天夹闭双侧颈总动脉;FKBP51错义寡核苷酸组和溶剂对照组侧脑室分别注射等体积错义寡核苷酸和TE buffer.除假手术组外,其余各组均缺血15 min后复灌不同时间点,然后分别断头取海马用于免疫印迹和免疫沉淀,检测各组中FKBP51蛋白表达;检测FKBP51反义寡核苷酸对FKBP51蛋白表达和JNK、c-Jun磷酸化的影响.结果 (1)FKBP51反义寡核苷酸组的FKBP51蛋白表达量明显减少,与假手术组差异有统计学意义(P＜0.05).(2)各组之间JNK总蛋白的表达差异均无统计学意义(P＞0.05).假手术组p-JNK的表达量明显少于其他组,差异有统计学意义(P＜0.05);缺血再灌注3h组、溶剂对照组、FKBP51错义寡核苷酸组p-JNK的表达较高,三组之间的差异无统计学意义(P＞0.05);与FKBP51错义寡核苷酸组比较,FKBP51反义寡核苷酸组p-JNK的表达量较少,差异具有统计学意义(P＜0.05).(3)各组之间c-Jun总蛋白的表达差异均无统计学意义(P＞0.05).假手术组p-c-Jun的表达量明显少于其他各组,差异有统计学意义(P＜0.05);缺血再灌注6h组、溶剂对照组、FKBP51错义寡核苷酸组p-c-Jun的表达量较高,三组之间的差异无统计学意义(P＞0.05);与FKBP51错义寡核苷酸组比较,FKBP51反义寡核苷酸组p-c-Jun的表达量较少,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 在脑缺血再灌注损伤中,FKBP51可以促进JNK信号通路的激活.
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创伤性脑损伤后大鼠脑神经元凋亡和脑死亡相关蛋白激酶的表达变化
目的 探讨大鼠创伤性脑损伤后死亡相关蛋白激酶(DAPK)的表达变化,寻找药物治疗的时间窗.方法 选择自由落体法建立脑损伤模型,60只Wister大鼠随机分为正常对照组、假手术组和损伤组,损伤组于损伤后分别于2、8、24、48和72 h取脑组织.HE染色观察组织病理变化;RT-PCR法检测DAPK mRNA的表达;TUNEL法检测神经细胞凋亡.结果 脑损伤8 h后DAPK mRNA的表达开始增高并出现明显的神经元凋亡;伤后24 h DAPK的表达神经元凋亡二者都达到高峰,随后二者逐渐降低.结论 创伤性脑损伤诱导DAPK表达和神经元凋亡,二者在伤后24 h达到高峰.药物治疗时问窗为伤后24 h.
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表达人JNK基因重组腺病毒的构建和鉴定
目的 制备表达人c-jun氨基末端激酶(JNK)复制缺陷型重组腺病毒.方法 将重组穿梭载体pAdTrack-CMV-WT-JNK线性化后,与pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5138,进行同源重组得到重组腺病毒载体.将重组腺病毒载体转染入包装细胞HEK293内制备复制缺陷型重组腺病毒,并经PCR及DNA测序鉴定.结果 JNK重组腺病毒载体能有效转染HEK293细胞并在细胞内成功包装,5 d后可以观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,搜集的病毒经过PCR扩增得到特定JNK基因片段并测序鉴定.动物实验证实构建的Ad-WT-JNK能有效在肝组织表达.结论 该研究成功构建了JNK重组腺病毒载体及相应重组腺病毒颗粒,为进一步研究JNK的作用及应用JNK进行相关疾病的基因治疗奠定了基础.
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PI-3K/Akt信号通路在大鼠心脏缺血-再灌注损伤中的作用
目的 探讨PI-3K/Akt信号通路在大鼠心脏缺血-再灌注损伤中的作用.方法 选取雌性Wistar大鼠建立大鼠心脏缺血/再灌注损伤(I/R)模型,分为正常对照组,I/R组和I/R+LY294002组.I/R+LY294002组大鼠再灌注前腹腔注射LY294002 6 mg/kg.检测各组Akt的表达、大鼠心肌梗死面积、心功能和心肌细胞凋亡的变化.结果 在大鼠心脏I/R中PI-3K/Akt信号通路被激活,应用LY2+94002后Akt表达减少,心肌梗死面积增加(30.47%±5.88% vs 45.97%±4.22%,P＜0.05),心肌细胞凋亡增加(20%±4.1% vs 35%±5.3%,P＜0.05),心功能恶化.结论 在大鼠心脏I/R过程中,PI-3K/Akt信号通路被激活并发挥心脏保护作用.
关键词： 心肌再灌注损伤 1-磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白激酶类 信号传导 -
TSC/Rheb/mTOR信号通路与肿瘤的研究进展
细胞可通过各种通路所形成的复杂网络系统来传递各种增殖和凋亡信号.PI3K/Akt/mTOR信号通路在正常细胞和肿瘤细胞中调节细胞生长、增殖、运动、存活、凋亡,与肿瘤的血管生成和侵袭转移密切相关[1].肿瘤抑制因子TSC位于mTOR上游,是调节mTOR的关键因子,TSC的结构和功能对于了解mTOR的功能和调节至关重要.
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磷脂酰肌醇-3激酶、蛋白激酶B及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶在慢性阻塞性肺疾病患者中的表达
目的 观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB)与γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的表达,研究PI3K、PKB通路和γ-GCS的关系.方法 将手术切除的肺癌患者肺组织标本(16例)分为COPD组和对照组,每组8例,检测肺组织中γ-GCS活性,原位杂交检测肺组织中γ-GCS mRNA的表达,免疫组化分析肺组织中PI3K、PKB与γ-GCS的蛋白水平.结果 COPD组中γ-GCS活性明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).原位杂交显示COPD组支气管、肺泡上皮细胞与小动脉平滑肌细胞γ-GCS mRNA广泛表达,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).PI3K、PKB与γ-GCS免疫组化在COPD组可见肺泡、支气管壁细胞及小血管平滑肌细胞胞浆中皆有蛋白阳性信号表达,图像定量分析显示COPD组PI3K、PKB与γ-GCS蛋白表达显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).直线相关分析得出PI3K、p-PKB蛋白表达与γ-GCS活性、mRNA及蛋白表达呈正相关.结论 COPD患者肺组织γ-GCS蛋白和mRNA表达增高,PI3K、p-PKB蛋白也有相应高表达,提示PI3K、PKB和γ-GCS可能在COPD的发病机制中发挥作用,且可能参与了γ-GCS的信号传导通路.
关键词： 阻塞性肺疾病 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 蛋白激酶类 信号转导 -
SGK1在糖尿病小鼠肾脏皮质中时间差异性表达及意义
目的:研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(serum and glucocorticoid-inducible kinase 1,SGK1)在糖尿病(DM)小鼠肾脏皮质中时间上差异性表达及意义.方法:采用链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射诱导小鼠糖尿病模型.将2月龄C57BL/6小鼠随机分成10组:第1、2、3、4、6、8、12周糖尿病小鼠组(DM1、DM2、DM3、DM4、DM6、DM8、DM12)和相应的第1、4、8周正常对照组(N1、N4、N8).分别在DM模型制作成功后第1、2、3、4、6、8、12周末收集小鼠24 h尿量,检测24 h尿蛋白量;观察肾脏病理改变;半定量RT-PCR检测小鼠肾脏皮质SGK1及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达,Western blotting检测N4、DM4、DM8组皮质SGK1、CTGF蛋白的表达.结果:随着糖尿病病程的进展,DM组小鼠肾小球体积逐渐增大、系膜区逐渐增宽;DM组小鼠24h尿蛋白从第2周起开始逐渐增多,肾脏皮质SGK1 mRNA表达从第2周开始明显上调,在第4周达到峰值.CTGF随着糖尿病病程的进展表达逐渐递增.结论:SGK1在糖尿病早期肾脏表达峰值的出现及CTGF持续递增的表达,提示SGK1在糖尿病肾病肾脏纤维化的发生发展过程中起重要作用.
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蚯蚓蛋白激酶对体内纤溶活性的增强作用研究
目的:探讨蚯蚓蛋白激酶制剂( LK)的纤溶增强作用.方法:采用静脉给药方法,观察LK对SD大鼠纤溶激活因子t-PA及其抑制物PAI-1的急性作用.结果:给药后,PAI-1活性被显著抑制(P＜0.01),t-PA活性则明显增强(P＜0.01).剂量1 200 U/kg体重的LK,其增强t-PA作用显著大于600 U/kg体重剂量LK(P<0.05).此外,体外观察表明:LK具有明显的激活纤溶酶原(Plg)作用,且有量-效关系,具有一定的浓度依赖性(1.56-25 kU/L).结论:结果表明,LK具备增强纤溶的特性,静脉给药作用快速而肯定.
关键词： 蛋白激酶类 纤维蛋白溶解 组织型纤溶酶原激活物 纤溶酶原激活物抑制物1 -
疾病机制与治疗:蛋白激酶及其抑制剂与心血管疾病
在当今世界上,心血管疾病是导致发病率和死亡率升高的主要原因.到目前为止,对心血管疾病的病理生理学研究与治疗的认识已经取得了实质上的进展.人体心血管系统有许多细胞信号级联放大系统,其中一些是有益的,一些是代偿的,而其它则是有害的.这些信号级联放大系统中转导途径是否平衡决定了机体有无疾病.在这其中,把细胞外刺激转导到细胞内是通过蛋白质磷酸化来完成的,而蛋白质磷酸化又被蛋白激酶介导.这种用来选择性地阻断信号转导途径的蛋白激酶抑制剂可能是一种潜在的有利的受体阻断剂.到目前为止,人们发现了各种各样的可用于治疗一些疾病的蛋白激酶抑制剂,并且用蛋白激酶抑制剂成功治疗肿瘤强有力地支持其在心血管疾病治疗中的应用.在此,我们将总结一些已经能用于心血管疾病的蛋白激酶靶位,以及一些鉴定与心血管疾病有关蛋白激酶假定的治疗靶位的难点.
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HSP70调节应激活化蛋白激酶JNK活性与细胞凋亡
1 简述 热休克蛋白（heat-shock protein，HSP）家族具有分子伴侣功能，能调节蛋白质的折叠、传递和降解［1］。这个家族的成员能被应激诱导合成并保护细胞对抗热休克和其它导致大量蛋白质损伤、变性的有害应激。因为HSP70能促进蛋白质的折叠，被认为能防止/修复应激所致的蛋白质损伤。许多实验结果都支持这一观点。例如：大量表达HSP70能显著地减少热诱导的核蛋白聚集［2］。此外，温和热休克诱导HSP70和其它热休克蛋白的合成堆积，可以戏剧性的降低其后严重高温所致的肌动蛋白及其它细胞骨架组织的聚集［3］。 细胞表达HSP70不仅能减少蛋白质的聚集变性，还能提高使用蛋白损害剂（如亚砷酸盐和乙醇）处理后细胞的存活率［4］，同时也能提高缺血和氧化应激后细胞的存活率。这些结果使人们普遍认为HSP70对蛋白质的再折叠及防止蛋白质/多肽的聚集作用是其保护作用的基础。 但是，另一些资料表明HSP70在细胞保护中还起到一个截然不同的作用。有文献报道，HSP70能防止那些没有发生可检测到蛋白质损伤的细胞的死亡。例如：大量合成HSP70能保护细胞不被紫外线照射［5］、抗肿瘤药物［6］（依托泊甙、阿霉素）致死，同时还能保护细胞不被信号传递分子NO［7］致死。此外，人们还发现大量合成HSP70尽管能保护细胞对抗DNA损伤性抗癌药阿霉素的作用，但不能减轻DNA的损伤［8］。因此，HSP70可能具有一种新的截然不同的功能，它在应激后细胞的存活中起着重要的作用。为了更好地理解HSP70的保护功能，应该清楚了解应激导致细胞死亡的机制。
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7,8-二羟基黄酮对缺氧诱导下肾小管上皮细胞内质网应激的抑制作用
目的 观察7,8-二.羟基黄酮(7,8-DHF)对缺氧诱导的人近端肾小管上皮细胞内质网应激(ERS)损伤的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK-2),采用缺氧培养箱建立细胞缺氧损伤模型,排除含血清培养基对缺氧的影响后,实验分为5组,分别为缺氧0h、4h、8h、12 h、16h组.实时荧光定量PCR(RT-PCR)法筛选缺氧诱导ERS的佳缺氧时间.用不同浓度(50、100、150、200、250 μmol/L)7,8-DHF处理HK-2细胞,采用细胞增殖与活性实验筛选7,8-DHF的安全浓度.用7,8-DHF预处理HK-2细胞缺氧模型,按以下处理因素分组:对照组、缺氧+DMSO组、缺氧+7,8-DHF组(包括100 μmol/L组和150 μmol/L组),通过检测细胞增殖与活性筛选佳给药浓度.后将细胞随机分为缺氧组、缺氧+7,8-DHF组(100 μmol/L),Western印迹法检测细胞蛋白激酶(Akt)、磷酸化蛋白激酶(p-Akt)、富含半胱氨酸蛋白61 (Cyr61)、ERS相关促凋亡蛋白CCAAT增强子结合蛋白(CHOP)的表达.用重组Cyr61慢病毒载体构建稳定表达Cyr61蛋白的Cyr61-HK-2细胞株进行缺氧实验,按如下处理因素分组:缺氧+空质粒转染组,缺氧+Cyr61过表达组,膜连蛋白V和碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)染色后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹法检测Cyr61和CHOP蛋白的表达情况.结果 (1)与对照组细胞相比,RT-PCR实验结果显示12h为诱导ERS的佳缺氧时间(P＜0.01).(2)与对照组相比,细胞增殖与活性实验结果显示100 μmol/L的7,8-DHF组为佳给药浓度(P＜0.01).(3)与缺氧+DMSO组相比,缺氧+7,8-DHF细胞p-Akt、Cyr61表达量均明显增加,CHOP表达量明显降低(均P＜0.05);LY294002处理可抑制p-Akt的表达,减少Cyr61及增加CHOP的表达(均P＜0.05).(4)与缺氧+空质粒转染组相比,过表达Cyr61组细胞的凋亡率明显降低;Cyr61表达量明显增加,CHOP表达量明显降低(P＜0.01).结论 缺氧可诱导HK-2细胞发生ERS,7,8-DHF可能通过激活Akt通路上调Cyr61,阻止ERS下游凋亡蛋白CHOP的活化,抑制细胞凋亡以及减轻缺氧诱导的HK-2细胞损伤,提不7,8-DHF可能对AKI发挥保护作用.
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血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶在糖尿病肾病小鼠中的表达及意义
目的探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶(SGK)在糖尿病肾病(DN)早期病变中的表达及意义.方法采用链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射诱导小鼠DN模型,设DN组和正常对照组(NG).在DN模型4周时,检测肾小球细胞外基质(ECM)、肾重指数、24 h尿蛋白量和Ccr;RT-PCR检测DN病变早期肾皮质SGK 1、SGK 2、SGK 3及Ⅰ型胶原α2(Col Ⅰα2)、纤连蛋白(FN)和转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达;Western印迹检测SGK1蛋白的表达.结果与NG组相比,DN组小鼠肾重/体重、24 h尿蛋白量,ECM相对面积,Ccr均显著增加.肾皮质Col Ⅰα2、FN、TGF-β1 mRNA表达显著上调,同时SGK1 mRNA、SGK2 mRNA、SGK3 mRNA及SGK1蛋白表达显著上调.而且SGK1、SGK2、SGK3的mRNA表达与Col Ⅰα2,FN,TGF-β1 mRNA表达均有显著正相关关系.结论 SGK在DN肾脏中有较高表达,伴随有ECM积聚,与Col Ⅰα2,FN,TGF-β1 mRNA表达有显著正相关,它可能在DN早期病变中起重要作用.
关键词： 糖尿病肾病 细胞外基质 蛋白激酶类 血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶 -
氧化-低密度脂蛋白诱导系膜细胞转录激活蛋白1活化的信号转导通路
目的观察氧化-低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导系膜细胞转录激活蛋白1(AP-1)活化的作用,探讨AP-1活化的上游信号转导机制.方法大鼠肾小球系膜细胞随机分为正常细胞组,ox-LDL处理组和ox-LDL+蛋白激酶抑制剂组.采用Western b1ot测定丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)家族磷酸化水平,采用凝胶迁移率实验观察蛋白激酶抑制剂bisindolylmaleimide Ⅰ、H89、genistein、PD98059及SB203580对ox-LDL诱导系膜细胞AP-1活性的影响.结果ox-LDL呈浓度和时间依赖性激活JNK1/SAPK(stress activated protein kinase)、p38MAPK磷酸化(P＜0.05),而ox-LDL对p44/42MAPK磷酸化无影响(P＞0.05).bisindolylmaleimide Ⅰ浓度为50、100、200 nmol/L时均显著抑制ox-LDL诱导系膜细胞AP-1活性.H89剂量为0.5、5 μmol/L时,AP-1活性显著受抑制.genistein浓度为25、50 μmol/L时并不抑制ox-LDL诱导AP-1活性,浓度达100 μmo1/L时则显著抑制ox-LDL诱导系膜细胞AP-1活性.SB203580和PD98059均不能抑制ox-LDL诱导AP-1活性.结论PKC、PKA及PTK等多种蛋白激酶参与对ox-LDL诱导系膜细胞AP-1活性的调控.
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诱导型一氧化氮合酶反义核酸在脊髓损伤后细胞凋亡和p-p38 MAPK信号转导通路中的作用
目的研究一氧化氮合酶(NOS)反义核酸(ASODN)对脊髓损伤后NOS表达、细胞凋亡、信号转导通路的影响.方法设计并合成诱导型NOS反义寡脱氧核苷酸(ASODN-iNOS)及诱导型NOS无义寡脱氧核苷酸(NSODN-iNOS),微量注入大鼠蛛网膜下腔并制备成脊髓压迫伤动物模型.伤后6 h分别用RT-PCR检测iNOS mRNA表达及用Westernblotting检测组织中磷酸化丝裂原激活蛋白激酶(p-p38 MAPK)的变化,用双标染色流式细胞术检测伤后72 h细胞凋亡情况.损伤对照组鞘内注射不含核酸的溶液成分.结果脊髓损伤后组织中存在iNOS的表达和p-p38MAPK变化;损伤后局部组织中存在明显的细胞凋亡;ASODN-iNOS可以抑制iNOS的表达,并可以显著抑制损伤后p-p38 MAPK的表达和细胞凋亡的发生,与损伤对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论ASODN-iNOS可以抑制脊髓损伤后iNOS的表达和细胞凋亡,ASODN的这种作用可能与p-p38 MAPK信号转导通路有关.
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JNK抑制剂SP600125对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用
[目的]研究特异性c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用.[方法]把体外培养的小脑颗粒神经元从含去极化浓度钾离子(KCl25mmol/L)的培养基中转移至低钾培养基(KCl5mmol/L)中诱导神经元凋亡.以Westernblot法检测JNK和c-Jun的磷酸化水平.[结果]低钾(KCl5mmol/L)磷酸化并激活JNK,诱导c-Jun磷酸化和小脑颗粒神经元凋亡.SP600125通过抑制cJun磷酸化而浓度依赖性地促进低钾环境中培养的小脑颗粒神经元的存活.其保护作用的半数有效量(ED50)为1.01μmol/L.[结论]SP600125通过特异性地抑制JNK活性而对低钾培养的小脑颗粒神经元具有保护作用;提示JNK是介导低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的关键激酶,它可能可以作为干扰神经元凋亡的药物的作用靶点.
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蛋白激酶G对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子分泌的影响
目的：探讨蛋白激酶G（PKG）对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞中炎症因子[白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）]分泌的影响。方法：THP-1单核细胞用160 nmol/L的佛波酯诱导分化成巨噬细胞，再以50 mg/L氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）处理形成泡沫细胞，油红“O”染色，镜下观察细胞形态。以PKG激动剂100μmol/L 8-Br-cGMP和抑制剂2μmol/L KT-5823分别处理巨噬细胞和泡沫细胞，同时设立巨噬细胞正常对照组和泡沫细胞模型对照组，24 h后收集细胞上清液，ELISA检测各组细胞IL-6、IL-10、TNF-α的分泌。结果：ox-LDL处理巨噬细胞48 h后，成功构建为泡沫细胞。泡沫细胞中IL-6、TNF-α分泌显著增加（P＜0．05）。8-Br-cGMP处理巨噬细胞后，IL-6分泌显著减少（P＜0．05），IL-10分泌显著增加（P＜0．05）；KT-5823处理巨噬细胞后，IL-10分泌显著减少（P＜0．05）。8-Br-cGMP处理泡沫细胞后，IL-6和TNF-α分泌显著减少（P＜0．05），IL-10分泌显著增加（P＜0．05）；KT-5823处理泡沫细胞后，IL-6和TNF-α分泌显著减少（P＜0．05）。结论：PKG可能通过上调抗炎因子IL-10的表达、下调促炎因子IL-6和TNF-α的表达，抑制炎症的发生发展；PKG可作为潜在的抗动脉粥样硬化的新思路和新靶点。
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MAPK反义寡核苷酸对肝癌细胞恶性表型的逆转作用
目的:探讨 MAPK反义寡核苷酸对肝癌细胞恶性表型的逆转作用.方法:用脂质体转染法将 MAPK反义寡核苷酸导入肝癌细胞株 SMMC-7721中,通过细胞活力、蛋白质含量、集落形成和 DNA合成的变化检测 MAPK反义寡核苷酸对肝癌恶性表型的逆转作用.结果:MAPK反义寡核苷酸可明显抑制细胞活力、蛋白质含量、集落形成和 DNA合成,其抑制率分别为 52.6%、50.5%、54.9%和 47.5%,与对照组比较差异有显著性(P< 0.01).结论:MAPK反义寡核苷酸可逆转 SMMC-7721细胞恶性表型,也为肝癌治疗指出了新方向.
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尾加压素Ⅱ诱导培养心肌细胞肥大及对p-p38表达的影响
目的:观察尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)诱导体外培养的乳鼠心肌细胞肥大及对p-p38表达的影响.方法:培养1 d龄乳鼠心肌细胞,用相差显微镜计数心肌细胞搏动频率,细胞图像分析系统测量细胞体积,考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量,[3H]-亮氨酸掺入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标;免疫沉淀法并p38试剂盒测定p38活性,Western-blot测定p-p38表达.结果:与对照组相比,UⅡ能显著提高心肌细胞搏动频率、细胞体积、心肌细胞蛋白含量、蛋白合成速率,同时显著提高p38活性和p-p38表达.结论:UⅡ可以诱导离体培养的乳鼠心肌细胞肥大,机制与促进p38活性、上调p-p38表达有关.
