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脱氧雪腐镰刀菌烯醇对体外培养人外周血单核细胞增殖及肿瘤坏死因子-α分泌的影响
为探讨我国恶性肿瘤高发区居民饮食中的优势污染霉菌毒素-脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对人体免疫机能的影响,分别以流式细胞光度术(FCM)、细胞计数、甲基噻唑基四唑(MTT)比色、双抗体夹心ELISA方法对DON作用后人外周血单核细胞(HPBM)增殖和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌情况进行了研究.FCM检测结果表明,HPBM经PHA预刺激48h后,低浓度DON(50~500ng/ml)处理6h的细胞增殖指数(PI)较对照组明显降低(19.80%~26.01%∶37.84%);而高浓度DON(1000~2000ng/ml)处理24h的细胞PI值则显著高于对照组(35.74%~34.37%∶22.85%).细胞计数和MTT比色法结果显示,在PHA存在的情况下,DON可抑制HPBM的增殖.双抗体夹心ELISA法检测结果显示,500和1000ng/ml的DON可明显降低HPBM TNF-α分泌(P<0.01).研究结果表明,根据作用时间和作用浓度不同及有无PHA刺激,DON对HPBM增殖的影响有所不同,但主要表现为对细胞增殖的抑制作用,并抑制TNF-α的分泌,从而对机体免疫机能造成负面影响.
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杂色曲霉素对体外培养人外周血白细胞介素Ⅱ分泌影响的研究
杂色曲霉素是我国肿瘤高发区粮食中的优势污染霉菌毒素.为探讨杂色曲霉素(ST)对人体免疫机能的影响,采用双抗体夹心ELISA方法对ST作用后人外周血单核细胞(HPBMc)培养上清液中白血细胞介素Ⅱ(IL-2)的分泌水平进行了检测.结果表明,不同浓度(0.03125~2mg/L)ST处理24h后,体外培养的HPBMc的IL-2分泌均受到一定程度的抑制,其中以较低浓度ST(0.03125~0.125mg/L)和较高浓度ST(1~2mg/L)抑制作用明显(P<0.05).在ST 1mg/L作用1~64h的时间范围内,ST对HPBMc IL-2的分泌总体表现抑制作用.ST处理后8~64h,随ST处理时间的延长,对IL-2分泌的抑制作用逐渐增强(r=0.822,P<0.05).本研究结果提示,ST对HPBMc IL-2的分泌有一定的抑制作用.
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357 豆科植物中异黄酮类化合物对人外周血单核细胞的影响
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冠心病患者外周血单核细胞载脂蛋白E基因表达的研究
本研究旨在探讨人外周血单核细胞载脂蛋白E(apolipoprotein,apoE)表达状况及与冠心病(coronary heart disease,CHD)的相关性.
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丙型肝炎病毒体外感染人外周血单个核细胞的初步研究
目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)在体外能否感染人外周血单个核细胞,并观察其复制情况. 方法 HCV RNA阳性血清与原代培养的外周血单个核细胞共同孵育6~8 h,收集不同时相点标本,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化、原位杂交分别检测细胞内或上清中正负链RNA,细胞内HCV NS3、NS5、CP10 3种抗原的表达情况,以及原位检测HCV负链RNA. 结果接种感染血清后5 d,可在细胞内或培养上清中间断检出HCV正负链RNA;HCV NS3、NS5、CP10可在感染细胞内表达,阳性物质位于胞浆中;原位杂交法证实细胞胞浆内存在负链RNA. 结论 HCV在体外能感染原代培养的人外周血单核细胞,并在其中复制.
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γ射线对人外周血单核细胞向破骨样细胞诱导分化的影响
目的 探讨电离辐射对人外周血单核细胞来源的破骨细胞体外诱导分化的影响.方法 将人外周血采用密度梯度离心法获得单核细胞,经核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导培养24 h,分别给予0、0.75和2 Gy的1377Cs γ射线照射,第7天行TRAP染色后计数TRAP阳性多核破骨细胞,第10天取象牙骨片基质行甲苯胺蓝染色观察骨吸收陷窝形成;qRT-PCR检测破骨细胞特征标志物组织蛋白酶K和integrin β3的mRNA表达水平;ELISA法检测培养上清液中TRAcP-5b含量.结果 0.75 Gy照射组TRAP染色阳性多核破骨细胞计数显著多于对照组(0 Gy)(t=3.451,P<0.05),组织蛋白酶K和integrin β3的mRNA表达水平明显上调(t=2.343、2.728,P<0.05),且培养液中TRAcP-5b浓度明显增加(t=3.631,P<0.05).而2 Gy照射组的TRAP染色阳性多核破骨细胞计数少于对照组,并伴有组织蛋白酶K和integrin β3的mRNA表达水平下调、培养上清液中TRAcP-5b浓度下降,但差异无统计学意义.结论 电离辐射可改变人外周血单核细胞破骨样细胞分化趋势,小剂量照射时可促进破骨细胞分化和骨吸收活性,而较大剂量照射后破骨细胞分化和骨吸收活性均降低.
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鲨肝肽对小鼠免疫性肝损伤的保护作用及免疫调节作用
目的:探讨从海洋生物鲨鱼肝纯化获得的一种活性多 肽( 以下称鲨肝肽)对人外周血单核细胞(PBMC)分泌IFN-γ及TNF-β的影响,以及对小鼠免 疫性肝损伤的保护作用。方法:分离PBMC,加入鲨肝肽,检测培养上 清中IFN-γ,TNF-β的量,另取健康小鼠,以内毒素攻击制造免疫性肝损伤模型,定时测 定血中AST,ALT的量。结果:鲨肝肽能有效诱导PBMC分泌IFN-γ; 抑制PBMC产生TNF-β;显著降低免疫性肝炎小鼠血清转氨酶含量的异常升高,肝脏病理损 伤明显减轻。结论:鲨肝肽在乙型肝炎、迁慢性肝炎、肝硬化等肝病 的治疗及调节机体免疫功能方面具有良好的应用前景。
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阳离子脂质体介导的A20基因转染人外周血单核细胞的可行性
目的 探讨阳离子脂质体介导的A20基因转染人外周血单核细胞的可行性及佳转染条件.方法 采用脂质体Lipofectamine TM 2000包裹pCAGGS-GFP/A20质粒转染人外周血单核细胞,通过荧光显微镜检测GFP报告基因,RT-PCR检测A20基因表达.结果 应用Lipofectamine TM 2000介导的A20基因转染人外周血单核细胞,在2×106/L细胞接种浓度,脂质体与质粒的量之比为4μl∶ 3μg时,转染效果佳,RT-PCR证实成功获得A20目的基因的表达.结论 脂质体转染法可介导A20基因在入外周血单核细胞获得表达,该研究为A20基因转染的相关实验研究提供参考依据.
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新IκBα突变体基因转染对人外周血来源的树突状细胞的作用
哮喘是T细胞介导的嗜酸细胞性气道变应性炎症.作为功能强的抗原递呈细胞,树突状细胞(DC)在T细胞免疫偏移中起关键作用.核因子кB(NF-κB)系p50/p65异源二聚体,IκBα为NF-кB抑制剂(IкB)家族中重要的成员,两者结合以三聚体形式位于静止的细胞质中.IκBα N端丝氨酸(Ser)32/36位点发生磷酸化和降解作用,是NF-κB激活的共同途径.研究表明,NF-κB过度激活是哮喘慢性气道炎症持续和扩大的重要基础[1].近,我们定点克隆了去除N端Ser 32/36磷酸化位点、长801 bp(203-1003 bp)的人胎盘组织IκBα突变体(IκBαM)基因,获得不易降解的新颖NF-κB超强抑制剂,并构建了其复制缺陷型重组腺病毒AdIκBαM [2].本研究观察AdIκBαM对人外周血单核细胞(PBMC)来源的DC凋亡、表型和刺激T细胞增殖作用的影响,探讨DC免疫治疗哮喘的新途径.
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YC-1抑制人外周血单核细胞和内毒素血症小鼠细胞因子的释放
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膀胱癌患者膀胱内注入BCG尿中TNF-α和IFN-γ的表达
BCG膀胱内注入疗法是治疗膀胱上皮癌较为有效的疗法之一,但对其作用机制尚未完全阐明。Kurisu等报道BCG可在体外诱导人外周血单核细胞产生TNF-α和IFN-γ[1]。本文对膀胱上皮癌患者行BCG膀胱内注入疗法后,通过检测注入前后患者尿中TNF-α和IFN-γ的浓度,探讨对膀胱癌患者的抗肿瘤作用。现将我们的研究结果报道如下。
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慢性心力衰竭病人外周血单核细胞中TNF超家族配体增强的基因表达
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国产5%咪喹莫特乳膏治疗尖锐湿疣五年临床回顾
咪喹莫特(imiquimod)是一种新型的免疫调节剂,局部外用后可以诱导人外周血单核细胞和角质形成细胞产生IFN-α、IFN-β、IFN-γ、TNF-α和IL-12等细胞因子,刺激机体的免疫系统产生针对感染人乳头瘤病毒(HPV)细胞的Th1型免疫反应,终清除局部HPV感染,达到治疗目的[1].现对国产5%咪喹莫特乳膏(四川明欣药业生产,商品名明欣利迪)上市5年来有关治疗尖锐湿疣的疗效及安全性观察的中文文献进行复习,为临床合理用药提供依据.
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细脚拟青霉总多糖对人外周血单核细胞TNF-α水平及增殖活性的影响
目的提取分离细脚拟青霉总多糖(PtPs),探讨其对人外周血单核细胞(PBMC)的调节作用.方法采用水提醇沉淀法提取PtPs成分;用不同浓度的PtPs单独或协同脂多糖(LPS)在体外刺激PBMC,酶联免疫法测定TNF-α的水平,溴化四唑蓝法测定增殖活性.结果所得PtPs制品的纯度为76.1%;适当剂量的PtPs(100~500μg/ml)能够单独或协同LPS提高PBMC对TNF-α的分泌;还可剂量依赖性地促进PBMC的增殖活性.结论PtPs对体外培养的PBMC具有激活作用,可能是发挥免疫药理作用的主要活性成分.
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人 Th17细胞体外诱导分化条件的研究
通过密度梯度离心法从人新鲜血液中分离获得人外周血单核细胞(PBMCs),比较分析加入不同细胞极化因子(IL-1β、IL-6、TGF-β和 IL-23)以及诱导不同时间(1,2,3,4 d)对 Th17细胞分化的影响,利用流式细胞仪、ELISA 方法以及Q-PCR 技术考察相关指标,评估人体外 Th17细胞的分化水平。研究表明,IL-1β、IL-6、TGF-β和 IL-23单独均能对 Th17细胞的分化起到促进作用,联用 IL-1β、IL-6、TGF-β和 IL-23时可使 Th17细胞体外分化效率达到佳。随着诱导时间的延长, Th17细胞分化水平逐渐升高,培养3 d 时达到峰值,继续增加培养时间分化率反而出现降低。终确立人 Th17细胞体外分化的佳诱导条件:在加入 CD3抗体和 CD28抗体的基础上,同时加入 IL-1β、IL-6、TGF-β以及 IL-23共同培养人 PBMCs 3 d 可有效地刺激人 Th17细胞的分化,并且流式细胞检测 Th17细胞分化率达到近10%,ELISA 检测细胞上清液中 IL-17A含量达到近3 ng/mL,Q-PCR 方法分析 IL-17 mRNA 基因表达升高达15倍,此方案具有操作简便、周期短、成本低廉等优点,为 Th17细胞的功能研究及相关疾病治疗药物的研发建立了有效的检测平台。
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单核细胞凝血/纤溶因子的测定在冠心病血瘀症中的应用及与脂类水平的关系
动脉粥样硬化(AS)是冠心病(CHD)的发病基础,高脂血症作为AS的独立危险因子已被广泛认可.近年来,随着对人体凝血/纤溶物质的深入研究,对人外周血单核细胞(PBMC)在CHD高凝状态的形成及在AS基础上的血栓形成过程中的作用越来越受到重视[1].本文测定了CHD血瘀症和非血瘀症患者PBMC表达的促凝活性(PCA)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及其抑制物(PAI-1)活性,并与血浆脂类水平关系进行了分析.现报道如下:
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他汀类药物对C反应蛋白直接诱导人外周血单核细胞IL-6 表达的影响
目的观察离体急性冠状动脉综合征(ACS)病人外周血单核细胞对C-反应蛋白(CRP)直接刺激的反应性及亲水性他汀(普伐他汀,氟伐他汀)与亲脂性他汀(辛伐他汀)药物干预后的效果.
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C-反应蛋白直接刺激人单核细胞肿瘤坏死因子α、白介素-6 表达的实验研究
目的比较急性冠状动脉综合征(ACS)患者与健康人外周血单核细胞对一定浓度的C-反应蛋白(CRP)或细菌脂多糖(LPS)刺激的炎症反应,并观察pravastatin的干预效应.
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糖基化终产物增加人外周血单核细胞对单核细胞趋化蛋白-1的表达
动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)是严重危害人类健康的疾病,糖尿病患者并发AS的可能性是正常人的3~4倍.高血糖状态下蛋白质发生的非酶糖基化可使其终形成不可逆的糖基化终产物(Advanced glycosylation end products, AGEs).
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糖基化终产物增加人外周血单核细胞对单核细胞趋化蛋白-1的表达
动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是严重危害人类健康的疾病,糖尿病患者并发AS的可能性是正常人的3~4倍.高血糖状态下蛋白质发生的非酶糖基化可使其终形成不可逆的糖基化终产物(advanced glycosylation end products, AGEs).