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金丝桃素对体外培养的人视网膜色素上皮细胞诱导凋亡的初步研究
目的 研究金丝桃素对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(RPE)凋亡的影响,探讨药物防止增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的某些基本机理.方法 用含0.5 μM～5μM金丝桃素不同浓度的血清培养人RPE,流式细胞仪(FCM)检测调亡细胞定量.结果 金丝桃素作用后RPE的S期百分比随着金丝桃素浓度增加而逐渐减少(金丝桃素4种浓度P均＜0.01).凋亡细胞定量结果显示:在2.5μM和5μM金丝桃素组凋亡细胞的比例分剐为2.3%和6.1%.结论 2.5μM和5.0μM金丝桃素能诱导RPE的凋亡,运用于眼内来控制RPE的前景是光明的.
关键词： 增生性玻璃体视网膜病变 视网膜色素上皮 细胞培养 金丝桃素 蛋白激酶C -
高度近视眼视网膜脱离术后再脱离的原因及再手术的疗效分析
目的 分析高度近视眼视网膜脱离术后视网膜再脱离的原因、再手术的方法及预后.方法 对25例(25眼)高度近视眼视网膜脱离复发患者行巩膜外垫压、环扎术、玻璃体手术或玻璃体切割联合巩膜外硅胶垫压、环扎术,术中观察视网膜裂孔的位置、数目,结合前次手术的有关资料,分析视网膜脱离复发原因.随访6个月观察视网膜复位及视力恢复情况.结果 视网膜脱离复发的25眼中,新裂孔形成7眼(28.0％),原裂孔封闭不良8眼( 32.0％),新裂孔形成和原裂孔封闭不良并存10眼(40.0％)；增生性玻璃体视网膜病变进展16眼(64.0％).再次手术:行巩膜扣带术7眼(28.0％),行玻璃体切割术11眼(44.0％),玻璃体切割联合巩膜外硅胶垫压(环扎术)术7眼(28.0％)；眼内填充硅油9眼,填充体积分数14％C3F8气体10眼.随访期末,24眼(96.0％)视网膜复位,1眼(4.0％)视网膜复位后再脱离；21眼(84.0％)视力不同程度提高.结论 裂孔封闭不良、产生新裂孔及增生性玻璃体视网膜病变进展是视网膜脱离复发的主要原因.根据玻璃体视网膜的状况选择合适的手术方式治疗效果良好.
关键词： 高度近视 视网膜脱离 视网膜脱离复发 增生性玻璃体视网膜病变 -
外伤性视网膜脱离眼发生严重增生性玻璃体视网膜病变的危险因素研究
目的 探讨外伤性视网膜脱离眼发生严重增生性玻璃体视网膜病变(prolifera-tive vitreoretinopathy,PVR)的危险因素.方法 回顾性分析2003年3月至2006年7月我科就诊的开放性眼外伤后视网膜脱离患者43例(43眼),均曾在我科或外院行裂伤缝合手术并存在视网膜裂孔.对性别、年龄、视力和眼压、开放性眼外伤分类、外伤分区、外伤时程、前房出血、晶状体缺如、玻璃体出血、视网膜脱离范围、视网膜下出血、脉络膜脱离性质等行Logistic回归分析,并部分采用χ2检验进行验证.结果 所有开放性眼外伤导致的外伤性视网膜脱离眼均存在一定程度的PVR表现,其中PVR D级所占比例大(46.5%),46.5%的患眼并不存在明显的前部PVR表现,25.6%患眼4个象限均存在前部增生性改变.Logistic回归分析结果显示:严重PVR危险因素仅视网膜脱离范围和晶状体缺如2项被保留于方程中,其中前者为正相关因素(B=18.853),后者为负相关因素(B=-1.946).严重PVR发生率在年龄<18岁组和年龄≥18岁组分别为41.67%和48.39%(P=0.692),破裂伤组的D级PVR发生率(48.15%)较裂伤组(43.75%)更高,但差异无显著统计学意义(P=0.780).玻璃体出血对严重PVR的影响差异无显著统计学意义(P=0.114),但前房有/无出血组间和视网膜下有/无出血组间差异却有显著统计学意义(P=0.043,0.037).结论 开放性眼外伤导致的外伤性视网膜脱离眼存在特发性PVR特征,视网膜脱离范围和晶状体缺如是影响PVR发生的重要因素,后者为保护性因素.
关键词： 增生性玻璃体视网膜病变 眼外伤 视网膜脱离 -
玻璃体切割术治疗人工晶状体眼视网膜脱离的结果分析
目的探寻人工晶状体眼裂孔性视网膜脱离(pseudophakic retinal detachment,PRD)玻璃体切割术后视网膜再脱离和视力差的原因.方法 106例PRD患者均选择玻璃体切割作为首选手术,其中术前27例未发现裂孔,26例曾行Nd:YAG激光后囊膜切开术.术后随访6～94.8月,平均20.8月.结果术后视网膜首次复位77例,29例视网膜再脱离的原因主要是视网膜新裂孔出现和增生性玻璃体视网膜病变.术后视力>0.3者63例,≤0.3者43例.视力≤ 0.3的主要原因是术后黄斑功能异常(13例)、黄斑前膜(8例)、黄斑水肿(3例)和视神经萎缩(3例).结论 PRD玻璃体切割术后视网膜再脱离的原因主要是新裂孔出现和增生性玻璃体视网膜病变,而视力差的主要原因是术后黄斑功能异常、黄斑前膜、黄斑水肿和视神经萎缩.
关键词： 人工晶状体眼 视网膜脱离 玻璃体切割术 增生性玻璃体视网膜病变 -
转化生长因子-β2(TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达及意义
目的 探究转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达变化及意义.方法 使用不同浓度TGF-β2刺激RPE细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Western blot、RT-PCR检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白(fibronection,FN)、神经钙粘连蛋白(nerve calcium adhesion protein,N-Cadherin)的表达.采用RT-PCR检测不同浓度TGF-β2及不同时间TGF-β2(5μg·L-1)刺激RPE细胞后miRNA-29b的表达.结果 TGF-β2刺激后的RPE细胞形态呈纤维化改变.在一定浓度范围内(1μg·L-1、5μg·L-1、10 μg· L-1),随着TGF-β2浓度的增加FN、N-Cadherin及相应mRNA随之增加,1μg·L-1、5μg·L-1、10μg · L-1组与对照组(0 μg· L-1)相比,差异均有统计学意义(均为P＜0.01).TGF-β2在一定浓度范围内(0μg· L-1、1μg·L-1、5 μg· L-1)以剂量依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1组与对照组(0μg·L-1)相比,差异均有统计学意义(均为P＜0.01),在TGF-β2浓度为5μg·L-1时miRNA-29b表达量低.TGF-β2在一定时间范围内(0h、3h、6h、12 h)以时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,3h、6h、12 h、24 h、48 h组与0h相比差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 一定范围内TGF-β2以剂量和时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b的表达,为进一步研究miRNA-29b与TGF-β2在RPE细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础.
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增生性玻璃体视网膜病变中水通道蛋白-1表达的实验研究
目的 检测水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP-1)在增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)中的表达,以确定其在PVR细胞迁移和增殖中可能的作用.方法 从10例PVR患者的眼科手术中收集10例PVR增生膜.采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和免疫荧光法分别确定PVR增生膜中AQP-1 mRNA和蛋白的表达.结果 RT-qPCR检测发现,AQP-1 mRNA在所有PVR增生膜中均出现了显著表达,其扩增的Cq值为27 ～29(28.10±0.54);免疫荧光检测发现,AQP-1标记细胞所总细胞数的比例为(25.36±2.35)％,且AQP-1蛋白主要表达在增生膜的边缘细胞中.同时10例PVR增生膜AQP-1 mRNA和蛋白质的表达非常接近,并无明显差别,与患者年龄、性别和之前是否接受过手术等无关.结论 AQP-1可能在PVR细胞迁移和增殖过程中起到了潜在的作用.
关键词： 增生性玻璃体视网膜病变 水通道蛋白-1 RT-qPCR 免疫荧光 -
非转移性黑色素瘤糖蛋白B在增生性玻璃体视网膜病变及视网膜色素上皮细胞中的作用
目的 研究非转移性黑色素瘤糖蛋白B(glycoprotein non-metastatic melanoma protein b,GPNMB)在增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)及视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞中的作用.方法 首先,采用免疫荧光法对18例PVR患者行玻璃体切除术时切除的视网膜进行定量分析;酶联免疫吸附试验检测PVR患者血清中GPN-MB的含量;然后,以人RPE细胞为研究对象,构建GPNMB的siRNA以及过表达载体,转染入细胞后采用MTT法和流式细胞仪观察其对RPE细胞增殖、细胞周期的影响.结果 免疫荧光实验表明,随着PVR增生膜病变程度的加重,其GPNMB的荧光强度加强,A、B、C级PVR的增生膜中GPNMB阳性荧光总量分别为5.07、11.21、19.34;酶联免疫吸附试验结果显示,PVR患者血清中GPNMB的含量远高于对照组;细胞增殖实验结果表明,GPNMB过表达可以显著促进RPE细胞的增殖,其OD值是对照组的3.7倍;然后以GPNMB过表达的人RPE细胞为研究对象,结果表明GPNMB-siRNA转染组可以显著抑制RPE细胞的增殖;流式细胞仪检测发现GPNMB对RPE细胞周期有显著影响.结论 GPNMB作为RPE细胞中的一个关键分子,通过细胞周期调控途径影响其增殖,为进一步研究GPNMB在PVR中的作用及机制奠定了基础.
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微小RNA-7对人视网膜色素上皮细胞增生和迁移的影响
目的 探讨微小RNA-7(miRNA-7)对人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,hRPE)细胞增生和迁移的调控作用.方法 利用脂质体Lipofectamine 2000将miRNA-7前体miRNA-145(miRNA-7前体干预组)和阴性对照物(阴性miRNA对照组)转染hRPE细胞,同时设立空脂质体组和空白对照组,采用Real-Time PCR检测成熟miRNA-7的表达,CCK-8检测细胞增殖抑制情况,用直径为8.5 mm的Boyden小室进行细胞迁移能力的检测,对4组结果作统计学分析.结果 miRNA-7对hRPE细胞增殖有明显抑制作用,miRNA-7前体干预组细胞增殖抑制率(23.58％)明显高于阴性miRNA对照组(2.35％)、空脂质体组(2.97％)与空白对照组(0％),差异均具有统计学意义(均为P＜0.05),空脂质体组、阴性miRNA对照组与空白对照组之间差异均无统计学意义(均为P＞0.05).在miRNA-7前体干预组中,迁移细胞数明显较少,每高倍视野为(16.0±3.8)个,而在阴性miRNA对照组、空脂质体组和空白对照组中,迁移细胞数明显较多,每高倍视野分别为(32.2±7.8)个、(31.4±6.9)个和(33.9±8.4)个,miRNA-7前体干预组细胞迁移数较后3组显著减少,差异均有统计学意义(均为P＜0.01),而后3组之间差异均无统计学意义(均为P＞0.05).结论 miRNA-7可明显抑制hRPE细胞的增殖和迁移,这种抑制作用可能是由于miRNA-7对hRPE细胞的EGFR通路产生了良好的靶向沉默后效应,直接下调EGFR表达,从而阻断或部分阻断了ERK1/2信号通路,使得hRPE细胞的增殖和迁移受到明显抑制.
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结缔组织生长因子在人视网膜色素上皮细胞的增生、迁移和上皮细胞-间充质细胞转变中的作用
目的 研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的增生、迁移和上皮细胞-间充质细胞转变(epithelial mesenchymal transition,EMT)中的作用.方法 采用CCK-8细胞计数试剂盒测定400 ng·mL-1 CTGF处理后的ARPE-19细胞以及稳定表达CTGF siRNA或对照siRNA的ARPE-19细胞的增生情况.采用细胞划痕实验评估CTGF RNAi对ARPE-19细胞迁移的影响,同时测定稳定表达CTGF siRNA或对照siRNA的ARPE-19细胞中CTGF、FN、MMP-2和α-SMA的表达水平以评估CTGF对于TGFβ1诱导的EMT作用.结果 400 ng· mL-1CTGF处理组APRE-19细胞与未接受CTGF处理组细胞之间以及CTGF siRNA处理组与阴性对照siRNA组之间的细胞倍增时间均存在显著差异(均为P＜0.05).正常培养ARPE-19细胞组修复划痕的时间(≤48 h)显著少于CTGF RNAi靶向干扰处理组(≥72 h).以TGF-β1诱导EMT,CTGF siRNA处理组与阴性对照组比较,CTGF、α-SMA、FN和MMP-2表达均显著下调.此外,外源性CTGF可单独诱导ARPE-19细胞α-SMA表达增加.结论 CTGF能够促进ARPE-19细胞增生,而CTGF RNAi不但能够显著抑制其增生还可显著抑制由划痕实验引发的ARPE-19细胞的迁移.此外,CTGF可通过上调α-SMA表达水平而增强ARPE-19细胞对于TGF-β1的反应,CTGF RNAi可使TGF-β1诱导的EMT减弱.
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PDGF-α受体反义寡核苷酸治疗实验性增生性玻璃体视网膜病变
目的 探讨血小板源性生长因子α受体(platelet-derived growth factor receptorα,PDGFR-α)反义寡核苷酸治疗实验性增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的效果.方法 选择健康成年有色家兔24只(48眼),右眼分别行玻璃体内注射人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium,H RPE)稀释液(8只8眼,A组)、1.0与2.0 μmol·L-1含PDGFR-α反义寡核苷酸及LipofectamineTM2000的HRPE细胞稀释液(各8只8眼,B组和C组).左眼分别注射平衡盐溶液(balanced salt solution,BSS)0.1 mL作为正常对照组.造模后1周、2周、3周、4周间接眼底镜观察PVR程度；处死动物后,进行组织病理学观察眼底改变及免疫组织化学染色观察切片着色情况.结果 造模前后正常对照组兔眼玻璃体透明,视网膜结构清楚；造模后28 d,A组兔眼玻璃体内可见粗大增生的条索及视网膜脱离,B组和C组严重度低于A组.在造模后1周、2周,PVR分级在所有组之间差异均无统计学意义(均为P＞0.05)；在3周、4周时,B组和C组的PVR分级明显低于A组(均为P ＜0.05).造模后4周,B组TRD发生率(50％)和C组TRD发生率(38％)与A组(100％)相比,差异均有统计学意义(均为P＜0.05)；B组与C组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05).组织病理学检查显示:造模后4周正常对照组全层结构清晰,A组兔视网膜内界膜粗糙、断裂或结构不清,各层结构欠清,神经节细胞水肿,出现空泡,数量减少,B组和C组严重度低于A组.免疫组织化学检查显示:A组视网膜全层细胞及增生的纤维组织内呈高强度棕黄色着色(++++),B组呈中等强度棕黄色着色(+++),C组呈较弱棕黄色着色(++)；正常对照组视网膜表层神经节细胞、RPE内可见弱棕黄色着色(+).结论 PDGFR-α反义寡核苷酸可降低PVR形成程度,这可能与下调视网膜细胞中PDGF-α浓度有关.
关键词： 增生性玻璃体视网膜病变 PDGF-α受体 反义寡核苷酸 兔 -
β-葡聚糖对大鼠增生性玻璃体视网膜病变的作用及其机制研究
目的 探讨β-葡聚糖对Wistar大鼠增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的影响.方法 52只Wistar大鼠随机分为空白对照组(A组)、模型对照组(B组)及β-葡聚糖高(C组)、中(D组)、低(E组)浓度治疗组.造模后B、C、D及E组分别向大鼠实验眼玻璃体内注入生理盐水、40g·L-1β-葡聚糖溶液、20 g· L-1 β-葡聚糖溶液及10 g· L-1 β-葡聚糖溶液.各组于造模后7d、14 d、21 d、28 d行裂隙灯及间接眼底镜检查；造模后28 d所有模型鼠取出眼球,制作标本并行组织病理学检查,采用免疫组织化学法检测视网膜组织中Smad7表达水平,应用ELISA法检测玻璃体液中转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)表达水平.结果 C组术后21 d、28 d PVR分级严重程度与B组差异均有统计学意义(Z=-2.392、-2.520,均为P＜0.05)；D、E组术后28 d PVR分级严重程度与B组差异均有统计学意义(Z=-3.120、-2.943,均为P＜0.05).造模后28 d时B、C、D及E组的Smad7表达光密度值分别为0.108±0.013、0.598±0.015、0.358±0.017、0.349±0.023,C、D、E组与B组差异均有统计学意义(t=-6.001、-3.062、-2.952,均为P＜0.05).造模后28 d时各组玻璃体液中TGF-β1的浓度分别为(50.11±2.15)pg·mL-1、(145.12±3.08) pg·mL-1、(85.66±2.86) pg·mL-1、(109.13±2.56)pg·mL-1、(115.16±2.18)Pg·mL-1,B、C、D、E组与A组差异均有统计学意义(t=-1163.630、-435.397、-722.844、-796.697,均为P＜0.05),B组与C、D、E组差异均有统计学意义(t=728.233、440.786、366.934,均为P＜0.05),D、E组与C组差异均有统计学意义(t=-287.448、-361.300,均为P＜0.05),E组与D组差异有统计学意义(t=-73.852,P＜0.05).结论 β-葡聚糖可能通过上调Smad7表达、降低TGF-β1水平途径抑制PVR发展,具有防治PVR的潜能.
关键词： 增生性玻璃体视网膜病变 β-葡聚糖 Smad7 转化生长因子-β -
胰岛素样生长因子结合蛋白-6对RPE细胞增殖和迁移的影响
目的 探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-6(insulin-like growth factor binding protein-6,IGFBP-6)对视网膜色素上皮(retinal pigmented epithelium,RPE)细胞增殖和迁移的影响.方法 用IGF-Ⅱ(50 mg·L-1)、PDGF( 20 mg·L-1)、VEGF(40 mg·L-1)和TGF-β(4 mg·L-1)干预ARPE-19细胞6h,以诱导细胞增殖,再加入不同浓度IGFBP-6(1 mg·L-1、10 mg·L-1、100 mg·L-1、500 mg·L-1、1000 mg·L-1)作用24h、48 h后,通过MTS实验观察OD值的变化,研究IGFBP-6对细胞增殖的影响.细胞划痕实验分为IGF-Ⅱ组(50 mg·L-1)、IGF-Ⅱ+IGFBP-6组(含IGF-Ⅱ50 mg·L-1和IGFBP-6 500 mg·L-1)、无血清培养液组的实验,细胞划痕24 h、48 h后,计算各组细胞移行愈合率的变化,从而研究IGFBP-6对细胞迁移的影响.结果 MTS比色法显示一定浓度的IGFBP-6(100 mg·L-1、500 mg·L-1、1000 mg·L-1)可以抑制IGF-Ⅱ诱导的ARPE-19细胞增殖(P＜0.05),各浓度IGFBP-6对PDGF、VEGF、TGF-β诱导的细胞增殖均无明显影响(均为P＞0.05);细胞划痕实验显示,IGF-Ⅱ组、IGF-Ⅱ+IGFBP-6组、无血清培养液组的细胞移行愈合率[分别为(24 h:43.91％±3.85％、29.76％±2.49％、26.12％±2.33％;48 h:66.09％±1.67％、59.88％±3.43％、57.05％±2.49％)]差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 IGFBP-6能够抑制IGF-Ⅱ诱导的RPE细胞增殖和迁移.
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α-平滑肌肌动蛋白在PVR增生膜中的表达以及PDGF对其在人RPE细胞中表达的影响
目的 探讨α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)增生膜中的表达以及血小板源性生长因子(PDGF)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞表达α-SMA的影响.方法 通过免疫荧光实验和免疫组化法对14例PVR患者视网膜表面增生膜(PRM)中α-SMA的表达进行定性及定量分析；用外源性PDGF-BB处理体外培养的人RPE细胞,并通过免疫荧光实验检测PDGF-BB对RPE细胞表达α-SMA的影响.结果 免疫组织化学结果显示:α-SMA在14例不同级别的PRM中均有表达,主要分布在胞浆中,但其表达的程度有差异.α-SMA阳性细胞在PVR/C级PRM膜中比率为35/80,在PVR/D级PRM膜中的比率为50/60.免疫荧光定量分析结果显示:α-SMA在C级PRM膜和D级PRM膜中的平均荧光强度分别为12.31和23.09,二者差异有统计学意义(P＜0.01).外源性的PDGF-BB(50 μg·L-1)能显著促进人RPE细胞中α-SMA的表达(50 μg·L-1 PDGF-BB处理前后平均荧光强度分别为10.08和17.23),差异有统计学意义(P＜0.05),这种促进作用在培养基中有血清存在时明显增强.结论 α-SMA在PVR增生膜中广泛表达,其表达量与PVR病变程度有关,提示α-SMA可作为检测PVR病变程度的一个潜在因子；PDGF促进d-SMA的表达,这提示PDGF在PVR发病中有重要作用,为临床上PVR的预防和治疗提出新的思路.
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培养人视网膜色素上皮细胞机械损伤后工IL-8的表达
目的 探讨视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞受机械损伤后IL-8表达情况.方法 取在6孔培养板內培养的RPE细胞,并建立机械损伤模型.待细胞铺满融合后,每孔刮除相同面积的细胞,72 h后收集培养上清液,采用ELISA试验检测培养上清液中IL-8的表达,同时用免疫组织化学方法险测RPE细胞內IL-8的表达.结果 RPE细胞在基础状态下,免疫组织化学法检测细胞內IL-8的表达,几乎不着色.经过机械(损伤刺激充分反应后,在损伤边缘的RPE细胞內IL-8蛋白质的表达呈阳性,胞浆出现浓淡不一的棕黄色着色.ELISA检测结果显示,体外培养RPE细胞在基础状态下可表达少量的IL-8.在经过机械损伤反应后,IL-8表达量显著增加,3次检测中对照和刮伤模型上清液中IL-8的浓度分别是105 x 10-12kg·L-1、965×10-12kg·L-1,108×10-12kg·L-1、990 x 10-12kg·L-1,100x10-12kg·L-1、960X10-12kgL-1,两者间有显著差异(P<0.01).结论 体外培养RPE细胞经过机械损伤反应后,IL-8的分泌和表达显著增加.提示在视网膜脱离前及脱离过程中,RPX细胞受到通过视网膜神经上皮层传导过来的机械牵拉力的作用后在损伤的修复过程中,可能会诱导IL-8的产生,从而有助于启动RPE细胞的移行及早期的炎症反应,导致PVR的发生.
关键词： 增生性玻璃体视网膜病变 视网膜色素上皮细胞 白细胞介素8 机械损伤 -
丹参单体、三氟拉嗪防治兔眼增生性玻璃体视网膜病变的实验研究
目的 评价丹参单体和三氟拉嗪对实验性兔增生性玻璃体视网膜病变( proliferative vitreoretinopathy,PVR)的防治作用.方法 有色兔81只随机分为6组:A至C组为药物防治组,E至G组为药物毒性观察组；从A至C组、E至G组中兔另一非实验眼分别选对照组:D组和H组.A至D组眼内注入视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞后分别注入三氟拉嗪、丹参单体、三氟拉嗪加丹参单体混合液、磷酸盐缓冲液；E至H组注入磷酸盐缓冲液后分别注入三氟拉嗪、丹参单体、三氟拉嗪加丹参单体混合液、磷酸盐缓冲液.通过间接检眼镜观察A至D组玻璃体混浊、视网膜脱离情况,通过间接检眼镜、光学显微镜观察E至H组视网膜病理学改变.结果 给药后1d,A组发生Ⅱ级玻璃体混浊8眼,B组Ⅱ级玻璃体混浊6眼,C组Ⅱ级玻璃体混浊7眼,D组Ⅱ、Ⅲ级玻璃体混浊各10眼,3个实验组与D组相比差异均有显著统计学意义(均为P=0.00).给药后3d,A组Ⅱ级玻璃体混浊3眼,B组及C组未见发生Ⅱ级及以上玻璃体混浊,D组Ⅱ级玻璃体混浊10眼、Ⅲ级玻璃体混浊6眼,3个实验组与D组相比差异也均有统计学意义(均为P=0.00).给药后5d,A组、B组及C组均未见发生Ⅱ级及以上玻璃体混浊,D组Ⅱ级玻璃体混浊8眼,3个实验组与D组相比差异均有统计学意义(均为P ＜0.05).给药后5d,D组Ⅱ级PVR 8眼、Ⅲ级PVR 2眼,3个实验组无PVR发生,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).给药后7d,D组Ⅱ级PVR 14眼、Ⅲ级PVR6眼,各实验组无PVR发生,差异也均有统计学意义(均为P＜0.05).给药后14 d,A组Ⅱ级PVR 3眼,B及C组各有Ⅱ级PVR2眼,D组Ⅱ级PVR2眼、Ⅲ级PVR 16眼、Ⅳ级PVR2眼；3个实验组与D组相比差异均有统计学意义(均为P=0.00).给药后21 d,D组Ⅲ级PVR 12眼、Ⅳ级PVR 8眼；3个实验组PVR发生情况无变化,3个实验组与D组比较差异均有统计学意义(均为P=0.00).给药后28 d,D组Ⅳ级PVR 14眼、Ⅲ级PVR 6眼,3个实验组PVR发生情况无变化,所有实验组与D组比较,差异也均有统计学意义(均为P =0.00).E至H组在整个观察期内未见毒性病理学改变.结论 三氟拉嗪、丹参单体、三氟拉嗪与丹参单体联合可有效预防实验性PVR.
关键词： 增生性玻璃体视网膜病变 丹参单体 三氟拉嗪 药物防治/联合应用 -
玻璃体腔注射人PRP联合巩膜外冷冻建立PVR动物模型的研究
目的 探讨玻璃体腔内注射人富含血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)联合巩膜外冷冻建立增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)动物模型的效果.方法 选取青紫蓝兔52只,随机分成实验组及对照组,每组各26只,每只兔随机选取一眼作为实验眼.取健康体检者静脉血制备PRP.暴露实验眼(贝贝贝页)上方巩膜,于角膜缘后3.5 mm行巩膜切开,剪除玻璃体约0.5 mL,实验组玻璃体腔注射PRP 0.4mL,同时联合巩膜外冷冻;对照组单纯行玻璃体腔注射PRP 0.4mL.分别于造模后1d、3d、7d、14 d、28d行裂隙灯、间接眼底镜及B超观察玻璃体增殖及视网膜脱离情况,并进行PVR分级.分别于造模后7d、14 d及28d每组随机选取2只兔摘除眼球行组织病理学检查.结果实验组和对照组造模后28d视网膜脱离的发生率分别为95％和65％,2组成模率比较,差异有统计学意义(x2=3.906,P=0.048).临床和B超观察:实验组造模后1d出现明显玻璃体混浊、3d出现玻璃体增殖条索、7d出现局限性视网膜脱离、14 d广泛视网膜脱离、28 d全视网膜脱离:对照组造模后1d玻璃体轻度混浊、3d出现明显玻璃体混浊、7d可见少量玻璃体增殖条索、14d出现局限性视网膜脱离、28 d有广近视网膜脱离发生.病理组织学观察:实验组造模后7d视网膜表面炎性细胞聚集、成纤维细胞增生,14 d视网膜前增殖条索、视网膜皱褶,28 d视网膜固定皱褶形成、呈花节样外观；对照组造模后7d视网膜表面见炎性细胞及渗出,14 d视网膜表面增殖膜,28d视网膜表面增殖条索出现.结论 玻璃体内注射人PRP联合巩膜外冷冻建立PVR动物模型简便有效、成模率高,可作为PVR相关基础研究的建模方法.
关键词： 人富含血小板血浆 增生性玻璃体视网膜病变 玻璃体内注射 动物模型 -
雷帕霉素靶分子信号转导通路在增生性玻璃体视网膜病变中的表达及意义
目的 探讨雷帕霉素靶分子(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号转导通路在增生性玻璃体视网膜病变中的表达及意义.方法 用RT-PCR、Western-blotting方法检测正常视网膜组织和增生膜组织中mTOR、p70S6k和4E-BPI的mRNA及蛋白的表达.结果 与正常视网膜组织相比,在增生膜组织中mTOR、p70S6k的mRNA及蛋白表达增加,4E-BP1 mRNA及蛋白表达减少,差异均具有统计学意义.结论 激活的mTOR信号通路可能是促进增生性玻璃体视网膜病变形成的重要因素之一.
关键词： 雷帕霉素靶分子 增生性玻璃体视网膜病变 视网膜色素上皮细胞 -
激肽原1作为增生性玻璃体视网膜病变血清分子标志物的验证
目的 验证激肽原1是否可以作为增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreo-retinopathy,PVR)的血清分子标志物.方法 收集PVR患者A、B、C、D级玻璃体(n=8)和相应的PVR患者术前和术后6个月血清样本(n=20),正常捐献眼玻璃体样本(n=8)和健康体检者血清(n=20)做正常对照,PVR术后不同状态的血清样本,包括环扎术后未愈者(n=8)和硅油眼(n=8).对玻璃体和相应的血清样本分别进行激肽原1的蛋白质印迹法(Western blotting)分析和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosor-bent assay,ELISA).结果 Western blotting分析显示激肽原1在PVR患者玻璃体和血清中均可检测到,而在正常捐献眼和正常人的血清中未检测到,且在PVR C、D级中明显高于PVR B级.激肽原1可以在所有的PVR患者玻璃体和血清样本中检测到(24/24,100%).EUSA显示严重PVR(C、D级合并)患者激肽原1浓度玻璃体中为(281.0±63.0)μg·L-1,血清中为(499.8±153.8)μg·L-1,明显高于轻度PVR(A、B级合并)患者[玻璃体:(237.5±32.1)μg·L-1,血清:(402.8±85.5)μg·L-1],二者差异有统计学意义(P<0.05).PVR患者术后6个月血清中激肽原1明显下降至(81.9±18.6)μg·L-1(P<0.05),仍高于正常对照组(57.9±8.9)μg·L-1(P<0.05).但环扎术后未愈者血清中激肽原1浓度(116.8±45.1)μg·L-1明显高于正常对照组和硅油眼(51.6±14.1)μg·L-1(P<0.01),亦高于玻璃体切割术后6个月PVR患者(P<0.05).结论 激肽原1是PVR患者玻璃体和血清的特异蛋白质,且与PVR的严重程度和预后评估相关,显示了作为PVR血清分子标志物的可能性.
关键词： 增生性玻璃体视网膜病变 分子标志物 蛋白质组学 激肽原l -
增生细胞核抗原核酶对兔视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用
目的 探讨增生细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)核酶(ri-bozyme,Rz)对PCNA表达及细胞增生的影响,为进一步基因治疗增生性玻璃体视网膜病变提供实验基础.方法 设计构建针对PCNA的锤头状核酶(PCNa-Rz),通过阳离子脂质体Lipofectamine 2000介导转染体外培养的视网膜色素上皮细胞(经此处理的为Rz载体组),观察其在细胞中的分布,应用3H-TDR掺入实验及四甲基偶氮唑盐比色实验检测细胞增生及活性,应用免疫组织化学技术检测细胞内PCNA表达水平,并设立裸Rz组、空载体组和对照组进行对照研究.结果 在脂质体介导下PCNα-Rz可成功转染培养的视网膜色素上皮细胞,较裸PCNα-Rz转染效率明显增高;Rz载体组细胞增生活性显著低于裸Rz组、空载体组及对照组,细胞生长抑制率显著提高(81.2%);Rz载体组细胞PCNA表达水平(9.2±1.3)%显著低于裸Rz组(27.5±4.3)%、空载体组(37.4±5.2)%和对照组(4.6±5.8)%,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01).结论 PCNα-Rz能显著抑制培养的兔视网膜色素上皮细胞中PCNA的表达,降低细胞的增生活性,此项技术有望应用于人眼并可能成为防治增生性玻璃体视网膜病变的有效手段.
关键词： 增生细胞核抗原 核酶 视网膜色素上皮细胞 增生性玻璃体视网膜病变 -
逆转录病毒载体携带报告基因在色素上皮细胞的转染与表达
目的 观察逆转录病毒载体携带报告基因在视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的表达情况,以探讨基因疗法用于抑制增生性玻璃体视网膜病变的可行性.方法 选第3～4代培养的已长满融合的RPE细胞,以1:3的分种率分种传代.随机分为对照组与实验组,每组12孔.实验组用绿色荧光蛋白基因作为报告基因,以逆转录病毒载体携带来转染RPE细胞,重组合绿色荧光蛋白基因的逆转录病毒上清液浓度为1.2×109 cfu·L-1.对照组RPE细胞以同样方法直接转染绿色荧光蛋白基因质粒DNA.观察绿色荧光蛋白基因在2组RPE细胞的表达情况.结果 基因转染后可见实验组RPE细胞的绿色荧光蛋白基因表达率可达56%～72%,对照组未见有任何表达.结论 逆转录病毒载体可以携带目的基因转染于RPE细胞,并达到较高的转染率.
关键词： 视网膜色素上皮细胞 增生性玻璃体视网膜病变 报告基因 基因治疗
