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1,25双羟维生素D3和染料木素对人成骨样SaOS-2细胞的作用
目的 研究1,25双羟维生素D3[1.25-(OH)2D3]及染料木素(genistein)对人成骨样SaOS-2细胞的作用.方法 培养人成骨样SaOS-2细胞,经1,25-(OH)2D3、genistein及二者联合应用后,用硝基苯磷酸二钠法(p-nitrophenylphosphate,pNPP)测定碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ALP及骨保护素(osteoprotegerin,OPG)mRNA水平的变化.免疫印记法测定OPG蛋白表达.结果 1,25-(OH)2D3及genistein可显著提高ALP活性,但对ALP mRNA的表达没有影响.二者联合应用有协同作用,可显著提高ALP活性及mRNA的表达(P＜0.01).1,25-(OH)2在D3组可显著降低OPG mRNA及蛋白的表达,而与genistein共用时,此抑制作用消失(P＜0.01).结论 1,25-(OH)2D3及genistein在促进人成骨样SaOS-2细胞的分化过程存在协同作用,genistein通过调控OPG基因及蛋白的表达抑制1,25-(OH)2D3对破骨细胞的促进作用,从而促进骨的形成.
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染料木素对骨代谢和脂代谢的研究新进展
染料木素是豆科植物提取的活性成分，它能明显降低恶性肿瘤发生，能够通过不同的传导途径促进成骨细胞生成，增加骨的碱性磷酸酶活性以及骨DNA和钙的含量，并抑制破骨细胞分化，达到防止骨质减少，抗骨质疏松的作用。染料木素同时可以促进血脂代谢，防止内脂质的氧化作用，软化血管，达到保护心脑血管，防止心脑血管意外的作用。随着对其作用机制研究的不断深入，必将开发出一系列相关药品，终为人类健康造福。
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染料木素7,4'-硝氧基丁酸酯的合成及其对MC3T3-E1细胞的增殖作用
目的 为改善染料木素的治疗效果,对其进行结构修饰.方法 通过成酯、硝基化反应,在染料木素的7-位,4'-位进行修饰,得到一个硝基酯类化合物;并考察得到的化合物对MC3T3-E1细胞的促增殖作用.结果 得到的化合物经核磁、质谱等结构鉴定与设计目标一致.该化合物能够显著促进MC3T3-E1细胞的增殖,且呈一定的时间、剂量依赖关系.结论 染料木素7,4'-硝氧基丁酸酯较母体药物更好地促进成骨细胞的增殖,为骨质疏松症治疗药物的开发提供新的参考.
关键词： 染料木素 合成 MC3T3-E1细胞 药理作用 -
染料木素和槲皮素体外抗肝纤维化作用
目的研究染料木素和槲皮素对体外肝维化的保护作用.方法细胞增殖和胶原合成分别用结晶紫染色法和3H-脯氨酸参入法.原胶原mRNA水平用RT -PCR法测定.结果染料木素(25-70 μmol*L-1)和槲皮素(6.25-50 μmol*L-1)浓度依赖抑制PDGF促HSC-T6细胞增殖和TGFβ1刺激的胶原合成及I型原胶原mRNA的表达.结论染料木素和槲皮素抑制PDGF和TGFβ1对星状细胞的作用可能对肝纤维化有保护作用.
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染料木素的磷酰化结构改造及与溶菌酶的弱相互作用
采用改进的Atherton-Todd反应对染料木素进行磷酰化结构改造,得到了4种新的磷酰化产物,并通过ESI-MS,NMR进行了结构确认,结果发现磷酰化试剂对染料木素羟基的磷酰化具有较好的选择性,反应主要发生在染料木素7位羟基;进一步利用ESI质谱技术,对4种磷酰化染料木素与大分子溶菌酶的弱相互作用进行测定,显示所有的磷酰化产物均与溶菌酶形成非共价复合物.
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染料木素与β-葡萄糖苷酶相互作用的研究
本文研究了染料木素与β-葡萄糖苷酶的相互作用.采用荧光光谱法研究了染料木素与β-葡萄糖苷酶的结合反应,二者的相互作用使β-葡萄糖苷酶发生内源荧光猝灭,属于静态猝灭机制.通过计算得到染料木素与β-葡萄糖苷酶在17、27和37℃下的结合常数分别为3.69×104、3.06 × 104和2.36×104 L·mol-1.同步荧光研究了染料木素对β-葡萄糖苷酶结构的影响,染料木素可使β-葡萄糖苷酶的构象发生变化、色氨酸残基所处微环境的疏水性降低.染料木素对酶活性的抑制试验结果表明其对酶的活性具有明显的抑制作用,双分子结合速率常数为1.2×103(mol·L-1)·min-1.结合AutoDock 4.2分子对接软件模拟研究了二者的键合模式和键合机制,表明氢键和疏水作用对染料木素与β-葡萄糖苷酶的结合起重要作用,同时还存在静电作用.
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响应面法优化纳米二氧化硅固体分散技术辅助酶解制备染料木素
本研究旨在使用纳米二氧化硅固体分散技术,提高酶解制各染料木素的效率.首先采用溶剂法制备染料木苷-纳米二氧化硅固体分散体,利用差示扫描量热法和扫描电镜对固体分散体进行验证,再利用蜗牛酶将其水解从而制备染料木素.以染料木素转化率为指标,通过单因素试验分别考察染料木苷及其固体分散体在酶解过程中不同的影响因素,再利用响应面法优化染料木苷固体分散体酶解制备染料木素的工艺.染料木苷-纳米二氧化硅固体分散体酶解反应佳条件:反应介质pH 7.1、温度为52.2℃、加酶量5.0 mg·mL-1、反应时间为7h.在此条件下,转化率为(93.47±2.40)％,比未经形成固体分散体的染料木苷转化速率提高了2.62倍.对水解产物进行纯化得到单体染料木素.采用蜗牛酶水解染料木苷-纳米二氧化硅固体分散体制备染料木索,方法简单,酶解时间显著缩短,适用于规模化生产.
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染料木素在健康受试者中的尿排泄动力学
为了研究人体口服染料木素胶囊(雌激素类药物)的尿排泄规律,筛选30名健康受试者按平行设计口服染料木素50、100和300 mg,采用LC-MS/MS法测定各时段尿液中的染料木素,并结合酶解法间接测定其葡糖醛酸结合物(glucuronidated genistein,GENG),以DAS2.0程序计算尿药动力学参数.结果表明,尿液中原药浓度很低,含量少于GENG的1％,其3个剂量的48 h平均累积尿排量分别为0.037、0.134和0.142 mg,累积尿排率仅分别为给药剂量的0.07％、0.13％和0.05％.而GENG的含量较高,其48 h累积尿排泄量分别为5.3、13.8和15.4 mg,累积尿排率分别为10.6％、13.8％和5.1％,大尿排速率分别为0.4、1.0和1.4 mg·h-1 (tmax为6 h).研究证明,部分药物在人体内以GENG形式经尿液排泄,而GENG的累积排泄量和大尿排速率在50～100 mg内随剂量倍比递增,在300 mg时呈非线性递增.
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液相色谱-串联质谱法测定人血浆中染料木素及其葡萄糖醛酸代谢物
目的 建立液相色谱-串联质谱联用法测定人血浆中染料木素(雌激素类药物)及其葡萄糖醛酸代谢物(GGS)并研究其在健康人体中的药代动力学.方法 10例健康受试者空腹口服染料木素50 mg,血浆加入内标物地塞米松后,经液-液萃取,色谱柱为Capcell Pak C8(2 mm×150 mm,5 μm),流动相为:甲醇-5 mmol·L~(-1)乙酸铵-乙腈(70:20:10),以ESI源正离子MRM模式测定染料木素的血药浓度,GGS先酶解为原形后间接测定,用DAS 2.0程序计算药代动力学参数.结果 线性范围为0.3～500.0 μg·L~(-1)(γy=0.9983),回收率在92.9%～104.9%,绝对回收率在74.2%～89.2%,日内、日间变异(RSD)均<15%.染料木素和GGS的主要药代动力学参数:t_(max)分别为(5.0±1.3),(6.0±2.4)h,C_(max)分别为(10.1±6.3),(218.7+68.6)μg·L~(-1),AUC_(0-t)分别为(31.2±10.3),(3344.0±1635.0)μg·h·L~(-1),AUC_(0-∞)分别为(33.9±11.4),(3703.0±2031.0)μg·h·L~(-1).结论 测定方法灵敏、准确、快速、特异性强,适用于染料木素药代动力学研究.
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染料木素及其衍生物的尿素酶抑制活性与作用机制
目的:观察染料木素及其衍生物对幽门螺杆菌尿素酶的抑制作用,探讨染料木素抑制尿素酶的作用机制.方法:采用靛酚法测定目标化合物的尿素酶抑制活性；双曲线法研究目标化合物抑制尿素酶的作用机制；双倒数曲线的斜率对抑制剂浓度作图法确定目标化合物的动力学常数Ki.结果:染料木素的羟基被甲氧基等取代,将导致活性的降低；染料木素抑制幽门螺杆菌尿素酶的IC50达13.7μmol·L-1,活性与阳性对照乙酰氧肟酸相当；染料木素是尿素酶的非竞争抑制剂,Ki为13.4μmol·L-1.结论:染料木素具有良好的抑制幽门螺杆菌尿素酶的活性,长期食用富含染料木素的食物,将有助于防止消化性溃疡的发生或对消化性溃疡有辅助治疗的作用；染料木素可以作为寻找新型高效尿素酶抑制剂的先导化合物.
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染料木素对异丙肾上腺素诱导的心肌肥厚大鼠血管活性物质的影响
目的:观察染料木素(Gen)对异丙肾上腺素(ISO)所致大鼠心肌肥厚的保护作用及其作用机制.方法大鼠背部sc给予Iso 1 mg·kg-1·d-1造模.第2天在给Iso 30 min后,再背部sc给予Gen 0.03,0.1和0.3 μmol·kg·1,连续14 d.末次药后12 h检测左心质量参数;放免法测定血桨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),心钠素(ANP)和内皮素(ET)的含量.结果:与正常时照组相比,模型组左心室质量参数由(1.87±0.09)mg·kg-1明显提高至(2.48±0.11)mg·kg-1(P<0.01),血浆AngⅡ含量由(245±74)ng·L-1提高至(354±51)ng·L-1(P<0.05),ET含量由(37±17)ng·L-1提高至(66±20)ng·L-1(P<0.05),ANP含量由(506±115)ng·L-1降低至(265±125)ng·L-1(P<0.05).与模型组相比,Gen 0.03,0.1和0.3μmol·kg-1组左心室质量指数下降,分别为:(2.32±0.15)mg·kg·1(P>0.05),(2.28±0.10)mg·kg-1(P<0.05),(2.25±0.13)mg·kg-1(P<0.05);血浆Ang Ⅱ含量下降,分别为:(242±77)ng·L-1(P<0.05),(198±40)ng·L-1(P<0.01),(196±53)ng·L-1(P<0.05);血浆ET含量下降,分别为:(36±17)ng·L-1(P<0.05),(38±9)ng·L-1(P<0.05),(45±17)ng·L-1;血浆ANP含量升高,分别为:(695±177)ng·L-1(P<0.01),(574±219)ng·L-1(P<0.05),(544±231)ng·L-1(P<0.05).结论:Gen可能通过影响大鼠体内血管活性物质的平衡,从而抑制ISO诱导的心肌肥厚.
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染料木素的脑保护作用及机制研究进展
染料木素是从大豆、三叶草、葛根等植物中提取出来的异黄酮化合物,为植物雌激素的一种.其化学结构与内源性雌激素相似,能与雌激素胞膜及胞内受体结合发挥作用,如抗肿瘤作用、神经保护作用、调节骨代谢与脂代谢、抗肝纤维化、心血管保护及抗氧化等作用.本文从神经毒性物质诱导的神经元损伤、去卵巢大鼠神经损伤、脑缺血再灌注损伤等方面综述了近年来染料木素对脑损伤的保护作用;文献分析表明,染料木素可通过直接与淀粉样蛋白β(Aβ)结合、抗氧化作用、抑制Ca2+超载、减轻谷氨酸的毒性、降低促炎细胞因子的表达及调节信号转导通路实现对各种因素所致的神经损伤保护效应.
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银杏叶提取物及其制剂中染料木素的检测
目的:对银杏叶提取物及其制剂中非法添加染料木素进行鉴定和检测.方法:采用HPLC-DAD法,色谱柱为DIKMA Inertsil ODS-3(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇0.4％磷酸溶液(50∶50),流量1.0 mL·min-1,柱温35℃,检测波长260nm,并同时采集210～400 nm的光谱图,对银杏叶、银杏叶提取物及其制剂中的染料木素进行定性分析.结果:部分银杏叶提取物和银杏叶制剂样品HPLC色谱图中出现与染料木素对照品保留时间一致的色谱峰,DAD光谱一致.结论:部分厂家生产的银杏叶提取物及其制剂中含有染料木素,为生产时添加了其他含染料木素的原料.
关键词： 银杏叶 银杏叶提取物 银杏叶制剂 染料木素 高效液相色谱-二极管阵列检测器 -
一株新分离鸡肠道厌氧细菌将染料木素转化为左旋-5-羟基-雌马酚
本研究从鸡新鲜粪样中分离得到一株能在厌氧条件下将大豆异黄酮染料木素转化为5-羟基-雌马酚的棒状严格厌氧细菌,我们将其命名为AUH-JLC257.通过ESI质谱、核磁共振氢谱和碳谱等对产物5-羟基-雌马酚进行了结构鉴定.通过手性高效液相色谱检测和旋光测定发现生成的5-羟基-雌马酚仅为左旋-5-羟基-雌马酚.菌株AUH-JLC257能高效转化底物染料木素的大浓度为0.6 mmol/L,平均转化率为83.1％.通过本研究首次发现生成的5-羟基-雌马酚在3.3μmol/L浓度下仍表现出对二苯代苦味酰基自由基(DPPH)的清除能力.通过16S rRNA基因序列比对,菌株AUH-JLC257与菌株Slackia equolifaciens strain DZE相似性高,相似性为99.27％.
关键词： 染料木素 左旋-5-羟基-雌马酚 细菌分离 鉴定 微生物生物转化 -
野百合黄酮类化学成分研究
目的 研究野百合(Crotalaria sessiliflora L.)中的黄酮类化学成分.方法 应用柱色谱技术分离纯化,核磁共振及质谱鉴定化合物结构.结果 从野百合醋酸乙酯层萃取物中分离得到11个黄酮类化合物,分别鉴定为异牡荆苷(1)、芹菜素(2)、染料木素(3)、木犀草素(4)、金丝桃苷(5)、槲皮苷(6)、槲皮素(7)、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖-7-O-β-D-葡萄糖苷(8)、4 ',7-二羟基黄酮(9)、3',5',5,7-四羟基二氢黄酮(10)、5-羟基-7,3',4'-三甲氧基黄酮醇(11).结论 化合物1 ～11均为首次从该植物中分离得到.
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酶解法转化染料木苷包合物制备染料木素的研究
目的 采用酶解法水解染料木苷-羟丙基-β-环糊精包合物制备染料木素.方法 运用饱和水溶液法制备染料木苷-羟丙基-β-环糊精包合物,再利用蜗牛酶将其水解从而获得染料木素.以染料木素转化率为指标,通过单因素实验分别考察染料木苷包合物和染料木苷酶解过程中不同的影响因素,确定佳的酶解条件.采用差示扫描量热法对包合物进行验证.建立高效液相色谱分析方法,比较酶解染料木苷包合物和染料木苷的转化率.采用1 H-NMR,13C-NMR鉴定水解产物.结果 染料木苷-羟丙基-β-环糊精包合物酶解反应适条件为反应介质pH5.0,温度为50℃,酶与底物的用量比为4:5,反应时间为12 h,在此条件下,包合物的转化率为(90.17±2.40)％,比未经包含的染料木苷转化率高了0.95倍.结论 蜗牛酶水解染料木苷-羟丙基-β-环糊精包合物制备染料木素,方法简单,酶解时间显著缩短,适用于工业化生产.
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染料木素-β-环糊精包合物的制备和鉴定
目的制备染料木素β-环糊精包合物,提高药物的水溶性及稳定性.方法通过饱和水溶液法制备出染料木素-β-环糊精包合物,并用紫外光谱、红外光谱、差示扫描量热和X-射线衍射分析等方法加以鉴定.结果建立了一种制备染料木素β-环糊精包合物的方法.结论β-环糊精包合物在水中的溶解度明显大于单体染料木素.
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RIP-HPLC同时测定槐角丸中4种有效成分的含量
目的 建立同时测定槐角丸中槐角苷、黄芩苷、染料木素和汉黄芩素4种有效成分含量的HPLC方法.方法 采用Dia-monsil C18柱(4.6 mm×200 mm,5 μm)进行分离;流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液,梯度洗脱(0～10 min,25%～37%乙腈;10～25 min,37%～60%乙腈);检测波长260 nm;柱温30℃;流速1.0 mL·min-1;进样量10μL.结果 槐角苷、黄芩苷、染料木素和汉黄芩素的质量浓度与峰面积分别在11.6～116μg·mL-1(r=0.999 6,n=6)、33.5～335 μg·mL-1(r=0.999 8,n=6)、0.46～4.63μg·mL-1(r=0.999 8,n=6)和1.54～15.4μg·mL-1(r=0.999 7,n=6)内呈良好的线性关系;平均加样回收率依次为99.3%、99.6%、99.6%和99.0%.RSD为1.1%、1.1%、1.4%和0.8%.结论 该方法快速、简便、重复性好,适合于同时测定槐角丸中槐角苷、黄芩苷、染料木素和汉黄芩素的含量.
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染料木素对雌激素缺乏诱发的大鼠骨质疏松症的作用研究
目的 观察染料木素对实验性去卵巢大鼠诱发的骨质疏松症模型的治疗作用.方法 SD雌性大鼠行去卵巢术后,随机分为正常对照组,模型组,骨疏康(GSK)组,尼尔雌醇组,染料木素大、中和小剂量组,每组10只.各组动物给予盐酸四环素25mg·kg-1连续3 d,同时给予治疗用药,剂量为GSK 5 g·kg-1,尼尔雌醇为1.5mg·kg-1,染料木素分别为18,9,4.5 mg·kg-1,以上给药除尼尔雌醇每周1次外其他各组均为每日1次.给药后12周后进行相关指标的测定.结果①染料木素4.5,9 mg·kg-1连续给药12周可使其股骨干重、灰重、骨钙及股骨和腰椎骨密度显著增加,与模型组比较具有显著差异(P<0.05或P<0.01);②染料木素4.5,9 mg·kg-1连续给药12周可显著改善模型大鼠的股骨及椎骨大载荷、大桡度、弹性载荷、弹性桡度(P<0.05或P<0.01);③染料木素低、中剂量用药12周后可明显增加模型大鼠骨小梁面积百分比(BV/TV%)、骨小梁厚度(Tb.Th)和骨小梁数目(Tb.N),减小骨小梁间隔(Tb.Sp)(P<0.05或P<0.01);④染料木素低、中剂量给药12周后,可使模型大鼠的血清ALP水平下降,尿Ca/Cr、Pyd/Cr水平降低(P<0.05或P<0.01).结论 染料木素对模型动物的骨密度、骨生物力学及相关生化指标都具有改善作用,具有较好的抗骨质疏松作用.
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染料木苷在大鼠肝微粒体中的代谢及酶促反应动力学研究
目的 建立HPLC-MS法,初步鉴定染料木苷在大鼠肝微粒体中的代谢产物,并研究其酶促反应动力学.方法 建立大鼠肝微粒体体外孵育体系对染料木苷进行代谢研究,应用HPLC-MS鉴定其体外代谢产物.以磺胺甲(噁)唑为内标,采用代谢物生成法,对代谢产物染料木素进行定量测定.应用GraphPad Prism 5.0软件分析数据,计算酶促反应动力学常数Vmax和Km.结果 染料木苷在体外孵育体系中生成代谢产物,经鉴定其为苷元染料木素.染料木苷在大鼠肝微粒体中佳温孵时间为40 min,佳蛋白质量浓度为1 mg·mL-1,底物浓度为50 μmol·L-1,代谢产物染料木素酶促反应的Vmax=(0.1042±0.003 3)μmol·min-1·mg(pro)-1,Km=(28.96±2.80) μmol·L-1.结论 染料木苷在大鼠肝微粒体中通过水解反应,生成相应苷元.代谢物生成法是一种可靠、简便测定肝微粒体酶促反应动力学参数的方法,所得到的酶促反应动力学参数为染料木苷进一步研究提供了重要参数.
