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5-Aza-dC及TSA对人胃癌细胞株SGC-7901Runx3基因甲基化及表达水平的影响
目的:探讨5-Aza-dC及TSA对人胃癌细胞系SGC-7901中抑癌基因Runx3启动子区甲基化、mRNA及蛋白表达水平的影响.方法:单独或联合应用5-Aza-dC及TSA处理体外培养的SGC-7901细胞,提取各组细胞的DNA、RNA及蛋白质,应用甲基化特异性定量PCR法(QMSP)检测Runx3基因启动子区甲基化状态,逆转录PCR法(RT-PCR)检测Runx3 mRNA的表达,免疫印迹法(Western blotting)法检测Runx3蛋白表达水平.结果:5-Aza-dC和TSA均能降低Runx3基因启动子区的甲基化水平(5-Aza-dC组及TSA组分别为对照组的0.70倍、0.63倍),提高mRNA表达水平(0.29±0.01、0.28±0.03 vs 0.14±0.03,P＜0.05)及蛋白表达水平(0.35±0.02、0.37±0.02 vs 0.09±0.01,P＜0.05)；与单独使用5-AzadC和TSA相比,两药联合组Runx3基因启动子区甲基化水平(对照组的0.37倍)及mRNA表达水平(0.45±0.02)和蛋白表达水平(0.50±0.01)均较单药组效果更明显(P＜0.05).结论:5-Aza-dC和TSA均能逆转胃癌细胞SGC-7901 Runx3基因的甲基化水平,恢复其mRNA和蛋白表达,且具有协同作用,为5-Aza-dC和TSA应用于胃癌的临床治疗提供了试验依据.
关键词： 胃癌 甲基化 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 曲古抑菌素A RUNX3 -
5-氮杂-2′-脱氧胞苷对人肺腺癌裸鼠种植瘤的抑制作用及组织因子途径抑制物2基因甲基化状态和表达的影响
目的：探讨去甲基化药物5?氮杂?2′?脱氧胞苷（5?Aza?CdR）对人肺腺癌裸鼠种植瘤生长的抑制作用，以及对种植瘤组织中组织因子途径抑制物2（ TFPI?2）基因甲基化状态和表达的影响。方法建立人肺腺癌A549细胞裸鼠种植瘤模型，按5?Aza?CdR不同剂量分为对照组（未注射5?Aza?CdR）和实验组，其中实验组分为0．5 mg／kg组、1 mg／kg组和2 mg／kg组。比较各组裸鼠种植瘤生长的变化。采用甲基化特异性聚合酶链反应、实时定量荧光聚合酶链反应和Western blot检测5?Aza?CdR对裸鼠种植瘤组织TFPI?2基因甲基化状态、mRNA和蛋白表达的影响。结果用药28 d后处死裸鼠时，0．5 mg／kg组、1 mg／kg组、2 mg／kg组和对照组荷瘤裸鼠体重分别为（26．80±0．18）g、（26．67±0．28）g、（26．50±0．26）g和（27．12±0．38）g，差异无统计学意义（P＞0．05）。0．5 mg／kg组、1 mg／kg组、2 mg／kg组和对照组皮下种植瘤体积分别为（400．67±2．68）mm3、（285．71±2．91）mm3、（230．44±3．15）mm3和（709．22±2．87）mm3，差异有统计学意义（P＜0．05）。对照组TFPI?2基因呈完全甲基化状态，0．5 mg／kg组和1 mg／kg组呈不完全甲基化状态，2 mg／kg组呈非甲基化状态。0．5 mg／kg组、1 mg／kg组、2 mg／kg组和对照组TFPI?2 mRNA的相对表达水平分别为1．67±0．07、3．40±0．24、5．55±0．61和1．00±0．00，差异有统计学意义（ P＜0．05）。0．5 mg／kg组、1 mg／kg组、2 mg／kg组和对照组TFPI?2蛋白表达的相对水平分别为0．36±0．01、0．64±0．02、0．81±0．20和0．18±0．02，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论5?Aza?CdR能抑制人肺腺癌裸鼠种植瘤的生长，诱导种植瘤细胞TFPI?2基因的表达，其机制可能为5?Aza?CdR通过去甲基化作用使甲基化的TFPI?2基因重新表达，从而抑制人肺腺癌A549细胞的生长和增殖。
关键词： 肺肿瘤 腺癌 小鼠 DNA甲基化 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 组织因子途径抑制物2 -
5-氮杂-2′-脱氧胞苷对人乳腺癌细胞Hs578T增殖和PRDM10基因甲基化的影响
目的 分析5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对体外培养的人乳腺癌细胞Hs578T增殖的影响,及其对此细胞中PRDM10基因甲基化状态的影响.方法 分别采用浓度为0、1、3、5 μmol/L的5-Aza-CdR处理体外培养的人乳腺癌细胞系Hs578T.MTT实验检测细胞增殖情况,甲基化特异性PCR(MSP)法检测PRDM10的甲基化状态;RT-PCR和Western blot分别检测PRDM10的mRNA和蛋白表达水平.结果 MTT结果显示,5-Aza-CdR的浓度越高、处理时间越长,对Hs578T细胞增殖的抑制作用越显著.与0 μmol/L组比较,1 μmol/L组处理72 h后及3、5 μmol/L组处理48 h后,Hs578T的增殖受到显著抑制(P<0.05).MSP结果显示,5-Aza-CdR的浓度越高,对PRDM10的去甲基化作用越显著.RT-PCR和Western blot结果显示,5-Aza-CdR的浓度越高,PRDM10的mRNA和蛋白表达水平越高(P<0.05).结论 5-Aza-CdR可抑制Hs578T细胞的增殖,可能与该细胞中PRDM10基因的去甲基化作用有关.
关键词： 乳腺肿瘤 甲基化 细胞增殖 PRDM10 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 -
5-氮杂-2′-脱氧胞苷诱导胃癌细胞系中p16和MGMT基因去甲基化并激活其表达
目的 观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)对体外培养的胃癌细胞MGC-803中p16和MGMT基因启动子区DNA甲基化状态及表达的影响,探讨胃癌细胞p16和MGMT基因失活的机制及去甲基化制剂对p16和MGMT基因表达的调控.方法 5-Aza-dC处理体外培养的胃癌细胞MGC-803后,甲基化特异性PCR(MSP)法检测用药前后细胞中p16和MGMT基因的甲基化状态,RT-PCR法检测用药前后细胞中p16和MGMTmRNA表达的变化.结果 胃癌细胞系MGC-803中p16和MGMTmRNA表达缺失,其启动子区域表现为DNA甲基化.5-Aza-dC不但能使MGC-803细胞中p16和MGMT基因发生DNA去甲基化,而且能使表达缺失的p16和MGMTmRNA重新表达.结论 启动子区高甲基化是胃癌细胞p16和MGMT基因失活的主要原因之一,去甲基化制剂-5-Aza-dC能逆转p16和MGMT基因甲基化状态,从而调控p16和MGMT基因表达.
关键词： 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 p16基因 MGMT基因 胃癌 DNA甲基化 -
胃癌细胞中BNIP3基因CpG岛甲基化及其调控作用
目的：观察胃癌细胞株MKN1中BNIP3基因启动子区的甲基化状态，探讨DNA甲基化调控BNIP3表达的机制。方法应用亚硫酸氢盐修饰后克隆测序法检测MKN1细胞中BNIP3基因启动子区的甲基化状态，应用甲基化抑制剂5?氮杂?2′?脱氧胞苷（5?Aza?CdR）处理MKN1细胞，观察给药前后BNIP3 mRNA表达及启动子区CpG岛甲基化状态的改变。应用染色质免疫沉淀技术检测BNIP3基因与DNA甲基化转移酶1（DNMT1）的结合。结果 MKN1细胞中BNIP3基因启动子区呈高甲基化状态。应用5?Aza?CdR处理细胞后，药物处理组（5?Aza?CdR浓度为10μmol/L）和对照组甲基化率和BNIP3 mRNA表达的差异均有统计学意义（P<0.05）。5?Aza?CdR抑制MKN1细胞中DNMT1与BNIP3基因的结合。结论 MKN1细胞中BNIP3基因表达受启动子区CpG岛甲基化调控，DNA甲基化的发生与DNMT1和BNIP3基因结合有关。
关键词： BNIP3基因 DNA甲基化 胃肿瘤 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 -
HIC-1基因在乳腺癌的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨癌高甲基化1(hypermethylated in cancer 1,HIC-1)基因在乳腺癌组织中的表达,以及恢复HIC-1基因表达对乳腺癌细胞增殖活力和凋亡的影响.方法:应用免疫组化方法测定乳腺癌组织芯片中80例癌组织的HIC-1蛋白表达,并分析其与临床病理的关系.应用甲基化特异性PCR法检测乳腺癌MDA-MB-231细胞中HIC-1基因启动子区域甲基化与基因表达的关系,5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-CdR)抑制甲基化后细胞HIC-1的表达水平变化.应用CCK-8方法和流式细胞仪测定恢复细胞HIC-1表达对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.结果:正常乳腺上皮组织HIC-1免疫组化染色呈强阳性,平均染色积分9.00±0,乳腺癌组织HIC-1染色明显降低,平均染色积分为4.58±1.22(P＜0.001).HIC-1的蛋白表达与病人年龄、发生部位以及是否出现淋巴结转移无关,但与肿瘤的组织学类型相关(P＜0.05).M DA-MB-231细胞HIC-1基因启动子区域呈完全甲基化,用5 μM的5-aza-CdR处理后可抑制HIC-1基因启动子甲基化、恢复HIC-1表达,并呈现浓度依赖性.恢复HIC-1基因表达抑制MDA-MB-231细胞增殖活性,促进MDA-MB-231细胞凋亡(P＜0.05).结论:乳腺癌组织HIC蛋白表达和癌细胞HIC-1基因表达明显降低,去甲基化药物可恢复肿瘤细胞内HIC-1基因表达,从而达到抑制肿瘤细胞增殖并促进细胞凋亡的目的.
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PTCH1基因甲基化在胃癌发病中的作用
目的:探讨PTCH1基因甲基化在胃癌发生中的作用及去甲基化试剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)对胃癌的治疗作用.方法:选取10例胃癌组织及其癌旁正常组织和胃癌细胞株AGS,抽提组织和细胞的总RNA和基因组DNA.实时定量QRT-PCR检测PTCH1基因的mRNA表达,MSP(methylation specific PCR)分析PTCH1基因启动子区甲基化变化.用5-Aza-dC处理AGS细胞株,流式细胞术检测细胞周期和凋亡并观察PTCH1基因甲基化水平的改变.结果:胃癌组织、癌旁正常组织和胃癌细胞株AGS中PTCH1基因表达和启动子甲基化水平呈负相关,相关系数为-0.591(P=0.006);5-Aza-dC的处理可引起胃癌细胞AGS细胞发生凋亡和G0/G1期阻滞,PTCH1基因发生去甲基化变化并表达增加.结论: PTCH1基因启动子区高甲基化是胃癌细胞PTCH1低表达主要原因之一,5-Aza-dC能逆转PTCH1基因甲基化状态,调控其表达,对胃癌具有一定的治疗作用.
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5-氮杂-2′-脱氧胞苷、曲古抑菌素A联合化疗对人胃癌细胞生长及MGMT基因表达的影响
目的：探讨体外5‐氮杂‐2′‐脱氧胞苷（5‐AzadC）、曲古抑菌素A（TSA）联合5‐氟尿嘧啶（5‐FU）和紫杉醇（PTX）对人胃癌SGC‐7901细胞生长及6‐氧‐甲基鸟嘌呤‐DNA甲基转移酶（MGMT）基因表达的影响。方法将培养的SGC‐7901细胞分为八组：对照组、5‐FU＋ PTX组、5‐AzadC组、TSA组、5‐AzadC＋ TSA组、5‐AzadC＋5‐FU＋ PTX组、TSA＋5‐FU＋ PTX组和5‐AzadC＋ TSA＋5‐FU＋PTX组。用M TS法测定各组药物对SGC‐7901细胞生长的影响，RT‐PCR和 Western blot方法检测SGC‐7901细胞MGMT mRNA及其蛋白的表达。结果5‐AzadC、TSA、5‐FU＋ PTX均能抑制细胞生长，且呈时间依赖性，多药联合组较单药组抑制率增强（ P＜0．05）；加药72 h后多药联合组较单药组MGMT mRNA和蛋白表达增强（P＜0．05）。结论5‐AzadC、TSA、5‐FU＋ PTX及药物联合干预通过增强M GM T基因再表达而抑制人胃癌SGC‐7901细胞的生长。
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去甲基化机制在腺苷及同型半胱氨酸诱导肝癌HepG2细胞凋亡中的作用
目的：探索去甲基化机制在腺苷（ADO）及同型半胱氨酸（HCY）诱导肝癌 HepG2细胞凋亡中的作用。方法CCK8法检测不同浓度腺苷（1.0、2.0、4.0 mol·L－1）单独或者联合同型半胱氨酸作用肝癌HepG2细胞不同时间（6、12、24 h）后细胞存活率；亦使用DNA甲基化酶抑制剂5-Aza-CdR观察其对细胞生长的影响。AnnexinV-FITC／PI 双染法检测细胞凋亡率，流式细胞术检测细胞内线粒体膜电位：实时荧光定量PCR及Western免疫印迹法分别检测caspase-3、caspase-8、caspase-9、MDM-2、p53、Cytochrome C、DNMT1、DN-MT3a、DNMT3b等因子的表达量。结果 ADO联合HCY明显抑制 HepG2细胞增殖，呈剂量和时间依赖性；不同浓度ADO联合HCY（1.0、2.0、4.0 mol·L－1）作用HepG2细胞24 h，细胞凋亡率分别为（18.63±1.25）％，（29.42±2.37）％，（42.47±3.09）％，均明显高于阴性对照组（1.30±0.82）％， P＜0.01；联合用药组线粒体膜电位明显下降，分别从空白对照组（674.15±82.8）％下降为（428.38±54.5）％、（297.78±30.5）％、（74.45±5.73）％，P＜0.01；ADO联合HCY导致caspase-3、caspase-8、caspase-9、p53、Cytochrome C 表达上调，MDM-2表达下调。ADO 联合 HCY 或5-Aza-CdR 处理HepG2细胞均可抑制DNA（甲基化酶DNMT1、DNMT3a、DN-MT3b）mRNA表达量。结论 ADO与HCY联合作用引起了细胞内甲基化改变，低甲基化作用激活了p53及线粒体等凋亡通路，终导致肝癌HepG2细胞凋亡。
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索拉非尼联合5-氮杂-2′-脱氧胞苷对肝癌SMMC-7721细胞DNMT3B基因表达的影响
目的:探讨索拉非尼联合5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞SMMC-7721的作用及其调控DNMT3B基因表达可能的分子 机制.方法:单独及联合给药后以MTT法测定SMMC-7721的增殖,Transwell检测其侵袭,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法观 察DNMT3B、p-Akt-Ser473及ERK蛋白的表达.结果:索拉非尼、5-Aza-CdR对肝癌SMMC-7721细胞半数抑制浓度(IC50)分别为11、6 μmol/L,联合用药选取(6+4)μmol/L作为后续用药浓 度.与对照组比较单药及联合用药均能抑制细胞侵袭、促进细胞凋亡、减少p-Akt-Ser473和DNMT3B蛋白的表达(P<0.05~P<0.01).结论:索拉非尼和5-Aza-CdR联合用药能有效降低索拉非尼用药浓度,降低肝癌SMMC-7721细胞DNMT3B蛋白表达水平.
关键词： 肝肿瘤 索拉非尼 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 -
5-氮杂-2′-脱氧胞苷逆转CNE-2Z 细胞RASSF1A基因甲基化的研究
目的 观察去甲基化剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z RASSF1A基因的去甲基化作用.方法 用5-Aza-CdR处理CNE-2Z细胞后,应用甲基化特异性PCR(MSP)检测RASSF1A基因的甲基化情况,免疫细胞化学检测RASSF1A基因表达改变,细胞生长曲线和平板克隆形成试验分别检测细胞生长能力和克隆形成能力.结果 CNE-2Z细胞RASSF1A基因呈高甲基化和阴性表达.经5-Aza-CdR处理,第1~2天RASSF1A基因高甲基化状态不改变,第3天部分去甲基化,第4天后全去甲基化,5-Aza-CdR处理停止2天后仍保持全去甲基化.随着RASSF1A基因去甲基化,RASSF1A呈明显阳性表达、细胞生长和平板克隆形成能力明显下降.结论 RASSF1A基因在CNE-2Z细胞中因高甲基化而失表达.5-Aza-CdR可诱导CNE-2Z细胞RASSF1A基因完全去甲基化而增强其表达,明显抑制CNET-2Z细胞生长和克隆形成能力.
关键词： 鼻咽癌 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 RASSF1A基因 甲基化 -
5-Aza-CdR体外诱导人肺癌细胞株p16基因去甲基化
目的 观察人肺癌细胞株H719p16基因启动子区甲基化状态,并探讨去甲基化制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR) 诱导H719细胞株高甲基化失活的pl6基因重新表达的可能性.方法 MSP法检测体外培养的人肺癌细胞株p16基因启动子区甲基化状态,并应用不同浓度的5-Aza-CdR处理人肺癌细胞株H719,MSP法检测用药后细胞中p16基因的甲基化状态,并用RT-PCR方法及Western Blot方法检测用药前后细胞中p16基因mRNA和蛋白水平变化.结果 p16基因在人肺癌细胞株H719中启动子区呈甲基化状态,经过5-Aza-CdR处理后, p16基因启动子区呈去甲基化状态,并且其mRNA及蛋白恢复表达.结论 启动子区异常甲基化是人肺癌细胞株p16基因失活的可能原因, 5-Aza-CdR能逆转p16基因甲基化状态.
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5-氮杂-2′-脱氧胞苷对结肠腺癌细胞株Caco-2细胞生物学行为的影响
[目的]研究去甲基化5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人结肠腺癌细胞株Caco-2细胞生长周期及凋亡的影响，探讨其临床治疗的可能性。[方法]分别使用0.4、1.6、6.4、25.6、102.4μmol/L浓度的5-Aza-CdR处理Caco-2细胞；通过M T T检测5-Aza-CdR对Caco-2细胞存活率的影响；应用流式细胞检测5-Aza-CdR对Caco-2细胞生长周期及凋亡的影响；RT-PCR检测处理前后抑癌基因RASSF1 A mRNA表达的改变。[结果]1.6μmol/L浓度的5-Aza-CdR可以明显的抑制Caco-2细胞的增殖，细胞周期中处于G0/G1期的细胞明显的增多，阻滞于G1期，凋亡率增高；5-Aza-CdR的作用与其浓度、时间在一定范围内呈正相关。5-Aza-CdR处理后，无RASSF1 A表达的Caco-2细胞可检测出基因RASSF1 A的重新表达。[结论]5-Aza-CdR可消除某些抑癌基因启动子甲基化状态，使其重新表达而抑制Caco-2细胞的生长，并促进其凋亡。
关键词： 结肠腺癌 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 Caco-2细胞 细胞周期 细胞凋亡 -
5-Aza-dC和TSA对胰腺癌Panc-1细胞TFPI-2基因甲基化水平及表达的影响
目的 探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)及组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)对胰腺癌Panc-1细胞系中TFPI-2基因甲基化水平及基因表达的影响.方法 Panc-1细胞经5 - Aza-dC和TSA单独或联合处理后,应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP),逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),蛋白印迹法(Western Blot)检测细胞TFPI-2基因启动子区甲基化状态和mRNA及蛋白表达情况.结果 Panc -1细胞经5-Aza-dC单独处理或与TSA联合处理后,TFPI-2基因启动子区高甲基化状态产生逆转,表现为非甲基化,原本不表达TFPI-2 mRNA及蛋白的Panc -1细胞重新表达,TFPI-2mRNA相对表达量为0.821±0.050和0.887±0.042,蛋白表达量为0.613±0.092和0.712±0.059,两者作用效果相似.经TSA单独处理的Panc -1细胞TFPI-2基因启动子区仍为异常高甲基化状态,原本不表达的TFPI-2基因未见重新表达.结论 Panc -1细胞中TFPI-2基因启动子区高甲基化可能是导致该基因失活的主要原因；5-Aza-dC单独作用或与TSA联合作用均能逆转TFPI-2基因的高甲基化状态,使该基因重新表达,但TSA对受抑制的TFPI-2基因无逆转作用.
关键词： 胰腺肿瘤 DNA甲基化 TFPI-2 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 曲古菌素A -
5-氮杂-2′-脱氧胞苷和曲古抑菌素A对胃癌细胞中P16和hMLH1及MGMT基因启动子甲基化和mRNA表达的影响
、0.214±0.018和0.156±0.017,均P＜0.05).结论 启动子区DNA高甲基化是胃癌细胞中P16、hMLH1和MGMT基因失活的主要原因之一,5-Aza-dC单独应用及5-Aza-dC和TSA联合应用致胃癌细胞中P16、hMLH1和MGMT基因启动子去甲基化,从而使其重获表达.
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脱乙酰化酶抑制剂与去甲基化制剂联合诱导U266细胞凋亡和p16基因重新表达
背景与目的:DNA甲基化调节基因表达与组蛋白脱乙酰化的作用密切相关,针对这两大途径用药,观察对肿瘤细胞的影响是有意义的.本文探讨脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(sodium phenylbutyrate,SPB)联合去甲基化制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理人骨髓瘤细胞系U266诱导高甲基化失活的p16基因重新表达的可能性及其对细胞生长的影响.方法:通过透射电镜、DNA梯形条带及流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的变化;RT-PCR和Westernblot检测p16表达水平.结果:单用5-Aza-CdR(1μmol/L)或SPB(1mmol/L)及两药联合诱导的细胞凋亡率分别是15.09%,89.19%和85.18%.单用5-Aza-CdR或SPB对细胞G1期无影响,单用SPB使G2/M期细胞比例增高,联合用药发生明显的G1期阻滞,且出现亚G1期峰达50%.单用PB不能诱导U266细胞p16的表达,单用5-Aza-CdR可诱导p16重新表达,两药联合明显增强p16表达水平.结论:PB与5-Aza-CdR协同可显著诱导U266细胞p16重新表达,细胞阻滞在G1期,并使细胞凋亡发生的时相不同于单独用药组.
关键词： 人骨髓瘤细胞系U266 p16基因 苯丁酸钠 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 -
5－氮杂－2′－脱氧胞苷对肺癌 SPC －A －1细胞RAR －β基因去甲基化及其表达的作用
目的：观察5－氮杂－2′－脱氧胞苷（5－Aza－CdR）对肺腺癌SPC－A－1细胞视黄酸受体β（ RAR－β）基因甲基化状态的影响，探讨不同浓度5－Aza－CdR对RAR－β基因表达缺陷的调控机制。方法将体外培养的人肺腺癌SPC－A－1细胞株分为4组，分别是A组（未加药）及B、C、D组（分别加入3、6、12μmol／L的5－Aza－CdR）。采用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测4组细胞RAR－β基因甲基化状态的差异，RT－PCR法检测4组细胞RAR－βmRNA表达水平的差异，Western blot检测4组细胞RAR－β蛋白表达水平的差异，流式细胞仪技术检测各组细胞周期及细胞凋亡率的差异。结果 A组标本检测出RAR－β基因为甲基化状态，而B、C、D组均检测出RAR－β为去甲基化状态。肺腺癌SPC－A－1细胞RAR－βmRNA及RAR－β蛋白表达水平低下，经5－Aza－CdR处理后，其表达水平明显增强（P＜0．01）。5－Aza－CdR处理后（B、C、D组）的细胞凋亡率均较A组明显提高，差异有统计学意义（ P＜0．01）。结论肺癌RAR－β基因因甲基化出现表达缺陷，5－Aza－CdR具有明显去甲基化作用，可诱导RAR－β基因重新激活表达，促进肺癌细胞凋亡及抑制癌细胞增殖，从而发挥抗癌作用。
关键词： 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 RAR-β基因 去甲基化 肺肿瘤 -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷联合曲古霉素A对高糖诱导下胰岛β细胞的增殖及PDX-1甲基化的影响
目的:探讨高糖诱导下应用5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-dC)和曲古霉素A(TSA)对胰岛 β 细胞NIT-1细胞株增殖及PDX-1启动子区甲基化及其表达的影响.方法:胰岛β细胞株予33.3 mmol/L葡萄糖浓度处理后随机分为:空白对照(NC)组、高糖诱导(HG)组、5-Aza-dC干预组、TSA干预组、5-Aza-dC+TSA联合干预组,检测细胞增殖情况、胰岛素释放水平、PDX-1启动子区甲基化状态及其表达水平的变化.结果:5-Aza-dC和TSA单独或联合干预可增加NIT-1细胞增殖率和胰岛素分泌量,降低PDX-1启动子区甲基化产物,增加PDX-1 mRNA相对表达量,并且联合组比单药组效果更加明显(均P<0.05).结论:5-Aza-dC和TSA可以激活高糖诱导下失表达的PDX-1,进而恢复胰岛β细胞功能,两药联合具有协同效应.
关键词： 高浓度葡萄糖 DNA甲基化 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 曲古霉素A -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷对胃癌SGC7901细胞增殖的抑制作用研究
目的:研究5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌SGC7901细胞增殖的抑制作用.方法:取SGC7901对数生长期细胞,分别加入0(未给药)、0.1、0.5、1.0、5.0 μmol/L 5-Aza-CdR,每个浓度设3个复孔,分别于给药后24、48、60、72h,采用MTT法检测细胞增殖情况,采用蛋白质印迹法和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法分别检测细胞内组织因子途径抑制物2(TFPI-2)蛋白和mRNA的表达情况.结果:与未给药比较,除作用24h外,各浓度5-Aza-CdR作用48、60、72h后SGC7901细胞的增殖活性均明显降低,细胞内TFPI-2蛋白和mRNA表达均明显增加(P＜0.05),且与浓度和时间呈正相关.结论:5-Aza-CdR可上调SGC7901细胞中TFPI-2基因的表达,对SGC7901细胞增殖具有抑制作用.
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5-氮杂-2′-脱氧胞苷对人甲状腺癌 TPC-1细胞生长及 KLF4基因表达的调节作用
目的：抑癌基因甲基化具有可逆性，相关药物可逆转甲基化使失活的基因重新表达。本研究观察去甲基化制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对体外培养的人甲状腺癌TPC-1细胞增殖的影响，及5-Aza-CdR对KLF4基因mRNA和蛋白表达水平的影响。方法使用不同浓度的5-Aza-CdR处理TPC-1细胞，采用MTT检测5-Aza-CdR对细胞增殖的影响，利用RT-PCR及蛋白质印迹法（ Westernblot ）方法检测KLF4基因mRNA和蛋白表达的水平。结果5-Aza-CdR作用于TPC-1细胞24、48及72 h后，TPC-1细胞增殖受抑制，且在一定范围内抑制率呈浓度和时间依赖性；TPC-1细胞经5-Aza-CdR干预后， KLF4基因mRNA和蛋白表达水平升高，差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论5-Aza-CdR 能抑制TPC-1细胞增殖，其作用可能是通过去甲基化上调抑癌基因KLF4的表达实现，为甲状腺癌的治疗提供了新思路。
关键词： KLF4基因 去甲基化 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 甲状腺癌
