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普通墨汁对中、小血管行荧光染色
自发荧光的生物物质或经荧光染料标记的物质可在荧光显微镜下发荧光.但市售普通墨汁对组织结构可行荧光染色,经查未见报告.我们给小鼠、大鼠、幼兔注射普通墨汁,分别取肺、肾、肝、肠系膜,均可见其中、小血管显现很强的黑色荧光,其他组织无荧光.碘化钾对血管荧光有很强的猝灭作用.现报道如下:1 材料与方法1.1 材料 (1)A液即市售普通墨汁原液.(2)B液取墨汁100ml,明胶3g,隔水加温,使明胶溶解于墨汁中即成.(3)C液蒸馏水100ml,明胶3g,加温溶解.1.2 动物实验动物分三组,每组小鼠、大鼠、幼兔各一只.1.3 方法小鼠、大鼠均断颈处死,幼兔耳静脉空气注射处死.迅速开胸,从心脏作全身注射.第一组注入A液,第二组注入B液,第三组注入C液.20min后取材,所有动物分别取肺、肾、肝、肠系膜,10%福尔马林固定24hr.肺、肾、肝行常规石蜡切片, 片厚15μm.肠系膜行铺片.常规二甲苯脱蜡封片.另取A组肾切片分别浸0.01%、 1%碘化钾5sec、5min,烘干后封片.荧光显微镜(激发滤片BG12,阻断滤片 535)及普通光镜观察.2 结果与分析2.1 在普通光镜下,墨汁组和墨汁明胶组的各器官组织中、小血管均清晰可见,但以墨汁明胶组效果略好.而明胶组则看不到血管(肠系膜上较粗血管肉眼可见除外).2.2 荧光显微镜观察,墨汁组各器官中、小血管呈现很强的黑色荧光,墨汁明胶组强度较弱,单纯明胶组根本不可见.2.3 碘化钾对血管荧光有很强猝灭作用,当切片经过不同浓度的碘化钾后其血管均不显荧光,其他组织亦无荧光.2.4 普通墨汁有市售,经济易得,荧光强度大,保持时间长.我们有保存十多年的切片, 其荧光强度几乎未减.利用其行荧光染色,有一定实用价值.
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FISH产前诊断一例特殊易位型先天愚型儿
患者女，36岁，结婚10年。第1胎生一先天愚型儿，核型为46，XY，-13,t(21;13)(21pter→21cen→21q22∷13q11→13qter)。因第2次怀孕，妊娠19+1周，要求产前检查就诊。在B超定位下，常规消毒，抽取羊水15 ml，12 ml羊水培养，3 ml做FISH。FISH采用不培养的羊水细胞。探针选用美国VYSIS公司提供的21号染色体特异性探针，荧光染色为桔红色(LSI21 Spectrum orange)。羊水细胞制片及杂交方法按VYSIS提供。杂交结果于24～48 h后用NIKONE-1000型荧光显微镜观察，AI图像分析仪分析结果，激发光滤片使用E×450-490。共统计200个羊水细胞，杂交率为85%，在杂交的羊水细胞中，有3个桔红色杂交信号者占88%，两个杂交信号者占12%，且多数为其中一个杂交信号较大，可能是两个信号重叠在一起。诊断为先天愚型。在FISH检查出结果后15天，羊水培养结果显示胎儿核型为46，XY，-13,t(21;13)(21pter→21cen→21q22∷13q11→13qter)。孕妇即在当地引产，胎儿呈典型先天愚型儿貌。
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组织工程肌腱保存过程中细胞存活率研究方法初步探讨
目的探讨组织工程肌腱保存过程中细胞存活率研究的方法. 方法采用碘化丙啶(PI)将第4代人成纤维细胞的死细胞染色,双苯并咪唑染料(Ho)染色活细胞后经适当波长紫外光激发,分别产生红色荧光和蓝色荧光,利用流式细胞仪区分活细胞和死亡细胞;将组织工程化肌腱种子细胞悬液4 ml(6.0×105个/ml)平分成两管,其中一管反复冻融,将细胞冻死;另一管不冻.再将两管细胞按不同比例混合,采用荧光染色流式细胞仪分析,研究其量效关系;并用荧光摄影,图像分析,即刻及2小时荧光标记到流式细胞仪,检测对细胞存活率的影响. 结果荧光染色流式细胞分析可反映加入冻融死细胞比例与存活细胞的量效关系,即细胞存活率与未冻融细胞和冻融细胞比例分别成正、负相关,相关系数r=0.970(P＜0.05);荧光摄影后图像分析也显示了同样的量效关系,r=0.982(P<0.05);荧光标记后2小时检测比即刻检测细胞存活率降低,但差异无统计学意义(P>0.05);通过荧光显微镜可直接观察组织工程化肌腱上的细胞. 结论 PI和Ho荧光染色后流式细胞仪分析及荧光摄影是组织工程肌腱保存过程中细胞存活率研究的较好方法.
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无血清神经基质培养基培养纯化的视网膜神经节细胞
目的建立无血清培养基培养纯化原代视网膜神经节细胞(RGCs)的方法,为研究青光眼等引起的RGCs损伤及防护提供理想的细胞模型.方法出生后1～3 d的SD大鼠视网膜细胞悬液,分别经抗大鼠信号调节蛋白(CD172G)单克隆抗体筛除巨噬细胞、抗大鼠Thy-1单克隆抗体筛选RGCs的两步筛选法,得到纯化的RGCs.用加入B27、睫状神经营养因子等的无血清神经元专用神经基质(neurobasal)培养基进行培养,通过细胞形态学观察、Thy-1免疫荧光细胞化学染色、钙黄绿素-乙酰乙酸酯(AM)染色等方法观察原代培养的视网膜神经细胞及纯化培养的RGCs生长并进行鉴定.结果原代培养的视网膜细胞中约91%为神经细胞.纯化培养的RGCs接种后24 h有突起长出;第4～8天可见细胞形态均一,细胞体较大,细胞突起较长;至第14天,仍有超过60%的细胞有活性.Thy-1的免疫荧光细胞染色结果显示RGCs纯度约为90%.钙黄绿素-AM染色存活的RGCs,结果显示RGCs细胞体较大,多数细胞有长度大于细胞体直径2倍的突起.结论该方法培养的RGCs大小均一、形态理想、纯度高,适宜研究各种因素引起的RGCs损伤及保护剂效果评价.
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双眼碱性电池爆炸伤1例
患者女,14岁,因双眼爆炸伤后疼痛、异物感、视力下降5小时入院.院外已用生理盐水冲洗双眼.检查:VOD手动/30cm,VOS数指/50cm,双眼睑水肿,球结膜充血,角膜上皮片状剥脱,角膜浑浊、水肿,少许异物存留,球内未见异常.入院后再次用0.9%生理盐水冲洗双眼,然后在显微镜下挑出角膜表面存留异物,两次双眼球结膜下注射维生素C0.1g,滴用0.25%润舒眼液,涂以0.5%红霉素眼膏,双眼包扎,并给予贝复舒眼液促进角膜上皮增生修复,全身给予抗菌素抗感染治疗.5日后,患者双眼睑肿胀、结膜充血消退,角膜上皮修复,浑浊、水肿消退,荧光染色阴性,眼底检查未见异常.查右眼视力0.1,矫正1.0,左眼0.3,矫正1.0.痊愈后出院.
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成人麻疹并发双眼角膜炎1例
患者,男性,26岁.因发热6天,全身性皮疹3天,肝功:ALT 155U/L,AST 128U/L,心肌酶谱:LDH334U/L,HBDH 462U/L入院.诊断为麻疹并心肌炎.住院治疗第2天出现双眼红肿、畏光、流泪,伴脓性分泌物,用润舒眼液无效,遂请会诊.体检:T39.3℃,P106次/分,面颈、躯干、四肢、手、足心可见红色斑丘疹,部分融合,疹间皮肤正常,皮疹压之褪色,双侧颊粘膜可见费柯氏斑.眼部检查:双眼睑红肿,不愿睁眼.裂隙灯检查:双眼结膜囊可见部分脓性分泌物,球结膜混合充血(卅),重度水肿.双眼角膜上皮水肿,可见弥漫性分布的点、片状灰白浸润、边界欠清晰、稍隆起,部分深及角膜实质层,荧光染色(+).前房深度正常,KP(一).双瞳孔圆,光反射好,眼底正常.诊断:麻疹并发双眼角膜炎.
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大链壶菌细胞核的初步研究
采用组织化学、荧光染色、透射电镜和小培养跟踪观察的方法对大链壶菌细胞核进行了初步研究,观察到该菌细胞核的形状、数目和其在细胞内的位置,以及游动孢子萌发过程中的核支持运动情况,为了解该菌的遗传结构进行初步的基础工作.
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抗酸杆菌两种染色方法的比较
结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性全身性传染疾病.结核杆菌主要通过呼吸道、消化道和损伤的皮肤粘膜等多种途径感染机体,引起多种组织器官的结核病,其中以肺结核为多见,严重危害人类健康[1].
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UF-100全自动尿沉渣分析仪对红细胞检测的影响因素分析
尿沉渣有较高的临床价值,但传统镜检方法存在费时、误差大、重复性差、不能定量,受人为因素影响,难进行室内质控等缺点.UF-100型尿沉渣分析仪(以下简称UF-100)是对尿样直接作荧光染色后,利用流式细胞原理对尿中有形成分进行分析和计数.它具有操作简便、重复性好等特点.但我们工作中发现尿中细菌、结晶等存在均可影响红细胞的测定[1,2].为提高尿沉渣检验质量,我们作了UF-100、干化学、显微镜检查法三种检验方法进行比较,现报告如下.
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一种对组织工程支架材料上细胞的非特异性荧光染色方法的建立
目的 采用以吖啶橙作为荧光染料,对生长在不透光性材料上的细胞进行染色,并建立染色方法,探讨其在组织工程学研究中的应用价值.方法 将骨髓间充质、牙髓、牙周膜3种组织来源的干细胞作为种子细胞,调整细胞浓度为1×104/ml,分别接种到钛片、β-磷酸三钙生物陶瓷、牙骨质片三种组织工程支架材料上.待细胞长满支架材料后,应用不同浓度及pH值的吖啶橙染液对细胞进行染色,采用荧光倒置显微镜进行观察.结果 0.1 g/dl浓度、pH7.2的吖啶橙染液细胞染色荧光信号强、背景染色信号弱,染色后能清晰地观察到支架材料上的绿色荧光细胞.结论 吖啶橙可作为组织工程支架材料上种子细胞的一种染色方法,该方法操作简单易行、费用低廉,在组织工程学研究中有着重要意义.
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UF-100电导率为零的故障修复
我科于2008年1月引进日本Sysmex公司生产的UF-100全自动尿沉渣分析仪,该仪器采用流式细胞和电阻抗原理,通过荧光染色、电阻抗及散色光强度得出细胞形态、细胞横截面积、染色片断长度和细胞容积等信息,从而获得客观、可靠的定量数据,不受人为因素影响,结果具有可比性,实现了尿常规检测的标准化.该仪器具有很高的的灵敏度、准确度和重复性.但在日常工作中由于操作不规范或保养不够,会造成各种故障,而能够及时准确地查明原因、捧除故障是我们工作效率的关键,科室自引进仪器以来共排除1例主要故障,现总结如下,以共同行参考.
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UF-100尿沉渣分析仪常见故障及排除
UF-100全自动尿沉渣分析仪是日本东亚公司生产的尿有形成分分析仪.UF-100专为临床实验室的尿液体外分析而设计,结合了流式细胞学技术和电阻抗测定法对尿液成分进行直接鉴别及计数.对尿液作荧光染色后,将染色的有形成分加压使其通过流室的小孔,用激光对其进行照射,以激光散射强度、散射幅度和荧光波幅度技术及电阻抗信号大小,识别和计数尿液中红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、细菌、结晶、精子及酵母菌等;并对红细胞作形态分类(分为均一型、非均一型及混合型三种),有助于判别血尿出血部位,还提供渗透压参数,实现尿液标本有形成分的定量分析及尿液的标准化.我科于2003年6月购进该仪器,现就我们在使用该仪器的过程中遇到的一些常见故障及其排除的方法总结如下,供同道参考.
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UF-100流式尿沉渣细胞分析仪常见误差原因及分析
UF-100尿沉渣分析仪是由日本Sysmex公司生产的采用流式细胞原理,尿沉渣经荧光染色后,经气体激光检测产生散射光、荧光、阻抗等五种信号,经电脑处理后,可直接精确定量计数尿中的红细胞、白细胞、上皮细胞、细菌.
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荧光显微镜摄影技术
当前在组织细胞学的实验研究中，广泛地应用着利用抗原-抗体反应的免疫组织化学(Immunohistochemistry)技术进行对组织、细胞内活性物质的定位和对它们的存在状态的观察。而免疫组织化学方法又包括着荧光抗体法、酶抗体法、重金属标记抗体法等。这些方法中，荧光抗体法(Immunoflu-orescence)是用荧光物质标记的抗原-抗体反应的方法，近年来由于新的荧光标记物质的出现和染色技术的发展，可以用多种荧光色素标记而作成多重荧光染色标本。由于在多重荧光染色的标本上，使用了多种荧光标记物质，可以在同一标本上获取多种信息，因而，目前用荧光抗体方法进行多重荧光染色已成为常用的研究手段。 另一方面，由于用荧光抗体法所进行的标本观察及记录(照相)都需在荧光显微镜下进行，所以在荧光标本上所获得的信息，是以荧光色素固有的色光(荧光)表现出来的。为了准确地观察记录实验结果，必须备置高性能的荧光显微镜以及与各种荧光色素相适应的配套滤色镜。但是，当使用这些高性能的仪器时，还必须具备：有关标记用的荧光色素以及荧光染色标本制作、滤色镜系统、显微镜照相技术和照片处理技术等各方面的必备的知识。 本文仅对荧光显微镜摄影中所需要的基本的理论和照相时所需要的一些知识做扼要的介绍。
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儿童面部毳毛癣皮肤镜、荧光染色及扫描电镜观察1例
患儿女,4岁.临床表现以淡红斑为主,未见明显鳞屑或脓疱,首次在皮肤镜下发现病变毳毛长度较短,且发生弯折和不规则卷曲,病变毳毛在荧光染色后在荧光显微镜和扫描电镜下可见大量菌丝和孢子形成菌鞘,包绕毳毛根部,分子生物学鉴定该病原菌为太田节皮菌(犬小孢子菌有性期).诊断:儿童面部毳毛癣.
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精准皮肤诊疗室——皮肤镜显微镜工作平台
建立皮肤镜-显微镜工作平台,将临床诊断、实验室检查和治疗等环节有机整合,是皮肤疾病精准诊疗的关键.“精准皮肤诊疗室”将诊断室、病原体检查室、病理室等相关功能集中、浓缩与结合,一体化同步完成,主要设备为皮肤镜和显微镜,初衷和终目的是建立一支学习性临床研究团队.“精准皮肤诊疗室”从概念到实践不断完善其内涵.
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皮肤镜在真菌病诊断中的应用
皮肤镜可以直接放大观察皮肤损害、识别细微皮损线索,协助皮肤科医师确立临床诊断并进一步作为疗效监测的手段,目前已越来越广泛应用于皮肤科临床实践.真菌性皮肤病临床表现多样,涉及病种多.皮肤镜在皮肤真菌病的诊断和治疗中可以广泛应用.
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盐酸四环素在根管治疗术中用药的组织实验研究
目的:用组织化学和动物实验方法观察盐酸四环素根管给药后局部组织的反应,探讨其作为根管治疗术用药的前景.方法:荧光显微镜观察.结果:经盐酸四环素处理的根管,近髓端1/3～1/2处的牙本质小管可见四环素特有的荧光染色像.动物实验各期置入体及其周围组织中均可见四环素荧光染色像.结论:盐酸四环素可作为感染根管、牙髓、根尖周等疾病的局部治疗用药.
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UF-100型全自动尿液沉渣检测仪测定参考范围调查
目的确定UF-100型全自动尿液沉渣检测仪检测健康人尿沉渣检测的参考值范围.方法用UF-100型全自动尿液沉渣检测仪随机检测520例健康人不离心尿液标本,对尿液沉渣进行分析.结果尿液中红细胞(RBC)、白细胞(wBC)、上皮细胞(EC)、管型(CAST)各年龄组之间检测值经F检验,差异无显著意义(P>0.05),但男、女性别之间差异有显著意义(P<0.05).结论尿液RBC、WBC、EC的多少与年龄无关,但与性别有关.健康人参考值的确立,为尿液常规检验定量标准化和临床应用提供了依据.
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紫外线照射致眼部损伤五例
2001年4月～2002年10月,笔者单位共有5例患者因误开紫外线灯照射致眼部损伤,其中男4例、女1例,年龄23～48岁.患者在凌晨因畏光难以入睡,误将紫外线灯打开,照射30～45 min后患者自觉双眼刺痛、流泪、有异物感,且逐渐加重.3～4 h后值班护士察觉并立即关掉紫外线灯.查体:患者眼周皮肤发红,结膜充血、水肿,角膜荧光染色见点状着色,瞳孔对光反射痉挛性缩小,视力未下降,身体其他裸露部位未见明显紫外线损伤.给予眼部冷敷、氯霉素眼药水滴双眼,3～4 d后5例患者眼部紫外线照射伤均痊愈.
