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水飞蓟宾抑制乳腺癌细胞增殖和促进其凋亡的作用及机制
目的:探讨水飞蓟宾抑制乳腺癌细胞增殖和促进其凋亡的作用及机制.方法:MCF7细胞分为对照组和SIL组(处理浓度分别为10、20、40mg/L),各组细胞分别处理24、48、72h.MTT法检测不同浓度SIL对乳腺癌MCF7存活率的影响,TUNEL法(DNA断裂的原位末端标记法)检测各组细胞凋亡率,caspase-Glo⑧3/7定量试剂盒测定细胞caspase3/7的表达情况,Westem blot法检测PUMA蛋白表达水平.结果:MTT结果显示SIL对MCF7细胞增殖有抑制作用(P＜0.01),其中用40mg/L SIL处理MCF7细胞72h时抑制效果明显,结果呈药物浓度时间依赖效应.TUNEL法显示(48h)SIL可以显著增加MCF7细胞的凋亡率(P＜0.01).caspase3/7结果示SIL可以使caspase3/7活性显著升高(P＜0.01).Western blot示SIL可以诱导PUMA蛋白的表达升高.结论:水飞蓟宾能抑制乳腺癌细胞增殖和促进其凋亡,其作用机制之一可能是诱导PUMA蛋白表达.
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水飞蓟宾对胶质瘤细胞替莫唑胺化疗敏感性的影响
目的:研究水飞蓟宾在增加胶质瘤细胞对替莫唑胺化疗敏感性中的作用.方法:CCK-8法检测应用水飞蓟宾前后,替莫唑胺对胶质瘤细胞存活率的影响;Western Blot法检测水飞蓟宾及替莫唑胺对耐药细胞中Bcl-2、p-Akt蛋白表达水平的影响.结果:水飞蓟宾增加替莫唑胺对胶质瘤细胞的增殖抑制作用;替莫唑胺耐药的胶质瘤细胞中Bcl-2蛋白表达水平和Akt磷酸化水平显著升高;水飞蓟宾能够降低耐药细胞中Bcl-2的蛋白表达水平和Akt磷酸化水平.结论:水飞蓟宾能够增加胶质瘤细胞对替莫唑胺的化疗敏感性,并能够在一定程度上逆转胶质瘤细胞对替莫唑胺的耐药,其机制可能是通过下调PI3K/Akt信号通路和Bcl-2表达水平实现的.
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水飞蓟宾抑制人乳头状甲状腺癌TPC-1细胞增殖及诱导凋亡作用的实验研究
目的:研究水飞蓟宾(Silibinin,SB)在体外对人乳头状甲状腺癌细胞株TPC-1增殖的抑制作用.方法:采用CCK-8法观察不同浓度水飞蓟宾对TPC-1细胞株增殖的抑制作用；流式细胞仪分析细胞周期及凋亡情况；Western blot检测细胞周期分布及凋亡相关蛋白的表达变化.结果:CCK-8检测发现,水飞蓟宾呈时间-剂量依赖性地抑制TPC-1细胞株的增殖,诱导细胞凋亡及G0/G1期阻滞,并伴有细胞周期调节蛋白CDK2和CDK6的表达水平降低和凋亡相关蛋白的升高.结论:水飞蓟宾具有抑制人乳头状甲状腺癌细胞株TPC-1的增殖和诱导其凋亡的作用.
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水飞蓟宾对人肝癌细胞SMMC-7721体外增殖的影响
目的:探讨水飞蓟宾对SMMC-7721细胞的抗增殖作用.方法:MTT法观察对细胞的抑制作用;免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)及Ki-67的表达;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡;光镜及透射电镜观察细胞形态学的变化.结果:水飞蓟宾可抑制SMMC-7721的增殖,并降低PCNA、Ki-67的表达及引起细胞G2/M期阻滞,同时诱导凋亡.光镜发现细胞体积缩小,核固缩深染;电镜可见凋亡及凋亡小体.结论:在体外,水飞蓟宾可抑制SMMC-7721细胞的增殖.
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水飞蓟宾对人舌癌细胞Tca的抑制作用
目的:研究水飞蓟宾在体外对舌癌细胞的作用,并进一步探讨其可能的作用机制.方法:MTT实验测定水飞蓟宾对舌癌细胞系(Tca)的半数抑制浓度(IC50);平板克隆形成实验检测加药前后细胞的克隆形成能力;流式细胞仪检测加药前后细胞周期的变化.结果:水飞蓟宾对舌癌细胞系有较强的抑制作用, 作用48 h时,IC50约为100 μmol/L;水飞蓟宾作用后,舌癌细胞的平板克隆形成能力降低;流式细胞仪检测结果显示细胞出现G1期阻滞.结论:水飞蓟宾在体外对舌癌细胞具有明显的抑制作用, 其作用机制可能是细胞出现G1期阻滞.
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高效液相色谱法测定水飞蓟提取物中水飞蓟宾的含量
目的建立一种用反相高效液相色谱测定水飞蓟提取物中水飞蓟宾含量的方法.方法以Shimpack VP-ODS(250 mm×4.6 mm,5 μm)为分析柱;以甲醇-水-乙腈-磷酸(45:50:5:0.5,体积比)为流动相.结果测得平均回收率为102.3%,RSD为0.75%.结论方法准确可靠、简便,适用于水飞蓟提取物中水飞蓟宾的含量测定.
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水飞蓟宾缓释微囊的制备及其药动学和体外释药研究
目的 研究利用明胶与阿拉伯胶作为囊材制备水飞蓟宾缓释微囊及其缓释效果和机制.方法 以药物与胶液比例(A)、胶液质量浓度(B)、pH值(C)和戊二醛(D)为影响微囊缓释性能的主要因素设计正交实验,以累积释放量为评价指标,选出佳处方及工艺条件;在佳处方配比的条件下研究了水飞蓟宾缓释微囊的药动学并对其缓释机制进行探究.结果 各因素对水飞蓟宾微囊释放量影响大小顺序为B>A>D>C,佳处方和工艺条件为A2 B3 C1 D2,即药物与胶液比例为1:5、胶液质量浓度<50.0g·L-1、pH值为3.0和戊二醛质量浓度为0.01g·mL-1;经静脉给药后,水飞蓟宾缓释微囊在大鼠体内消除半衰期约为18 h,明显比水飞蓟宾原料药消除半衰期延长;释药机制的研究表明,渗透压、扩散作用和释药动力源对水飞蓟宾缓释微囊的释药有影响;而释药介质的pH值对水飞蓟宾微囊的缓释作用影响不显著.结论 采用明胶与阿拉伯胶作为囊材制备的水飞蓟宾微囊具有良好的缓释效果.
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水飞蓟宾通过调控AMPK活性抑制自由脂肪酸诱导的肝细胞炎症因子分泌
目的 研究水飞蓟宾对自由脂肪酸(FFA)诱导肝细胞炎症因子分泌的抑制作用,并探讨其是否通过调节腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路实现.方法 将HepG2细胞分为对照组、模型组和水飞蓟宾组.水飞蓟宾组(80和160μm01·L-1)预孵育HepG2细胞4h后,用500 μmol·L-1的FFA处理HepG2细胞24 h.Real-time PCR和Elisa法测定炎症因子IL-1β扣TNF-α的mRNA及蛋白表达,油红O染色检测脂质生成情况,Western Blot测定AMPK和p-AMPK的蛋白相对表达量.用AMPK抑制剂或水飞蓟宾孵育细胞后用FFA处理,Elisa法测定炎症因子的生成情况.结果 水飞蓟宾组可降低FFA诱导炎症因子生成增加,降低肝细胞中脂质含量的积累.Western Blot测定结果发现,水飞蓟宾可增加AMPK的磷酸化,AMPK抑制剂可逆转水飞蓟宾对炎症因子生成的抑制作用.结论 水飞蓟宾组可通过AMPK信号通路抑制FFA诱导肝细胞炎症因子的表达.
关键词： 水飞蓟宾 非酒精性脂肪肝 炎症因子 腺苷单磷酸活化蛋白激酶 -
两种方法制备水飞蓟宾固体脂质纳米粒的比较
目的:探索将中药水飞蓟宾(SIL)制备成固体脂质纳米粒(SLN)的方法,并探讨SIL-SLN的主要性质. 方法:分别采用超声法和高压乳匀法制备SIL-SLN. 在电镜下观察其形态,以Mastersizer 2000粒度分析仪和Zetasizer Nano电位分析仪测定其粒径和Zeta电位,以葡聚糖凝胶柱层析法和HPLC测定其包封率,并观察SLN的稳定性. 结果:超声法制备的SIL-SLN在透射电镜下呈片状存在,形态不规则,高压乳匀法制备的SIL-SLN呈球状,形态规则. 超声法和高压乳匀法制备的SIL-SLN粒径分别为(165±7) nm和(157±6) nm (P＜0.05); Zeta电位分别为(-28.35±2.72) mv和(-35.36±2.68) mv (P＜0.001); 包封率分别为(90.59±0.89)%和(95.64±1.33)% (P＜0.001). 高压乳匀法制备的SIL-SLN室温放置4 wk后,粒径无明显增加(P＞0.05). 结论:高压乳匀法制备SIL-SLN具有粒径小、稳定性和包封率高的特点,优于超声法.
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水飞蓟宾固体脂质纳米粒的制备及抗肝纤维化作用
目的 制备载中药水飞蓟宾(SIL)的固体脂质纳米粒(SLN),并观察其对肝硬化模型大鼠的抗肝纤维化作用.方法 采用高压乳匀法制备SIL-SLN,实验大鼠分为正常对照组、模型对照组、SIL普通剂型组、SIL-SLN灌胃组和SIL-SLN静脉注射组,比较SIL的SLN剂型与普通剂型的抗肝纤维化作用.结果 高压乳匀法制备的SIL-SLN呈圆形,形态规则,粒径为(157±8)nm,Zeta电位为(-35.36±2.68)mV,平均包封率为95.64%,平均SIL含量为1.501 g/L.给药8周后,SIL-SLN灌胃组和SIL-SLN静脉注射组的大鼠肝脏Masson胶原染色图像分析灰度值分别为4.73±1.35和2.26±0.42,与SIL普通剂型组(7.26±1.72)比较差异有显著性(P＜0.05),且SIL-SLN静脉注射组作用优于SIL-SLN灌胃组(P＜0.05).结论 SIL-SLN可显著提高SIL的抗肝纤维化作用,静脉注射作用更强,是一种新型中药靶向制剂.
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水飞蓟宾对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其机制
目的 研究水飞蓟宾(Silibinin,SB)在体外对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其相关机制.方法 采用MTT法观察不同浓度SB对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用;倒置显微镜下观察细胞形态变化;RT-PCR检测凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达变化.结果 MTT检测发现:随着SB浓度增加和作用时间延长,对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用增强,且各组间比较均有显著性差异(P＜0.01),并呈时间-剂量依赖关系;倒置显微镜发现应用SB干预后,5637细胞体积缩小,变形,胞浆浓缩,核固缩深染;人膀胱癌细胞株5637中Survivin的mRNA表达随着SB浓度增加和时间延长相应下降.结论 SB可抑制人膀胱癌细胞株5637的增殖;并下调凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达.
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银杏叶联合水飞蓟宾治疗非酒精性脂肪性肝炎疗效观察
目的 观察银杏叶联合水飞蓟宾治疗非酒精性脂肪性肝炎的疗效.方法 选择符合条件的72例非酒精性脂肪性肝炎患者,随机分为治疗组和对照组.治疗组给予口服银杏叶软胶囊500mg,每日3次,水飞蓟宾胶囊75mg,每日3次;对照组口服水飞蓟宾胶囊75mg,每日3次.两组疗程均为24周,两组患者均禁酒、控制饮食及体重、中等量有氧运动.观察两组临床症状、体重指数、肝功能指标、血脂及B超的改变.结果 治疗组在治疗后临床症状、体重指数、ALT、AST、TG、TC均较治疗前有明显改善,B超脂肪肝程度减轻,与对照组比较,各指标差异均有统计学意义(P<0.05).两组均未发现明显不良反应.结论 在控制饮食、加强运动等基础治疗上,银杏叶联合水飞蓟宾治疗非酒精性脂肪性肝炎有明显疗效.
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水飞蓟宾对CCl4所致肝硬化门静脉高压大鼠的保护作用及其机制研究
目的:研究水飞蓟宾(Silibinin,SIL)对CCl4所致肝硬化及门静脉高压大鼠的保护作用及其机制.方法:将120只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、SIL(25、50、100 mg/kg)治疗组和秋水仙碱(0.1 mg/kg)治疗组;采用四氯化碳复合法制备肝硬化门静脉高压大鼠模型;造模完成后灌胃给药,1次/d,疗程6周.测定肝功能指标:血清中转氨酶(ALT、AST)和总胆红素(TBIL)含量;HE染色法观察肝脏组织病理性形态学变化;测定血清中肝纤4项(CⅣ、PCⅢ、LN、HA)和肝脏组织中羟脯氨酸(HYP)水平;通过生理记录仪记录门静脉压(PVP)、门静脉血流量(PVF)、平均动脉压(MAP)并测定心率(HR);测定肝脏组织中一氧化氮(NO)、环鸟苷酸(cGMP)含量.结果:与模型组对照组比较,SIL(50、100 mg/kg)治疗组大鼠血清中ALT、AST、TBIL、CⅣ、PCⅢ、HA、HYP含量均显著降低(P<0.05),PVP和PVF显著降低(P<0.05),肝脏组织中NO含量显著升高(P<0.01);SIL(100 mg/kg)治疗组大鼠血清中LN含量显著降低,MAP显著升高,HR显著降低,肝组织中cGMP含量显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);SIL各治疗组大鼠肝脏组织病理性形态学变化呈不同程度好转,其中以SIL 100 mg/kg治疗组效果为显著.结论:SIL对CCl4所致大鼠肝纤维化及门静脉高压具有抑制作用,其作用机制可能与SIL能够有效保肝降酶,提高NO、cGMP含量有关.
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拉米夫定联合苦参素或水飞蓟宾治疗慢性乙型肝炎疗效分析
目的:探讨苦参素或水飞蓟宾联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的疗效.方法:将100例慢性乙型肝炎病例随机分为3组:拉米夫定组(A组,30例)、苦参素联合拉米夫定组(B组,35例)和水飞蓟宾联合拉米夫定组(C组,35例).疗程为9个月.治疗前和治疗结束后,分别检测血清ALT、HBeAg和HBV-DNA；另每组10例,检查肝脏组织病理学改变.结果:联合治疗组ALT、HBeAg及HBV-DNA转阴率优于拉米夫定组,但差异比较无统计学意义(P＞0.05).治疗后肝脏组织病理学改变检查,三组组间差异比较均无统计学意义(P＞0.05).结论:拉米夫定联合苦参碱或者水飞蓟宾在一定程度上提高治疗慢性乙型肝炎的抗病毒疗效.
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水飞蓟宾治疗抗精神病药物引起的肝功能损害的疗效观察
目的:探讨水飞蓟宾片治疗抗精神病药物所引致肝功能异常的疗效.方法:将100例长期口服抗精神病药物后肝功能异常的住院患者以随机抽样法分为治疗组和对照组各50例,治疗组给予水飞蓟宾片70 mg,一日三次口服,对照组给予护肝宁片1.25 g,一日三次口服.两组均治疗12周,观察两组治疗前和治疗后2,4,8,12周临床症状和血生化指标即谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST).结果:总有效率:94％对照组52％,差异有统计学意义(P＞0.05).结论:水飞蓟宾具有良好的保肝降酶的作用,对治疗抗精神病药物造成的肝损害疗效肯定.
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水飞蓟宾对高脂诱导非酒精性脂肪肝大鼠的调脂保肝作用
目的 探讨水飞蓟宾对高脂诱导的非酒精性脂肪肝(NAFL)模型大鼠的调脂保肝作用.方法 采用ig高脂乳剂配合高脂饲料制备大鼠NAFL模型,持续4周,对照组给予生理盐水和普通饲料.模型大鼠随机分为模型组、辛伐他汀(阳性药,1.8 mg/kg)组和水飞蓟宾低、中、高剂量(18.9、37.8、75.6 mg/kg)组,第5周在继续造模的基础上ig给药,每天1次,持续8周.末次给药后,称取肝脏质量并计算肝系数:HE染色观察肝组织病理形态;腹主动脉取血,分离血清,试剂盒法检测三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)水平.结果 连续治疗8周后,与对照组比较,水飞蓟宾高、中剂量均可明显改善肝组织脂肪变性程度;各剂量组肝系数均显著下降(P＜0.05、0.01);各剂量组均显著降低血清TC、TG、AST、ALT水平(P＜0.05、0.01);高、中剂量组显著降低LDL、升高HDL水平(P＜0.01).结论 水飞蓟宾对NAFL大鼠发挥治疗作用,其作用可能与降脂、保肝有关.
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四种药物对丙二醛和晚期糖化终末产物抑制作用的比较
目的比较四种黄酮类物质抗氧化能力和防止晚期糖化终末产物的形成能力.方法通过对黄连素,槲皮素,水飞蓟宾和水飞蓟素四种不同的黄酮类中药对肝匀浆中丙二醛(MDA)生成和晚期糖化终末产物(AGE)生成的抑制作用的研究,比较四种黄酮类物质预防糖尿病并发症的能力.结果水飞蓟素具有很好的抑制肝匀浆中丙二醛(MDA)生成和晚期糖化终末产物(AGE)生成作用,其IC50分别为2×10-10g/ml和5.6×10-4g/ml.结论水飞蓟素可以用来预防糖尿病并发症.
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HPLC法测定水飞蓟宾脂质纳米粒在小鼠肝脏中的药物浓度
目的:建立水飞蓟宾脂质纳米粒在小鼠肝脏中药物浓度的高效液相色谱测定方法.方法:小鼠肝脏匀浆液在pH 8.2条件下用乙醚提取,氮气吹干,残渣以流动相溶解后进样.采用Nova-pak C18色谱柱(3.9 mm×150 mm,4 μm),以甲醇-0.05 mol*L-1磷酸二氢钾(10∶ 11,磷酸调至pH 4.0)为流动相,流速1.0 mL*min-1,检测波长为288 nm,内标为α-萘酚.结果:水飞蓟宾的线性范围为1.60～31.8 μg*g-1 (r=0.999 4);S/N=3时,低检测限为10 ng;高、中、低3个浓度的平均回收率为100.8%～104.7%,日内RSD为1.6%～3.3%,日间RSD为3.2%～4.8%,n=5.结论:所建方法灵敏、准确,适用于水飞蓟宾肝靶向制剂的肝脏药物浓度测定及肝脏靶向性评价.
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反相高效液相色谱法测定人血浆中水飞蓟宾的浓度
目的:建立测定人血浆中水飞蓟宾浓度的反相高效液相色谱法.方法:血样在pH 8.5条件下经乙醚提取后,采用μBondapak C18(3 00 mm×4.6 mm)色谱柱,甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液(pH 3.0)(29s∶20∶51)为流动相,以萘酚为内标,检测波长288 nm.结果:水飞蓟宾在3.695～236.5 ng·mL-1范围内线性相关(r= 0.999 8),方法回收率为96.5%,日内、日间RSD均小于2.3%(n=3).结论:方法简便快速、灵敏度高,适用于该药的临床药理研究.
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替比夫定联合水飞蓟宾治疗乙型肝炎肝硬化的临床效果观察
目的:研究替比夫定联合水飞蓟宾治疗乙型肝炎肝硬化的临床效果.方法:选取我院2016年12月到2017年12月期间就诊的60例乙型肝炎肝硬化患者,采用随机数字表法的形式将60例患者平均分为实验组与对照组,每组均为30例.其中,对照组单独采用替比夫定治疗,实验组在此基础上与水飞蓟宾联合治疗,对比两组患者各项肝功能指标、血清HBV DNA阴转率.结果:经两组患者临床治疗效果比较分析,实验组各项肝功能指标均优于对照组,血清HBV DNA阴转率比对照组高,组间比较存在显著差异性(p<0.05).结论:替比夫定联合水飞蓟宾治疗乙型肝炎肝硬化的临床效果理想,能够有效改善患者临床症状,提高血清HBV DNA阴转率,具有较高的临床推广与应用价值.
