首页 > 文献资料
-
应用全反射荧光显微镜对MIN6细胞分泌过程的动态研究
目的:通过追踪胰腺β细胞株MIN6细胞内单个分泌囊泡的运动轨迹研究胰岛素的动态分泌过程和影响因素.方法:应用吖啶橙转染MIN6细胞,通过全反射荧光显微镜观察细胞膜和靠近胞膜80 nm区域内的单个囊泡运动的动态过程.结果:在高浓度氯化钾刺激下,附着在细胞膜的分泌囊泡发生融合和释放,此分泌过程大约在1 min达到高峰,并可持续到4～5 min.在高浓度葡萄糖激发下,前1～2 min主要由原来附着在细胞膜的分泌囊泡融合和释放,5～6 min以后由新融合的囊泡分泌.结论:在高浓度氯化钾刺激下,主要引发第一相分泌,在高浓度葡萄糖的刺激下,可以表现为双相分泌.
-
人胚胎发育中胰腺细胞的增殖变化
目的:探索人胚胎发育过程中胰腺细胞增殖水平.方法:应用免疫组织化学EnVision法,检测30例人胚胎胰腺组织PCNA的表达.结果:各胎龄段胰腺外分泌细胞PCNA的阳性表达均显著高于内分泌细胞,胚胎发育早期阶段(9～14 w)外分泌细胞PCNA的阳性表达明显高于其它胎龄,胚胎发育晚期阶段(29～37 w)内分泌部PCNA阳性率高于其它胎龄组.结论:在胚胎发育过程中胰腺外分泌部细胞增殖水平高于内分泌部,随着胎龄的变化,胰腺内、外分泌细胞的增殖水平也发生了变化.
-
肿瘤坏死因子受体p55、p75与急性胰腺炎
急性胰腺炎是一种常见疾病,尽管其诱发因素各不相同,但病理生理过程均始于胰腺细胞破坏.
-
环氧合酶-2对重症急性胰腺炎大鼠模型的实验研究
胰腺细胞内胰蛋白酶原激活是引起急性胰腺炎(AP)的起始因素,然而决定病程转归及严重程度的机制并未明确.研究显示,胰酶激活后的炎症反应与AP严重程度密切相关[1].环氧合酶-2(COX-2)受各种炎症因子调节,在炎症发生发展中起重要作用[2].已有研究证实,AP时胰腺细胞中COX-2表达增加.我们在5%牛磺胆酸钠诱导大鼠重症急性胰腺炎(SAP)模型中,用特异性COX-2抑制剂(NS-398)干预,观察胰腺组织COX-2变化及这一变化与胰腺组织学之间的关系,探讨COX-2在AP中的可能作用机制.
-
急性胰腺炎非特异性炎性反应的调控
目前认为,重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)的病程演进、病理生理过程分为:第1期,胰腺内消化酶的激活和胰腺细胞的损伤;第2期,胰腺内炎性反应和不同程度胰腺细胞坏死;第3期,胰腺进一步损伤和胰外改变,如全身炎性反应综合征( systemic inflammatory response syndrome,SIRS)和多器官功能障碍综合征 ( multiple organ dysfunction syndrome,MODS).根据现有的研究提示,无SIRS患者病死率为0.7％,短暂性SIRS(≤48 h)患者病死率为8.0％,持续性SIRS(＞48 h)患者病死率为25.4％,因此,SIRS可能是疾病发生发展的独立危险因素[1].
-
树突状细胞转分化及其与肾脏疾病
自从细胞分化理论建立以来,人们普遍认为在哺乳动物体中只有胚胎干细胞才能分化产生不同胚层的各类细胞,成体组织干细胞的分化潜能受到一定的限制,只能向其所在胚层的某些或某类细胞进行分化,不能跨胚层或跨系分化,而终末分化细胞在正常情况下是不能逆转其表型[1].然而近期研究发现,终末分化细胞在特定的生理病理情况下,可通过去分化和转分化,发生细胞表型改变,并转变为其他类型的组织细胞[2].如视网膜色素细胞可以转分化为晶状体上皮细胞、肌细胞转分化为脂肪细胞、内皮细胞转分化为血管平滑肌细胞,以及胰腺细胞和肝细胞的相互转分化等[3].本文就树突状细胞和转分化及其与肾脏疾病关系作一综述.
-
酵母双杂交技术筛选与HBeAg结合的胰腺细胞蛋白
目的 应用酵母双杂交技术筛选人类胰腺细胞cDNA文库中与HBeAg相互作用的结合蛋白.方法 醋酸锂法将诱饵质粒pGBKT7-HBeAg转化酵母菌AH109;同时扩增纯化人胰腺细胞cDNA文库并转化酵母菌株Y187.应用酵母双杂交系统3将二者进行配合,在四缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和X-α-gal上进行双重筛选.提取阳性菌落质粒并电击转化感受态大肠埃希菌DH5α,BglⅡ酶切鉴定及与诱饵质粒的共转化回交实验验证,将阳性克隆测序并在GenBank里进行同源性比对和生物信息学分析.结果 初步筛选出包括顺乌头酸酶在内的13个与HBeAg相互作用的蛋白.结论 HBeAg可能与胰腺文库蛋白相互作用,与2型糖尿病和肝脏脂肪变性等代谢性疾病密切相关.
-
大黄酸对肿瘤坏死因子α所致胰腺细胞损伤的保护作用
目的;探讨大黄酸是否对肿瘤坏死因子α(TNFα)作用下的胰腺细胞具有保护作用.方法:观察大黄酸对TNFα作用条件下体外培养的大鼠胰腺细胞的细胞活率、培养上清中的乳酸脱氢酶(LDH)、淀粉酶(AMY)和N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的水平的影响,并进行了胰腺细胞形态学观察.结果:大黄酸可提高相应TNFα浓度下的胰腺细胞的细胞活率,降低培养上清中LDH、AMY和NAG的水平.结论:大黄酸对TNFα所致胰腺细胞损伤有明显的保护作用.
-
3TSR体内外诱导内皮细胞凋亡的研究
目的 观察血管形成抑制剂3TSR体内外对内皮细胞的影响,并探讨与细胞凋亡蛋白酶-3(Caspase-3)的关系.方法 在体外培养条件下比较对照组、不同剂量3TSR(1～3 μmol/L)作用48 h对人脐静脉血管内皮细胞增殖及凋亡的影响,并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组Caspase-3 mRNA转录水平.建立裸鼠原位胰腺癌模型,进行随机干预实验,比较对照组(每日0.2 ml生理盐水腹腔注射)、3TSR1组(每日1 mg/kg体重腹腔注射)、3TSR2组(每日2mg/kg体重腹腔注射)及3TSR3组(每日3 mg/kg体重腹腔注射),每组6只,3周后检测胰腺癌原位肿瘤血管内皮细胞凋亡率.结果 体外培养时3TSR对人脐静脉内皮细胞有显著增殖抑制及凋亡诱导作用,作用48 h后其凋亡率分别为(10.3±3.2)%,(12.4±4.1)%和(20.1±5.4)%,均显著高于对照组(P＜0.05).3TSR1组、3TSR2组和3TSR3组Caspase-3 mRNA转录水平相对强度分别(0.76±0.11),(0.79±0.21)和(0.89±0.19),均显著高于对照组(P＜0.05),且随浓度增加而增强.体内实验时3TSR能显著诱导胰腺癌血管内皮细胞凋亡,3TSR1组、3TSR2组及3TSR3组凋亡率分别为(7.8±3.0)%,(14.6±4.9)%和(15.9±3.2)%,均显著高于对照组(P＜0.05).结论 3TSR体内外均能诱导内皮细胞的凋亡,且呈一定的浓度依赖性,其作用机制可能与促进Caspase-3基因转录有关.
-
胰腺缺血-再灌注损伤细胞凋亡及其相关因素的研究
我们对胰腺缺血-再灌注损伤细胞凋亡及其相关因素如肿瘤坏死因子(TNF)-α、组织Ca 2+等在其过程中的作用进行研究，现将结果报道如下。 一、材料与方法 成年Wistar大鼠60只，体重(200±25) g，雌雄不拘。随机分为对照组(A组，10只)、缺血-再灌注损伤组(B组，30只)、异搏定保护组(C组，10只)和TNF-α拮抗组(D组，10只)。戊巴比妥钠45 mg/kg体重腹腔注射麻醉，A组直接取胰腺组织标本，心脏穿刺取血2 ml；B组分别以血管夹阻断腹腔干和肠系膜上动脉15、30、60 min(各10只)后再灌注6 h，取标本；C组阻断血管(同B组)15 min，于再灌注前5 min尾静脉注射异搏定溶液0.1 mg/100 g体重，取标本；D组于术前5 min尾静脉注射抗TNF-α单克隆抗体20 μg/100 g体重后阻断血管(同B 组)15 min，再灌注6 h，取标本。 胰腺标本常规固定，苏木素-伊红染色，以各组10个病理切片中出血坏死性胰腺炎所占比例来衡量胰腺组织损伤的严重程度。 采用末端标记法(TUNLE)标记胰腺凋亡细胞核中的DNA 3’-OH末端，按TUNLE试剂盒要求操作。3，3’-2氨基联苯胺显色，苏木素复染。光镜下计算凋亡细胞百分比，3次记数平均值，作为胰腺细胞凋亡指数(AI)。按TNF-α放射免疫试剂盒(北京东亚免疫研究所)说明测定TNF-α。以原子吸收光法测定组织Ca2+ 。所有数据以(****±s)表示，方差分析及相关性检验。 二、结果 缺血15、30、60 min细胞凋亡百分比分别为(28.3±3.2)%、(19.6±3.0)%、(11 .2±2.9)%，不同缺血时间的细胞凋亡百分比之间差异均有显著性意义(P＜0.05)。各组胰腺细胞AI、TNF-α、组织Ca2+检测结果见表1。缺血-再灌注损伤组血TNF-α、组织Ca2+与细胞凋亡指数之间均具有显著相关性(r=0.692 7，P＜0.05 ；r=0.848 5，P＜0.05)。
-
硫酸软骨素对牛磺胆酸钠诱导的大鼠离体胰腺细胞骨架损伤的影响
为探讨硫酸软骨素(CS)对牛磺胆酸钠诱导的大鼠离体胰腺腺泡细胞氧化应激损伤及细胞骨架蛋白F-actin结构的影响.笔者将雄性Wistar大鼠36只,经分离提纯获取胰腺腺泡细胞悬液,牛磺胆酸钠处理离体胰腺细胞后,随机分3组即细胞模型(细胞骨架损伤)组,CS处理组和对照组.各组分别于30 min,1 h,3 h进行MDA,GSH,SOD和ATP含量测定.离心细胞涂片后,以罗丹明-法罗丁F-actin染色,在共聚焦激光显微镜下观察F-actin结构的变化;用流式细胞术检测细胞的F-actin蛋白含量.结果 示,模型组GSH,SOD和ATP明显下降(P＜0.05),MDA明显升高(P＜0.05).CS组GSH,SOD,ATP下降幅度小于模型组,差异有显著性(P＜0.05);MDA升高幅度小于模型组,差异有显著性(P＜0.05).模型组细胞骨架蛋白F-actin解聚并弥漫分布于胞浆内,其蛋白含量持续下降(P＜0.05);CS组F-actin结构较稳定,其蛋白水平明显高于模型组(P＜0.05).提示:牛磺胆酸钠诱导的离体胰腺细胞早期已存在内源性抗氧化物质的显著下降,脂质过氧化增加和ATP耗竭加重了细胞损伤.CS可通过减轻氧化应激损伤维持ATP含量,缓解F-actin的降解,稳定细胞骨架结构从而减轻细胞损伤.
-
胰腺星状细胞与慢性胰腺炎关系的研究进展
慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)是由不同因素造成胰腺组织和功能持续性损害,终导致胰腺内外分泌功能的永久性丧失,其典型病理表现为胰腺实质纤维化、胰腺细胞萎缩、胰管狭窄或扩张和胰腺微结石.胰腺纤维化是由于过多的细胞外基质(extracellular matrixc,ECM)在胰腺内沉积所致,近的研究认为胰腺存在着与肝星状细胞结构和功能相似的细胞,称之为胰腺星状细胞(pancreatic setellate cell,PSC),活化的PSC可以产生Ⅰ、M型胶原及纤连蛋白等主要的ECM成分[1],因而该细胞在胰腺纤维化过程中发挥重要作用.
-
TGFa在胰腺癌中的表达及其癌细胞DNA倍型的关系
胰腺癌是恶性程度极高的肿瘤,近年发现多种生长因子可能参与其调控,转化生长因子a(TGFa)与癌肿的发生、发展及肿瘤细胞的增殖和分化相关.据此,我们采用免疫组化LSAB法,研究各级分化的胰腺癌转化生长因子的表述,并探讨其表达与胰腺细胞DNA倍型的相关性.
-
多特征聚类与粘连分离模型的细胞抹片图像分割与分类
胰腺癌的诊断非常重要,而细胞抹片显微图像的病理分析是其诊断的主要手段.图像的准确自动分割和分类是病理分析的重要环节,因此本文提出了一种新的胰腺细胞抹片显微图像自动分割与分类算法.在分割方面,首先采用多特征Mean-shift聚类算法(MFMS)定位细胞核区域;接着采用弹性数学形态学结合角点检测的去粘连模型(CSM)对粘连重叠细胞核进行去粘连处理,实现了分割的准确性和鲁棒性.在分类方面,首先针对分割的细胞核提取了4个形状特征和138个不同颜色空间的纹理特征;然后结合支持向量机(SVM)和链式遗传算法(CAGA)实现封装式特征选择;后将优选特征送入SVM进行分类,完成了胰腺细胞抹片显微图像的分类识别.本文采用了15幅图像一共461个细胞核进行测试.实验结果显示,本文算法可以实现不同类型的胰腺细胞抹片显微图像的自动分割与准确分类.就分割来说,本文算法可获得较高的正确率(93.46％±7.24％);就正常和癌变细胞的分类来说,本文算法可获得较高的分类正确率(96.55％±0.99％)、灵敏度(96.10％±3.08％)和特异度(96.80％±1.48％).
-
善宁对重症急性胰腺炎胰腺细胞的保护作用
目的探讨善宁对重症急性胰腺炎胰腺细胞的保护作用.方法采用15 g/L去氧胆酸钠逆行胆胰管内注射建立大鼠重症急性胰腺炎(SAP)模型,治疗组背部皮下注射善宁(1.35 μg/100 g体质量)给予治疗.观察血中NO、ET、过氧化脂质(LPO)以及胰腺细胞线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)活性、溶酶体酸性磷酸酶(ACP)释放率、微粒体细胞色素P450的变化,并进行相关分析.结果与对照组比较,模型组血中NO、ET、LPO以及溶酶体ACP释放率明显升高(P<0.05),线粒体SDH活性以及微粒体细胞色素P450则显著降低(P<0.05);善宁治疗后上述各检测指标均较模型组明显改善(P<0.05);相关分析显示NO、ET、LPO与溶酶体ACP释放率呈正相关,而与线粒体SDH和微粒体细胞色素P450呈明显负相关.结论 NO、ET在SAP的病损中起重要作用,善宁能缓解三者的损伤作用,保护胰腺细胞结构和功能的正常.
