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血管周上皮样细胞肿瘤免疫表型分析
目的 研究血管周上皮样细胞肿瘤(PEComa)的免疫表型和分子遗传学改变及其与临床病理特征的关系.方法 收集25例PEComa患者的存档蜡块、病理及临床资料,采用免疫组织化学(SP法或EnVision法)检测相关免疫标志物,同时以多种肿瘤进行对照.运用荧光原位杂交(FISH)方法检测25例PEComa中TFE3基因的易位及扩增情况.结果 25例患者年龄21 ～61岁(平均43岁),男女比例为1∶1.3.22例为肝脏和肾脏的血管平滑肌脂肪瘤(AML),由成熟脂肪组织、梭形或上皮样平滑肌细胞和特征性的厚壁血管组成；3例为肝肾外PEComa,形态与经典AML有明显区别,肿瘤由单行性上皮样或梭形细胞构成,呈片状、巢状排列.免疫组织化学结果显示:25例PEComa组织蛋白酶K(cathepsin K)均呈强阳性(100％,25/25),HMB 45、Melan A和平滑肌肌动蛋白(SMA)的阳性率分别为80％ (20/25)、88％ (22/25)和88％(22/25),阳性瘤细胞占所有瘤细胞的百分比平均值:cathepsin K为90％、HMB 45为36％、Melan A为41％、SMA为35％.TFE3在肝肾AML中全部阴性(22/22),而在肝肾外PEComa中均为阳性(3/3).经FISH证实25例PEComa均不存在TFE3基因融合或扩增.结论 肝肾外PEComa的组织学形态与经典AML有明显区别,其发病与TFE3蛋白高表达关系密切,可能为独立的PEComa分子亚型.cathepsin K在PEComa中阳性率高,敏感性优于HMB 45、Melan A和SMA,可用于PEComa与其他常见的多种肿瘤的鉴别诊断.
关键词： 血管肿瘤 上皮样细胞 免疫组织化学 组织蛋白酶k 小眼畸形相关转录因子 -
MITF在破骨细胞中的作用研究进展
MITF（ microphthalmia-associated transcription factor ，MITF）是小眼畸形相关转录因子，它在破骨细胞中的作用成为近几年骨科领域的研究热点。不断有研究证实，MITF调节破骨细胞中众多功能相关基因的转录，包括抗酒石酸酸性磷酸酶（ tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP），组织蛋白酶K（Cathepsin K），破骨细胞相关受体（osteoclast-associated receptor，OSCAR），氯离子通道-7（chloride channel-7，Clcn7），骨硬化相关跨膜蛋白-1（osteopetrosis-associated transmembrane protein 1，Ostm1）和E-钙粘蛋白（E-cadherin）等。无论在MITFmi/mi突变的小鼠模型还是来源于MITFmi/mi突变的小鼠体外培养的破骨样细胞中，我们都能检测到上述与破骨细胞众多功能相关基因的表达都会受到明显抑制，导致破骨细胞功能异常，小鼠患有严重的骨硬化病。因为小鼠和人类的MITF基因序列具有很高的同源性，所以理解MITF调控系统对小鼠破骨细胞的作用也将有助于我们阐明妇女绝经后的骨质疏松症、骨硬化病或者发生在多发性骨髓瘤患者身上的溶骨性骨质破坏和高钙血症等人类疾病的分子作用机制。现就MITF在破骨细胞中的作用做一综述。
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43例肢端型黑色素瘤MITF基因扩增分析及其临床意义
目的 黑色素瘤是侵袭性强的恶性肿瘤之一,肢端黑色素瘤是黑色素瘤的一种特殊亚型,常见于亚洲黄种人群,发病机制尚不明确.小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)是黑色素细胞生长、分化的重要调节蛋白,在黑色素瘤的发生、发展及转移过程中也发挥重要作用.本研究分析中国肢端型黑色素瘤患者MITF基因扩增情况及其临床意义.方法 收集2010-01-01-2013-04-30北京肿瘤医院肾癌黑色素瘤内科43例中国肢端型黑色素瘤患者的石蜡包埋组织样本,应用实时定量PCR法检测MITF基因扩增情况,收集患者的临床病理资料进行统计分析.结果 MITF基因在43例样本中的扩增率为48.8％(21/43).MITF基因扩增和无扩增患者的年龄(x2 =0.193,P=0.661)、性别(x2 =0.587,P=0.443)、临床分期(x2=4.837,P=0.184)、血清LDH水平(x2=0.451,P=0.502)、溃疡(x2=0.910,P=0.340)、标本来源(x2=1.406,P=0.236)的差异均无统计学意义.但是,MITF基因扩增患者中肿瘤浸润厚度≥4 mm比例为72.7％(8/11),明显高于无扩增患者的27.3％(3/12),差异有统计学意义(Fisher精确概率法,P=0.039).MITF基因扩增和无扩增患者的中位总生存期分别为42.4个月(95％ CI:29.7～55.1)和46.3个月(95％CI:34.5～58.2),差异无统计学意义,x2=0.287,P=0.592.结论 中国肢端型黑色素瘤患者MITF基因扩增率较高,且扩增患者中肿瘤≥4 mm比例显著高于无扩增患者,预示患者存在不良预后因素.
关键词： 肢端型黑色素瘤 小眼畸形相关转录因子 基因扩增 -
小眼畸形转录因子家族相关性肾细胞癌四例并文献复习
目的 探讨小眼畸形转录因子(MiTF)家族相关性肾细胞癌的临床和病理特征、诊断和治疗.方法 回顾性分析2016年1月至12月收治的4例MiTF家族相关性肾细胞癌,并结合文献对该病的影像学、病理特征及免疫组织化学结果进行总结.结果 4例患者中,3例因无痛性肉眼血尿就诊,入院后常规体检及相应的辅助检查后考虑为肾占位,行根治性肾切除术,术后免疫组织化学确诊为Xp 11.2易位/TFE3融合基因相关性肾细胞癌;另1例因糖尿病16年常规体检发现肾占位就诊,入院后检查考虑为肾下极占位,行肾下极部分切除术,术后免疫组织化学确诊为t(6;11) (p21;q12) /TFEB融合基因相关性肾细胞癌.结论 MiTF家族相关性肾细胞癌是一种临床较为少见的易位性肾癌,临床表现与其他类型的肾癌非常相似,确诊需依赖病理检查及免疫组织化学结果,目前根治性手术切除是其主要的治疗方法,预后需密切观察.
关键词： 肾肿瘤 小眼畸形相关转录因子 易位 遗传 -
小眼畸形相关转录因子转录调控与白癜风临床类型的相关性研究
目的 研究小眼畸形相关转录因子(MITF)及其转录调控的酪氨酸酶相关蛋白(TRPs)与白癜风临床类型的相关性.方法 选择非节段型白癜风(NSV)17例和节段型白癜风(SV) 13例,对所有病例均取白斑区、远离白斑正常肤色区的表皮片,首先应用免疫组织化学方法原位检测黑素细胞的MITF及其主要转录调控分子酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TYRPI)和酪氨酸酶相关蛋白2(TYRP2)的表达情况,并对所有30例远离白斑正常肤色区的表皮黑素细胞进行培养,应用免疫印迹方法检测培养的黑素细胞MITF及TYR、TYRP1和TYRP2的表达情况.结果 (1)原位表达结果:白斑区:所有病例MITF及TYR、TYRP1和TYRP2的表达均为阴性；正常肤色区:SV的MITF表达显著抑制,与NSV及正常人对比均具有统计学差异(P＜0.05),NSV的MITF、NSV与SV的TYR、TYRP1和TYRP2表达与正常人对比均没有统计学差异(P＞0.05).(2)培养黑素细胞的蛋白表达结果:NSV的TYRP2表达下调,与正常人对比具有统计学差异(P＜0.05),而MITF、TYR和TYRP1表达正常；SV的MITF与NSV及正常人对比均具有统计学差异(P＜0.05),而TYR、TYRP1和TYRP2正常表达.结论 NSV和SV可能存在不同的MITF转录调控机制.
关键词： 小眼畸形相关转录因子 酪氨酸酶相关蛋白 白癜风 -
白及多糖对酪氨酸酶活性及黑色素生成的影响
目的:观察白及多糖对酪氨酸酶(TYR)活性及黑色素形成相关蛋白TYR、小眼畸形相关转录因子(MITF)表达的影响.方法:超声提取白及多糖粗品.用不同浓度的白及多糖(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 g/L)和曲酸(阳性对照,0.1、0.2、0.4 g/L)作用于小鼠B16黑色素瘤细胞,用于检测细胞活性、TYR活性;各组细胞分别加入α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)及不同浓度药物共培养后检测黑色素含量;将细胞分为空白组、模型组(α-MSH)、曲酸组及白及多糖低、中、高剂量组,予相应干预48 h后,应用Western blot检测B16细胞TYR和小眼畸形相关转录因子(MITF)的蛋白表达情况.结果:不同浓度曲酸组、白及多糖(0.05～0.8 g/L)组、空白组间的细胞活性差异无统计学意义(P＞0.05).与空白组比较,白及多糖在浓度0.1～0.8 g/L对TYR的活性有显著抑制作用(P＜0.05,P＜0.01),其作用与阳性对照曲酸相当;白及多糖在浓度0.1～0.8 g/L有较高的抑制黑色素生成作用(P＜0.05,P＜0.01);白及多糖浓度0.2～0.4 g/L对TYR、MITF蛋白表达水平有明显抑制作用(P＜0.05).结论:白及多糖可能通过抑制TYR的活性和蛋白表达及MITF的蛋白表达,起到抑制黑色素生成的作用.
关键词： 白及多糖 黑色素 小鼠B16黑色素瘤细胞 酪氨酸酶 小眼畸形相关转录因子 -
α黑素细胞刺激素类似物及其诱导剂治疗白癜风的研究进展
α黑素细胞刺激素作为黑素细胞刺激素中作用强的一种内源性小分子神经内分泌免疫调节肽,主要在脑垂体中产生.α黑素细胞刺激素可以促进黑素细胞增殖、产生黑素小体以及通过小眼畸形相关转录因子调节黑素细胞分化,引起皮肤色素沉着.研究发现,白癜风患者表皮及血浆中的α黑素细胞刺激素浓度降低.临床推荐α黑素细胞刺激素的类似物afamelanotide和性类固醇甲状腺激素治疗白癜风,性类固醇甲状腺激素可诱导黑素细胞α黑素细胞刺激素的表达,两者均可利用α黑素细胞刺激素作用于黑素细胞的原理而治疗白癜风.
关键词： α促黑素 白癜风 性类固醇甲状腺激素 小眼畸形相关转录因子 α-MSH衍生物 -
非转移性黑素瘤糖蛋白基因沉默抑制黑素小体形成的机制探讨
目的:探讨非转移性黑素瘤糖蛋白[glycoprotein (transmembrane) nonmetastatic melanoma proteinb,GPNM]B 基因沉默抑制黑素小体形成的作用机制.方法:以黑素细胞系PIG1 为研究对象,采用小干扰RNA(siRNA)干扰法下调GPNMB 基因的表达,以实时定量反转录(RT)-PCR 和Western blot 法检测GPNMB-siRNA 转染对GPNMB、酪氨酸酶(Tyr)、酪氨酸相关蛋白1(Trp1)、OA1 和Pmel17 的影响,进一步采用Tyr-siRNA 转染PIG1 细胞下调Tyr 基因的表达以验证GPNMB 与Tyr 之间的相互作用,并检测GPNMB 基因沉默对小眼畸形相关转录因子(MITF)的影响.结果:GPNMB-siRNA 转染对GPNMB、Tyr、Trp1、Pmel17 和OA1 等黑素小体蛋白的表达均有显著抑制作用;GPNMB 与Tyr 之间无相互作用;GPNMB-siRNA 转染或中波紫外线(UVB)单独作用能够上调MITF 的表达,但两者共同作用却能显著抑制MITF 的表达.结论:GPNMB 基因沉默对黑素小体形成的抑制作用不依赖于MITF.
关键词： 黑素小体 黑素细胞 非转移性黑素瘤糖蛋白 酪氨酸酶 小眼畸形相关转录因子 -
葛根素促进黑素细胞黑素合成及其机制的初步探讨
目的 探讨葛根素对正常人黑素细胞黑素合成的影响和可能机制.方法 用噻唑蓝(MTT)法、NaOH裂解法观察葛根素对黑素细胞增殖及黑素合成作用,RT-PCR及Western印迹法检测葛根素对黑素细胞小眼畸形相关转录因子(MITF)、酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP-1)基因转录和蛋白表达水平的影响.结果 1～ 40 μmol/L浓度范围内葛根素对体外培养的黑素细胞增殖影响与正常对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).与正常对照组相比,40 μmol/L葛根素可显著促进黑素细胞的黑素合成(P＜0.05),并可显著增加MITF、TYR、TRP-1 mRNA及蛋白的表达(P＜0.05).40 μmol/L葛根素使MITF、TYR、TRP-1的蛋白表达量分别比正常对照组增加8.69％,10.28％和10.58％(P＜ 0.05);并使MITF、TYR、TRP-1的mRNA表达量分别比正常对照组增加2.48倍,1.91倍和1.63倍(P＜0.05).结论 葛根素能增加MITF、TYR、TRP-1 mRNA及蛋白的表达水平,促进黑素合成.
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人参皂苷Rb1对人表皮黑素细胞黑素生成的影响
[目的]探讨人参皂苷Rb1对体外培养的人黑素细胞黑素生成的影响及其作用机制.[方法]人表皮黑素细胞取自小儿包皮环切术标本,取第2～5代细胞进行实验.采用MTT法测定体外培养的人黑素细胞增殖情况,分光光度计法测定酪氨酸酶的多巴氧化酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,免疫蛋白印记法测定黑素细胞酪氨酸酶、小眼畸形相关转录因子(MITF)的表达及cAMP应答元件结合蛋白(CREB)的磷酸化.[结果]体外培养的人黑素细胞分别加入25、50、100 μ mol/L人参皂苷Rbl作用72 h后,黑素细胞存活率3组间差异无统计学意义(P＞0.05),黑素含量呈浓度依赖性增加(与溶剂对照组相比的相对黑素含量分别为112.4％±5.7％、155.7％±6.3％、217.2％±11.7％),酪氨酸酶活性增加(相对酪氨酸酶活性分别为117.9％±5.7％、158.2％±9.6％、182.6％±10.0％).100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h,黑素细胞酪氨酸酶(225.4％±12.8％)、MITF(313.5％±16.7％)蛋白表达明显升高(与溶剂对照组相比,P值均＜ 0.01),CREB磷酸化明显增加(322.5％±21.1％)(与溶剂对照组相比,P＜ 0.01).100 μmol/L人参皂苷Rb1作用黑素细胞8h,MITF蛋白表达无明显变化；作用24h后,MITF表达明显增加,与0时间点相比,P＜ 0.01.10 μmol/L的蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89预处理细胞,可明显抑制100 μmol/L人参皂苷Rbl引起的CREB激活、酪氨酸酶及MITF蛋白表达的增加,与100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h比较,P值均＜ 0.01,进而抑制人参皂苷Rb1引起的酪氨酸酶活性作用增强及黑素合成增加.[结论]人参皂苷Rb1可促进正常人黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性.PKA/CREB/MITF/酪氨酸酶信号通路可能参与了人参皂苷Rb1的促黑素生成机制.
关键词： 黑素细胞 人参皂甙 一元酚单氧酶 小眼畸形相关转录因子 黑素生成 -
白癜风表皮黑素细胞超微结构及小眼畸形相关转录因子转录调控研究
目的 研究白癜风黑素细胞超微结构和小眼畸形相关转录因子(MITF)及其转录调控的酪氨酸酶相关蛋白(TRP)与白癜风临床类型与病程的相关性.方法 选择不同病程的寻常型白癜风(VV)12例和节段型白癜风(SV)8例,分别取白斑区、白斑边缘正常肤色区和远离白斑正常肤色区的表皮片,经组织学确定其表皮的完整性.透射电镜观察10例患者(VV 6例,SV 4例)不同区表皮黑素细胞的超微结构特点.对所有20例远离白斑正常肤色区的表皮片黑素细胞进行培养,应用免疫印迹方法检测MITF及其转录调控的酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP1)和酪氨酸酶相关蛋白2(TYRP2)的表达水平.结果 白癜风表皮黑素细胞超微结构病理改变:10例中7例白斑区表皮内未见黑素细胞,1例短病程和2例长病程VV分别可见少量黑素体显著减少或缺失的黑素细胞;白斑边缘正常肤色区,6例VV中,3例病程小于15个月者可见黑素细胞超微结构异常,而4例SV中仅1例异常;远离白斑正常肤色区,10例黑素细胞超微结构均正常.白癜风表皮黑素细胞MITF及其转录调控TRP的表达:VV的MITF表达下调与TYR、TYRP1、TYRP2的表达下调一致;SV存在MITF显著表达下调.而TYR、TYRP1、TYRP2几均正常表达.结论 VV和SV可能存在不同的表皮黑素细胞超微结构病理改变和MITF转录调控机制.
关键词： 白癜风 黑素细胞 黑色素小体 小眼畸形相关转录因子 -
恶性黑色素瘤的研究进展
恶性黑色素瘤是一种由黑色素细胞恶化形成的高度恶性肿瘤.对其它常见恶性肿瘤来说,它的发病率较低,但却是所有恶性肿瘤中增长速度快的肿瘤之一,尤其以白种人发病概率高.虽然在中国发病率也比较低,但其增长速度却越来越快.并且,目前恶性黑色素瘤存在误诊率较高、治疗率低的现象,且预后较差.黑色素瘤的形成常伴随着基因突变或表达的变化,研究相关基因对黑色素瘤形成和发展的影响,将为黑色素瘤的治疗提供新途径.近,有关黑色素瘤在基因调控机制和临床治疗方面取得了许多突破性进展,主要包括小眼畸形相关转录因子、聚腺苷酸化元件结合蛋白、B型Raf原癌基因、脂筏特征蛋白和SOX基因等.因此,今后在传统治疗手段的基础上,进一步采用生物免疫治疗已成为黑色素瘤治疗的热点.该文综述了恶性黑色素瘤的分类、风险影响因素、早期发现和诊断,对其治疗方法尤其是相关调控基因的新研究进展进行讨论.
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伴有TFE3扩增的宫颈血管周上皮样细胞肿瘤
目的 探讨伴有TFE3扩增的子宫颈血管周上皮样细胞肿瘤(perivascular epithelioid cell neoplasm,PEComa)的病理学特征、鉴别诊断及生物学行为.方法 对1例伴有TFE3扩增的子宫颈PEComa进行光镜观察、免疫组化染色及荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测,追踪随访患者预后,并复习相关文献.结果该例PEComa浸润性生长,呈巢状或片状排列,瘤细胞呈上皮样改变,可见灶性坏死.瘤细胞表达TFE3和HMB-45,TFE3基因出现多倍体扩增,未见易位发生.患者第一次术后2个月肿瘤复发,术后5个月盆腔淋巴结转移.结论 伴有TFE3扩增的子宫颈PEComa具有侵袭性生物学行为,预后更差,需与其他形态学相似的肿瘤相鉴别.
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小眼畸形相关转录因子在黑色素瘤转移中的作用
小眼畸形相关转录因子(MITF)一直是近几年黑色素瘤细胞研究中的热点.异常表达的MITF与黑色素瘤的发生和转移密切相关,且MITF低表达能促进黑色素瘤细胞的侵袭.研究MITF及与其相关的分子和信号通路的调节关系,将进一步加深对恶性黑色素瘤转移分子机制的理解,为开发新的分子靶向药物提供帮助.
关键词： 肿瘤转移 小眼畸形相关转录因子 黑色素瘤 -
抗白灵霜在黑素合成中对 TYR 和MITF的调节作用
目的：：明确抗白灵霜( KBL)在黑素合成中对TYR和MITF的调节作用。方法：体外培养小鼠B16黑素瘤细胞,分为空白对照组和不同浓度KBL(5 mg/mL,10 mg/mL和15 mg/mL)用NaOH溶解法检测黑素合成量,Real time－PCR检测TYR和MITF基因mRNA表达,Western Blot检测KBL组TYR和MITF蛋白的表达。结果：各浓度KBL组黑素合成量及TYR和MITF基因的mRNA和蛋白表达的水平均高于空白对照组,且呈浓度依赖性。结论： KBL可能通过上调MITF基因的表达,激活参与黑素合成的TYR以促黑素合成。
关键词： 抗白灵霜 小鼠B16黑素瘤细胞 酪氨酸酶 小眼畸形相关转录因子 黑素合成 -
Waardenburg综合征2型家系的临床特征分析及突变检测
目的:分析Waardenburg综合征(WS)2型家系的临床表型特征,并探讨其分子病因,为WS家系提供遗传咨询.方法:收集7个WS2型家系和散发病例(14例患者)的临床资料,分析其临床表型特征,均签署知情同意书并获取血样,提取基因组DNA,聚合酶链反应扩增MITF、SNAI2、SOX10和EDNRB基因编码区全部外显子,在ABI自动测序仪上进行正反向测序,并进行测序结果和相关数据信息的分析.结果:WS2型患者的临床表型特征常见的是听力障碍(10/14,71.4％)、雀斑(7/14,50.0％)、虹膜异色(6/14,42.9％)和早白发(5/14,35.7％);耳聋表型比较一致,均表现为先天性双耳极重度感音神经性聋,雀斑表型不同于国外WS患者的皮肤低色素改变.突变检测发现WS02家系MITF基因第3号外显子c.328C＞T杂合突变(p.R110X),其他家系和散发病例均未检测到这4个基因的致病性突变.结论:WS2型患者表型特征多样,棕褐色雀斑沉着可能是国内WS患者皮肤色素异常表现的一种特殊形式.MITF基因突变R110X是导致WS02家系发病的分子病因,其他家系突变检测阴性提示存在其他未知的WS2致病基因或者拷贝数变异的可能.
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IRF4与MITF协同作用于络氨酸酶启动子的相关机制
目的:探索干扰素调节因子4(interferon regulatory factor 4,IRF4)与小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)协同作用激活络氨酸酶(tyrosinase,TYR)启动子的作用机制.方法:利用荧光素酶检测、细胞免疫荧光蛋白定位、GST融合蛋白沉降技术(GST-pull down)、免疫共沉淀等多种体外细胞实验学方法,观察IRF4与MITF的协同转录激活效应、亚细胞定位和蛋白-蛋白相互作用情况.结果:IRF4与MITF蛋白共同表达于细胞核;IRF4可以增强MITF在TYR启动子上的转录激活作用,产生协同效应,而在其他MITF目标启动子上不产生;IRF4不能单独激活TYR启动子,且与丧失功能的MITF突变蛋白在TⅥ启动子上不能产生协同作用;两个蛋白之间无直接相互作用.结论:IRF4与MITF在TYR启动子上产生协同作用,该效应主要依靠MITF进行调节;两个蛋白之间的相互作用可能需要DNA参与.
关键词： 干扰素调节因子4 小眼畸形相关转录因子 络氨酸酶 转录激活作用 协同作用 -
干扰MITF表达对恶性黑素瘤细胞B16F10增殖及黑素生成的影响
目的 验证小眼畸形相关转录因子(MITF)高表达在恶性黑素瘤细胞中的关键作用.方法 利用RNA干扰技术特异性抑制MITF基因及其蛋白表达水平,研究该基因对B16F10细胞增殖活性的影响,验证MITF对黑素瘤细胞内外黑素分泌水平的影响及对与该分泌水平密切相关的酪氨酸酶(TYR)活性的影响.结果 RNA干扰技术在B16F10细胞中能显著抑制MITF基因及蛋白表达水平,分别为82.7％、50.0％,干扰MITF表达能抑制B16F10增殖活性达49.5％,能抑制黑素瘤细胞内、外黑素分泌水平,分别为49.7％、43.8％,能抑制TYR活性达48.0％.结论 MITF对黑素瘤细胞增殖活性具有重要作用,对黑素瘤细胞中的TYR活性及黑素生成具有重要作用,与黑素瘤细胞中的黑素功能密切相关.
