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复方利多卡因在自然分娩中的应用
会阴阴部神经阻滞麻醉,可减轻分娩过程中由于产道和盆底扩张及外阴手术所致的疼痛,使会阴阴道松弛,缩短第二产程[1].而复方利多卡因是盐酸利多卡因与薄荷脑等的灭菌稀醇溶液,利多卡因可与神经细胞膜钠通道轴浆内侧受体相互作用,阻断钠离子内流,可逆性阻滞神经纤维的冲动传导,具有作用快、弥散广、穿透力强、无明显扩张血管作用.
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亚甲蓝与盐酸利多卡因联合治疗肛肠术后疼痛200例临床疗效
手术因其解剖因素,疼痛剧烈,并且持续时间长,现虽然止痛方法众多,但理想的止痛方法却很少.应用亚甲蓝与盐酸利多卡因联合对肛肠手术后进行止痛,取得了良好的止痛效果,现综述如下.由于亚甲蓝与神经组织有较强的亲和力,可腐蚀神经纤维的髓质并发生可逆性的损坏,使局部感觉迟钝、括约肌松弛、痛觉减轻或消失,从而达到持续镇痛的目的[1].利多卡因是一种酰胺类局麻药,可与神经细胞膜钠通道轴浆内侧受体相互作用,阻断钠离子内流,可逆性阻滞神经纤维的冲动传导,二者联合使用止痛效果较好.
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SCN1A基因突变导致部分性癫痫伴热性惊厥附加征的分子特性分析
目的 探讨部分性癫痫伴热性惊厥附加征(Partial epilepsy with febrile seizures plus,PEFS+)的分子特性.方法 在PubMed数据库进行全面检索,收集2000年1月-2014年12月所有已报道的与癫痫相关的SCN1A基因突变,建立一个全面的SCN1A突变数据库.统计PEFS+的突变位点,分析其在α亚基上的分布特点,并对PEFS+和婴儿重症肌阵挛性癫痫(SMEI)的分子特征进行比较.结果 数据库收录了来源于1 727例患者的1 257个SCN1A基因突变.PEFS+患者中筛查出30个SCN1A基因突变;其中错义突变23个(76.7％),11个(47.8％)位于孔区.统计表明,截短突变的比例在PEFS+和SMEI中有统计学意义(P＜0.05);孔区的错义突变所占的比例在两者之间无统计学意义,但位于孔区的错义突变的D值在两者之间有统计学意义(P=0.042).结论 PEFS+的临床和生理学特征都不同于全面性癫痫伴热惊厥附加征和SMEI,可能是SCN1A突变引起的一种特殊表型的癫痫.
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滇黄芩总黄酮对豚鼠心肌细胞电压依赖性钠通道电流的影响
目的:研究滇黄芩总黄酮(totla flavonoid)对豚鼠心肌组织电压门控性钠通道的影响.方法:成年豚鼠,肝素抗凝后,腹腔麻醉,断头处死,迅速取其心脏,进行Langendorff灌流,先用无钙台式液灌流10 min,再以Ⅰ型胶原酶溶液灌流心脏,待心脏基本变软后剪取心室部分,制备单个心室肌细胞.分离出的豚鼠心肌单细胞,用全细胞电压钳技术记录电压依赖性钠电流进行研究.结果:滇黄芩总黄酮能可逆性抑制钠电流,其半数抑制浓度(IC50)为106 mg·L-1(95％的可信限是92 ～112 mg·L-1).滇黄芩总黄酮并不影响钠通道激活开放的刺激电位阈值、大激活电位值和反转电位值,但能使可激活开放的钠通道明显减少,钠离子电流明显衰减,可引出的钠电流在-40 mV处较正常组减少45.6％.细胞外给予滇黄芩总黄酮小影响钠通道激活曲线:对照组与106 mg·L-1的滇黄芩总黄酮组的半激活电压(V1/2)分别为(-50.4±1.7)mV和(-50.1±3.1)mV(n=6差异无统计学意义).细胞外给予滇黄芩总黄酮可影响钠通道失活曲线,106 mg·L-1的滇黄芩总黄酮对电压依赖性稳态失活钠电流会引起一个大约12 mV的负向漂移,延缓失活钠通道的恢复:对照组与106 mg·L-1的滇黄芩总黄酮组的V1/2分别为(-69.4±1.6)mV和(-79.3±3.2)mY(n=7,P＜0.05),两者间的差异有显著性意义,斜率分别为(-8.2±0.9)mV和(7.1±0.7)mV.细胞外给予滇黄芩总黄酮也可影响失活钠通道的恢复,使钠通道的复活时间常数显著延长:对照组和106mg·L-1的滇黄芩总黄酮组的时间常数分别为(15.6±6.3),(29.8±14.8) ms(n =6,P＜0.05),差异有显著性意义.结论:滇黄芩总黄酮可阻滞豚鼠心肌细胞钠通道,是稳定的豚鼠心肌组织钠通道阻断剂.
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益气升陷复方注射液对大鼠及豚鼠心室肌细胞钠、钾电流的作用
目的:观察益气升陷法对单个心室肌细胞钠电流和钾电流的作用.方法:采用膜片钳技术观察益气升陷法对豚鼠及大鼠单个心室肌细胞钠和钾电流的影响.结果:益气升陷法能够减少内向整流钾电流(Ik1) 、瞬时外向钾电流(Ito)和钠电流(INa)峰值,对延迟整流钾电流没有影响(Ik).结论:益气升陷法抗心律失常的作用可能是通过对INa、Ik1和Ito的抑制而延长动作电位时程来实现的.
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苦参碱对豚鼠心室肌细胞动作电位及钠通道的影响
目的:观察苦参碱对豚鼠心室肌动作电位及钠通道的作用,探讨其抗心律失常的作用机制.方法:采用标准微电极记录技术记录动作电位,采用膜片钳全细胞记录技术记录通道电流.结果:苦参碱(10μmol/L；50μmol/L; 100μmol/L)浓度依赖性延长APD50和APD90降低APA(n=8);乌头碱明显延长APD50和APD90,苦参碱(100μ mol/L)能逆转乌头碱对动作电位的过度延长作用(n=7)；苦参碱(50μmol/L)抑制INa,与对照组相比,其INa电流密度在-45mV时从(-65.14±4.2)pA/pF降低到(-46.39±4.8)pA/pF(n =10).结论:苦参碱能逆转乌头碱对动作电位时程的延长作用并能抑制INa.
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他莫昔芬抑制胶质瘤细胞系SHG-44增殖及钠通道电流
目的 研究他莫昔芬对SHG-44胶质瘤细胞的增殖及其细胞膜上钠通道电流的作用.方法 用四唑盐比色试验分析细胞活性,通过流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡.以全细胞膜片钳法记录SHG-44细胞的钠通道电流.结果 加入他莫昔芬后,SHG-44细胞变老、脱落,细胞总数减少.他莫昔芬组G2/M期细胞较对照组增多,凋亡细胞比例增加.钠通道电流特性为内向电流、快速激活失活.他莫昔芬可剂量依赖性及电压依赖性阻断该电流.在0 mV时,8 μmol/L他莫昔芬对钠通道电流抑制率为69%.半数抑制浓度(IC50)为5.54 μmol/L.结论 他莫昔芬可明显阻断SHG-44胶质瘤细胞上的钠通道,这可能是其抑制胶质瘤细胞增殖的机制之一.
关键词： SHG-44胶质瘤细胞 钠通道 膜片钳技术 他莫昔芬 -
慢性房颤患者心房肌细胞钠通道的变化
目的 研究慢性房颤病人心房肌细胞钠通道电流特征及其基因表达.方法 膜片钳全细胞技术记录风湿性心脏病慢性房颤者和窦性心律者心房肌细胞钠通道电流;半定量反转录聚合酶链式反应测量心房肌细胞钠通道α亚单位基因(SCNSA)mRNA的表达.结果 (1)与窦性心律相比,慢性房颤病人钠通道电流密度和恢复动力学无改变,钠通道电压依赖性失活曲线向更正的方向偏移;(2)慢性房颤病人基因表达无改变.结论 慢性房颤病人心房传导速度的减慢不是由于钠通道电流的减小所致.
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兔内、中、外层心室肌细胞的快钠电流
目的探讨兔心室肌快钠通道的跨壁异质性.方法以酶解法分离兔心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术观察内、中、外3层心室肌细胞快钠电流(INa)的活性及动力学差异.结果 3层细胞的INa电压依赖性相似,但峰电流值不同,中层细胞大,其次为内、外层细胞.分别为(pA/pF)31.46±13.72、15.89±6.64、12.16±2.26,中层细胞与内、外2层细胞相比差异显著(P＜0.05),内外两层细胞无显著差异.内、中、外3层细胞失活半电压分别为(mV) -93.82±4.64(n=16cells),-103.00±8.67(n=15cells),-97.38±5.42(n=14cells),中层细胞与内层细胞相比差异显著;中层细胞与外层细胞及内层细胞与外层细胞相比无显著差异.3层细胞的INa灭活后恢复曲线无明显差异.中层细胞与内、外2层细胞的INa活性存在明显差异.结论以上结果可能是构成心律失常发生的解剖学基础,也可能是I类抗心律失常药在3层细胞作用不同的原因.
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疼痛的分子生物学研究新进展
疼痛做为一种慢性疾病威胁着全球数百万患者,而目前的治疗方法效果欠佳且不良反应较多.目前已证实胶质细胞的激活参与突触前/后神经元细胞间的信号传导,并促进细胞因子、化学趋化因子、前炎性因子和肿瘤坏死因子的释放和激酶通路的信号传导,终导致神经元超兴奋性,临床上则表现为痛觉过敏或痛觉异常.因此对疼痛发病机制尤其是分子生物学机制的认识将为我们寻找新的疼痛靶向治疗方法提供希望.
关键词： 疼痛 钠通道 小胶质细胞 细胞外信号调节MAP激酶类 -
1.11胃肠平滑肌细胞的离子通道及其调制
膜片箝技术的问世促进了离子通道研究的飞速发展.但是消化道平滑肌细胞离子通道的研究相对滞后于神经和心肌等其它可兴奋细胞.1离子通道的分类胃肠平滑肌细胞的离子通道有三种类型:①电压门控通道:电压门控的钠通道、钾通道、钙通道等;②配体门控通道:乙酰胆碱受体通道、毒蕈碱受体通道、谷氨酸受体通道等;③机械门控通道:牵张敏感通道和容积敏感通道等.
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淡色库蚊(Culex pipiens Pallens)与击倒抗性(kdr)相关的钠通道基因突变
本研究采用RT-PCR技术,使用简并引物分别从淡色库蚊(Culex pipiens pallens)敏感品系和抗溴氰菊酯品系中扩增出钠通道ⅡS4～ⅡS6区域的基因片段,长度为359bp.该基因片段所编码的氨基酸与黑尾果蝇(Drosophila melanogaster)、家蝇(Musca domestica)、埃及伊蚊(Aedes aegypti)、冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)及德国小蠊(Blattella germanica)等昆虫相应区域的氨基酸序列具有较高的同源性,其同源性分别为95.8%,95.0%,100.0%,98.3%和95.0%.经序列比对,确认抗溴氰菊酯品系淡色库蚊钠通道基因在1014位点发生了突变:该位点的碱基"A"突变为"T",其对应氨基酸由亮氨酸(L)变为苯丙氨酸(F),该突变(L1014F型)在多种昆虫中较为常见.
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荧光定量PCR快速检测淡色库蚊击倒抗性相关钠通道基因突变(L1014F)
本研究的目的是采用荧光定量PCR扩增技术,建立快速检测淡色库蚊Culex pipiens pallens钠离子通道L1014位点击倒抗性(Knockdown resistance,kdr)相关点突变方法,该方法的原理是以突变位点为3′端设计两条特异性上游引物,和一条非特异下游引物组成两对引物平行双管法,用荧光定量PCR扩增快速检测淡色库蚊钠通道L1014F突变的SS,SR,RR 3种基因型.用此方法对48个北京淡色库蚊样本进行基因分型,42个样本检测结果与等位基因特异性PCR(AS-PCR)检测结果完全一致,得到SS(TTA/TTA)基因型21个,占50.0%,SR(TTA/TTT)基因型16个,占38.1%,RR(TTT/TTT)基因型5个,占11.9%,与测序结果完全一致;另外6个样本检测结果与AS-PCR检测结果不一致,测序显示:TCA(L1014S)、TTC(L1014F)突变各1株,另4株为敏感纯合子.因此,PCR SYBR GREEN 扩增灵敏度(93.75%)低于AS-PCR法(100%),但特异性较高,达100%;分析原因可能是被检测样本引物结合部位多态性较高,影响了引物的结合,而AS-PCR凭经验能完成部分结果的判断.综上所述,用PCR SYBR GREEN 扩增技术快速检测淡色库蚊的L1014F基因突变仍是一种值得采纳的等位基因分型方法.
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自然种群淡色库蚊钠通道基因全长的克隆及序列分析
本研究采用反转录多聚酶链式反应（ RT-PCR）的方法对野外采集的河北种群淡色库蚊的钠离子通道基因进行了克隆和序列分析。得到的克隆序列与GenBank中公布的序列能够吻合，说明成功克隆出淡色库蚊的钠通道基因全长，为抗性突变的研究奠定了基础。本研究在淡色库蚊钠通道基因上发现了多处氨基酸突变（A32T、 T336A、 S342P、 K535E、 L1035F、 N1595S和F1982L）和7处可变剪接。其中，包括经典的抗性突变L1014F （ L1035F）。但这些突变和可变剪接与蚊虫抗性的关系有待进一步研究。
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拟除虫菊酯对昆虫钠通道作用的研究进展
电压依赖性钠通道(voltage-dependent sodium channel)是存在于脊椎动物和无脊椎动物可兴奋细胞膜上的一种糖基化大分子蛋白,主要调控细胞膜钠离子的瞬时通透性,参与形成细胞膜动作电位的上升相,在细胞兴奋性的传导上具有重要作用,是拟除虫菊酯和许多神经毒性药物作用的分子靶标.
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钠通道基因SCN5A突变与扩张型心肌病
心脏钠通道基因SCN5A突变可以导致多种心律失常,近年研究发现该基因突变与扩张型心肌病也有关,但致病机制不甚清楚.本文通过比较与扩张型心肌病有关的多个已发现SCN5A突变的电生理特点,提出该基因突变可能通过改变细胞内钠浓度来影响细胞内钙稳态而导致扩张型心肌病;新近发现的A1180V突变携带者表现出的异常心电图,很可能为某些扩张型心肌病患者进行早期诊断,提供一种有效而简便的方法.
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两种心肌梗死模型的交感神经节神经元通道特性的对比
目的 探讨药物注射及手术结扎两种方法制造兔心肌梗死(MI)模型,在颈上神经节(SCG)的神经元通道特性方面的研究对比.方法 药物注射制造MI模型是利用异丙肾上腺素(ISO)腹部皮下注射(150 mg·kg-1·d-1,共2 d)得到.手术结扎方法是通过手术结扎左前降支完成.模型完成后通过全细胞膜片钳技术测定神经元的延迟整流钾通道和钠通道特性改变.结果 对照组、ISO注射组和手术结扎组的SCG神经元延迟整流钾通道的峰值电流密度分别为80.80±22.80 pA/pF、99.89±21.50 pA/pF和115.33±16.00 pA/pF.三者的延迟整流钾通道激活曲线差异无统计学意义.对照组、ISO注射组和手术结扎组的SCG神经元钠通道的峰值电流密度分别为-102.71±9.55 pA/pF、-144.79±24.34 pA/pF和-125.66±32.34 pA/pF.ISO注射和手术结扎均使钠通道激活曲线和失活后恢复曲线显著左移,但对失活曲线没有显著性影响.结论 通过ISO注射和手术结扎方式得到的两种MI模型,对SCG神经元通道特性的影响是一致的.因此,在进行MI后交感神经节神经元通道特性的研究时两种方法都是可靠的选择.
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研究电压门控性钠离子通道的3种细胞处理方法比较
目的 建立适用于膜片钳技术记录电压门控性钠离子通道的3种细胞处理方法并进行比较.方法 采用急性分离技术、分离脑片技术、pCMV_SCN1A质粒钙转染HEK293细胞3种方式处理细胞,镜下观察细胞形态,膜片钳记录钠通道激活情况.结果 急性分离的神经元形态正常,有较长突起；膜片钳记录封接成功率达50％以上,记录到电流的细胞膜电容为(7.56±3.47)pF(n=20),串联电阻为(10.18±4.82)MΩ(n=20).分离脑片的神经元形态正常饱满；膜片钳记录封接成功率达30％以上,记录到电流的细胞膜电容为(9.45±4.26)pF(n=10),串联电阻为(12.53±3.87)MΩ(n=10).钙转染处理的细胞完整,有立体感；膜片钳记录封接成功率约20％,记录到电流的细胞膜电容为(8.79±4.54)pF(n=10),串联电阻为(14.12±4.26)MΩ(n=10).3种细胞处理方法均能提供研究所需的钠通道电流.结论 3种细胞处理方法均可以简单、快速记录电压门控性钠离子通道,各有优缺点,适用于不同的研究需求.
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特异性等位基因PCR扩增技术检测家蝇击倒抗性相关钠通道的基因突变
城市家蝇(Musca domestica)的化学防制多以混配或复配拟除虫菊酯类杀虫剂为主,近10年来国内各城市均有家蝇对拟除虫菊酯产生抗药性的报道[1-5].昆虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性主要是击倒抗性(knockdown resistance,kdr),Farnham发现kdr在家蝇对拟除虫菊酯的抗性中具有重要作用.拟除虫菊酯的作用靶标主要是昆虫神经细胞膜上的钠离子通道[6,7],通过比较敏感、抗性及高抗性家蝇的部分及全部钠通道基因序列,发现para型钠通道Vssc1基因的L1014F(亮氨酸到苯丙氨酸)即CTT→TTT的突变和击倒抗性相关[8-10].
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β-肾上腺素能激动剂对大鼠肺泡液体的清除效应
目的 探讨β-肾上腺素能激动剂对肺泡上皮主动清除液体的效应及相关机制.方法 48只清洁级雄性SD大鼠随机数字法分成6个组[正常对照组、多巴酚丁胺组、阿米洛利(特异性钠通道阻滞剂)组、多巴酚丁胺+阿米洛利组、多巴酚丁胺+阿替洛尔(高度选择性(1-肾上腺素能阻滞剂)组、多巴酚丁胺+ICI 118,551(高度选择性(2-肾上腺素能阻滞剂)组].单核素示踪技术测定肺泡液体清除率(AFC).逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织肺泡上皮钠通道(α、β、γ-rENaC)mRNA表达.结果 (1)β2-肾上腺素能受体效应显著增加AFC:多巴酚丁胺组、多巴酚丁胺+阿替洛尔组AFC分别为(26.6±1.6)%和(25.0±4.8)%,显著高于正常对照组[(21.0±3.9)%]和多巴酚丁胺+ICI 118,551组[(21.0±4.8)%](P＜0.05).多巴酚丁胺组AFC与多巴酚丁胺+阿替洛尔组比较,差异无统计学意义(P＜0.05);正常对照组AFC与多巴酚丁胺+ICI118,551组比较,差异无统计学意义(P＜0.05).(2)阿米洛利敏感钠通道显著影响肺泡液体清除:阿米洛利组AFC为(6.0±2.8)%,显著低于正常对照组(P＜0.05).(3)多巴酚丁胺通过非阿米洛利敏感钠通道途径增加肺泡液体清除:多巴酚丁胺+阿米洛利组AFC为(10.0±2.3)%,显著高于阿米洛利组(P＜0.05).(4)多巴酚丁胺上调γ-rENaC表达:多巴酚丁胺组、多巴酚丁胺+阿替洛尔组的γ-rENaC mRNA表达分别为(0.90±0.19)和(0.90±0.09),显著高于正常对照组(0.69±0.09)和多巴酚丁胺+ICI 118,551组(0.68±0.06)(P均＜0.05).多巴酚丁胺组γ-rENaC mRNA表达与多巴酚丁胺+阿替洛尔组比较,差异无统计学意义(P＜0.05);正常对照组γ-rENaC mRNA表达与多巴酚丁胺+ICI 118,551组比较,差异无统计学意义(P＜0.05).各组间α、γ-rENaC mRNA表达比较,差异无统计学意义(P均＜0.05).(5)阿米洛利抑制多巴酚丁胺上调γ-rENaC表达:多巴酚丁胺+阿米洛利组γ-rENaC mRNA表达为(0.70±0.14),显著低于多巴酚丁胺组和多巴酚丁胺+阿替洛尔组(P均＜0.05).结论 β2-肾上腺素能激动效应增加肺泡液体清除,其机制除与上调肺泡上皮β-rENaC表达有关外,还可能与刺激非阿米洛利敏感钠通道途径有关.
关键词： β-肾上腺素能激动剂 肺泡液体清除 钠通道 大鼠
