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MRP1/MRP2与重金属转运的研究进展
多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRPs)是ATP结合盒式转运蛋白(ATP-binding cassette,ABC)家族中的一个亚群,1992年由Cole等[1]初在耐阿霉素小细胞肺癌细胞株H69/AR的研究中发现,该耐药细胞株表达了一种不同于P糖蛋白(P-gp)的蛋白,此后命名为多药耐药相关蛋白1(mulidrug resistance-associated protein l,MRPl/ABCC1).随后人们又陆续发现多药耐药相关蛋白2(multidrugresistance-associated protein 2,MRP2/ABCC2)及MRPs的其他成员.MRP1和MRP2是细胞代谢产物、药物、毒物进入细胞的天然屏障和流出泵,个体MRP1和MRP2生理活性和表达水平的不同会影响药物的药效和毒物毒性的大小[2].
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胰腺癌耐药细胞株JF305/CDDP和PANC-1/GEM的生物学特性及新耐药相关基因MSX2的发现
目的 建立胰腺癌耐药细胞株,探寻新的胰腺癌细胞耐药基因并初步研究其作用机制.方法 采用大剂量间歇诱导法建立对顺铂(CDDP)和吉西他滨(GEM)耐药的细胞株.采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测其半数致死量(IC50)、耐药指数(R)及交叉耐药情况,并观察其生长差异.应用流式细胞术检测耐药细胞的周期变化,Transwell迁移实验检测其迁移能力的改变,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中多药耐药相关基因的变化.结果 成功获得对CDDP耐药的细胞株JF305/CDDP和对GEM耐药的细胞株PANC-1/GEM.JF305/CDDP和PANC-1/GEM细胞株的耐药指数分别为15.3和27.31,并存在交叉耐药.与亲代细胞相比,JF305/CDDP细胞的生长增殖速度减慢,第4天时吸光度(A)值分别为0.60±0.01和1.00±0.06(P=0.002);JF305/CDDP细胞的G1+G2期细胞比例增加[(70±3)％和(55±3)％],而S期细胞比例减少[(30±2)％和(45±2)％,P=0.041];JF305/CDDP细胞穿过Transwell小室的数量增加[(158±5)个/视野和(32±1)个/视野,P<0.001];JF305/CDDP细胞中多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白2(MRP2)和同源(异型)框基因2(MSX2)的表达量增加到(5.10±0.63)倍、(7.20±0.84)倍和(6.95±0.77倍).在JF305细胞中,敲降MSX2则MRP2表达降低(0.69±0.17);在PANC-1细胞中,过表达MSX2则MRP2表达升高(2.1±0.31).结论 成功建立了2株稳定的耐药胰腺癌细胞株JF305/CDDP和PANC-1/GEM.发现了新的耐药相关基因MSX2,MSX2可能通过上调MRP2的表达促进胰腺癌细胞耐药.
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香兰素与乙基香兰素对大鼠肝脏中转运蛋白mRNA表达的影响
目的 研究香兰素、乙基香兰素对大鼠肝脏中多药耐药基因Mdr1、多药耐药相关蛋白Mrp2、阴离子转运蛋白Oatp1A1和阳离子转运蛋白Oct1 mRNA表达水平的影响.方法 大鼠ig香兰素或乙基香兰素3、15、75 mg/(kg·d),连续给药7d,提取肝脏总RNA,逆转录后荧光定量PCR检测细胞膜Mdr1、Mrp2、Oatp1A1和Oct1 mRNA的表达.结果 香兰素、乙基香兰素均能显著上调Mdr1 mRNA的表达,下调Oatp1A1、Oct1 mRNA的表达,对Mrp2 mRNA的表达无显著影响.结论 香兰素、乙基香兰素给药后能提高肝细胞Mdr1对药物的外排作用,减弱Oatp1A1、Oct1对药物的摄取能力,当香兰素和乙基香兰素与上述转运体底物药物共用时,可能会发生药物相互作用.
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氢溴酸槟榔碱体内对大鼠肝肾转运体表达的影响
目的 探究氢溴酸槟榔碱对大鼠肝肾转运体表达的影响.方法 通过给雄性Wistar大鼠ig氢溴酸槟榔碱(0.8、4、20 mg/kg) 21 d,应用荧光RT-PCR检测肝、肾组织中13种转运体mRNA的表达量,考察氢溴酸槟榔碱对大鼠肝、肾转运体mRNA表达的影响.结果 氢溴酸槟榔碱低剂量时显著抑制了肝脏MRP2和MDR1A mRNA表达,但显著诱导了肾脏MRP5 mRNA表达.氢溴酸槟榔碱高剂量时显著抑制了肝脏OCT2、OAT2、OCTN2、OATP1A1、OATP1A4、OATP2B1、MRP2和MDR1A,以及肾脏MRP2、BCRP、MDR1A的mRNA表达水平,但显著上调了肾脏OCTN2、OATP1A1、OATP1A4及MRP5的mRNA表达量,且对上述转运体mRNA表达的影响有一定剂量依赖性.结论 由于肝肾转运体表达与功能的改变会引起药物相互作用,临床上应给予槟榔嗜好者更多关注,以避免发生不良药物相互作用.
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异甘草酸镁对雷公藤甲素损伤L-02细胞中UGT1A、MRP2蛋白及其mRNA表达的影响
目的 研究异甘草酸镁对雷公藤甲素损伤L-02细胞中尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A(UGT1A)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)蛋白及其mRNA表达的影响,从药物代谢学方面探讨异甘草酸镁的保肝作用机制.方法 L-02细胞分为空白对照组、雷公藤甲素组、异甘草酸镁组、利福平组,共4组(n=6),空白对照组和雷公藤甲素组仅加入培养基,异甘草酸每组和利福平组分别给予异甘草酸镁、利福平预处理24 h,后3组再加入雷公藤甲素18 h后,用MTT法测定细胞存活率,用Western blot及RT-PCR检测各组细胞中UGT1A、MRP2蛋白及其mRNA表达水平.结果 异甘草酸镁预保护24 h实验组的细胞存活率明显高于雷公藤甲素组(P<0.05);雷公藤甲素组UGT1A、MRP2蛋白及其mRNA表达水平显著低于空白对照组(P<0.05);异甘草酸镁组UGT1A、MRP2蛋白及mRNA表达水平较雷公藤甲素组显著升高(P<0.05);利福平组UGT1A蛋白及mRNA表达水平明显低于异甘草酸镁组(P<0.05),MRP2蛋白及mRNA表达水平与异甘草酸镁组差异无统计学意义.结论 异甘草酸镁可减轻雷公藤甲素对L-02细胞的损伤作用,其机制可能与诱导UGT1A、MRP2的表达有关.
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加味大柴胡汤对阻塞性黄疸大鼠肝脏MRP2表达的影响
目的:探讨加味大柴胡汤对阻塞性黄疸大鼠肝脏MRP2表达的影响及其对肝脏的保护机制.方法:将54只大鼠随机分三组,即:假手术+生理盐水灌胃组(SO+NS组)、胆总管结扎+生理盐水灌胃组(BDL+NS组)、胆总管结扎+加味大柴胡汤灌胃组(BDL+MMDB组).分别在术后7、14、21d取肝组织标本,用PV-6001免疫组织化学法和半定量RT-PCR法检测肝脏MRP2蛋白和MRP2mRNA的表达.结果:各时相段中BDL+MMDB组的MRP2蛋白和MRP2mRNA的表达低于SO组,而明显高于BDL+NS组,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:加味大柴胡汤能上调MRP2的表达,减轻肝脏的损伤.
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补肾祛湿方增加大鼠肝细胞MRP2、BSEP表达对抗雌激素致胆汁淤积作用
目的:观察补肾祛湿方含药血清对雌激素致大鼠胆汁淤积肝细胞胆汁酸转运蛋白MRP2与BSEP表达的作用,探讨补肾祛湿方治疗妊娠肝内胆汁淤积症可能的分子机制.方法:用1 μmol/L的17β雌二醇干预大鼠原代肝细胞24 h诱导形成胆汁淤积模型后,加入补肾祛湿方含药血清处理24 h,放射免疫法测定培养液中总胆汁酸含量,提取细胞总RNA及蛋白,实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法检测MRP2、BSEP mRNA与蛋白表达水平.电子显微镜观察培养肝细胞超微结构变化.结果:补肾祛湿方含药血清可减轻肝细胞损伤,显著增加细胞培养上清总胆汁酸含量,P＜0.01,并且可明显增加肝细胞MRP2、BSEP mRNA与蛋白表达水平,P＜0.01.结论:补肾祛湿方治疗妊娠肝内胆汁淤积症的分子机制可能是通过改善肝细胞超微结构的损伤,增加肝细胞胆汁酸转运蛋白MRP2、BSEP mRNA与蛋白表达水平实现的.
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胆红素主要转运子MRP2和MRP3在胆汁淤积中的作用
MRP3和MRP2 是多药耐药蛋白家族成员之一,MRP2和MRP3分别存在于肝细胞毛细胆管膜和肝细胞基侧膜.大量实验表明,MRP2、MRP3介导了淤胆时胆汁成分,特别是结合型胆红素跨细胞膜的转运.
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MRP2在胆汁淤积中的研究进展
胆汁淤积(cholestasis)是肝内外各种疾病所引起的胆红素代谢障碍的综合性病理过程,胆道梗阻、肝叶切除、肝移植、内毒素血症、药物性肝脏损害、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎等疾病常并发胆汁淤积的病理改变.
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几种药物对HepG2细胞MRP2表达的影响
目的 探讨还原型谷胱甘肽、苯巴比妥、地塞米松对人肝癌HepG2细胞细胞膜上MRP2 mRNA表达的影响,以探讨这些药物消退黄疸的作用机制.方法 采用人肝癌HepG2细胞系作传代培养,并分别加入1000nM地塞米松、10mM还原型谷胱甘肽、0.15mM苯巴比妥和生理盐水作用48h后提取各组细胞的总mRNA,然后以同种药物同组内的β-肌动蛋白的基因表达量做为内对照,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测,以光密度比值(MRP2/β-actin)半定量表示各组细胞MRP2 mRNA加药后表达的变化,将结果建立数据库进行方差分析和q检验.结果 苯巴比妥组和地塞米松组的HepG2细胞MRP2 mRNA表达量都明显高于生理盐水组(P＜0.01),并且地塞米松组MRP2 mRNA表达要明显高于苯巴比妥组(P＜0.01),而谷胱甘肽组MRP2 mRNA表达要低于生理盐水对照组(P＜0.05).结论 苯巴比妥、地塞米松可上调MRP2 mRNA的表达,由于MRP2为结合型胆红素运输的载体,因此上调MRP2 mRNA的表达可能为这两种药物促进结合型胆红素排泄,消退黄疸的作用机理之一.而谷胱甘肽作为MRP2的底物,它并不能促进MRP2的表达,谷胱甘肽对结合型胆红素向胆管内运输可能无作用.我们认为MRP2的表达水平可以作为结合型胆红素增高性疾病退黄药物治疗的评价指标之一,并加以开发.
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获得性淤胆大鼠肝细胞Bsep、Mrp2、Ntcp表达及S-腺苷蛋氨酸作用观察
肝细胞是胆汁酸和胆汁分泌的重要器官.肝脏摄取和分泌胆汁酸盐及一些非胆汁酸盐的有机阴离子(例如胆红素)是由位于基底侧和顶部的肝细胞膜和胆管上皮细胞膜(胆管细胞)的特殊转运蛋白介导的.近年来发现了几个重要的肝胆转运单位,其中胆汁酸盐输出泵(bile salt export pump,即鼠的Bsep和人的BSEP)介导胆汁酸向毛细胆管排放[1,2].
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异补骨脂素抑制MRP2、MRP3所致的HepG2细胞内胆汁酸蓄积和毒性
目的：观察异补骨脂素体外对HepG2细胞毒性和细胞内胆汁酸浓度的影响,并考察其对胆汁酸合成转运的影响。方法不同浓度异补骨脂素在HepG2细胞作用24 h, MTT法检测细胞存活,并检查细胞内胆汁酸浓度。常规TRIzol法提取RNA,real time PCR检测细胞中转运体BSEP、MRP2、 MRP3、 OATP2、 NTCP、 OSTα,合成酶 CYP7A1、CYP27A1和受体 FXR、PXR 的 mRNA 转录水平。结果HepG2细胞存活率随着异补骨脂素浓度升高而剂量依赖性的降低,异补骨脂素作用24 h的IC50为118.1μmol·L-1。100、400μmol·L-1异补骨脂素可使细胞内胆汁酸浓度明显升高。异补骨脂素在25μmol·L-1时就可使MRP2、MRP3、CYP7A1明显降低,当浓度增大到100μmol · L-1时, OATP2、OSTα、CYP27A1、FXR、PXR 也明显升高,但 BSEP、NTCP差异无显著性。结论异补骨脂素可引起HepG2细胞内胆汁酸升高和细胞毒性,其机制可能与抑制 MRP2、MRP3有关。
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黄芩素对胆汁外排转运体MRP2和BSEP的影响
多药耐药相关蛋白2( MRP2/ABCC2)属于ABC转运蛋白超家族,肝脏细胞所表达的MRP2,能介导一些有机阴离子的转运,例如葡萄糖醛酸盐结合物等物质的转运[1]。胆汁酸盐输出泵转运蛋白( BSEP)是肝脏中参与胆汁外排转运的另一重要的转运体,主要介导单价胆汁酸、硫酸盐胆酸等转运过程。在肝细胞中MRP2和BSEP相互协调,可以介导胆汁的排泄,这两种转运体的表达均可以在转录和转录后两个水平上受到调节[2-3]。有文献报道,核转录因子 Nrf2可以影响MRP2底物的分泌和排泄,Nrf2能够在异物的刺激下与MRP2基因增强子近端的 ARE 元件结合而调控其表达[4]。
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前列腺素E1对梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡及相关蛋白MRP2的影响
目的 探讨前列腺素E1 (PGE1) 对梗阻性黄疸(OJ)大鼠肝细胞凋亡及相关蛋白多药耐药相关蛋白2(MRP2)表达的影响.方法 72只健康雄性SD大鼠随机均分为假手术组(CG组)、胆总管结扎组(OJ组)、胆总管结扎+PGE1给药组(OJ+PE组),建立OJ模型.每组再分设术后第3、7、10天 3个不同时相点,采集下腔静脉血及部分肝脏组织,检测血清肝功能水平,HE染色观察肝脏病理形态学改变,原位末端转移酶标技术(TUNEL)测定肝细胞凋亡指数(AI),免疫组化法测定MRP2蛋白的表达及逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测其mRNA水平.结果 ① 与CG组同时相点相比,OJ组各时相点大鼠血清转氨酶和胆红素水平增高(P<0.05),肝脏组织病理学改变明显加重,肝细胞AI升高(P<0.05),MRP2蛋白表达减弱(P<0.05),其mRNA表达下降,且随胆总管结扎时间的延长而愈加明显;② 与OJ组各时相点相比,OJ+PE组大鼠血清转氨酶和胆红素降低,术后第3天时谷丙转氨酶(ALT)的差异有统计学意义(P<0.05),术后第7~10天血清谷草转氨酶(AST)、ALT、总胆红素(TBIL)、结合胆红素(DBIL)水平均明显降低(P<0.05);肝脏组织病理学改变减轻;肝细胞AI减低(P<0.05); MRP2蛋白和mRNA的表达均明显增加(P<0.05).结论 PGE1一定程度上可以减轻由OJ所致的大鼠肝功能受损,抑制OJ所致的
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多耐药相关蛋白MRP2与核受体RXRα、RARα在人阻塞性胆汁淤积肝组织中的表达变化
目的 观察多耐药相关蛋白MRP2 (multidrug resistance associated protein 2) 与核受体RXRα、RARα在人阻塞性胆汁淤积肝组织的表达变化.方法 收集人正常及阻塞性胆汁淤积肝组织标本各20例,HE染色验证阻塞性黄疸病变,免疫组化方法检测人多耐药相关蛋白MRP2及核受体RXRα、RARα的表达变化.结果 人阻塞性胆汁淤积肝组织中核受体RXRα、RARα表达减弱,多耐药相关蛋白MRP2表达也减弱.结论 与体外培养肝细胞与模型动物一样,人阻塞性胆汁淤积肝组织中MRP2表达减弱也可能由核受体RXRα、RARα表达减弱导致.
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梗阻性黄疸大鼠肝细胞MRP2和FXR蛋白表达变化及意义分析
目的 通过建立梗阻性黄疸动物模型,在蛋白水平观察多耐药相关蛋白MRP2(muhidrug resistance-associated protein2,MRP2)和类法尼醇X受体FXR(farnesoid X receptor)表达变化并分析二者之间的关系.方法 用胆总管结扎术方法制备大鼠梗阻性黄疸模型,检测肝功能;提取大鼠肝细胞膜蛋白与核蛋白,测定提取液蛋白浓度;采用Western blot技术检测MRP2和FXR蛋白表达.结果 梗阻性黄疸大鼠总胆红素、直接胆红素显著升高;与假手术对照组相比,梗阻性黄疸组大鼠肝细胞MRP2蛋白表达明显降低(P=0.041),FXR蛋白无表达,差异均有统计学意义.结论 MRP2表达下调可能与FXR表达抑制有关,FXR蛋白可能对MRP2蛋白表达有正性调控作用.
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二甲双胍对糖尿病大鼠肝脏中重要转运蛋白表达的影响
目的:研究二甲双胍对糖尿病大鼠肝脏中重要转运蛋白表达的影响.方法:利用高脂肪饲料与链脲佐菌素(STZ)诱导产生糖尿病模型大鼠.将造模后大鼠分为模型对照组、二甲双胍低剂量组(30 mg·kg-1·d-1)、二甲双胍高剂量组(100 mg·kg-1·d-1),口服给药4周,同时设正常对照组.检测并比较不同组别大鼠肝脏组织中P糖蛋白(P-gp)与多药耐药相关蛋白(MRP)2蛋白表达量与相应mRNA表达水平.结果:二甲双胍高、低剂量组的P-gp与MRP2蛋白表达及mRNA水平均明显低于模型对照组(P＜0.05),且二甲双胍高剂量组明显低于二甲双胍低剂量组(P＜0.05).结论:二甲双胍可能通过抑制肝脏的P-gP与MRP2蛋白表达及mRNA水平,从而发挥降糖作用,可能是其作用机制之一.
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肿瘤耐药相关蛋白及β-catenin在食管鳞状细胞癌中的表达及意义
背景与目的:随着化疗药物在肿瘤临床治疗中的广泛应用,肿瘤对化疗药物产生多药耐药性的问题越来越突出,已成为肿瘤联合化疗失败的主要原因之一.本研究检测β-catenin以及肿瘤耐药相关蛋白MRP2、P-gp、Bcl-2在食管鳞状细胞癌(esophageal squamoua cell carcinoma,ESCC)中的表达,探讨它们在ESCC的多药耐药发生发展中的作用和相互关系.方法:运用组织芯片技术、免疫组织化学方法以及图像分析技术检测582例ESCC及其癌旁294例正常黏膜、92例单纯细胞增生和87例不典型增生上皮组成的组织芯片中MRP2、P-gP、β-catenin及Bcl-2的表达情况,并分析其与各临床病理参数之间的关系.结果:MRP2、Bcl-2在ESCC中的累积光密度(integral optical density,IOD)值[分别为(195.7±175.9)×103和(90.5±112.5)×10~3]显著高于其在癌旁正常组织中的IOD值[分别为(104.8±86.1)×10~3和(25.2±46.6)×10~3],差异有统计学意义(P＜0.01);Pgp、β-catenin在ESCC中的IOD值[分别为(57.7±75.5)×10~3和(32.0±47.0)×10~3]显著低于其在癌旁正常组织中的IOD值[分别为(114.8±106.6)×10~3和(46.1±35.7)×10~3],差异有统计学意义(P＜0.01);随着ESCC的分化程度按高分化-中分化-低分化顺序依次改变,MRP2的IOD值依次递增,β-catenin在低分化ESCC中的IOD值大于其在中、高分化ESCC中的IOD值,Bcl-2在高分化ESCC中的IOD值低于其在中、低分化ESCC中的IOD值,差异有统计学意义(P＜0.01);β-catenin、Bcl-2在ESCC浸润至黏膜层的病例的癌组织标本中的IOD值大于其在ESCC浸润至肌层或浆膜层的病例的癌组织标本中的IOD值,差异有统计学意义(P＜0.01);有淋巴结转移的Bcl-2的IOD值显著高于无淋巴结转移(P＜0.01);ESCC中P-gp的表达分别与MRP2、Bcl-2的表达呈明显正相关(r=0.288和r=0.253,P＜0.01).结论:P-gp与MRP2及Bcl-2可作为ESCC多药耐药的预测因子.β-catenin可能在ESCC的发生发展中起着重要作用.
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缺氧对大鼠药物转运体MDR1、MRP2表达的影响
目的：研究模拟急进高原缺氧对大鼠部分生理指标以及小肠、肝脏、肾脏内MDR1、MRP2两种外排型药物转运体表达的影响，初步探讨高原低压低氧对药物转运体的影响。方法 Wistar大鼠随机分成正常对照组、缺氧24 h组、缺氧72 h组。取腹腔主静脉血分析生理指标；以Real-Time PCR方法检测各组大鼠不同组织中MDR1、MRP2转运体基因表达水平；同时采用ELISA方法测定MDR1、MRP2的蛋白表达变化。结果生理指标结果显示，模拟缺氧组大鼠相比于正常对照组发生了明显的变化。与正常对照组比较，缺氧组小肠、肝脏、肾脏三个组织中MDR1、MRP2基因表达明显升高，同时蛋白水平也增加（P<0.05，P<0.01），但随着缺氧时间的延长，不同转运体在不同器官组织中变化趋势不一样。结论高原缺氧会引起急进大鼠的生理指标及MDR1、MRP2的表达发生变化，继而影响上述转运体底物在体内的处置过程，这可为高原药代动力学研究提供理论依据。
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熊去氧胆酸对胆汁淤积幼年大鼠Mrp2和Bsep的调控作用
目的:研究熊去氧胆酸(UDCA)对胆汁淤积幼年大鼠的治疗作用以及胆汁酸转运体多药耐药相关蛋白2(MRP2,大鼠基因表达为Mrp2)和胆盐输出泵(BSEP,大鼠基因表达为Bsep)表达的影响,探讨该药物作用的分子机制.方法:将SD幼年大鼠随机分为正常对照组(Normal组)、胆汁淤积模型组(ANIT组)和熊去氧胆酸治疗组(UDCA组).α-萘异硫氰酸酯(ANIT)灌胃法(80 mg/kg,每周1次,共2次)诱导肝内胆汁淤积大鼠模型,分别给予安慰剂对照以及熊去氧胆酸口服(100 mg/kg,qd)治疗10 d.实验第10天处死大鼠,留取血标本进行丙氨酸氨基转移酶(ALT)、直接胆红素(DBIL)、总胆汁酸(TBA)检查,肝脏标本分别行组织病理学检查、免疫组化以及荧光定量RT-PCR检查胆汁酸转运体Mrp2和Bsep的分布以及RNA表达情况.结果:UDCA组与ANIT组比较,ALT、DBIL和TBA水平明显下降(分别为153 U/L vs 203 U/L、7 mmol/L vs 16 mmol/L、28 mmol/L vs 51 mmol/L,P＜0.05),病理损害减轻,Mrp2和Bsep表达增强.结论:熊去氧胆酸能改善胆汁淤积幼年大鼠肝脏功能,减少肝细胞损害以及炎症渗出,上调胆汁酸转运体Mrp2和Bsep的表达.
