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人非小细胞肺癌VEGFR2和NRP-1表达意义分析
目的:探讨人非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)组织中VEGFR2和NRP-1的表达情况及临床意义.方法:选取2009-01-01-2012-11-30连云港市第一人民医院手术切除并经病理确诊的NSCLC石蜡包埋标本40例和肺良性组织10例,采用免疫组化方法(IHC)测定VEGFR2、NRP-1表达,运用荧光原位杂交技术(FISH)检测VEGFR2基因(KDR)及NRP-1基因拷贝获益(copy number gains,CNG),终所获结果结合患者的临床病理资料进行分析.结果:40例NSCLC组织中VEGFR2蛋白高表达率为57.5％,NRP 1蛋白高表达率为55.0％;KDR CNG(+)比率为32.5％,NRP-1 CNG(+)的比率为30.0％.VEGFR2蛋白在NSCLC组织中的表达与肺良性病变的阴性表达比较,差异有统计学意义,x2=10.65,P＜0.001;NRP-1蛋白在NSCLC组织中的表达与肺良性病变的阴性表达比较,差异有统计学意义,x2 =9.82,P=0.002,且其表达与肿瘤的TNM分期、淋巴结转移和肿瘤组织分化程度有关,P＜0.05;与患者年龄和病理类型无关,P＞0.05.肺癌患者中KDR CNG(+)与肺良性病变KDR CNG(-)比较差异有统计学意义,x2 =4.39,P=0.04;肺癌患者中NRP-1 CNG(+)与肺良性病变CNG(-)比较差异有统计学意义,x2=3.95,P=0.04;且其与肿瘤的TNM分期、淋巴结转移和肿瘤组织分化程度有关,P＜0.05;而与患者年龄和病理类型无关,P＞0.05.结论:VEGFR2、NRP-1在NSCLC组织中均有高表达,并且它们在NSCLC发生、发展和转移中有重要意义,对临床判断NSCLC预后和指导临床抗血管生成有一定的价值.
关键词： 癌 非小细胞肺/病理学 血管内皮生长因子受体2 神经纤毛蛋白-1 肺肿瘤/病理学 -
神经纤毛蛋白-1和CD4+CD25+Treg在人脑胶质瘤中的表达及意义
目的 研究神经纤毛蛋白-1(NRP-1)与CD4+ CD25+调节性T细胞(CD4+ CD25+Treg)在人脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义.方法 收集人脑胶质瘤标本41例,其中Ⅰ级11例,Ⅱ级8例,Ⅲ级12例,Ⅳ级10例(胶质母细胞瘤).另取11例因颅脑创伤行内减压术患者的正常脑组织标本作为对照组.应用RT-PCR技术检测人脑胶质瘤组织和正常脑组织NRP-1的mRNA表达.流式细胞术检测上述组织中CD4+ CD25+ Treg细胞的比率.结果 NRP-1 mRNA在胶质瘤和正常脑组织中均有不同程度表达,但在胶质瘤中的表达量明显高于正常脑组织,且在胶质瘤中表达程度随其病理分级的增高而增高,差异有统计学意义(P＜0.05);胶质瘤组织CD4+ CD25+ Treg细胞比率明显高于正常脑组织(P＜0.01),在胶质瘤组织中CD4+ CD25+ Treg细胞的比率随肿瘤病理分级增高而增高,差异有统计学意义(P ＜0.05);NRP-1 mRNA表达程度和CD4+ CD25+ Treg细胞比率呈显著正相关(r=0.723,P＜0.05).结论 NRP-1和CD4+ CD25+ Treg在脑胶质瘤中高表达,二者表达程度均与肿瘤的病理分级密切相关,NRP-1和CD4+ CD25+ Treg表达上调可能与肿瘤微环境的免疫耐受有关.
关键词： 神经胶质瘤 神经纤毛蛋白-1 CD4+CD25+调节性T细胞 -
Neuropilin-1及其免疫调节机制的研究
Neuropilin-1（NRP-1）又称为神经纤毛蛋白，是一种非酪氨酸激酶跨膜多功能糖蛋白。其在多种肿瘤组织与免疫细胞上高表达，它作为一个多功能受体，通过独立或依靠其他配体分子的方式，在各种实体肿瘤、血液系统肿瘤及免疫学等方面中发挥重要作用。本文就NRP-1及其配体在肿瘤发生和免疫调节方面的作用机制研究作一综述。
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神经纤毛蛋白-1与肿瘤血管生成的关系
神经纤毛蛋白-1(Neuropilin-1,NRP-1)属跨膜糖蛋白,作为轴突导向分子(semaphorin,Sema)的受体,参与神经导向的调节,同时作为血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR-2)的共受体表达于血管内皮细胞.参与血管新生的调节.近年已基本阐明NRP-1在神经系统中的作用,其在血管新生方面的研究亦逐渐深入.NRP-1可通过依赖血管内皮生长因子(VEGF)的方式或独立的方式参与肿瘤血管新生调节,同时在肿瘤生长及转移中发挥重要作用.NRP-1生物学特性取决于其独特的分子结构.综述NRP-1结构和生物学特性、与VEGF及其受体的相互作用、对肿瘤血管新生的影响及其在妇科肿瘤中的研究.
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沙利度胺联合XELOX方案治疗晚期胃癌的临床研究
目的 探讨沙利度胺联合XELOX方案(奥沙利铂+卡培他滨)治疗晚期胃癌的临床疗效.方法 选取2013年1月—2016年1月丹阳市人民医院收治晚期胃癌患者180例,随机分为对照组和治疗组,每组各90例.对照组患者静脉滴注注射用奥沙利铂,130 mg/m2,1次/14 d,同时口服卡培他滨片,每次1250 mg/m2,2次/d,持续治疗14 d.治疗组在对照组基础上睡前口服沙利度胺片,200 mg/次,1次/d,14 d为1个疗程,连续治疗2个疗程.观察两组患者临床疗效,同时比较治疗前后两组患者KPS评分及血管内皮生长因子(VEGF)、内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)、神经纤毛蛋白-1(NRP-1)水平.结果 治疗后,对照组客观缓解率为35.6％,显著低于治疗组的51.1％,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05).治疗后,两组患者KPS评分显著升高(P<0.05),且治疗后治疗组KPS评分明显高于对照组(P<0.05).治疗后,两组患者VEGF、ESM-1和NRP-1水平均显著降低(P<0.05),且治疗组血清VEGF、ESM-1和NRP-1水平明显低于对照组(P<0.05).结论 沙利度胺联合XELOX方案能够有效抑制肿瘤新生血管生成,降低血清ESM-1、NRP-1表达,具有一定的临床推广应用价值.
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NRP-1在胶质瘤细胞系中表达水平及亚细胞定位的鉴定
[目的]检测不同胶质瘤细胞系中神经纤毛蛋白1(neuropilin-1,NRP-1)的表达水平及亚细胞定位.[方法]传代培养人U87、U251、H4及大鼠C6胶质瘤细胞系,以人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)为阳性对照、正常大鼠脑组织为阴性对照,采用RT-PCR、Western-blotting及细胞免疫荧光技术三种检测手段从信使RNA及蛋白层面分析NRP-1在四种胶质瘤细胞系中的表达及定位.[结果]四种胶质瘤细胞系(U87、U251、H4及C6)中均有NRP-1的阳性表达,且表达水平均明显高于正常大鼠脑组织(P＜0.05);恶性程度高的U87的NRP-1表达水平明显高于恶性程度较低的U251及H4(P＜0.05);而U251及H4之间NRP-1的表达水平无明显差异(P＞0.05);细胞免疫荧光结果显示NRP-1在四种胶质瘤细胞系中均有表达,且亚细胞定位主要分布于胞膜及胞质中.[结论]本实验确定了NRP-1在U87、U251、H4及C6胶质瘤细胞系中表达水平及亚细胞定位,为今后进一步将NRP-1应用于胶质瘤鉴别诊断与分级诊断奠定了理论基础.
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Neuropilin-1及其作为恶性肿瘤治疗靶点的研究进展
神经纤毛蛋白1(neuropilin-1,NRP-1)是一种跨膜糖蛋白.它作为血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)家族的一个共受体,能结合或调节一些其他细胞外配体,如第3类神经生长导向因子(class 3 semaphorins,Sema3s)、转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、成纤维生长因子(fibroblast growth factors,FGF)和血小板衍生因子(platelet derived growth factor,PDGF),从而参与轴突导向、血管形成和免疫反应等多种生理和病理过程.NRP-1在多种肿瘤(如黑素瘤、前列腺癌、肺癌、胰腺癌、结肠癌、星形细胞瘤、成胶质细胞瘤和成神经细胞瘤)细胞中异常表达,进而在肿瘤的发生和发展过程中起关键作用.许多研究表明,NRP-1可以不依赖VEGF受体而显示出重要功能.当缺乏VEGF受体1/2时,NRP-1可通过激活选择性整合素,刺激VEGF-A和金属蛋白酶的分泌,调节特定的信号转导通路,终促进黑素瘤的侵袭和转移.本文以黑素瘤为重点,探讨NRP-1在肿瘤侵袭和转移中的作用以及以NRP-1为靶点治疗恶性肿瘤的相关研究进展.
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靶向长循环脂质体造影剂体内外靶向性研究
目的 通过测定肿瘤新生血管靶向的长循环脂质体造影剂与体外细胞的结合能力及在其体内的代谢、分布情况,研究其对肿瘤的靶向能力.方法 薄膜超声法制备包裁核磁共振造影剂钆喷酸葡胺注射液(Gd-DTPA)的靶向神经纤毛蛋白-1受体的长循环脂质体造影剂(T-PEG-Gd-LP)和非靶向的长循环脂质体造影剂(NT-PEG-Gd-LP),并观察测定物理性质.实验共设3组,游离组Gd-DTPA、非靶向组NT-PEG-Gd-LP和靶向组T-PEG-Gd-LP,分别测定与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)和人肺腺癌细胞(A549 cells)的结合能力及注射荷瘤裸鼠模型后的血液和各组织器官中的钆含量.结果 靶向组T-PEG-Gd-LP与细胞的结合能力优于其他组别(P<0.05).与游离组Gd-DTPA相比,NT-PEG-Gd-LP和T-PEG-Gd-LP在血中的清除速率明显减慢,肿瘤、肝、脾、肌肉组织中的药物含量明显增加,心、肺、肾组织中明显降低.与非靶向组卜rr-PEG-Gd-LP相比,靶向组T-PEG.Gd-LP在肿瘤组织中的药物含量显著增加.结论 肿瘤新生血管靶向的长循环脂质体造影剂在体外结合和体内分布情况都表现出良好的肿瘤靶向性.
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Neuropilin-1在消化道恶性肿瘤发生发展中的生物学作用
消化道肿瘤是常见的恶性肿瘤,发病率高,死亡率亦高.神经纤毛蛋白-1(Neuropilin-1)在消化道恶性肿瘤发生发展中的作用成为近年来研究的热点,其调控恶性肿瘤血管生成过程,介导肿瘤细胞的增殖与侵袭,从而促进肿瘤进展与转移.本文就Neuropilin-1在肿瘤血管生成、肿瘤增殖与侵袭、转移及肿瘤治疗靶标中的作用作一综述.
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NRP-1介导的非依赖VEGF-VEGFR2通路在肿瘤发生发展中的作用?
神经纤毛蛋白（ NRP ）?1作为NRP家族中重要成员之一，常表达于内皮细胞及部分肿瘤细胞。近年来越来越多研究证实NRP?1主要通过VEGF?VEGFR2通路在肿瘤发生发展中起重要作用。除此之外，NRP?1还可以与其他生长因子及其受体结合，如血小板衍生生长因子（ PDGF）及其受体。另外，近有研究表明NRP?1通过NRP?1?ABL通路促进血管形成，而不依赖VEGF?VEGFR2。并且NRP?1?ABL和PDGF通路下游都涉及Rad51蛋白，而Rad51蛋白则是体内催化同源重组性DNA修复主要的关键酶。 Rad51过表达可使肿瘤细胞对放化疗产生耐受。抑制NRP?1也许可以弥补单纯抑制VEGF?VEGFR2通路在肿瘤治疗中的不足，为肿瘤的治疗提供新思路。因此本文就NRP?1不依赖VEGF?VEGFR2通路在肿瘤发生发展中的作用作一综述。
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Neuropilin-1在三阴性乳腺癌中的表达及其临床意义
目的 探讨Neuropilin-1(NRP-1,神经纤毛蛋白-1)在三阴性乳腺癌中的表达及其与临床病理特征的相关性.方法 筛选并回顾分析手术切除治疗的69例三阴性乳腺癌及30例乳腺良性疾病病例,将相应患者病理标本制作成组织标本,并采用免疫组化方法检测三阴乳腺癌组织和乳腺良性疾病组织中NRP-1的表达情况,对NRP-1的表达与三阴性乳腺癌患者的临床病理特征进行相关性分析.结果 ①NRP-1在三阴性乳腺癌中的阳性表达率明显高于乳腺纤维腺瘤和乳腺囊性增生症(P=0.000);NRP-1在乳腺纤维腺瘤和乳腺囊性增生症中的表达无明显差异(P=0.6767);②NRP-1表达率随三阴性乳腺癌术后分期的升高逐渐升高(P=0.000);③三阴性乳腺癌中,腋窝淋巴结转移患者中NRP-1表达率高于无淋巴结转移者(P=0.001);④三阴性乳腺癌患者NRP-1的表达受肿瘤大小、细胞分化程度、pTNM分期、随访期间是否有复发或远处转移影响.结论 NRP-1的过表达可能与三阴性乳腺癌的发生、发展、腋窝淋巴结转移密切相关,并有可能成为三阴性乳腺癌治疗的新靶点.
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大肠癌中Neuropilin-1的表达与血管生成的关系
目的 探讨大肠癌组织中神经纤毛蛋白-1(NRP-1)的表达与大肠癌生物学行为及血管生成的关系和意义.方法 应用免疫组化SP 法检测正常大肠黏膜、大肠癌组织中NRP-1、血管内皮生长因子(VEGF)、CD34的表达并测定微血管密度(MVD).结果 大肠癌组织中NRP-1的表达及MVD高于正常大肠粘膜组织,且与大肠癌淋巴结转移、浸润程度密切相关.NRP-1表达阳性组的MVD高于阴性组.与VEGF表达呈正相关性.结论 NRP-1参与了大肠癌的发生、浸润与转移;NRP-1与大肠癌的血管生成有关;NRP-1作为肿瘤抗血管治疗的靶点具有一定的价值.
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胃癌患者血清IGFBP3和Neuropilin-1的表达水平及其临床意义
目的 探讨胃癌患者血清胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)和神经纤毛蛋白-1(Neuropilin-1)水平及其与临床病理参数间的相关性.方法 选取胃癌患者98例,同期收集体检者50例为健康对照组.检测2组研究对象血清IGFBP3和Neuropilin-1水平;分析胃癌组患者血清IGFBP3和Neuropilin-1水平与胃癌临床病理参数间的相关性;比较随访期间存活组与死亡组患者间血清IGFBP3和Neuropilin-1表达.结果 与对照组比较,胃癌组患者血清IGFBP3水平明显减少而Neuropilin-1水平明显升高(P＜0.01).血清IGFBP3和Neuropilin-1的表达与胃癌患者的年龄、性别、大小、肿瘤位置无显著性相关(P＞0.05),而与TNM分期、分化程度以及淋巴结转移呈显著性相关(P＜0.01).所有患者1年期随访结果:33例死亡,65例存活;死亡组患者入院时血清IGFBP3水平明显低于存活组,而Neuropilin-1表达明显高于存活组,比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 胃癌患者血清IGFBP3水平明显降低而Neuropilin-1的水平明显增高,与胃癌的恶性程度关系密切,也可能是临床评价胃癌患者预后的重要指标.
关键词： 胃癌 胰岛素样生长因子结合蛋白3 神经纤毛蛋白-1 相关性 -
靶向神经纤毛蛋白-1的分子探针与小鼠异位胶质瘤结合的磁共振研究
目的 通过磁共振成像技术检测靶向神经纤毛蛋白-1(neuropilin-1,NRP-1)的分子探针与小鼠异位脑胶质瘤的结合能力.方法 应用碳二亚胺法合成以NRP-1为靶点,以tLyP-1为配体的分子探针USPIO-PEG-tLyP-1(靶向组);通过胶质瘤组织移植法制备胶质瘤模型小鼠;30只荷瘤小鼠随机选取12只进行组织解剖学取材,其余18只随机分为3组:对照组(A组),探针对照组(B组)和探针组(C组),分别经小鼠尾静脉给予20μl生理盐水、20μl USPIO-PEG、20μl USPIO-PEG-tLyP-1,每组在0 h、6 h、12 h、24 h磁共振检测T2WI及T2MAPPING序列;成像结束后立即处死荷瘤鼠,取胶质瘤组织进行普鲁士蓝染色检测铁颗粒含量以观检测胶质瘤组织与新型分子探针的结合能力;取肝肾组织固定切片后行病理染色检测新型分子探针的生物毒性.结果 胶质瘤组织NRP-1的表达量明显高于肝、肾、脑组织(P<0.05);C组荷瘤鼠胶质瘤组织24 h弛豫时间[(14.19±0.87)ms]与B组24 h弛豫时间[(25.94±0.77)ms]相比明显下降(P<0.05),C组胶质瘤组织蓝染铁颗粒明显比B组多(P<0.05).结论 在动物实验中,以NRP-1为靶点的分子探针有明显的靶向作用,具有良好的生物相容性,动物组织无明显的损伤.
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神经纤毛蛋白-1靶向性分子探针的构建及体外显像脑胶质瘤细胞的研究
目的：合成以超小超顺磁性氧化铁颗粒（ ultrasmall superparamagnetic iron oxide， US?PIO）为核心、tLyP?1（ CGNKRTR）为配体的新型磁共振分子探针USPIO?PEG?tLyP?1并检测其对神经纤毛蛋白?1（ Neuropilin?1，NRP?1）高表达的脑胶质瘤细胞的成像能力。方法利用碳二亚胺法将US?PIO?PEG同多肽tLyP?1偶联得到USPIO?PEG?tLyP?1，通过免疫印迹法检测不同脑胶质瘤细胞系中NRP?1的表达水平，利用噻唑蓝比色法检测分子探针的细胞毒性，利用普鲁士蓝染色、透射电镜及体外磁共振成像检测USPIO?PEG及USPIO?PEG?tLyP?1同NRP?1高表达的脑胶质瘤细胞的结合能力。结果合成了水合粒径为43．84 nm的分子探针USPIO?PEG?tLyP?1，噻唑蓝比色法证实这种分子探针在有效浓度下（50μg Fe／ml）对细胞存活无显著影响（P＞0．05）。选择NRP?1表达水平高的U87脑胶质瘤细胞作为实验对象（P＜0．01）。普鲁士蓝染色结果显示在相同浓度及时间的条件下，USPIO?PEG?tLyP?1组的蓝染颗粒较USPIO?PEG组更多、更明显。透射电镜结果显示USPIO?PEG?tLyP?1同U87细胞结合后主要分布于溶酶体、内质网及线粒体中。磁共振成像结果显示在相同浓度下，USPIO?PEG?tLyP?1组细胞的SI值下降水平均明显高于USPIO?PEG组细胞（P＜0．01）。结论 tLyP?1的修饰大大提高了USPIO?PEG同脑胶质瘤细胞的结合能力，并且显著增加了磁共振下的阴性对比效果，为新型磁共振分子探针USPIO?PEG?tLyP?1的体外实验及今后的临床应用奠定了基础。
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强化训练对脑缺血再灌注大鼠臂板蛋白3A及其受体神经纤毛蛋白-1表达的影响
目的 观察不同强度运动训练对脑缺血再灌注大鼠脑内臂板蛋白3A(Sema3A)及其受体神经纤毛蛋白-1(NP-1)的表达以及缺血侧脑细胞凋亡的影响,探讨强化运动训练促进脑缺血再灌注大鼠运动功能恢复的可能机制.方法 采用线栓法建立左侧大脑中动脉阻塞( MCAO)2 h再灌注动物模型.60只造模成功的雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为训练1组、训练2组、训练3组、对照组(各15只鼠).训练1组大鼠每天游泳1次,每次5 min；训练2组大鼠每天游泳1次,每次10 min;训练3组大鼠每天游泳2次,每次10 min;对照组大鼠不做任何训练；另15只鼠为假手术组不阻塞大脑中动脉血流,不训练.采用Garcia神经功能缺损评分评价神经功能缺损情况.采用TUNEL染色观察缺血区大脑皮质细胞凋亡情况.应用免疫组织化学法对脑缺血后脑内神经生长抑制因子Sema 3A及其受体NP-1的表达进行分析.结果 假手术组神经行为功能正常.对照组各时间点的Garcia神经行为功能评分与假手术组同时间点比较,差异均有统计学意义(P＜0.01)；各训练组游泳训练7和14 d后的Garcia神经功能评分明显优于同时间点对照组(P＜0.01),且训练3组神经功能评分提高明显,其游泳训练3、7和14 d后的Garcia神经功能评分分别为(12.80±0.45)、(15.20±0.45)和(16.80±0.45)分.游泳训练3、7和14 d后,训练1组、训练2组、训练3组的Sema3A、NP-1及TUNEL各指标阳性细胞的表达均明显低于对照组相同时间点(P＜0.01),以训练3组更为明显.训练3组游泳训练3、7和14d后,TUNEL阳性细胞率分别为(29.43±1.38)％、(22.30±1.21)％和(17.58±1.70)％；Sema 3A阳性细胞率分别为(19.64±1.17)％、(9.73±3.83)％和(8.24±0.87)％；NP-1阳性细胞率分别为(33.95±6.86)％、(27.95 ±1.29)％和(18.90±1.44)％,较其他各训练组的阳性细胞表达减少更明显(P＜0.01或0.05).结论 康复训练可减少脑缺血再灌注大鼠Sema 3A、NP-1及TUNEL阳性细胞表达,促进其运动功能的恢复及神经功能重塑,强化运动训练的效果更明显.
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靶向神经纤毛蛋白-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及对人T淋巴瘤细胞靶基因沉默作用
目的 构建靶向神经纤毛蛋白-1(NRP-1)基因的RNA干扰慢病毒表达载体[pLB-NRP-1/短发卡RNA(shRNA)],并观察其对人T淋巴瘤Jurkat细胞靶基因NRP-1的沉默效应.方法设计、合成3对人NRP-1的特异性干扰序列(NRP-1/shRNA1-3)和1对非特异性对照序列(NRP-1/shRNA4),分别亚克隆至经Hpa Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切线性化的慢病毒载体pLB中,得到pLB-NRP-1/shRNA重组慢病毒质粒;经酶切和测序鉴定成功后,与包膜质粒pCMV△8.91、被摸蛋白质粒pMD.G重组并包装成为慢病毒表达载体;将其感染至Jurkat细胞;分选阳性细胞后应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测对NRP-1 mRNA和蛋白表达的沉默效应.结果 酶切和测序结果证实3个靶向NRP-1基因的慢病毒载体构建成功,包装成慢病毒滴度可达108 IU/ml;感染Jurkat细胞后,NRP-1 mRNA表达量分别下降了95.9％、92.3％、87.1％,NRP-1蛋白的表达量分别下降了33.8％、29.7％、17.9％,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),shRNA1为佳干扰靶序,pLB-NRP-1/shRNA1为佳干扰靶序列慢病毒表达载体.结论 成功构建慢病毒表达载体可高效感染体外培养的人Jurkat细胞株,并可显著抑制靶基因NRP-1 mRNA和蛋白的表达.
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NRP-1过表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231、SK-BR-3生物学行为的影响
目的 通过上调乳腺癌细胞MDA-MB-231、SK-BR-3中NRP-1的表达,观察NRP-1对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响.方法 构建pcDNA3.1-NRP-1表达载体,脂质体介导NRP-1表达质粒转染MDA-MB-231、SK-BR-3细胞,用G418筛选出稳定转染的乳腺癌细胞株.利用RT-qPCR、Western blot法分别检测NRP-1基因mRNA及其蛋白表达;CCK-8法、AnnexinⅤ-APC/7-AAD法、Transwell小室分别检测转染细胞增殖率、凋亡率及侵袭、迁移能力.结果 成功构建pcDNA3.1-NRP-1表达载体,转染MDA-MB-231、SK-BR-3细胞并筛选稳定表达系.与对照组相比,过表达组细胞的NRP-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(均P＜0.05);NRP-1过表达组的细胞较对照组增殖率增加、凋亡率降低、侵袭及迁移能力增强(均P＜0.05).结论 NRP-1在乳腺癌发展、浸润、转移中起着一定的作用,它可促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,抑制其凋亡.
关键词： 神经纤毛蛋白-1 乳腺癌 MDA-MB-231 SK-BR-3 -
NRP-1的生物学特征及其在肿瘤发生发展中的作用
神经纤毛蛋白-1（neuropilin-1，NRP-1）是一种大小约为130～140 kD的非酪氨酸激酶跨膜多功能糖蛋白，在脊椎动物胚胎的神经和心血管系统发育中起重要作用。NRP-1在多种肿瘤组织中呈高表达，以独立或者依赖血管内皮生长因子-2（vascular endothelial growth factor，VEGFR-2）的方式调节肿瘤血管的形成及肿瘤细胞的增殖、凋亡和迁移，促进多种实体瘤及血液系统肿瘤的发生和发展，且与肿瘤患者的预后密切相关。本文主要对NRP-1的生物学特征及其在肿瘤发生和发展中的作用进行综述。
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直肠癌组织中神经纤毛蛋白-1及血管内皮生长因子的表达与微血管形成的相关性
目的 探讨直肠癌组织中神经纤毛蛋白-1(NRP-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达与微血管形成的关系与直肠癌的发生机制.方法 采集2013-06 ～2015-06在该院接受手术切除并经病理证实的直肠癌标本64例(份),以及癌旁正常组织.采用免疫组织化学法对标本组织进行染色,测定直肠癌组织的微血管密度(MVD),用实时逆转录(RT-PCR)法检测NRP-1和VEGF mRNA的表达水平,分析两者与MVD的相关性.结果 与癌旁正常组织相比,直肠癌组织染色程度明显增强,范围明显扩大.直肠癌组织的NRP-1mRNA、VEGF mRNA表达水平及阳性表达率、MVD均明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P＜0.01).直肠癌组织中,肿瘤大小≥5 cm者NRP-1 mRNA表达水平明显低于＜5 cm者,浸润深度在浆膜内、有淋巴结转移、Dukes分期为C期的直肠癌组织NRP-1 mRNA表达水平明显高于浸润深度在浆膜外、无淋巴结转移、Dukes分期为A、B期者(P＜0.05);低分化、浸润在浆膜内及有淋巴结转移、Dukes分期为C期的直肠癌组织VEGF mRNA表达水平明显高于高中分化、浸润在浆膜外、无淋巴结转移、Dukes分期为A、B期者(P＜0.05).NRP-1 mRNA与VEGF mRNA表达水平呈正相关(P ＜0.05);NRP-1、VEGF mRNA分别与MVD呈正相关(P＜0.05).结论 NRP-1的高表达与直肠癌的发生和进展密切相关,其可增强VEGF的活性,促进肿瘤新血管的形成,增强直肠癌的侵袭和转移能力,故可作为评价直肠癌病情发展的生物学指标.
