首页 > 文献资料
-
丙戊酸钠增强二甲双胍对前列腺癌PC-3细胞的抗肿瘤作用
目的 探讨去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)与二甲双胍(MET)在前列腺癌PC-3细胞中的抗肿瘤作用.方法 分别处理前列腺癌PC-3细胞,分为对照组、VPA组、MET组、VPA+MET组.随后采用CCK-8法检测肿瘤细胞的活性变化,Transwell技术检测肿瘤的侵袭转移能力,Western blotting检测pAkt、pSmad3、aH3、aH4等蛋白的水平变化.结果 VPA组与MET组均可抑制肿瘤细胞的侵袭转移能力与肿瘤细胞活性,而VPA+MET组对肿瘤细胞侵袭转移能力和肿瘤细胞活性的抑制较VPA组与MET组更加显著.相比较对照组和MET组,VPA+MET组中pAkt、pmTOR和pSmad3蛋白水平明显降低,伴随aH3、aH4乙酰化水平明显升高(P<0.05).结论 VPA与MET两种药物联合应用较单一用药具有更显著的优势.这种优势可能是通过调节转化生长因子-β(TGF-β)与雷帕霉素靶蛋白(mTOR)两条通路活性及上调组蛋白aH3、aH4而实现.
-
mTORC1信号通路在花生四烯酸代谢产物致乳腺癌过程中的作用
目的：探讨花生四烯酸（ AA）代谢产物5-羟二十烷四烯酸（ HETE）、12-HETE促进乳腺癌发生过程中雷帕霉素靶蛋白1（ mTOR）信号通路的作用。方法将体外培养乳腺癌MCF-7细胞随机分为4组，对照组加入0．1％DMSO，HETE组加入5-HETE及12-HETE 15μmol/L，Rap组加入mTORC1抑制剂雷帕霉素（ Rap）100μmol/L，HETE＋Rap组加入Rap 100μmol/L及5-HETE＋12-HETE 15μmol/L。 CCK-8法检测各组细胞增殖率，免疫印迹法检测各组细胞mTORC1信号通路下游蛋白P-S6活性，细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。结果细胞增殖率HETE组高于对照组，HETE＋Rap组低于HETE组（P均＜0．05）。 P-S6蛋白灰度值HETE组高于对照组，HETE＋Rap组低于HETE组（ P均＜0．01）。 MCF-7细胞迁移距离 HETE 组大于对照组（P＜0．01）。 HETE＋Rap组小于HETE组（P＜0．05）。结论 mTORC1信号通路参与了 AA代谢产物乳腺癌发生的过程。
-
血管内亚低温治疗对脑缺血性癫痫大鼠神经元异常放电的作用及机制
目的 观察血管内亚低温治疗对脑缺血性癫痫大鼠神经元异常放电的作用,并探讨其作用机制.方法 将100只SD大鼠随机分为5组,各组20只.空白组正常饲养,模型组、亚低温组和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂组均采用颈动脉结扎法制备脑缺血性癫痫模型;假手术组予以相同手术刺激,不结扎.模型制备成功后组予以亚低温治疗3 h/d,mTOR抑制剂组腹腔注射雷帕霉素0.13 mg/(kg·d),均干预3 d.采用脑电图监测大鼠异常放电频率;Longa法对大鼠神经行为学进行评分.5组各取6只大鼠,直接断头取脑,用TTC染色法测算大鼠脑梗死率;Western blotting法检测大鼠海马组织中mTOR通路相关蛋白表达,并做相关分析.结果 与空白组、假手术组比较,模型组神经元异常放电频率高(P均<0.05);与模型组比较,亚低温组、mTOR抑制剂组神经元异常放电频率低(P均<0.05).模型组神经行为学评分分布与空白组、假手术组比较差异有统计学意义(P均<0.05),与亚低温组、mTOR抑制剂组比较差异有统计学意义(P均<0.05).与空白组、假手术组比较,模型组脑梗死率高(P均<0.05);与模型组比较,亚低温组、mTOR抑制剂组脑梗死率低(P均<0.05).与空白组、假手术组比较,模型组磷酸化蛋白激酶B(p-AKT1)/AKT1、磷酸化mTOR(p-mTOR)/mTOR、磷酸化核糖体蛋白S6激酶1(p-S6K1)/S6K1值大(P均<0.05);与亚低温组、mTOR抑制剂组比较,模型组p-AKT1/AKT1、p-mTOR/mTOR及p-S6K1/S6K1值小(P均<0.05).模型组、亚低温组、mTOR抑制剂组异常放电频率与p-AKT1/AKT1、p-mTOR/mTOR及p-S6K1/S6K1呈正相关(r分别为0.689、0.884、0.861,P均<0.01).结论 血管内亚低温治疗能够缓解脑缺血性癫痫大鼠神经元异常放电,其作用机制可能与抑制海马区m T O R通路有关.
-
青蒿琥酯对人肺腺癌细胞系A549增殖的抑制作用及机制
目的 观察青蒿琥酯对人肺腺癌细胞系A549增殖的抑制作用,并探讨其作用机制.方法 常规培养A549细胞后,不同浓度(0、25、50、75、100μmol/L)的青蒿琥酯作用A549细胞,采用CCK-8法检测青蒿琥酯对A549细胞的增殖抑制率,Western blotting法检测mTOR信号通路关键分子和自噬相关蛋白p62、LC3B表达变化.结果 25μmol/L及以上浓度的青蒿琥酯可抑制A549细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性(P均<0.05).不同浓度(0、25、50、75、100μmol/L)的青蒿琥酯作用A549细胞48 h可降低p62表达,增加LC3B表达,并降低mTOR信号通路关键分子的表达,并呈剂量依赖性.青蒿琥酯联合自噬抑制剂3-MA可增加A549细胞的生存率(P<0.05).结论 青蒿琥酯可能通过下调mTOR信号通路关键分子表达、诱导A549细胞发生自噬从而抑制A549细胞增殖.
-
二甲双胍对人子宫内膜癌细胞增殖的影响及其机制
目的：探讨二甲双胍对人子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞增殖的影响及可能的作用机制。方法以不同浓度（0、1、5、10 mmol／L）的二甲双胍作用于Ishikawa细胞分别干预24、48、72 h，采用MTT法检测细胞增殖率；干预48 h后，采用RT-PCR技术检测雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和DNA损伤反应调节基因（REDD1）mRNA的表达， Western blotting技术检测mTOR和REDD1蛋白的表达。结果二甲双胍抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖，呈浓度时间依赖性（ P均＜0．05）。二甲双胍增加REDD1蛋白及基因的表达，降低mTOR蛋白及基因的表达（ P均＜0．05）。结论二甲双胍可能通过REDD1／mTOR信号通路抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖。
关键词： 子宫肿瘤 二甲双胍 雷帕霉素靶蛋白 DNA损伤反应调节基因 细胞增殖 -
1,25-(OH)2D3对大鼠系膜细胞增殖的影响及机制探讨
目的 探讨1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]对大鼠肾小球系膜细胞(MC)增殖的影响及机制,为其临床应用提供依据.方法 将体外培养的对数生长期大鼠MC分为对照组和观察组.观察组采用1,25-(OH)2D3(浓度为10-8mol/L)干预,对照组不干预.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,免疫荧光染色法检测蛋白激酶(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达.结果 与对照组比较,观察组MC增殖受抑,细胞周期阻滞于G1期；Akt、mTOR蛋白表达降低,P均＜0.05.结论 1,25-(OH)2D3可抑制大鼠肾小球MC增殖,其作用机制可能为抑制磷脂酰肌醇-3激酶/Akt/mTOR信号传导通路.
关键词： 肾小球系膜细胞 1 25-二羟基维生素D3 雷帕霉素靶蛋白 -
雷帕霉素靶蛋白和p70S6激酶及Lgr5蛋白在胃癌组织中的表达及相关性
目的 探讨雷帕霉素靶蛋白(mammalian target“rapamycin,mTOR)、p70S6激酶(p70S6 kinase,p70S6K)及Lgr5蛋白在胃癌组织中的表达及相关性.方法 采用免疫组织化学法检测132例胃癌患者手术切除的胃癌组织、癌旁组织标本和30例慢性非萎缩性胃炎患者胃镜下活检正常胃黏膜组织标本中mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白表达,分析胃癌患者mTOR、p70S6K及Lgr5蛋白阳性表达率与临床病理特征的关系,对胃癌组织中Lgr5蛋白表达与mTOR、p70S6K蛋白表达的相关性进行分析.结果 胃癌组织mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白阳性表达率分别为65.15％、61.36％、70.45％,癌旁组织分别为24.24％、22.73％、34.09％,均高于正常胃黏膜组织(10.00％、13.33％、6.67％),且胃癌组织mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白阳性表达率高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P＜0.05);不同性别,年龄≥50岁与＜50岁胃癌患者mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白阳性表达率比较差异均无统计学意义(P＞0.05),肿瘤直径≥5 cm胃癌患者mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白阳性表达率(72.73％、74.03％、80.52％)高于肿瘤直径＜5 cm者(54.55％、43.64％、56.36％),TNM分期Ⅰ+Ⅱ期者(50.98％、45.10％、54.92％)低于Ⅲ+Ⅳ期者(74.07％、72.84％、80.52％),组织学分级G1+G2期者(53.70％,50.00％,55.56％)低于G3 +G4期者(73.08％、69.23％,80.77％),淋巴结转移N0者(42.22％、44.44％、46.67％)低于N1+N2+N3者(77.01％、70.11％、82.76％),侵犯程度T1+T2期者(42.11％、42.11％、44.74％)低于T3 +T4期者(74.47％、69.15％、80.85％),差异均有统计学意义(P＜0.01);胃癌组织中Lgr5蛋白表达与mTOR、p70S6K蛋白表达呈正相关(r=0.579,P=0.004 6;r=0.502,P=0.007 1).结论 mTOR、p70S6K和Lgr5蛋白表达与胃癌肿瘤浸润程度、淋巴结转移、TNM分期、组织学分级密切相关,可作为评估胃癌患者预后的指标.
-
mTOR siRNA对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞生物学行为的影响
目的 观察mTOR siRNA对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖能力的影响.方法 选取45例喉鳞状细胞癌组织和45例正常喉黏膜组织,采用免疫组织化学法检测mTOR蛋白的表达;将喉鳞状细胞癌Hep-2细胞分为空白对照组、空载体组和mTOR siRNA组,及正常对照组、溶剂对照组和雷帕霉素组,分别利用mTOR siRNA和雷帕霉素进行治疗,采用Western bloting法检测不同浓度的mTOR siRNA和雷帕霉素分别处理细胞后对mTOR蛋白表达的影响,并采用CCK-8试剂盒分析mTOR蛋白表达下调对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖能力的影响.结果 mTOR蛋白在喉鳞状细胞癌组织中表达的阳性率显著高于正常喉黏膜组织(P<0.05).3种不同浓度mTOR siRNA分别转染Hep-2细胞24、48、72 h,各组与空白对照组、空载体组相比,mTOR蛋白表达均有所降低(P<0.05),且mTOR蛋白表达随mTOR siRNA浓度的增加、作用时间的延长而降低(P<0.05).3种不同浓度雷帕霉素处理Hep-2细胞24、48、72 h,各组与溶剂对照组及正常对照组相比,mTOR蛋白表达量均有所降低(P<0.05);且mTOR蛋白表达随雷帕霉素浓度的增加、处理时间的延长而降低(P<0.05).与空白对照组、空载体组相比,各mTOR siRNA组的Hep-2细胞增殖在转染后24、48、72 h均受到明显抑制(P<0.05).结论 mTOR siRNA均能降低喉鳞状细胞癌Hep-2细胞中mTOR蛋白的表达,有效抑制细胞的生长,为喉鳞状细胞癌的分子治疗提供了理论依据.
-
mTOR在TGF-β2诱导的人晶状体上皮细胞上皮-间叶样转化过程中的动态表达
目的 观察雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,Mtor)在转化生长因子β<,2>(transforming growth factor-β<,2>,TGF-β<,2>)诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epi-thelial ceils,HLEC)上皮一间叶样转化过程中的动态表达变化.方法 将10μg·L<'-1>TGF-β<,2>,加入HLEC-B3细胞系,分别在体外培养0 h、1 h、6 h、12 h、24 h、48 h,光学倒置显微镜下观察细胞的形态变化,Western blot-ting检测Mtor及其磷酸化水平在该过程中的动态表达情况,同时观察HLEC上皮细胞标志物缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)、上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin,E-cad)和间叶样细胞标志物纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平.结果 在10μg·L<'-1>TGF-β<,2>诱导HLEC间叶样分化过程中,随着培养时间的增加,HLEC从类椭圆形、多角形逐渐变为长梭形,且细胞间隙增大.与未经TGF-β<,2>处理的HLEC相比,E-cad和Cx43分别于培养的6 h和12 h时表达开始明显下降(E-cad:1.059±0.004,P=0.000;Cx43:0.477±0.076,P=0.032),FN和α-SMA于处理24 h时表达开始明显增高(FN:0.872±0.134,P=0.011;α-SMA:0.516±0.049,P=0.000);Mtor的磷酸化水平从培养的6 h开始明显增高(0.542±0.124,P=0.003),并呈时间依赖性表达上调,在24 h时达到高水平,但总Mtor的表达水平没有明显变化.结论 TGF-β<,2>诱导HLEC上皮一间叶样转化过程中Mtor磷酸化激活,并随间叶样转化程度的增高而表达增加,提示Mtor可能参与了HLEC向间叶样细胞转化的过程.
-
BQ-123通过 mTOR-自噬通路对蛛网膜下腔出血大鼠神经细胞凋亡的影响
目的：探讨BQ-123对蛛网膜下腔出血（ SAH）的治疗作用及其机制。方法：120只雄性SD 大鼠，分为假手术（Sham）组、SAH组、雷帕霉素组、BQ-123干预组。二次注血法制作SAH大鼠模型；镜下观察海马区组织形态结构变化；免疫组化法和RT-PCR法检测海马区雷帕霉素靶蛋白（ mTOR）、自噬相关基因Beclin-1和微管相关蛋白1轻链（ LC3）-Ⅱ的表达；TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果：SAH组海马区可见神经细胞变性水肿和死亡；血管内皮细胞肿胀、凝集，管腔受压、狭窄明显，管壁迂曲不平、缝隙连接断裂、基膜松散、模糊甚至分离。雷帕霉素组大部分细胞排列整齐、细胞结构完整；血管内皮细胞肿胀、凝集，管腔受压、狭窄程度减轻，管壁迂曲不平；BQ-123干预组结构完整神经细胞显著增多；血管内皮细胞凝集已少见，膜结构完整、清晰，基膜厚薄均匀。与 SAH组比较，雷帕霉素组和BQ-123干预组海马区mTOR表达降低，Beclin-1和LC3-Ⅱ表达增加，凋亡神经细胞数量减少（P＜0．05）。结论：BQ-123可抑制SAH大鼠神经细胞凋亡，其机制与调控mTOR-自噬信号途径有关。
-
EC9706和Eca109细胞中雷帕霉素靶蛋白信号通路激活状态观察
目的:观察低分化的食管鳞癌细胞EC9706和高分化的食管鳞癌细胞Eca109中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号转导通路的激活状态.方法:采用细胞免疫组织化学方法检测EC9706和Eca109细胞中mTOR及其下游靶分子p70S6K的表达和定位,并采用RT-PCR和Western blot方法分别从mRNA及蛋白水平检测此通路的活性.结果:在2种细胞中mTOR均有表达,且在EC9706细胞中的表达水平高于Eca109(P＜0.05);EC9706细胞中mTOR下游靶点的磷酸化水平高于Eca109细胞(P＜0.05).结论:在2种食管鳞癌细胞中,mTOR信号通路均特异性激活;但激活状态与细胞的分化程度有关,细胞分化程度低者通路的激活水平较高.
-
靶向mTOR siRNA的合成及对MCF-7细胞mTOR基因表达的影响
目的:合成靶向哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)siRNA,观察其对人乳癌MCF-7细胞mTOR基因表达的影响.方法:以mTOR基因434～452序列为靶点,设计并体外合成mTOR siRNA,用100和150 nmol/L的siRNA转染MCF-7细胞24、48、72 h,同时设无关对照组(转染非特异性siRNA)和正常对照组(不转染),运用免疫组化SP法和原位杂交技术检测各组细胞mTOR蛋白及mRNA的表达水平.结果:转染24、48和72 h后,与各对照组相比,siRNA转染组细胞mTOR蛋白及mRNA的表达均降低(P均＜0.05),2个siRNA转染组之间差异无统计学意义(P均>0.05).不同时间点mTOR蛋白及mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05).结论:设计合成的siRNA可有效抑制乳癌MCF-7细胞mTOR基因的表达.
-
热量限制对延缓衰老的作用
热量限制(caloric restriction,CR)在很多物种中能够改善健康和延缓衰老,近年来的许多研究发现,热量限制可以减少多种与年龄相关性疾病的发生,但至今热量限制延缓衰老的机制尚未十分清楚.近有研究表明,热量限制延缓衰老的机制可能与营养调控、生殖滞育等过程有密切的关系,SIRT1、PGC-1α、AMPK、TOR等信号因子也因其在热量限制和营养调控延缓衰老的机制研究中的重要作用而受到极大的关注.
-
细胞自噬与炎症小体相互作用的研究进展
细胞自噬是真核生物细胞内普遍存在的一种自我维持内环境稳定的机制,并在多种生理活动中发挥重要作用,如生存、发育、细胞自我保护等.炎症小体是胱天蛋白酶活化平台,并促进某些促炎因子如IL-1β、IL-18的成熟和分泌,启动机体的固有免疫反应.自噬与炎症小体关系密切,炎症小体能够诱导自噬的发生,自噬对炎症小体也有调控作用.现就细胞自噬和炎症小体的相互作用作一综述.
-
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号传导与恶性肿瘤的治疗
雷帕霉素靶蛋白(target of rapamycin,TOR)是近年来发现的一类进化上保守的蛋白家族,广泛存在于酵母、果蝇、哺乳动物中,该家族包括TOR1、TOR2、MEC1、TEL1、RAD3、MEI-41、DNA-PK、ATM、ATR、TRAPP及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammal target of rapamycin,mTOR),在哺乳动物中只发现一种TOR蛋白,即mTOR[1].
-
依维莫司在转移性肾细胞癌靶向药物序贯治疗中的应用
肾细胞癌起源于近曲小管上皮,以透明细胞癌为主.血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)通路的活化导致肿瘤血管生成增加,在肾癌转移中起到关键作用.目前已有多种针对VEGF和mTOR信号通路的靶向药物被批准用于治疗转移性肾细胞癌(metastatic renal cell carcinoma, mRCC)患者,包括血管内皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(VEGFR-TKI)如舒尼替尼、索拉非尼和帕唑帕尼,抗VEGF抗体贝伐单抗,以及mTOR抑制剂替西罗莫司和依维莫司.其中,VEGFR-TKI被推荐用于大多数mRCC患者的一线治疗,对于VEGFR-TKI一线治疗失败的患者,国际上主要的肾癌临床诊治指南均推荐应用mTOR抑制剂依维莫司治疗.研究发现,mRCC患者序贯应用不同作用机制的靶向药物可以有效控制肿瘤生长,延长无进展生存时间(PFS),维持较长的临床获益时间.本文主要讨论抗mTOR抑制剂依维莫司在mRCC二线治疗中的临床研究结果.
-
西罗莫司在肝移植中的应用进展
西罗莫司(SRL;商品名:雷帕鸣)初是由加拿大Ayerst研究所从吸水性链霉菌发酵液中提取出来的一种大环内酯类抗生素,分子式为C51 H79 NO13其相对分子质量为914.2.SRL通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、阻断白细胞介素2(IL-2)的作用从而抑制急性排斥反应(AR);同时抑制细胞因子信号传导而抑制肿瘤细胞的增殖,发挥抗肿瘤作用.现已证明它是一种强有力的新型免疫抑制剂,999年9月已被美国FDA批准上市.本文就SRL在肝移植中的应用进展作一综述.
-
肾移植术后第一年使用西罗莫司的优化方案选择——美国的临床经验
西罗莫司(SRL),即雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂在美国的临床应用已经接近10年的时间,与其他的免疫抑制剂一样,临床医师也付出了相当的时间去学习如何优化地使用它.虽然SRL已被批准术后与环孢素A(CsA)联合做为免疫抑制方案,但一些中心仍倾向于不在术后直接使用SRL,特别是肥胖的受者,因为容易引起切口愈合不良.
-
西罗莫司在治疗淋巴管肌瘤病中的作用
淋巴管肌瘤病(LAM)是一种罕见的结节硬化症基因突变引发的肺部囊性病变,多见于女性,可伴发肾血管肌脂瘤和淋巴管扩张.确诊LAM需要借助高分辨率CT,由有经验的放射学专家判读,并结合肺活检结果做出诊断.常规的处理方案是根据以往经验使用孕酮进行抗雌激素治疗,肺移植也是LAM患者的一个重要选择,但复发率较高.LAM和复合性结节性硬化病都是由于结节硬化基冈TSC1和TSC2突变所致,而这两个基因则通过丝(苏)氨酸激酶(AKt)和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号系统调控细胞的生长、存活和运动.因此,越来越多的医生尝试使用mTOR抑制剂,如西罗莫司等来治疗LAM,并获得了较好的效果.
-
微小RNA-20a对人胶质瘤细胞替莫唑胺耐药性的影响
目的 检测微小RNA(miRNA,miR)-20a在替莫唑胺(TMZ)耐药的胶质瘤细胞株中的表达,探讨胶质瘤产生TMZ耐药的机制.方法 通过浓度梯度递增法建立人脑胶质瘤TMZ耐药模型细胞株,并命名U251/TMZ.实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞株中miR-20a的表达.Western blot技术检测细胞株中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号及其下游信号的磷酸化.对U251/TMZ细胞株转染miR-20a inhibitor,并检测其细胞存活率、miR-20a表达及mTOR信号通路磷酸化.结果 与U251细胞株比较,U251/TMZ细胞株中miR-20a的表达水平明显升高(2.28 ±0.18比1.03±0.05,P＜0.05),同时mTOR通路的磷酸化水平也升高.并且抑制miR-20a表达后,U251/TMZ细胞株的细胞存活率明显下降(P＜0.01),mTOR信号通路的磷酸化水平下降.结论 miR-20a的表达可能与胶质瘤细胞对TMZ的耐药性相关,其可能通过mTOR信号通路发挥作用.
