胃泌素对人结肠癌裸鼠移植瘤增殖活性的影响

结肠癌是常见的恶性肿瘤,目前尚缺乏有效的全身治疗方法.近年来发现胃肠激素,特别是胃泌素与部分胃肠肿瘤的发生、发展有关.我们利用人结肠癌SW480裸鼠移植瘤模型,观察在五肽胃泌素(pentagastrm,PG)作用下,移植瘤体积、重量、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、组织核仁区嗜银蛋白(silver-stained nuclear organizerregion protein,AgNORs)的变化,探讨胃泌素对人结肠癌移植瘤增殖活性的影响及临床意义.

Ki-67在结肠良、恶性病变中的表达及其意义

结肠癌常由结肠慢性炎症、结肠腺瘤等病变演变而来,其重要特征是细胞获得了无限增殖的能力.Ki-67抗原(简称为Ki-67)是全面反映细胞群体增殖活性的良好指标.我们运用流式细胞术,对Ki-67在结肠良、恶性病变中的表达及其意义进行初步研究.

慢病毒介导的HO-1基因沉默对人白血病K562细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究沉默血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)基因对人慢性粒细胞性白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)K562细胞增殖与凋亡的影响.方法:构建靶向HO-1基因的重组慢病毒Lv-siRNA-HO-1,将其感染K562细胞,荧光显微镜检测其适感染复数(multipliciy of infection,MOI).Western blotting检测Lv-siRNA-HO-1感染组、空载体Lv-Ctrl感染组及未感染组K562细胞中HO-1蛋白的表达,CCK-8法、流式细胞术分别检测各感染组K562细胞的增殖与凋亡.结果:成功构建靶向HO-1基因的干扰表达载体PSIH1-HO-1-siRNA,包装后形成重组慢病毒Lv-siRNA-HO-1,其有效感染K562细胞MOI值为6.与未感染组相比,Lv-siRNA-HO-1感染组K562细胞中HO-1蛋白的表达显著降低[(0.16±0.02) vs(0.70 ±0.02),P＜0.01],K562细胞增殖活性也明显下降[(1.36±0.12) vs (2.02±0.17),P＜0.01)],而K562细胞凋亡率则显著增加[(62.77±4.39)％vs(14.19±1.6)％,P＜0.01].结论:慢病毒介导的HO-1基因沉默能抑制人白血病K562细胞增殖和诱导其凋亡.

周期性张应变对人牙髓细胞形态、存活率和增殖活性的影响

目的:研究周期性张应变对人牙髓细胞形态、存活率和增殖活性的影响.方法:取新鲜拔除的健康恒牙牙髓,采用组织块贴壁法培养原代人牙髓细胞,通过Fhxcell细胞应力培养系统,分别加载2%和8%的周期性张应变,加载频率为1 Hz,加载时间分别为0.5 h,12 h及24h,以未加载的静态细胞作为对照组.应用倒置相差显微镜、台盼蓝法及MTT法分别检测细胞形态、存活率和增殖活性的变化.数据采用SPSS16.0软件包进行单因素方差分析.结果:张应变加载后,贴壁的牙髓细胞形态为长梭形,有明显的极性突起,并且排列趋向一致,加载24h变化更明显.2%、8%加载组细胞的存活率显著大于对照组,12h加载组细胞存活率高,24h加载组略有下降.2%、8%加载组细胞的增殖能力与对照组相比增加,2%组加载24h增加明显(p<0.01).结论:周期性张应变对离体培养的人牙髓细胞形态、存活率和增殖活性有明显影响,并呈应变大小和时间依赖性.

糖尿病兔骨髓间充质干细胞成骨分化能力探讨

目的:观察糖尿病兔骨髓间充质干细胞(bone arrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)以成骨分化为主的生物学特性.方法:通过静脉注射水合四氧嘧啶,建立糖尿病模型,以注射等量生理盐水作为对照组.在无菌条件下,局麻后抽取兔髂骨骨髓,获取BMSCs.采用全骨髓贴壁培养法对细胞进行纯化及培养,分别对2组细胞行MTT检测、实时定量PCR检测、碱性磷酸酶(ALP)活性检测,以及ERK、AKT信号通路表达检测.采用SPSS 13.0软件包对数据进行单因素方差分析(ANOVA)和SNK post hoc分析.结果:与正常组比较,实验组糖尿病兔BMSCs细胞增殖活性、成骨基因表达、ALP活性及成血管基因表达均显著下降(P＜0.05).结论:糖尿病兔BMSCs的增殖活性、成骨分化能力及成血管基因表达能力均受到损害.

正常人血清TPS含量及在恶性肿瘤中的判断限值

组织多肽特异性抗原(tissue polypeptide specific antigen,TPS)是一种新型的反映肿瘤细胞分裂增殖活性的肿瘤标志物.它在肿瘤的诊断、预告复发和转移、评价疗效和预后方面均有独特的价值[1].本文选择正常人104例,良性疾病55例,恶性肿瘤62例,采用ELISA进行血清TPS测定,并通过临床可用性能评价确定恶性肿瘤的判断限值,旨在为临床在实际应用中提供依据.

2型糖尿病患者血清IGF-2和SIL-2R水平检测的临床意义

众所周知,类胰岛素生长因子(IGF)是一类既有促细胞分化和增殖活性,又具有胰岛素样作用的多肽,主要包括IGF-1和IGF-2两种[1].白细胞介素-2受体是由IL-2诱导产生,可间接地反映机体的细胞免疫功能状态[2].本文报告2型糖尿病患者血清IGF-2和SIL-2R水平测定的结果.

54例糖尿病患者血清IGF-2测定的临床意义

类胰岛素生长因子(IGF)是一类既有促细胞分化和增殖活性,又具有胰岛素样作用的多肽,主要包括IGF-1和IGF-2两种.本文对54例糖尿病患者和76例正常人IGF-2测定结果报告如下.资料和方法一、对象:2型糖尿病患者54例(男29,女25),年龄42～62岁,病史在12年以上,具有典型的临床症状并经生化及相应的内分泌检测方法确诊.正常对照组76例,其中男性运动员25例,年龄17～28岁.其余51例(男30,女21),年龄42～60岁,二者经体检确认除外肝、肾、心血管、内分泌系统等疾病.

组织多肽特异性抗原检测及其临床应用(文献综述)

组织多肽特异性抗原(tissue polypeptide specific antigen, TPS)是一种新型的反映肿瘤细胞分裂增殖活性的肿瘤标志物,它在肿瘤的诊断、预告复发和转移、评价疗效和预后方面均有独特的价值.本文拟就TPS检测在恶性肿瘤诊治中的应用作一综述.

hsa-miR-759促进胃癌细胞 SGC-7901增殖的机制研究

世界范围内，胃癌发病率在所有恶性肿瘤中居第4位，其致死率则位于第2位，我国是胃癌高发国家，每年新增病例约占全球新增数量的40％。由于我国早期胃癌诊断率较低，治疗方法多以手术切除为主，这使得胃癌的致死率高于世界平均水平，因此，寻找胃癌诊断的新方法以及治疗的新途径尤为重要［1］。目前，早期胃癌临床治疗多以手术为主，内镜下黏膜切除术（EMR）和内镜下黏膜下剥离术（ESD）是主要的2种手术方法［2-3］。临床原发肿瘤的切除，通常对于肠型黏膜内癌，病灶部位无溃疡或溃疡疤痕的胃癌有较好的效果，而对伴有远处转移的胃癌多数是无法治愈的。对于进展期或复发性的肿瘤，化疗的作用有限，即使联用放疗也难以达到治愈。因此，寻找潜在的胃癌基因治疗靶点，对胃癌的深度和彻底治疗尤为重要。 NGX6基因位于人基因组的9号染色体［4］，相关研究表明，NGX6具有明显的肿瘤抑制作用［5］。那么，NGX6在胃癌的发生机发展中是否具有关键的作用，NGX6在胃癌中表达异常的原因是什么，NGX6蛋白表达上调是否对胃癌具有抑制作用？为了阐明上述问题，笔者将在胃癌细胞株SGC-7901中展开相关研究。

AP-2α抑制胃癌细胞BGC-823增殖并诱导凋亡的作用机制研究

目的 研究核转录因子AP-2α抑制胃癌细胞株BGC-823增殖活性及诱导凋亡的作用和机制.方法 收集临床胃癌及其癌旁组织标本30对,免疫印迹及荧光定量法检测AP-2α及Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)基因mRNA含量;生物软件预测AP-2α蛋白与KLF4基因启动子上的转录因子结合位点并进行验证.分别转染pcDH1-AP-2α及pshRNA-KLF4到BGC-823细胞,转染后48 h,确定细胞转染效率,免疫印迹法检测胞内AP-2α、KLF4、P53及BCL-2蛋白表达;噻唑蓝(4,5-dimethyl-2-thiazolyl-2,5-diphenyl-2-Htetrazolium bromide,MTT)检测基因干预后各组细胞增殖活性;流式法检测各组细胞凋亡情况.结果 所有检测的30对组织标本中,肿瘤中AP-2α表达和KLF4基因mRNA含量均明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.01,vs癌旁);生物软件预测显示,AP-2α在KLF4基因启动子上存在9个碱基"5′-GCCGCCGGC-3′"的理论结合位点,位点位于转录起始位点前52碱基处,荧光素酶活性检测证实AP-2α可以结合于预测位点并对下游基因的转录进行正调控;细胞转染后48 h,GFP计数显示,细胞瞬时转染效率约为85％,免疫印迹检测数据表明,AP-2α过表达导致KLF4和P53蛋白表达上调,BCL-2蛋白表达下调,而KLF4基因沉默则能够明显减弱AP-2α对KLF4或者P53蛋白表达的影响;细胞转染后24～72 h,pcDH1-AP-2α转染能够明显抑制BGC-823细胞对数期增殖活性,pshRNA-KLF4转染则能够明显减弱AP-2α基因过表达对细胞增殖活性的抑制作用;pcDH1-AP-2α转染细胞后48 h,能够明显导致BGC-823细胞产生凋亡,pshRNA-KLF4转染则能够明显减弱AP-2α过表达产生的诱导细胞凋亡的能力.结论 核转录因子AP-2α通过KLF4基因的转录调控对BGC-823细胞的增殖和凋亡产生影响.

Dickkopf-4激活Wnt/PCP通路促进肾透明细胞癌的增殖及侵袭

目的 研究Dickkopf-4(DKK4)在肾透明细胞癌(clear cell Renal cell carcinoma,ccRCC)组织中的表达及其与ccRCC生物学行为、临床分期分级和预后之间的的相关性.方法 采用RT-PCR、免疫组织化学及Western印迹法比较42例肾癌和癌旁正常组织中DKK4的表达水平,观察其表达与肿瘤大小、临床分期、分级之间的关系;使用pCMV6-DKK4表达载体转染786-O和A498人肾透明细胞癌细胞,检测、观察转染后的肿瘤细胞的增殖活性、侵袭力及细胞凋亡水平,检测Wnt/β-Catenin(β-Catenin、Cyclin D1)及Wnt/Planar Cell Polarity信号通路(.JNK、Rac1)蛋白表达.结果 28例(66.7％)肾癌组织中,DKK4的表达明显高于正常组织,其表达水平与肿瘤病理分级分期和临床特征之间无明显相关(P＞0.05);过表达DKK4的肾癌细胞株的增殖活性及侵袭力明显增强;细胞内Wnt经典通路蛋白β-Catenin表达下调而Cyclin D1表达上调;Wnt/PCP通路下游蛋白JNK、Rac1表达上调.结论 Wnt/β-Catenin通路抑制剂DKK4通过激活Wnt/PCP非经典通路促进肾癌细胞增殖,增强肾癌细胞侵袭力.

MTT法检测94例胃癌体外药敏

四唑盐比色法(MTT法)是一种测定细胞代谢和增殖活性的技术.其原理是利用活细胞内的线粒体脱氢酶将黄色可溶性的四唑盐[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5二苯基四氮唑溴盐,简称MTT]还原为蓝紫色不溶性的甲臢(For-mazan),通过测定细胞内脱氢酶活性的改变可客观地反映细胞的变化.

利用MIB-1单克隆抗体检测KI-67抗原的增殖活性可以作为组织病理学上鉴别幼年良性黑素瘤的辅助手段

恶性成釉细胞瘤AgNOR及PCNA表达的定量研究

目的探讨AgNOR计数、形态分型及PCNA蛋白表达在恶性成釉细胞瘤中的意义.方法应用免疫组化SP方法及AgNOR染色检测17例恶性成釉细胞瘤组织中PCNA的表达及AgNOR计数和形态特征.结果恶性成釉细胞瘤中AgNOR计数(3.92±0.87)及PCNA增殖指数(18.78±3.34)均显著高于良性成釉细胞瘤(2.04±0.58,6.86±1.25;P＜0.01).恶性成釉细胞瘤中AgNOR形态主要为弥散型,而良性成釉细胞瘤中主要为单一型,两者均有显著性差异(P＜0.01).结论AgNOR计数和形态分型及PCNA增殖指数有助于恶性成釉细胞瘤的鉴别诊断.

细脚拟青霉总多糖对人外周血单核细胞TNF-α水平及增殖活性的影响

目的提取分离细脚拟青霉总多糖(PtPs),探讨其对人外周血单核细胞(PBMC)的调节作用.方法采用水提醇沉淀法提取PtPs成分;用不同浓度的PtPs单独或协同脂多糖(LPS)在体外刺激PBMC,酶联免疫法测定TNF-α的水平,溴化四唑蓝法测定增殖活性.结果所得PtPs制品的纯度为76.1%;适当剂量的PtPs(100～500μg/ml)能够单独或协同LPS提高PBMC对TNF-α的分泌;还可剂量依赖性地促进PBMC的增殖活性.结论PtPs对体外培养的PBMC具有激活作用,可能是发挥免疫药理作用的主要活性成分.

mi RN A-145抑制肺癌A549细胞增殖活性的机制

目的：研究miRNA-145（miR-145）抑制肺癌A549细胞增殖活性的机制。方法：应用生物信息学方法预测Sp1基因3′-UTR区与miR-145的结合位点并通过荧光素酶报告基因法进行验证；转染miRNA-145拟似物和阻遏物到A549细胞，实时荧光定量PCR法检测细胞内miR-145含量，蛋白质印迹法检测细胞中Sp1蛋白含量；同时采用MTT法检测转染后24，48和72 h A549细胞的增殖活性。结果：荧光素酶报告基因系统验证结果表明，成功预测了miR-145与人Sp1基因3′-UTR区的结合位点。与单独转染组比较，miR-145拟似物和miR-145阻遏物与野生型荧光素酶报告基因共转染可以明显抑制或增强荧光素酶活性（P＜0．05）。转染miR-145拟似物和阻遏物能明显抑制或者促进A549细胞内Sp1蛋白的表达（P均＜0．05）。实时荧光定量检测结果表明，转染后48 h，与转染对照组比较，拟似物组细胞内miR-145含量明显上升，而阻遏组细胞内miR-145含量明显下降（P均＜0．05），阴性对照转染组和转染对照组miR-145相对含量间的差异无统计学意义（P＞0．05）。细胞活性检测结果表明，转染72 h后，拟似物组细胞增殖活性明显降低，而阻遏组细胞活性明显增高（P均＜0．05）。结论：miR-145通过抑制Sp1基因表达，明显抑制A549细胞的增殖活性。

薯蓣皂苷元体内外抑制胃癌增殖的机制

目的:研究薯蓣皂苷元抑制胃癌增殖及转移的主要途径及其机制.方法:分别使用1,10,100 μg/mL浓度薯蓣皂苷元处理人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)和胃癌BGC-823细胞,制作细胞生长曲线,观察薯蓣皂苷元对细胞增殖能力的影响;选取一定浓度的薯蓣皂苷元处理HUVEC和BGC-823细胞,体外成管实验和划线法分别检测药物处理对血管内皮细胞成管能力及肿瘤细胞迁移能力的影响.将BGC-823细胞接种到裸鼠制作皮下肿瘤模型,连续静脉注射薯蓣皂苷元,分析比较其对皮下肿瘤的抑制效果.结果:与对照组比较,薯蓣皂苷元可明显抑制内皮细胞增殖活性(P＜0.05),且具有浓度依赖性;而相同处理方式对BGC-823细胞的增殖活性基本无影响;10 μg/mL的薯蓣皂苷元对BGC-823细胞的迁移能力具有明显的抑制作用,能够明显抑制HUVEC细胞体外成管能力;与模型组比较,薯蓣皂苷元给药组肿瘤抑制率明显增高(达38.2％),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:薯蓣皂苷元可以通过抑制内皮细胞增殖活性影响肿瘤血供,并终抑制皮下肿瘤模型的增殖,同时,其可通过直接的作用抑制胃癌的迁移.

Ki67在卵巢癌中的表达及临床意义

采用免疫组织化学SP法检测Ki67在20例卵巢良性肿瘤、10例交界性肿瘤、42例卵巢癌中的表达,并分析它们与卵巢临床病理指标的关系.结果:卵巢良性肿瘤KI指数为2.00±1.22,交界肿瘤为10.20±5.03,卵巢癌为35.20±15.20,三组比较,差异显著(P＜0.01);Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌KI指数为35.75±12.30,显著高于Ⅰ～Ⅱ期卵巢癌的22.00±11.20(P＜0.01);中低分化癌KI指数为34.17±9.08,显著高于高分化癌的22.88±10.02(P＜0.01);卵巢癌Ki指数与组织类型、淋巴转移无关(P＞0.05).结果表明,卵巢癌中Ki67表达显著高于卵巢良性交界肿瘤,可作为鉴别良恶性肿瘤的指标;其表达与卵巢癌的临床分期、病理分级有关.

Ki-67抗原在侵袭性垂体腺瘤中的表达研究

目的探讨垂体腺瘤中Ki-67抗原表达与垂体腺瘤侵袭性的关系.方法采用新一代鼠抗人Ki-67单克隆抗体MIB-1免疫组化LSAB法对52例侵袭性垂体腺瘤和35例非侵袭性垂体腺瘤中的Ki-67抗原表达进行检测,以MIB-1增殖细胞指数(MIB-1 PCI)表示.对侵袭性腺瘤和非侵袭性腺瘤组间、有海绵窦侵袭腺瘤和元海绵窦侵袭腺瘤组间的MIB-1 PCI进行比较.结果侵袭性垂体腺瘤组MIB-1 PCI为(3.59±2.67)%,非侵袭性垂体腺瘤组为(2.23±2.38)%,2组间有显著性差异(P《0.05);海绵窦侵袭腺瘤组MIB-1 PCI为(5.42±5.87)%,无海绵窦侵袭腺瘤组为(2.63±2.86)%,差异有显著性(P《0.01).结论Ki-67抗原表达可以作为反映垂体腺瘤增殖潜能、侵袭性和侵袭程度的标志物,具有较高的临床应用价值.