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墨尔本试验药物Venetoclax能够杀死提高癌细胞存活率的BCL-2蛋白质
墨尔本的一项药物试验在Royal Melbourne Hospital和Peter MacCallum Cancer Centre进行，试验中使用的药物名叫Venetoclax，结果显示该药物能够杀死提高癌细胞存活率的BCL-2蛋白质。
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半枝莲黄酮对抗Aβ25-35所致N2a细胞损伤的作用
目的:探讨半枝莲黄酮对抗β-淀粉样蛋白25-35(β-amyloid protein 25-35,Aβ25-35)所致小鼠脑神经瘤细胞(Neuro-2a,N2a)损伤的作用.方法:体外培养N2a细胞,随机分为空白组、模型组、半枝莲黄酮(scutellaria barbata flavonoids,SBF)1.125μg·mL-1、2.250μg·mL-1和4.500μg·mL-1剂量组.药物作用细胞12 h后,模型组和SBF组分别加入终浓度为35μmol·L-1的Aβ25-35作用24 h.倒置显微镜下观察细胞形态学变化,分光光度法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的水平,噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法测定细胞存活率.结果:与空白组比较,模型组N2a细胞形态结构明显受损,细胞与细胞之间链接破坏,部分细胞聚团,折光性降低;细胞培养液中LDH水平明显增加(P<0.01);细胞存活率显著下降(P<0.01).与模型组比较,三剂量SBF不同程度地降低Aβ25-35所致N2a细胞结构受损的程度,细胞突起增加,细胞之间结构清晰,折光性增强;培养液中LDH释放量也不同程度地降低(P<0.05),细胞的存活率亦明显增加(P<0.01).结论:SBF能够对抗Aβ25-35所致的N2a细胞的损伤.
关键词： 半枝莲黄酮 β-淀粉样蛋白25-35 N2A细胞 乳酸脱氢酶 细胞存活率 -
铅对肾细胞的脂质过氧化损伤机制的研究
铅是一种严重危害人类健康的重金属元素.进入人体的铅99％经肾脏代谢,因此,肾脏是铅毒作用的主要靶器官之一[1].铅对肾脏的病理改变提示其毒性作用是以肾小管损害为主要特征.本文采用大鼠肾细胞(NRK)为研究模型,以不同剂量的醋酸铅染毒,观察反映铅对NRK细胞毒性指标:细胞存活率、细胞超微结构、N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)、谷氨酰转肽酶(γ-GT)以及脂质过氧化指标,包括谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)的改变,探讨铅对肾细胞毒作用及脂质过氧化机制,为临床工作提供理论指导.
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视网膜色素上皮细胞的培养和保证
视网膜色素上皮(RPE)细胞移植是近年来发展起来的一项新的医学科研技术,本研究首次在分离兔RPE细胞时应用了酶的二步消化法分离了兔RPE上皮与神经上皮,Bruch膜之间的插入连接,这种方法与机械分离法、冷冻法相比较,避免了RPE细胞完整性的破坏,细胞收获量大,体外生长旺盛,细胞存活率高,为在细胞及分子生物学水平上深入探索RPE细胞的生理生化特性及视网膜色素变性,光损伤等各种眼疾病机制的探讨和防治提供了研究基础.同时为建立细胞库奠定了基础,当应用于视网膜移植实验时,可不受时间、条件、供体来源的限制,为将来临床RPE细胞移植开拓了广阔前景.
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碳纳米管在药物缓控释中的研究
碳纳米管（CNTs）又称纳米碳管，是一种具有石墨结晶的管状纳米碳材料。是1991年由日本科学家Iijima［1］首先发现的一种新型纳米材料。碳纳米管是由石墨烯层片绕中心轴按一定的螺旋角卷曲而成的直径为纳米级的无缝、中空的管体，根据石墨烯层数分为单壁碳纳米管和多壁碳纳米管，其直径为数纳米到数十纳米，具有优良的光学、力学、化学和电学等特性［2，3］。其径向尺寸较小，外径一般在数纳米至数十纳米之间；管的内径更小，小的只有1 nm左右。CN T s独特的结构决定了其具备良好的力学、电学、光学、热学等性能，可广泛应用于轮胎、平板显示器和汽车制造等领域［4］。CN T s已成为当今受关注的纳米材料之一，其中，将CN T s作为新型的药物载体材料用于药物递送系统是目前研究的热点之一［5］。然而，作为药物载体材料，碳纳米管因其生物相容性差导致细胞存活率降低、抑制细胞增殖以及降低细胞黏附力等问题，限制了它在药物载体领域的应用，而经表面修饰后的碳纳米管用于药物传递未显示出毒性［6］。且可以改善其水分散性，而且可提高碳纳米管的生物相容性［7］，使碳纳米管作为药物传输系统的运送载体得以应用［8］。
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金属硫蛋白对甲基汞致小鼠生殖细胞损伤的拮抗作用
目的探讨ZnMT对甲基汞所致生殖细胞损伤的拮抗作用.方法采用支持细胞/生殖细胞体外共培养法观察甲基汞对生殖细胞存活率的影响以及ZnMT的拮抗效应.结果 0.01mmol/L和0.1mmol/L两组甲基汞使生殖细胞存活率明显下降,30μg/ml和50μg/ml ZnMT使0.01mmol/L甲基汞作用后的生殖细胞死亡数减少,但对0.01mmol/L甲基汞作用后的生殖细胞却无此作用.结论 ZnMT对一定剂量范围的甲基汞致生殖细胞损伤有拮抗作用.
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大气总悬浮颗粒物对大鼠肺损伤机制的研究
流行病学研究表明,城市空气中大气总悬浮颗粒物(TSP)的污染程度与人群慢性呼吸道炎症、肺气肿、肺癌的发病率明显相关.动物实验研究证实,TSP使肺巨噬细胞存活率下降、吞噬功能降低,在吞噬异物或毒物的同时,释放出一系列细胞因子和前炎症因子,如肿瘤坏死因子、核转录因子,作用于肺上皮细胞、内皮细胞等,使各种炎症细胞聚集,导致炎症发生[1].本文通过大鼠气管染尘,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞数,测定血清和BALF中生化指标的水平及酶的活性,从而探讨TSP对呼吸系统的损害及其机制,为治理大气污染、保护人群健康提供科学依据.
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苯并[a]芘和高温及其联合作用对大鼠小脑粒细胞存活率及热应激蛋白水平的可能作用
目的研究苯并[a]芘(BaP)、高温及其联合作用对大鼠小脑粒细胞存活率及热应激蛋白70与热应激蛋白90 β(HSP70、HSP90 β)表达水平的影响.方法取8 日龄SD大鼠小脑粒细胞原代培养,将其分为空白对照组、溶剂对照组(等量DMSO平行处理)、低浓度BaP染毒组(BaP 5 μmol/L+S9-mix)、高浓度BaP染毒组(BaP 50 μmol/L+S9-mix)、高温处理组(40℃,45 min预热)、高温处理+低浓度BaP染毒组、高温处理+高浓度BaP染毒组.染毒90 min,胰酶消化法收集标本,台盼蓝染色法检测存活率,用同一样本进行Western blot法检测HSP70、HSP90 β相对表达值.结果高浓度BaP染毒、高温处理、高温处理+低浓度BaP染毒、高温处理+高浓度BaP染毒组均可降低细胞存活率(P＜0.05～P＜0.000 01),HSP90 β相对表达值升高.HSP90 β相对表达值与细胞存活率间有线性相关关系(r＝-0.796 2,P＜0.05),而HSP70相对表达值与细胞存活率间无线性相关关系(r＝0.217 4,P＞0.05).结论高浓度BaP染毒或BaP与高温联合作用对体外培养神经元具有一定的损害作用.HSP90 β相对表达值可用作体外培养神经元损害程度的标志.
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6种可吸人性矿物粉尘致A549细胞炎症因子的变化研究
检测我国石英、绢云母、钠长石、方解石、蒙脱石、纳米SiO26种主要矿物粉尘的成分,观察其对A549细胞形态的影响,检测其诱导细胞产生白介素-6 (IL-6)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)炎性因子,探讨可吸入矿物粉体的细胞毒性和致炎性.
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下调AFAP-1L2表达增强顺铂对子宫内膜癌细胞的杀伤作用
目的 观察AFAP-1 L2下调后对顺铂干预的子宫内膜癌KLE细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,为子宫内膜癌治疗提供新的靶点.方法 以Western blot及qRT-PCR检测不同分化程度子宫内膜癌细胞(KLE,Ishikawa)中AFAP-1L2蛋白及mRNA表达;构建siAFAP-1L2质粒并转染子宫内膜癌细胞,检测转染效率;顺铂干预siNegative Control细胞为对照组(DDP组),对siAFAP-1 L2干扰细胞(siAFAP-1L2+DDP组)给予不同浓度顺铂干预或同一浓度不同培养时间下以MTT法观察细胞存活率,流式细胞术观察细胞凋亡率,PI法观察细胞周期.结果 AFAP-1L2蛋白及mRNA在低分化KLE细胞株中表达水平明显高于高分化Ishikawa细胞株.AFAP-1L2下调后能够增加KLE细胞对DDP化疗敏感度,并具有剂量依赖性及时间依赖性.下调AFAP-1 L2表达能够促进DDP干预的KLE细胞凋亡,使更多细胞生长停滞.结论 siAFAP-1L2沉默可增强顺铂对子宫内膜癌细胞的杀灭作用,为子宫内膜癌治疗研究的候选靶点.
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氟化钠对原代培养猪甲状腺细胞毒性效应的实验研究
目的 观察NaF对原代培养猪甲状腺细胞的毒性效应,并探讨其作用机制.方法 采用40mg/L,80mg/L和160mg/L NaF对原代培养猪甲状腺细胞进行染毒,48h后光镜下观察猪甲状腺细胞形态结构的变化,并采用吖啶橙染色法,在荧光显微镜下观察细胞核形态结构的变化;采用MTT法测定细胞存活率.结果 中、高剂量氟组甲状腺细胞滤泡结构渐消失,细胞变小、变圆,亮度增加.甲状腺细胞核内可见致密浓染的黄绿色染色,呈圆形、月牙形,可见发泡现象及凋亡小体,且细胞的存活率显著低于对照组(P<0.01).结论 NaF对原代培养猪甲状腺细胞具有毒性效应,并呈现一定的剂量效应关系.
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携带人TRAIL基因的双靶向溶瘤腺病毒与X线联合抑瘤效应
目的 探讨携带人TRAIL基因的溶瘤腺病毒CNHK500-hTRAIL,联合X线照射对A549细胞生长的影响.方法 将质粒pPE3-hTRAIL与pSG500用Lipofectamine2000共转染至293细胞内同源重组,包装出的溶瘤腺病毒CNHK500-hTRAIL,采用PCR法进行鉴定,并在293细胞中大量扩增病毒,采用50％组织培养感染计量法测定病毒滴度,以MOI为5的溶瘤腺病毒CNHK500-hTRAIL感染A549细胞24 h,用RT-PCR法检测hTRAIL基因在肿瘤细胞中的表达.用小同MOI值(0.01～40)的CNHK500-hTRAIL感染A549细胞,感染5 d,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其对A549细胞的细胞存活率,以便确定适宜的感染滴度.用CNHK500-hTRAIL感染A549细胞,感染后48 h,用不同剂量的X线(1和2 Gy)照射,照射后3d,通过MTT比色法检测CNHK500-hTRAIL联合X线照射下A549细胞的细胞存活率.结果 PCR法鉴定表明溶瘤腺病毒CNHK500内携带hTRAIL基因,制备的CNHK500-hTRAIL病毒滴度为3.25×109PFU/ml,且CNHK500-hTRAIL携带的hTRAIL基因在A549细胞中有效表达.经不同MOI值CNHK500-hTRAIL感染A549细胞,细胞存活率为64.26％～96.02％.CNHK500-hTRAIL感染联合不同剂量X线照射组细胞存活率较单纯X线照射(1和2 Gy)和单纯CNHK500-hTRAIL感染组明显降低(P＜0.01),细胞存活率分别为50.77％和45.56％,增敏效应比值(E/O)为1.5和1.6,均大于1.4.结论 成功构建了携带hTRAIL基因的溶瘤腺病毒CNHK500-hTRAIL,CNHK500-hTRAIL感染与X射线联合照射对A549细胞生长有协同抑制作用.
关键词： 肺癌 溶瘤腺病毒 肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 放射治疗 细胞存活率 -
L-NMMA和L-Arg对体外培养海马神经元缺血缺氧损伤调控作用及其机制的研究
近年来研究发现一氧化氮(NO)在缺血缺氧机制中具有重要作用.NO与细胞凋亡的关系仍存在着较大分歧,实验证明NO既可诱导凋亡又可抑制凋亡.本研究利用体外培养海马神经元,通过去除培养液中糖和氧气模拟缺血缺氧状态,以细胞形态学、细胞存活率、乳酸脱氢酶变化描述细胞损伤程度,观察NO合成前体物左旋精氨酸(L-Arg)、NO合成酶(NOS)抑制剂N单甲基-L-精氨酸(L-NMMA)对缺血缺氧损伤体外培养海马神经元的影响,并初步探讨了两者与细胞凋亡的关系.
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人参益智片对神经细胞的保护和修复机制
目的 研究人参益智片(RYT)对神经细胞保护和修复的机理,开发人参益智片为辅助改善记忆的保健食品提供依据.方法 采用MTT法测定Aβ25-35、冈田酸、过氧化氢致细胞损伤的IC50,并观察人参益智片对SH-SY5Y细胞的保护修复.结果 人参益智片与SH-SY5Y细胞共同孵育24 h情况下,在11.72~187.5μg/mL浓度范围内具有促进增殖作用;细胞存活率与冈田酸浓度相关,冈田酸浓度增大,细胞存活率降低,并通过拟合曲线计算IC50为80 nmol/L;人参益智片在一定浓度范围内对SH-SY5Y有保护作用,浓度超过187.5μg/mL时则诱导细胞凋亡,出现细胞毒样作用.结论 人参益智片对SH-SY5Y的正常细胞有保护作用,对由OKA损伤的SH-SY5Y细胞有修复作用.
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绿茶提取物对牙周膜细胞活性影响的体外研究
目的 评价绿茶提取物(GTE)在体外对牙周膜成纤维细胞活性的影响,评估其作为脱位牙保存介质的可能性.方法 取正畸患者拔出的天然牙牙周膜成纤维细胞,在DMEM培养基中培养后分别置DMEM培养基、汉斯平衡盐溶液(HBSS)、牛奶、低渗蔗糖溶液及GTE中,37℃孵育.于实验后第1、2、4、24 h分别以MTT法测定各培养基中细胞浓度.结果 GTE组细胞浓度明显高于蔗糖组(1、2、4、24 h,P＜0.05)、HBSS组(2、4、24 h,P＜0.05)、DMEM组(2h,P＜0.05)和牛奶组(4 h,P＜0.05).结论 GTE能有效的保护牙周膜细胞,是脱位牙保存的良好介质.
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新生牛血清的质量控制对SPF鸡胚细胞和人二倍体(2BS)细胞生长的影响
目的 考察新生牛血清质量控制对SPF鸡胚细胞和人二倍体(2BS)细胞生长的影响.方法 选择来源可追溯性、工艺质量稳定,且检定合格的新生牛血清样品配制细胞生长液,用于SPF鸡胚细胞和2BS细胞的培养.待细胞生长成致密成纤维单层细胞,记录细胞成单层的时间,用胰酶消化细胞,通过全自动细胞计数仪对细胞悬液进行测定,观察总细胞数、活细胞数,计算细胞存活率.根据活细胞数计算MOI,分别用腮腺炎及风疹病毒接种SPF鸡胚细胞和2BS细胞,检测收获病毒液的滴度.结果 SPF鸡胚细胞总细胞数不低于3.5× 106个/mL,活细胞数不低于2.1×106个/mL,细胞存活率不低于60％;2BS细胞总细胞数不低于7.0× 105个/mL,活细胞数不低于4.2× 105个/mL,细胞存活率不低于60％.腮腺炎病毒原液滴度在6.1～6.6 lgCCID50/mL之间,平均值为6.28 lgCCID50/mL,SD为0.11,生产过程加工能力指数(process capability index,Cpk)为1.51,批间质量趋于一致;风疹病毒原液滴度均在5.5～6.2 lgCCID50/mL之间,平均值为5.8 lgCCID50/mL,SD为0.17,Cpk值为1.40,批间质量趋于一致.结论 新生牛血清的质量良好,用其培养SPF鸡胚细胞和2BS细胞的活细胞比率可控,收获的病毒液滴度较均一,差异性较小.
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斑蝥素对HL-60细胞和QGY7703细胞的作用研究
采用MTT法和流氏细胞仪技术,研究了斑蝥素对HL-60细胞和QGY7703细胞的存活率和细胞周期分布影响.结果表明,斑蝥素对HL-60细胞的IC50是15.34μmol/L,对QGY7703细胞的IC50是18.54μmol/L.斑蝥素处理HL-60细胞和QGY7703细胞24h后,G2-M期细胞分布都有所增加,Gn-G1期细胞分布都有所降低:斑螯素处理HL-60细胞24h后,G0-G1期峰前有亚二倍体峰出现,说明斑蝥素在所用剂量下能够诱导HL-60细胞发生凋亡.
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脉络宁对SH-SY5Y细胞氧糖剥夺再恢复损伤的保护作用及其机制研究
目的:研究脉络宁注射液对SH-SY5Y细胞氧糖剥夺/再复氧糖(OGD/R)损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法:体外培养SH-SY5Y细胞,将细胞随机分为正常组、氧糖剥夺模型组和脉络宁组(1.0 mL·L-1),建立体外OGD/R细胞模型.倒置显微镜观察细胞形态;MTT法测定细胞存活率;测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax蛋白表达的变化.结果:与模型组相比,脉络宁能减轻OGD/R引起的SH-SY5Y细胞的损伤,明显提高细胞存活率(P＜0.05),减少LDH的释放量(P＜0.05),有效抑制Bax蛋白的表达(P＜0.05),上调Bcl-2的表达(P＜0.05).结论:脉络宁注射液对OGD/R引起的SH-SY5Y细胞损伤有保护作用,其机制可能与影响凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达有关.
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芦荟大黄素介导的光动力疗法对人口腔黏膜癌KB细胞杀伤效果的研究
目的 探讨芦荟大黄素(Aloe-emodin,AE)介导的光动力疗法(Photodynamic therapy,PDT)对人口腔黏膜癌KB细胞的杀伤效果.方法 通过MTT法检测不同实验条件对KB细胞的杀伤作用.实验分为空白对照组(Control)、单纯药物组(AE)、单纯光照组(Laser)和光动力组(PDT).分别比较AE组不同浓度(10 μM、20μM、30 μM和40 μM)、Laser组不同光照时间(10s、20s、40s、80s)与Control组对KB细胞的杀伤作用,分析PDT组AE浓度和时间对KB细胞杀伤作用的影响.结果 与Control组相比,AE组和Laser组对KB细胞的杀伤作用无统计学意义(P＞0.05).PDT组对KB细胞的杀伤作用呈浓度和时间依赖性,当AE的浓度为40 μM,照射时间为80 s时,细胞存活率降低至56.7％.结论 AE介导的PDT对KB细胞有显著的杀伤作用.
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不同给药方法对胶质瘤细胞抑制作用的体外实验
目的探讨治疗脑胶质瘤的化疗药物持续作用及短时作用的疗效.方法 C6细胞接种于96孔培养板,分别采取短时及持续的给药方式,于不同时间采用MTT法检测细胞的存活率.结果持续给药组细胞存活率显著低于短时给药组.结论持续给药可以降低用药浓度,有效地抑制肿瘤细胞的生长.
