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双调蛋白在人体睾丸组织的表达特征
目的 确定双调蛋白在人体睾丸组织和精子的表达特征,比较双调蛋白在正常人和隐睾症患者睾丸组织的表达差异. 方法 收集正常睾丸组织、精液精子和隐睾症患者的睾丸组织,采用反转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)和免疫组织化学的方法检测双调蛋白的表达水平. 结果 双调蛋白在正常睾丸组织和精子均有表达,主要分布于睾丸长型精子细胞和成熟精子尾部;与正常睾丸组织比较,双调蛋白在隐睾组织的表达显著减少、隐睾组织生精小管的表达基本消失. 结论 在隐睾症睾丸中双调蛋白的表达显著减少,提示双调蛋白表达与睾丸发育有一定关系.
关键词： 双调蛋白 睾丸 隐睾症 反转录-聚合酶链反应 免疫细胞化学 -
免疫细胞化学法检测乙型肝炎产妇分娩的死胎心脏组织乙型肝炎核心抗原的表达
目的:观察乙型肝炎病毒(HBV)通过产妇传播在胎儿心脏组织中表达的情况.方法:采集40例乙型肝炎产妇分娩的死胎,常规尸检,取心脏组织,免疫细胞化学法检测乙型肝炎核心抗原(HBcAg);回访孕妇产前静脉血HBV的检测结果;采用百分率行χ2检验.结果:HBcAg阳性颗粒在死胎的心内膜及心脏血管中呈点状及灶状分布,心肌细胞核不着色.乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)皆为阳性的孕妇较HBV单项阳性或HBsAg、乙型肝炎e抗体(HBeAb)、HBcAb皆为阳性的孕妇分娩的死胎心脏组织中HBcAg阳性率明显升高(P<0.05);HBV单项阳性与HBsAg、HBeAb、HBcAb皆为阳性的孕妇分娩的死胎心脏组织中HBcAg阳性率比较,无显著差异(P>0.05).结论:孕妇静脉血HBsAg、HBeAg、HBcAb皆为阳性是乙型肝炎病毒通过母婴垂直传播在胎儿心脏组织中表达的高危因素.
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一氧化氮合酶同功异构酶在大鼠睾丸中的表达和定位
目的：了解一氧化氮(NO)在睾丸中的作用。方法：运用免疫组织化学方法观察3种一氧化氮合酶(NOS)同功异构酶在大鼠生后4、7、14、30、60 d睾丸中的分布。结果：(1)生后4、7、14 d大鼠睾丸未见3种NOS免疫阳性反应；(2)生后30 d少数精母细胞及生后60 d生精小管腔面精子和间质细胞呈NOS1阳性；(3)生后30 d少数精母细胞、支持细胞和管周类肌细胞呈NOS2阳性，而生后60 d NOS2阳性反应见于睾丸间质细胞、管周类肌细胞、支持细胞、极少数精母细胞和不成熟精子头部；(4)生后30 d睾丸内少数精母细胞和血管壁呈NOS3阳性，生后60 d NOS3阳性反应仅见于血管壁。结论：NO可能参与精子发生、睾酮的分泌过程，并调节睾丸内的血流。
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健康男性和弱精子症患者精液精子中GP130的表达
目的观察在正常和活动力低下的人精液精子中白细胞介素-6(IL-6)及其受体(IL-6R)和GP130的表达差异.方法收集活动力正常的人精液精子和A、B级精子低于20%的弱精子症患者的精液精子,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学的方法检测IL-6及其受体和GP130的表达水平. 结果与活动力正常的精液精子比较,GP130在活动力低下患者精液精子的表达显著降低(P＜0.01),本实验未检测到IL-6和IL-6R在人精液精子的表达.结论精液精子GP130的表达减少与人精子活动力低下相关,提示GP130表达减少可能是精子活动力低下的原因之一.
关键词： 弱精子症 白细胞介素-6 GP130 逆转录-聚合酶链反应 免疫细胞化学 -
高锰对雌性仔鼠大脑发育的影响
用不同锰含量的饮水(分别为2和10g/L)使孕鼠染锰,研究对子代大脑发育的影响.结果表明:(1)高剂量染锰组仔鼠大脑额叶和顶叶皮质厚度比低剂量组和对照组显著变薄,而胶质细胞纤维酸蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)免疫反应强度及其阳性反应产物平均相对密度均明显增高;(2)高、低剂量染锰组仔鼠的扣带回皮质厚度显著较对照组增厚,GF-AP反应强度及其阳性反应产物相对密度显著升高;(3)高剂量染锰组仔鼠胼胝体的面积较对照组和低剂量组显著增大,GFAP免疫反应及其阳性反应产物相对密度明显增高,而低剂量组与对照组之间无差异.
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Ki67在胃癌细胞株中的表达及意义
目的:探讨Ki67在人胃癌细胞SGC7901、BGC-823中的表达及意义.方法:选择两种不同的胃癌细胞(人胃癌转移淋巴结细胞SGC7901,人胃低分化腺癌细胞BGC-823细胞),采用细胞免疫化学SABC法和及western-blot法对两种胃癌细胞中Ki67表达情况进行检测和分析.结果:Ki67在两种胃癌细胞中都高表达,且差异有统计学意义(P＜0.01).结论:Ki67参与了胃癌的发生发展.且Ki67蛋白高表达可能是胃癌细胞的重要生物学标志.
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补肾益智方对老年性痴呆模型鼠NOS1表达的影响
探讨天然促智药复方--补肾益智方对基底前脑神经元型一氧化氮合酶(nitric oxidesynthase 1,NOS1)表达的影响.方法:用鹅膏蕈酸(Ibotenic acid,IBO)损毁老年大鼠双侧基底核作为老年性痴呆(Alzheimer's disease,AD)模型,治疗组行补肾益智方灌胃,用药对照组用石杉碱甲(Hup A)灌胃,正常对照组为青年组和老年正常组.各组Morris水迷宫检测,之后取各组受试大鼠脑组织冠状切片进行NOS1免疫细胞化学染色.结果:逃避潜伏期中药组大鼠较模型组、Hup A组明显缩短.NOS1阳性细胞数中药组较模型组、Hup A组明显增加,明显低于青年组扣老年正常组.灰度值中药组较青年组、老年正常组明显降低,斜角带水平支(horizonal diagonal band of Broca,hDB)较模型组有明显增加.胞体面积中药组较模型组、Hup A组显著增加.结论:补肾益智方可增加基底前脑NOS1表达.
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乳酸脱氢酶联合免疫细胞化学检测在恶性胸腔积液诊断中的价值
目的 探讨乳酸脱氢酶(LDH)联合免疫细胞化学检测在恶性胸腔积液诊断中的价值.方法 回顾性分析50例胸腔积液患者胸腔积液LDH检测浓度和细胞学标本分别做标记物癌胚抗原(CEA)、广谱细胞角蛋白(AE1/AE3)、钙视网膜蛋白(cahetinin)、间皮细胞(mesothelial cell)、波形蛋白(vimentin)、细胞增殖指数(Ki-67)免疫细胞化学染色.结果 癌症组LDH含量(850.60±126.58 U/L)显著高于对照组LDH含量(125.68 ±32.45 U/L),差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 LDH联合检测CEA、AE1/AE3、calretinin、MC、Vimentin、Ki-67的表达情况,有助于鉴别胸腔积液的良、恶性,还可以进一步确定恶性胸腔积液中恶性肿瘤细胞的类型,对患者治疗方案的选择及预后的判断具有重要的临床意义.
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用免疫细胞化学鉴别胸腹水脱落细胞在肿瘤诊断中的价值
探讨免疫细胞化学鉴别胸腹水中上皮来源恶性肿瘤细胞和间皮源性细胞的价值.应用免疫细胞化学方法,检测80例患者胸腹水恶性肿瘤细胞和间皮细胞的细胞学形态及ESA、CEA、CK、D2-40、CR、Mesothlial、KI67、Vimentin等8种蛋白的表达情况.结果表明:胸腹水脱落细胞学检测和这8种蛋白联合检测可鉴别上皮来源恶性肿瘤细胞和间皮细胞.两种方法联合检测胸腹水,提高了脱落细胞学疑难病例诊断的准确率.
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体外新生小鼠嗅鞘细胞的生物学特性
目的 研究新生小鼠嗅鞘细胞的生物学特性.方法 自新生小鼠嗅球中分离并纯化嗅鞘细胞,用免疫细胞化学和RT-PER对其进行检测.结果 体外培养的新生小鼠嗅鞘细胞主要为双极或三极细胞,其纯度可以达到88.7%以上,污染细胞中有星形胶质细胞、神经元、少突胶质细胞和成纤维细胞.免疫细胞化学结果显示,嗅鞘细胞呈 P75NGFR、NGF、BDNF和CNPase免疫阳性,GFAP和Nestin阴性.RT-PCR结果显示,嗅鞘细胞表达β-NGF、BDNF、NT-3、PDGF-B、bFGF、EGF、TrkA和TrkB的mRNA,而不表达NT-4.结论 本研究对新生小鼠嗅鞘细胞的形态学、免疫细胞化学和分子生物学特性提供了部分实验数据.但不同动物来源、不同的取材时间和培养条件对嗅鞘细胞的影响尚需进一步研究.
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下颌神经切断术后Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体在大鼠三叉神经复合体中表达的变化
目的观察下颌神经切断术后不同存活时间Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体(VGluT1)样免疫阳性物质在大鼠三叉神经复合体中表达水平的变化.方法免疫细胞化学和图像分析技术.结果正常大鼠三叉神经复合体内可观察到大量的VGluT1样免疫阳性物质,且主要分布于终末内.切断一侧下颌神经后,手术侧与对照侧相比,术后存活1周组的Vp背侧部内VGluT1样阳性物质的表达有所下降(P＜0.05);术后存活2周组的Vp背侧部、Vc背侧部、Vi背侧部,以及Vsup和Vmo内VGluT1样阳性物质的表达明显下降(P＜0.01),且与术后存活1周组手术侧比较其下降有显著差异(P＜0.05);术后存活3周组上述部位内VGIuT1样阳性物质表达的下降更加明显(P＜0.01),且与前两组手术侧相比均有显著差异(P＜0.01或P＜0.05);其中在Vmo内的表达几乎完全消失. 结论切断初级传入神经元的周围突可以导致其中枢突终末内VGluT1的表达水平下降;三叉神经复合体内部分VGIuT1样阳性终末来源于外周.
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人胚胎生殖细胞在人胚胎成纤维细胞饲养层上的生长
目的探讨以人胚胎成纤维细胞为饲养层分离、培养人胚胎生殖细胞的方法和条件.方法分离、培养3～4月胚胎成纤维细胞,取3～15代细胞经丝裂酶素处理后铺板备用;分离6～11周胚胎原始生殖细胞,将其置于人胚胎成纤维细胞饲养层上,在含生长因子、分化抑制因子的培养体系中培养胚胎生殖细胞;用免疫细胞化学方法检测胚胎生殖细胞表面标志SSEA-1和SSEA-4;钙-钴法检测碱性磷酸酶活性;RT-PCR检测转录因子Oct-4的表达.结果人胚胎成纤维细胞可连续传代25代以上(6月),3～15代细胞可以用作饲养层细胞.分离的胚胎生殖细胞在饲养层上可增殖形成典型胚胎生殖细胞集落,并能连续在体外培养超过8代.集落未分化标志检测显示SSEA-1、SSEA-4呈阳性,碱性磷酸酶活性呈强阳性,Oct-4表达阳性.结论用人胚胎成纤维细胞作为饲养层能获得可连续增殖的胚胎生殖细胞.
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小鼠肾小管上皮细胞的原代培养及鉴定
目的 建立小鼠肾小管上皮细胞(mRTECs)原代培养、传代及鉴定的方法.方法 采用肾小管节段贴块培养法与3种消化培养法(胰蛋白酶、胰蛋白酶+EDTA、胶原酶Ⅰ)进行小鼠肾小管上皮细胞原代培养,锥虫蓝染色后镜下观察消化后细胞成活率、细胞形态和数量.胰蛋白酶消化传代,以免疫细胞化学方法鉴定细胞种类.结果 贴块法和胶原酶Ⅰ消化培养法均能成功培养小鼠肾小管上皮细胞,两者相比,胶原酶Ⅰ消化培养法培养的细胞生长更快.结论 胶原酶Ⅰ消化培养法是小鼠肾小管上皮细胞原代培养的理想方法.
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胰岛素样生长因子-1抑制β淀粉样蛋白25～35诱导的神经干细胞凋亡
目的 观察β-淀粉样蛋白(Aβ)对神经干细胞(NSCs)增殖和凋亡的影响,探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对Aβ介导的NSCs毒性作用的保护机制.方法 从E14 SD大鼠大脑中分离神经干细胞,分别用Aβ、IGF-1和Aβ加IGF-1处理,锥虫蓝(trypan blue)染色确定细胞死亡数量和细胞死亡率,BrdU标记并分析细胞增殖能力,免疫细胞化学法鉴定神经干细胞和新生细胞,TUNEL技术检测凋亡细胞.结果 IGF-1处理时细胞死亡率低下,有大量BrdU阳性细胞生成,但无TUNEL阳性细胞.Aβ处理组细胞死亡率在6～48 h快速上升,并形成大量TUNEL阳性细胞.而IGF-1加Aβ处理时,细胞死亡率较Aβ组显著下降.TUNEL阳性细胞显著减少.结论 Aβ促进神经干细胞死亡和凋亡;而IGF-1促进神经干细胞增殖并抑制由Aβ诱导的神经干细胞凋亡.
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人胎海马结构小白蛋白免疫反应性神经元的分布
目的观察人胎海马结构小白蛋白(PV)免疫反应性神经元的分布. 方法取孕龄为30周的人胎尸体,用ABC免疫细胞化学方法显示PV 免疫反应性神经元. 结果海马结构的各区域内均有丰富的PV免疫反应性神经元分布,以锥体细胞层为密集.CA1、CA2、CA3始层PV免疫反应性神经元呈散在分布,胞体较小,多为三角形或梭形,细胞突起2～3个,锥体细胞层PV免疫反应性神经元数量多,分布密集,细胞形态多样,细胞的突起伸向浅层的始层和深层的分子层;分子层PV 免疫反应性神经元较稀少.门区PV免疫反应性神经元分布密集,但细胞分层不明显,可见部分细胞的突起伸向齿状回;齿状回PV免疫反应性神经元集中分布于颗粒细胞层,其余各层有少量散在的PV免疫反应性神经元,细胞染色浅淡,无明显突起.下托复合体PV免疫反应性神经元主要分布于锥体细胞层,始层和分子层较稀少,细胞淡染,突起不明显. 结论海马结构的各区域均有丰富的PV免疫反应性神经元分布,主要分布于锥体细胞层和齿状回的颗粒层.各区域PV免疫反应性神经元发育成熟的时间可能并不同步,CA1～3 和门区PV免疫反应性神经元发育成熟早于齿状回和下托复合体.
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凝聚态Aβ25～35可通过JNK/p38 MAPK途径诱导胎鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化
目的 探讨JNK/p38 MAPK在β淀粉样蛋白多肽片段25～35(Aβ25～35)诱导的阿尔茨海默病(AD)样胎鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化中的作用.方法 应用蛋白免疫印迹和免疫细胞化学染色的方法,观察Tau蛋白磷酸化和JNK/p38丝裂原活化的蛋白激酶(JNK/p38 MAPK)的表达情况.结果 凝聚态Aβ25～35(20μmol/L)作用于皮层神经元12h,Tau蛋白Ser396、Ser199/202、Thr205位点的磷酸化水平明显增高,同时JNK/p38 MAPK的总量及其活性形式-磷酸化JNK/p38 MAPK的蛋白表达水平也增加.结论 Aβ25～35可通过激活JNK/p38 MAPK使Tau蛋白的磷酸化水平增高.
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慢性复合应激增强大鼠海马Doublecortin的表达
目的 探讨慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马齿状回(DG)新生神经元数量变化以及Doublecortin(DCX)在海马组织中表达的变化及其意义.方法 成年雄性大鼠随机分为复合应激组和正常对照组.复合应激组动物每天交替暴露于复合应激原中达6周.实验结束后,所有动物分别进行3d的Morris水迷宫测试,记录其学习和记忆成绩.运用免疫细胞化学方法观察海马DG新生神经元数量的变化,同时运用Western blotting和RT-PCR技术分别检测DCX在海马的表达及其mRNA水平的变化.结果 与对照组相比,复合应激组动物的学习与记忆成绩优于对照组(P＜0.05);其海马DG新生神经元数明显增多(P＜0.05);海马DCX蛋白的表达明显增加(P＜0.05);海马DCX mRNA水平明显上调(P＜0.05).结论 慢性复合应激致大鼠的学习与记忆能力增强,海马DG内DCX阳性细胞数增多,提示新生神经元数量增加是导致大鼠学习记忆能力增强的原因之一.
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人子宫内膜基质细胞和腺体细胞的分离培养及鉴定
目的 人子宫内膜分离培养并得到纯度较高的内膜基质细胞和腺体细胞。 方法 采用二次滤网过滤法进行分离并通过光镜观察和免疫细胞化学染色对其进行鉴别。 结果 基质细胞在接种后0.5h开始贴壁，可见梭形和多角形两种形态的细胞。免疫细胞化学染色显示这两种细胞均具有波形蛋白免疫反应性，反应率可达95%以上，而细胞角蛋白无免疫反应性，提示它们为来源于内膜基质的基质细胞。大部分腺体细胞在接种24h后贴壁，培养后4d左右腺体细胞呈旋涡状排列，单个细胞为多角形，核大而圆。腺细胞呈细胞角蛋白免疫反应性，反应率在90%以上。 结论 采用二次滤网过滤法可成功地分离人子宫内膜基质细胞和腺体细胞。
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过氧化物酶体增殖物活化的受体γ特异配体罗格列酮对肝星状细胞生物学特性的影响
目的研究过氧化物酶体增殖物活化的受体γ(PPARγ)特异配体罗格列酮对肝星状细胞(HSC)PPARγ表达以及对HSC生物学特性的影响. 方法设立空白对照组、3 μmol/L罗格列酮组、10 μmol/L罗格列酮组;分别用RT-PCR、Western印迹、免疫细胞化学方法检测PPARγ的表达;用Western印迹和免疫细胞化学方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;四甲基偶氮唑盐(methythiazolyltetrazolium,MTT)法检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞凋亡. 结果10 μmol/L罗格列酮组HSC的PPARγmRNA表达明显高于对照组(t=10.87,P＜0.01),PPARγ蛋白表达也明显高于对照组(t=4.627,P＜0.01);10μmol/L罗格列酮组HSC的增殖活性显著低于对照组(t≥5.542,P＜0.01),其α-SMA及Ⅰ型胶原表达明显低于对照组(t≥4.627,P＜0.01),其凋亡发生率显著高于对照组(x2=16.682,P＜0.01). 结论 PPARγ特异配体罗格列酮通过增加PPARγ的表达,能够抑制激活的HSC表达α-SMA及Ⅰ胶原,抑制激活的HSC增殖,诱导激活的HSC凋亡.
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大鼠三叉神经中脑核内GABAA受体和GABAB受体的定位分布
目的观察大鼠三叉神经中脑核(Vme)内GABAA受体(GABAAR)和GABAB受体(GABABR)的定位分布,为研究GABA受体在面口部本体感觉信息传递和调控中的作用提供形态学依据. 方法用免疫细胞化学技术,染色结果在光学显微镜下进行观察.结果在Vme内可观察到大量GABAAR和GABABR样免疫反应阳性的胞体、纤维和终末,其不同亚单位的分布具有一定差别:1.GABABR1亚单位主要分布于Vme神经元的胞体,呈强阳性反应,而GABABR2亚单位只见于Vme神经元胞体周围的纤维和终末内,呈弱阳性反应,Vme神经元为阴性;2.在Vme内亦可观察到大量GABAAR免疫反应阳性的胞体、纤维和终末,其主要亚单位有α1、α2、α3和β.其中GABAARα1和GABAARα3亚单位只分布于神经元胞体,呈强阳性反应,GABAARα2和GABAARβ亚单位仅见于神经纤维和终末内,Vme神经元胞体为阴性;3.密集分布的GABABR2、GABAARα2和GABAARβ亚单位样免疫阳性纤维和终末似包绕在Vme神经元胞体的周围,其中以GABAARα2的免疫染色强,分布也较为集中.结论GABAA受体和GABAB受体的不同亚单位在Vme内的定位分布有一定差异,提示GABA能神经终末对面口部本体感觉信息的传递发挥抑制性调控作用,可能主要是由位于Vme神经元胞体内的GABAARα1和GABAARα3亚单位所介导.
