接合菌病
摘要： 接合菌病(zygomycosis)由接合菌纲的致病性真菌所致.接合菌纲包括毛霉目和虫霉目.由毛霉目真菌引起的感染称为毛霉病(mucormycosis),好侵犯血管,引起血栓及周围组织坏死.由虫霉目真菌引起的感染称为虫霉病(entomophthoramycosis),通常引起皮下组织和皮肤黏膜的慢性感染.毛霉病和虫霉病合称接合菌病.
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申克孢子丝菌酵母相形成过程中转录组表达谱变化及差异表达基因功能分析
目的 比较并分析申克孢子丝菌菌丝相及早期酵母相转录组学的差异,明确酵母相形成过程中转录组表达谱的变化.方法 对25℃沙氏培养基培养96 h获得的菌丝相申克孢子丝菌及37℃脑心浸液培养基培养36 h获得的早期酵母相申克孢子丝菌的转录组进行测序分析,对筛选后的单基因簇进行功能注释,包括与多个数据库(NR、Swiss-Prot、KEGG、COG、KOG、GO、Pfam)的比对、编码区序列预测及基因在每个样品中的表达量分析.后,对差异表达基因进行模式聚类、功能注释以及富集性分析.结果 共获得14.76 Gb有效数据,组装获得43 863条单基因簇,28 094条获得注释结果.与菌丝相比较,酵母相上调表达的基因10 969条,下调表达的基因199条.差异表达基因参与蛋白磷酸化、细胞内蛋白转运、细胞蛋白修饰、小三磷酸鸟苷酶介导的信号转导、囊泡介导转运、翻译、细胞内信号转导、微管形成、三磷酸腺苷合成偶联质子转运等过程.参与真菌形态形成的两个重要信号转导通路丝裂原活化蛋白激酶和双组分信号通路中的16条基因及参与几丁质合成代谢的16条基因均被证实在早期酵母相上调表达.结论 与菌丝相相比,申克孢子丝菌酵母相基因表达谱发生显著变化,差异表达的基因涉及众多功能,提示孢子丝菌相变受多基因网络系统的调控.
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输入性疖肿型皮肤蝇蛆病一例及致病瘤蝇COI基因序列分析
报道1例输入性疖肿型皮肤蝇蛆病,并对致病瘤蝇的线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列进行分析.患者女,33岁.患者于1个月前去非洲加纳和喀麦隆两地,期间未采取任何防蚊措施,且有室外晾晒衣物经历.皮肤科检查:左上臂内侧和左侧胸部外侧各见一疖性隆起,直径1 ～2cm,鲜红色,边缘不规则,触之较硬,皮损表面中央有小孔.形态学观察显示皮损处挤出的虫体疑似为蝇蛆.PCR扩增虫体COⅠ基因片段获得650 bp左右的产物,测序后经BLAST比对分析显示,该产物与喀麦隆2010年分离的嗜人瘤蝇COⅠ基因FR719158.1亲缘关系近,序列相似性为99.84％,在系统进化树上聚集在一起.综合患者的临床特征、旅行史和致病瘤蝇的序列分析结果,确认该病例为嗜人瘤蝇导致的输人性疖肿型皮肤蝇蛆病.
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RGD多肽修饰的芬维A铵脂质体对恶性黑素瘤细胞增殖、凋亡及迁移的影响
目的 探讨芬维A铵(4-HPR)对B16F10和A375黑素瘤细胞增殖、凋亡及迁移的影响,并观察脂质体及以RGD多肽修饰的脂质体对药物摄取及作用的影响.方法 采用薄膜-水化法制备4-HPR脂质体(4-HPRL),并以RGD多肽对4-HPRL进行修饰,制备RGD-4-HPRL,对其浓度、粒径、电位、载药量及包封率进行检测.体外培养B16F10和A375细胞,分为对照组、4-HPR组、4-HPRL组和RGD-4-HPRL组,给4-HPR组分别加入含相同浓度4-HPR的4-HPR原料药、4-HPRL及RGD-4-HPRL,对照组加入等量培养液.作用不同时间后,通过CCK8细胞计数试剂盒检测细胞活性,膜联蛋白V/碘化丙锭染色检测细胞凋亡,细胞划痕实验检测药物对细胞迁移的影响.以香豆素6(C6)代替4-HPR制备C6脂质体(C6L)和RGD-C6L,流式细胞仪检测细胞对药物的摄取情况.采用SPSS22.0软件进行统计学分析,多组间数据比较采用单因素方差分析,两两组间显著性差异比较采用t检验.结果 制备的4-HPRL和RGD-4-HPRL溶液可明显提高4-HPR的水溶性,并具有较高的载药量和包封率.粒径分布均匀,平均在100 nm以下.CCK8实验表明,4-HPR可明显抑制B16F10和A375细胞增殖,且相同浓度下4-HPRL对细胞增殖的抑制率高于4-HPR(P＜ 0.01),RGD-4-HPRL又高于4-HPRL(P＜ 0.01或P＜0.05)和4-HPR(P＜ 0.01).细胞凋亡实验表明4-HPR浓度分别为10 mg/L或20 mg/L时可明显诱导B16F10和A375细胞凋亡.4-HPRL组两种细胞凋亡率高于4-HPR组(均P＜0.01),RGD-4-HPRL组高于4-HPRL组(均P＜0.01)和4-HPR组(均P＜0.01).细胞划痕实验显示,4-HPR可抑制两种细胞划痕愈合和细胞迁移,4-HPRL和RGD-4-HPRL抑制能力明显优于4-HPR原料药.摄取实验显示,B16F10细胞C6荧光强度在对照组为2.15±0.28,C6组为8.56±0.36,C6L组为20.48±0.13,RGD-C6L组为22.55±0.07,各组间差异有统计学意义(F=67 194.186,P＜0.01),其中,C6L组与RGD-C6L组荧光强度明显高于C6组(均P＜0.01),且RGD-C6L组高于C6L组(P＜0.01).结论 4-HPR可抑制黑素瘤A375和B16F10细胞的增殖、迁移并诱导其凋亡,脂质体和RGD靶向脂质体可明显增强4-HPR对黑素瘤细胞的作用.
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过敏性紫癜患者CD4+T细胞叉头框蛋白3基因甲基化水平及其与调节性T细胞的关系
目的 检测过敏性紫癜患者外周血CD4+T淋巴细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)比例和叉头框蛋白3(Foxp3)基因mRNA表达以及启动子区甲基化水平.方法 2015-2016年在中南大学湘雅二医院皮肤科收集20例过敏性紫癜住院患者和20例健康人,两组间性别、年龄差异无统计学意义(均P＞ 0.05).分离受试者外周血CD4+T淋巴细胞,荧光实时定量PCR试剂盒检测Foxp3基因mRNA,流式细胞仪检测CD4+CD25 +Treg比例,亚硫酸氢钠测序技术检测Foxp3基因启动子甲基化水平.采用SPSS16.0软件分析数据,两独立样本均数比较采用t检验,单因素直线相关分析评估各指标的相关性.结果 过敏性紫癜组CD4+T淋巴细胞中Foxp3mRNA表达水平(0.380±0.226)显著低于健康对照组,t=9.503,P＜0.01,CD4+ CD25+ Treg比例(1.668％±0.959％)显著低于对照组(2.741％±1.131％),t=2.552,P＜ 0.05,Foxp3基因启动子区甲基化水平(0.712±0.164)显著高于对照组(0.453±0.147),t=3.610,P＜0.01.患者组Foxp3启动子区甲基化水平与CD4+CD25+Treg百分比呈显著负相关(r=-0.490,P＜0.05),和临床病情评分呈正相关性(r=0.486,P＜ 0.05).肾损害组患者Foxp3基因启动子区甲基化水平显著高于无肾损害组(P＜0.05).结论 过敏性紫癜患者CD4+T细胞Foxp3基因启动子区甲基化水平升高,下调Foxp3基因表达和CD4+CD25+Treg比例,这可能与过敏性紫癜发病有关,并影响病情进展和预后.
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黄芩苷对狼疮鼠肾炎的治疗作用和对滤泡辅助T细胞的调控作用
目的 研究黄芩苷对狼疮鼠肾炎的治疗作用和对滤泡辅助T(Tfh)细胞的调控作用.方法 8只12周龄雌性狼疮鼠按随机数字表法随机分为两组,每组4只.黄芩苷组腹腔注射200 mg/kg黄芩苷每日1次,共治疗4周,对照组注射生理氯化钠溶液.治疗结束时,考马斯亮蓝法检测24 h尿蛋白含量,处死小鼠,取出脾脏称重,分离单个核细胞,流式细胞仪检测Tfh细胞比例;取出肾脏行苏木精-伊红染色,评估肾脏损伤情况.从上述对照组狼疮鼠脾脏中分离单个核细胞,免疫磁珠分选幼稚性CD4+T细胞,分3组培养,空白对照组不做处理,诱导组加入10 μg/L IL-21、IL-6和3μg/L抗CD3及CD28抗体培养5d,干预组在诱导组基础上同时加入40 μmol/L黄芩苷体外培养5d.用50 μg/L佛波酯、750 μg/L离子霉素和20 mg/L布雷非德菌素A刺激在上述体系中培养的部分幼稚CD4+T细胞5h.流式细胞仪检测CD4+CXCR5+PD-1+细胞和CD4+IL-21+细胞比例.采用SPSS20.0进行统计分析,定量资料通过方差分析和Student t检验进行组间比较.结果 黄芩苷治疗能有效改善狼疮鼠肾脏损伤,黄芩苷组尿蛋白含量(1 416±171) μg/24 h显著低于对照组[(2 623±278) μg/24 h,P=0.022],脾脏中Tfh细胞的比例也低于对照组(12.6％±2.3％比40.2％±1.1％,P=0.005).体外黄芩苷能抑制Tfh细胞分化,干预组CD4+ CXCR5 +PD-1+Tfh细胞比例(13.3％±0.8％)低于诱导组(17.6％±0.9％,P=0.04),CD4+IL-21+细胞比例(1.0％±0.4％)亦低于诱导组(2.7％±0.2％,P＜ 0.01).结论 黄芩苷治疗能有效改善狼疮肾炎的损伤,可能与抑制Tfh细胞分化有关.
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犬小孢子菌PQ-LRP蛋白的定位研究
目的 用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记犬小孢子菌PQ-LRP蛋白,明确PQ-LRP蛋白在犬小孢子菌中的定位.方法 提取犬小孢子菌总RNA,反转录为cDNA作为模板,PCR扩增PQ-LRP基因,将PQ-LRP基因与EGFP基因构成融合基因,连接到pCAMBIA 1300质粒载体,采用根癌农杆菌转化法对犬小孢子菌进行转化,使融合基因LRP-EGFP在真菌通用启动子(Ptrpc)和终止子(Ttrpc)调控下在犬小孢子菌中整合型表达,激光共聚焦显微镜检测融合蛋白的细胞定位.结果 成功构建表达载体pCAMBIA-LRP-EGFP,融合基因LRP-EGFP在犬小孢子菌中获得整合型表达.激光共聚焦显微镜下LRP-EGFP的荧光信号呈颗粒状或团块状集中于犬小孢子菌的细胞膜上.结论 LRP-EGFP融合基因在犬小孢子菌中成功表达,且PQ-LRP蛋白定位于犬小孢子菌细胞膜上.
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英夫利西单抗长疗程治疗中重度寻常性银屑病的疗效评价
目的 观察长期使用英夫利西单抗治疗中重度寻常性银屑病的疗效.方法 随访分析2016年3月至2018年5月在北京大学第三医院皮肤科应用英夫利西单抗治疗的中重度寻常性银屑病患者,纳入用药超过54周的患者.用药剂量5 mg/kg,总剂量以100 mg为间隔取整数.前两次用药间隔依次为2、4周,然后间隔均为8周.采用Mauchly球性检验法、随机区组的方差分析法及Bonferroni法分析治疗前、治疗2、6、14、22、30、38、46及54周银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)变化,同时记录病情转归及不良反应.结果 12例患者接受治疗,9例持续用药超过54周,遂纳入数据分析.治疗前,9例患者PASI值[M(P25,P75)]为26.3(23.4,27.7).不同治疗时间点的PASI值不等(F=7.12,P=0.0004),且患者PASI值呈总体下降趋势.治疗30周时,PASI值为4(2.5,5.2),PASI改善率为86.38％±6.98％.其中,改善率达PASI50的患者8例,达PASI75的患者7例,达PASI90的患者2例.治疗54周时,PASI值为8(3.5,8.9),PASI改善率为64.23％±17.32％,8例达PASI50,4例达PASI75,1例达PASI90.Bonferroni法显示,与治疗30周时相比,治疗54周时PASI评分显著升高(t=3.269,P=0.0048),但治疗30周及54周时PASI评分值均显著低于治疗前(30周:t=18.49,P＜0.0001;54周:t=5.81,P=0.0004).结论 英夫利西单抗治疗中重度寻常性银屑病在长达54周的时间内有显著疗效.
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白癜风患者血清nesfatin-1与白细胞介素26的表达水平及其意义
目的 检测白癜风患者血清中摄食抑制因子(nesfatin-1)、白细胞介素26(IL-26)的表达水平,研究其与焦虑状态、病情分期、皮疹分布类型的关系.方法 2017年3月至2018年9月选取江苏大学附属医院皮肤科门诊诊断为白癜风的患者123例,其中伴有焦虑状态者93例(白癜风焦虑组),无焦虑者30例(白癜风无焦虑组),30例健康对照者(健康对照组).同时,在镇江市第五人民医院选取30例无白癜风、无其他自身免疫性疾病及高血压、糖尿病等基础疾病的焦虑患者(普通焦虑组).采用酶联免疫吸附实验检测各组nesfatin-1及IL-26表达水平,采用焦虑状态特质问卷评估各组的焦虑状态.白癜风患者按疾病活动性评分分为稳定期、进展期和快速进展期,根据皮损分为局限型、节段型、泛发型、散发型、肢端型,分析各组、各型间nesfatin-1及IL-26水平.多组资料采用单因素方差分析,多个影响因素时采用多因素方差分析及分层分析,治疗前后比较采用配对￡检验,相关性分析采用Pearson相关分析.结果 白癜风焦虑组、白癜风无焦虑组、普通焦虑组和对照组血清nesfatin-1含量差异有统计学意义(F=10.78,P＜0.001),其中,白癜风焦虑组血清中nesfatin-1含量显著高于白癜风无焦虑组、普通焦虑组及对照组(P＜ 0.001).4组间血清中IL-26含量差异无统计学意义(F=1.34,P=0.26).Pearson相关分析显示,93例白癜风焦虑患者血清nesfatin-1水平与焦虑状态特质问卷评分呈正相关(r=0.55,P＜0.001).各型中快速进展期白癜风焦虑患者血清nesfatin-1水平均显著高于稳定期(P＜0.05),而不同分期白癜风焦虑患者IL-26水平差异无统计学意义(P＞0.05).各期中泛发型白癜风焦虑患者血清nesfatin-1水平均显著高于局限型(P＜ 0.001).10例白癜风焦虑患者治疗3个月后nesfatin-1水平低于治疗前(配对t=4.40,P=0.02),但焦虑状态特质问卷评分无变化(P＞0.05).结论 Nesfatin-1可能作为情绪影响因子参与了白癜风的发病,尤其作用于快速进展期和泛发型患者,而IL-26与白癜风发生发展关系不大.
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不同底物间接免疫荧光对自身免疫性表皮下水疱病诊断的评价
目的 评价以正常人皮肤、猴食管及盐裂皮肤为底物的间接免疫荧光对自身免疫性表皮下水疱病的诊断价值.方法 选取2015年1月至2016年12月在中国医学科学院皮肤病研究所诊断的自身免疫性表皮下水疱病56例,其中大疱性类天疱疮(BP)47例,获得性大疱性表皮松解症(EBA)6例,线状IgA大疱性皮病2例,P200类天疱疮1例.对照组为70例天疱疮、15例慢性湿疹和15例健康成人.分别以正常人皮肤、猴食管及盐裂皮肤为底物行间接免疫荧光,观察荧光沉积情况,比较不同表皮下水疱病间接免疫荧光检测的敏感性和特异性.采用SPSS 13.0软件,计数资料比较采用x2检验.结果 BP患者血清以正常人皮肤、猴食管为底物间接免疫荧光可见到荧光物质沿基底膜带线性沉积,盐裂皮肤间接免疫荧光可见BP患者荧光线性沉积于表皮侧,EBA和P200类天疱疮线性沉积于真皮侧.以正常人皮肤、猴食管及盐裂皮肤为底物间接免疫荧光对表皮下水疱病诊断的敏感性分别为73.2％、60.7％、94.6％,差异有统计学意义(x2=18.2,P＜0.05),特异性分别为98.0％、100％、97.1％,差异无统计学意义(P＞0.05),以盐裂皮肤为底物时诊断的敏感性高于以正常人皮肤、猴食管为底物(x2值分别为8.0、16.7,均P＜0.05).结论 对于自身免疫性表皮下水疱病的诊断,盐裂皮肤为底物行间接免疫荧光检查优于以猴食管和正常人皮肤为底物.
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银屑病患者血浆中前蛋白转化酶枯草溶菌素9的表达及对外周血CD4+T细胞活化的影响
目的 通过检测银屑病患者血浆中前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)的含量及其对外周血CD4+T细胞分泌干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素17A(IL-17A)的影响,探讨PCSK9在银屑病发病机制中的作用.方法 招募2016年2月至2017年12月于中国医学科学院皮肤病医院门诊就诊的30例寻常性银屑病患者和30例健康志愿者(对照组).患者组中男16例,女14例,年龄18～ 66岁,病程1个月至15年.抽取受试者外周静脉血,分离血浆和单个核细胞(PBMC),实时荧光定量PCR(q-PCR)检测PBMC中PCSK9 mRNA表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血浆中PCSK9蛋白浓度.磁珠法分离每例受试者外周血CD4+T细胞,并均分为两组,实验组加入PCSK9蛋白共培养,对照组不加PCSK9蛋白,培养24h后,ELISA检测培养基上清液中IFN-γ和IL-17A的表达水平.两组间比较采用独立样本t检验,银屑病患者血浆PCSK9浓度与银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)的关系采用Pearson相关性分析.结果 银屑病组和对照组PBMC中未检测到PCSK9 mRNA的表达.银屑病组血浆中PCSK9表达[(243.58±11.91) μg/L]显著高于对照组[(199.74±31.09) μg/L],差异有统计学意义(t=5.761,P＜0.001).银屑病患者外周血CD4+T细胞与PCSK9蛋白共培养后,IFN-γ和IL-17A表达水平[分别为(6 150.00±212.13) ng/L和(1 532.00±11.31) ng/L]均高于未加PCSK9蛋白的对照组[分别为(4 650.00±212.13) ng/L和(698.5±266.58) ng/L],差异均有统计学意义(t=7.071和4.418,均P＜0.05).健康对照CD4+T细胞实验组和对照组均未检测到IFN-γ和IL-17A表达.结论 银屑病患者血浆中PCSK9含量增高,可能通过活化外周血CD4+T细胞参与银屑病的发病机制.
关键词： 银屑病 CD4阳性T淋巴细胞 干扰素γ 白细胞介素17 前蛋白转化酶枯草溶菌素9
